免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法.pdf

1、10申请公布号CN102017918A43申请公布日20110420CN102017918ACN102017918A21申请号201010292211922申请日20100927A01K61/0020060171申请人大连海洋大学地址116023辽宁省大连市高新园区火炬路3号72发明人丁君王轶南74专利代理机构大连非凡专利事务所21220代理人曲宝威54发明名称免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法57摘要免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法，步骤为建立育种家系，在每个家系中随机抽取10个海水养殖动物个体，测量其溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量，并计算各参数的

2、平均值B1；利用多糖浸泡液进行免疫刺激；测量上述各参数并计算其平均值B2；计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量，根据海水养殖动物的种类不同和育种目标不同，确定加权值A，对各指标变化的绝对值进行加权；计算各家系的平均综合选择指数IA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率；按I值上选30家系，按雌雄比31并避免近亲交配，再次建立海水养殖动物育种家系至少100个；循环上述步骤至少4次，获得广谱抗病海水养殖动物。本方法实施过程简单，安全可靠。51INTCL19中华人民

3、共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页CN102017930A1/1页21一种免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法，其特征在于步骤如下A、建立至少100个海水养殖动物育种家系，每个家系的海水养殖动物数量至少100个，并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同；B、取海水养殖动物的成体，在每个家系中随机抽取10个海水养殖动物个体，测量每个海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量；计算每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1，以此作为家系免疫活性的表征值；C、利用多糖浸泡液对上述海水养殖

4、动物个体进行免疫刺激，多糖浸泡液浓度为0001G/L0007G/L，浸泡时间为24小时72小时；D、再次测量上述海水养殖动物个体的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量，计算刺激后刺免疫多糖每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2；E、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量，根据海水养殖动物的种类不同和育种目标不同，确定加权值A，对各指标变化的绝对值进行加权；F、计算各家系的平均综合选择指数IIA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二

5、醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率；G、根据各家系的平均综合选择指数I，上选30的家系，按雌雄比31的比例，在避免近亲交配的情况下，再次建立海水养殖动物育种家系至少100个；H、循环AG步骤至少4次，获得广谱抗病海水养殖动物；所述的海水养殖动物为海参、海胆等海水养殖动物。权利要求书CN102017918ACN102017930A1/2页3免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法技术领域0001本发明涉及一种培育海水养殖动物包括海参、海胆等海水养殖动物的方法，特别是一种免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法。背景技术0002近年来，随着海水养殖环境恶化，海水养殖动物特别是海参、

6、海胆等重要经济养殖动物病害频发，严重影响着重要经济养殖动物的产量，通过遗传育种手段，培育高产、抗逆海参、海胆等海水养殖动物新品种迫在眉睫。目前培育抗病海水养殖动物必须进行感染试验，要经过病原菌分离、培养、感染、计算存活率等途径，步骤繁琐，过程复杂，并且有些病原菌无法培养或培养困难，感染的最适剂量难以确定，风险性大。发明内容0003本发明的目的是提供一种过程简单、容易操作、无风险的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法，克服现有技术的不足。0004本发明的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法，步骤如下0005A、建立至少100个海水养殖动物育种家系，每个家系的海水养殖动物数量至少100个，

7、并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同；0006B、取上述海水养殖动物的成体，在每个家系中随机抽取10个海水养殖动物个体，测量每个海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量；计算每个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1，以此作为家系免疫活性的表征值；0007C、利用多糖浸泡液对上述海水养殖动物个体进行免疫刺激，多糖浸泡液浓度为0001G/L0007G/L，浸泡时间为24小时72小时；0008D、再次测量上述海水养殖动物个体的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量，计算刺激后刺免疫多糖每

8、个家系中海水养殖动物的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2；0009E、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量，根据海水养殖动物的种类不同和育种目标不同，确定加权值A，对各指标变化的绝对值进行加权；0010F、计算各家系的平均综合选择指数I0011IA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率；0012G、根据各家系的平均综合选择指数I，上选30的家系，按雌雄比31的比例，在避免近亲交配的情况下，再次建立海水养殖动物育种家系至少1

9、00个；0013H、循环AG步骤至少4次，获得广谱抗病海水养殖动物；0014所述的海水养殖动物为海参、海胆等。0015本明的免疫多糖法培育广谱抗病海水养殖动物的方法，实施过程简单，易控说明书CN102017918ACN102017930A2/2页4制，好操作，安全高效，无任何风险。具体实施方式0016以海胆为例，具体操作步骤如下0017A、建立120个海胆育种家系，每个家系的海胆数量150个，并使各家系的生长环境和饵料供应状况相同；0018B、养殖6个月后，在每个家系中随机抽取10个海胆个体，测量每个海胆的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量；然后根据测量的参数计算出每

10、个家系中海胆的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1，以此作为家系免疫活性的表征值；0019C、利用多糖浸泡液对上述海胆个体进行免疫刺激，多糖浸泡液浓度为0001G/L0005G/L，浸泡时间为24小时72小时；其中多糖可为香菇多糖、黄芪多糖或脂多糖；0020D、再次测量上述海胆个体的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量，并计算刺激后刺免疫多糖每个家系中海胆的溶菌酶、SOD、CAT、总抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2；0021E、计算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指标的改变量，对各指标变化的绝对值进行加权，在海胆中，A溶菌酶

11、为03，ASOD为01，ACAT为01，A总抗氧化力为02，A丙二醛为01，A吞噬效率为02；0022F、计算各家系的平均综合选择指数I0023IA溶菌酶|B2B1|溶菌酶ASOD|B2B1|SODACAT|B2B1|CATA总抗氧化力|B2B1|总抗氧化力A丙二醛|B2B1|丙二醛A吞噬效率|B2B1|吞噬效率；0024G、根据各家系的平均综合选择指数I，上选30的家系，按雌雄比31的比例，在避免近亲交配的情况下，再次建立海胆育种家系120个；0025H、循环AG步骤4次或5次或6次，即获得广谱抗病海胆；0026对于海参按上述的相同方法进行培育。0027海参、海胆等属于无脊椎动物，不具备特异性免疫系统，提高其抗病能力实际是提高其广谱非特异性免疫的能力。本发明采用免疫多糖刺激海参、海胆免疫系统，通过测定海水养殖动物刺激前后免疫酶及免疫细胞活性的变化情况，评判其广谱非特异性免疫能力，为抗病海参、海胆育种提供理论依据和方法。说明书CN102017918A