免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201010292211.9

申请日:

2010.09.27

公开号:

CN102017918A

公开日:

2011.04.20

当前法律状态:

终止

有效性:

无权

法律详情:

未缴年费专利权终止IPC(主分类):A01K 61/00申请日:20100927授权公告日:20120704终止日期:20140927|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A01K 61/00申请日:20100927|||公开

IPC分类号:

A01K61/00

主分类号:

A01K61/00

申请人:

大连海洋大学

发明人:

丁君; 王轶南

地址:

116023 辽宁省大连市高新园区火炬路3号

优先权:

专利代理机构:

大连非凡专利事务所 21220

代理人:

曲宝威

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内容摘要

免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,步骤为:建立育种家系,在每个家系中随机抽取10个海水养殖动物个体,测量其溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量,并计算各参数的平均值B1;利用多糖浸泡液进行免疫刺激;测量上述各参数并计算其平均值B2;计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,根据海水养殖动物的种类不同和育种目标不同,确定加权值A,对各指标变化的绝对值进行加权;计算各家系的平均综合选择指数I=A溶菌酶|B2-B1|溶菌酶+ASOD|B2-B1|SOD+ACAT|B2-B1|CAT+A总抗氧化力|B2-B1|总抗氧化力+A丙二醛|B2-B1|丙二醛+A吞噬效率×|B2-B1|吞噬效率;按I值上选30%家系,按雌雄比3∶1并避免近亲交配,再次建立海水养殖动物育种家系至少100个;循环上述步骤至少4次,获得广谱抗病海水养殖动物。本方法实施过程简单,安全可靠。

权利要求书

1: 一种免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,其特征在于 :步骤如下 : a、建立至少 100 个海水养殖动物育种家系,每个家系的海水养殖动物数量至少 100 个,并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同 ; b、取海水养殖动物的成体,在每个家系中随机抽取 10 个海水养殖动物个体,测量 每个海水养殖动物的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量 ; 计算每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙 二醛含量的平均值 B1,以此作为家系免疫活性的表征值 ; c、利用多糖浸泡液对上述海水养殖动物个体进行免疫刺激,多糖浸泡液浓度为 0.001g/L-0.007g/L,浸泡时间为 24 小时 -72 小时 ; d、再次测量上述海水养殖动物个体的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬 效率及丙二醛含量,计算刺激后刺免疫多糖每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值 B2 ; e、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,根据海水养殖动物的种类不 同和育种目标不同,确定加权值 A,对各指标变化的绝对值进行加权 ; f、计算各家系的平均综合选择指数 I I = A 溶菌酶 |B2-B1| 溶菌酶 +ASOD|B2-B1|SOD+ACAT|B2-B1|CAT+A 总抗氧化力 |B2-B1| 总抗氧化力 +A 丙二 醛 |B2-B1| 丙二醛 +A 吞噬效率 ×|B2-B1| 吞噬效率 ; g、根据各家系的平均综合选择指数 I,上选 30%的家系,按雌雄比 3 ∶ 1 的比例, 在避免近亲交配的情况下,再次建立海水养殖动物育种家系至少 100 个 ; h、循环 a ~ g 步骤至少 4 次,获得广谱抗病海水养殖动物 ; 所述的海水养殖动物为海参、海胆等海水养殖动物。

说明书


免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法

    技术领域 本发明涉及一种培育海水养殖动物 ( 包括海参、海胆等海水养殖动物 ) 的方法, 特别是一种免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法。
     背景技术
     近年来,随着海水养殖环境恶化,海水养殖动物特别是海参、海胆等重要经济 养殖动物病害频发,严重影响着重要经济养殖动物的产量,通过遗传育种手段,培育高 产、抗逆海参、海胆等海水养殖动物新品种迫在眉睫。 目前培育抗病海水养殖动物必须 进行感染试验,要经过病原菌分离、培养、感染、计算存活率等途径,步骤繁琐,过程 复杂,并且有些病原菌无法培养或培养困难,感染的最适剂量难以确定,风险性大。发明内容
     本发明的目的是提供一种过程简单、容易操作、无风险的免疫多糖法培育广谱 抗病海水养殖动物的方法,克服现有技术的不足。
     本发明的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,步骤如下 :
     a、建立至少 100 个海水养殖动物育种家系,每个家系的海水养殖动物数量至少 100 个,并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同 ;
     b、取上述海水养殖动物的成体,在每个家系中随机抽取 10 个海水养殖动物个 体,测量每个海水养殖动物的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二 醛含量 ;计算每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬 效率及丙二醛含量的平均值 B1,以此作为家系免疫活性的表征值 ;
     c、利用多糖浸泡液对上述海水养殖动物个体进行免疫刺激,多糖浸泡液浓度为 0.001g/L-0.007g/L,浸泡时间为 24 小时 -72 小时 ;
     d、再次测量上述海水养殖动物个体的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性 和吞噬效率及丙二醛含量,计算刺激后刺免疫多糖每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值 B2 ;
     e、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,根据海水养殖动物的种 类不同和育种目标不同,确定加权值 A,对各指标变化的绝对值进行加权 ;
     f、计算各家系的平均综合选择指数 I
     I = A 溶菌酶 |B2-B1| 溶菌酶 +ASOD|B2-B1|SOD+ACAT|B2-B1|CAT+A 总抗氧化力 |B2-B1| 总抗氧化力 +A 丙二醛 |B2-B1| 丙二醛 +A 吞噬效率 ×|B2-B1| 吞噬效率 ;
     g、根据各家系的平均综合选择指数 I,上选 30%的家系,按雌雄比 3 ∶ 1 的比 例,在避免近亲交配的情况下,再次建立海水养殖动物育种家系至少 100 个 ;
     h、循环 a ~ g 步骤至少 4 次,获得广谱抗病海水养殖动物 ;
     所述的海水养殖动物为海参、海胆等。
     本明的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,实施过程简单,易控制,好操作,安全高效,无任何风险。 具体实施方式
     以海胆为例,具体操作步骤如下 :
     a、建立 120 个海胆育种家系,每个家系的海胆数量 150 个,并使各家系的生长 环境和饵料供应状况相同 ;
     b、养殖 6 个月后,在每个家系中随机抽取 10 个海胆个体,测量每个海胆的溶菌 酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量 ;然后根据测量的参数计算 出每个家系中海胆的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的 平均值 B1,以此作为家系免疫活性的表征值 ;
     c、利用多糖浸泡液对上述海胆个体进行免疫刺激,多糖浸泡液浓度为 0.001g/ L ~ 0.005g/L,浸泡时间为 24 小时~ 72 小时 ;其中多糖可为香菇多糖、黄芪多糖或脂多 糖;
     d、再次测量上述海胆个体的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率 及丙二醛含量,并计算刺激后刺免疫多糖每个家系中海胆的溶菌酶、 SOD、 CAT、总抗 氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值 B2 ; e、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,对各指标变化的绝对值 进行加权,在海胆中, A 溶菌酶为 0.3, ASOD 为 0.1, ACAT 为 0.1, A 总抗氧化力为 0.2, A 丙二醛为 0.1, A 吞噬效率为 0.2 ;
     f、计算各家系的平均综合选择指数 I
     I = A 溶菌酶 |B2-B1| 溶菌酶 +ASOD|B2-B1|SOD+ACAT|B2-B1|CAT+A 总抗氧化力 |B2-B1| 总抗氧化力 +A 丙二醛 |B2-B1| 丙二醛 +A 吞噬效率 ×|B2-B1| 吞噬效率 ;
     g、根据各家系的平均综合选择指数 I,上选 30%的家系,按雌雄比 3 ∶ 1 的比 例,在避免近亲交配的情况下,再次建立海胆育种家系 120 个 ;
     h、循环 a ~ g 步骤 4 次或 5 次或 6 次,即获得广谱抗病海胆 ;
     对于海参按上述的相同方法进行培育。
     海参、海胆等属于无脊椎动物,不具备特异性免疫系统,提高其抗病能力实际 是提高其广谱非特异性免疫的能力。 本发明采用免疫多糖刺激海参、海胆免疫系统,通 过测定海水养殖动物刺激前后免疫酶及免疫细胞活性的变化情况,评判其广谱非特异性 免疫能力,为抗病海参、海胆育种提供理论依据和方法。
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1、10申请公布号CN102017918A43申请公布日20110420CN102017918ACN102017918A21申请号201010292211922申请日20100927A01K61/0020060171申请人大连海洋大学地址116023辽宁省大连市高新园区火炬路3号72发明人丁君王轶南74专利代理机构大连非凡专利事务所21220代理人曲宝威54发明名称免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法57摘要免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,步骤为建立育种家系,在每个家系中随机抽取10个海水养殖动物个体,测量其溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量,并计算各参数的。

2、平均值B1;利用多糖浸泡液进行免疫刺激;测量上述各参数并计算其平均值B2;计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,根据海水养殖动物的种类不同和育种目标不同,确定加权值A,对各指标变化的绝对值进行加权;计算各家系的平均综合选择指数IA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率;按I值上选30家系,按雌雄比31并避免近亲交配,再次建立海水养殖动物育种家系至少100个;循环上述步骤至少4次,获得广谱抗病海水养殖动物。本方法实施过程简单,安全可靠。51INTCL19中华人民。

3、共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页CN102017930A1/1页21一种免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,其特征在于步骤如下A、建立至少100个海水养殖动物育种家系,每个家系的海水养殖动物数量至少100个,并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同;B、取海水养殖动物的成体,在每个家系中随机抽取10个海水养殖动物个体,测量每个海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量;计算每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1,以此作为家系免疫活性的表征值;C、利用多糖浸泡液对上述海水养殖。

4、动物个体进行免疫刺激,多糖浸泡液浓度为0001G/L0007G/L,浸泡时间为24小时72小时;D、再次测量上述海水养殖动物个体的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量,计算刺激后刺免疫多糖每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2;E、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,根据海水养殖动物的种类不同和育种目标不同,确定加权值A,对各指标变化的绝对值进行加权;F、计算各家系的平均综合选择指数IIA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二。

5、醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率;G、根据各家系的平均综合选择指数I,上选30的家系,按雌雄比31的比例,在避免近亲交配的情况下,再次建立海水养殖动物育种家系至少100个;H、循环AG步骤至少4次,获得广谱抗病海水养殖动物;所述的海水养殖动物为海参、海胆等海水养殖动物。权利要求书CN102017918ACN102017930A1/2页3免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法技术领域0001本发明涉及一种培育海水养殖动物包括海参、海胆等海水养殖动物的方法,特别是一种免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法。背景技术0002近年来,随着海水养殖环境恶化,海水养殖动物特别是海参、。

6、海胆等重要经济养殖动物病害频发,严重影响着重要经济养殖动物的产量,通过遗传育种手段,培育高产、抗逆海参、海胆等海水养殖动物新品种迫在眉睫。目前培育抗病海水养殖动物必须进行感染试验,要经过病原菌分离、培养、感染、计算存活率等途径,步骤繁琐,过程复杂,并且有些病原菌无法培养或培养困难,感染的最适剂量难以确定,风险性大。发明内容0003本发明的目的是提供一种过程简单、容易操作、无风险的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,克服现有技术的不足。0004本发明的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,步骤如下0005A、建立至少100个海水养殖动物育种家系,每个家系的海水养殖动物数量至少100个,。

7、并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同;0006B、取上述海水养殖动物的成体,在每个家系中随机抽取10个海水养殖动物个体,测量每个海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量;计算每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1,以此作为家系免疫活性的表征值;0007C、利用多糖浸泡液对上述海水养殖动物个体进行免疫刺激,多糖浸泡液浓度为0001G/L0007G/L,浸泡时间为24小时72小时;0008D、再次测量上述海水养殖动物个体的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量,计算刺激后刺免疫多糖每。

8、个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2;0009E、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,根据海水养殖动物的种类不同和育种目标不同,确定加权值A,对各指标变化的绝对值进行加权;0010F、计算各家系的平均综合选择指数I0011IA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率;0012G、根据各家系的平均综合选择指数I,上选30的家系,按雌雄比31的比例,在避免近亲交配的情况下,再次建立海水养殖动物育种家系至少1。

9、00个;0013H、循环AG步骤至少4次,获得广谱抗病海水养殖动物;0014所述的海水养殖动物为海参、海胆等。0015本明的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法,实施过程简单,易控说明书CN102017918ACN102017930A2/2页4制,好操作,安全高效,无任何风险。具体实施方式0016以海胆为例,具体操作步骤如下0017A、建立120个海胆育种家系,每个家系的海胆数量150个,并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同;0018B、养殖6个月后,在每个家系中随机抽取10个海胆个体,测量每个海胆的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量;然后根据测量的参数计算出每。

10、个家系中海胆的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1,以此作为家系免疫活性的表征值;0019C、利用多糖浸泡液对上述海胆个体进行免疫刺激,多糖浸泡液浓度为0001G/L0005G/L,浸泡时间为24小时72小时;其中多糖可为香菇多糖、黄芪多糖或脂多糖;0020D、再次测量上述海胆个体的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量,并计算刺激后刺免疫多糖每个家系中海胆的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2;0021E、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量,对各指标变化的绝对值进行加权,在海胆中,A溶菌酶。

11、为03,ASOD为01,ACAT为01,A总抗氧化力为02,A丙二醛为01,A吞噬效率为02;0022F、计算各家系的平均综合选择指数I0023IA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率;0024G、根据各家系的平均综合选择指数I,上选30的家系,按雌雄比31的比例,在避免近亲交配的情况下,再次建立海胆育种家系120个;0025H、循环AG步骤4次或5次或6次,即获得广谱抗病海胆;0026对于海参按上述的相同方法进行培育。0027海参、海胆等属于无脊椎动物,不具备特异性免疫系统,提高其抗病能力实际是提高其广谱非特异性免疫的能力。本发明采用免疫多糖刺激海参、海胆免疫系统,通过测定海水养殖动物刺激前后免疫酶及免疫细胞活性的变化情况,评判其广谱非特异性免疫能力,为抗病海参、海胆育种提供理论依据和方法。说明书CN102017918A。

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