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1、(10)申请公布号 CN 104017783 A (43)申请公布日 2014.09.03 CN 104017783 A (21)申请号 201410199978.5 (22)申请日 2014.05.13 C12N 9/08(2006.01) (71)申请人 安徽味仙食品有限公司 地址 236600 安徽省阜阳市太和县城关镇开 发区 (72)发明人 范亚东 (54) 发明名称 一种农作物提取过氧化氢酶的方法 (57) 摘要 本发明涉及一种生物酶的提取, 具体涉及一 种农作物提取过氧化氢酶的方法, 所有材料取自 于天然废弃农作物, 由于这些农作物中含有大量 的过氧化氢, 所以成本较为低廉, 具有。
2、经济适用 性, 本发明提取过程方便, 提取出的过氧化氢酶干 制品可用在食品工业中除去用于制造奶酪的牛奶 中的过氧化氢。 也可被用于食品包装, 防止食物被 氧化。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 (10)申请公布号 CN 104017783 A CN 104017783 A 1/1 页 2 1. 一种农作物提取过氧化氢酶的方法, 其特征在于 : 其包括以下工艺步骤 : (1) 、 取 100g 大豆皮、 100g 大豆荚、 100g 大豆秸秆、 100g 小麦叶、 100g 小麦秸。
3、秆粉碎后 放入研钵中, 研碎成匀浆, 过60目筛体后, 用离心速率为4000r/min的离心机离心15min, 取 上清液 a ; (2) 、 不断搅拌上清液a, 按每升上清液a添加260g饱和度为0.4的硫酸铵粉末的比例, 向上清液 a 中添加硫酸铵粉末, 待搅拌 2 小时后, 置于 0下放置 12 小时, 得上清液 b ; (3) 、 将上清液 b 用虹吸管移出, 下层浑浊液用离心速率为 3000r/min 的离心机离心 15min, 弃除沉淀物 ; (4) 、 将上清液 a 和上清液 b 合并得上清液 c, 按每升上清液 c 添加 256g 饱和度为 0.8 的硫酸铵粉末的比例, 向上清。
4、液 c 中添加硫酸铵粉末, 搅拌 1 小时, 当硫酸铵粉末完全溶解 后置于 04下放置 12 小时, 用虹吸管吸出上清液 d, 浑浊部分用转速为 4000r/min 的 离心机离心 20min, 得到沉淀物 a, 保留沉淀物 a ; (5) 、 将沉淀物 a 悬浮于 150ml 蒸馏水中至沉淀物 a 全部溶解为止, 得混合液, 将混合液 放置于透析袋内, 在 04下透析 48h, 得到沉淀物 b ; (6) 、 将沉淀物 b 在转速为 4000r/min 的离心机内离心 15min, 得上清液 e ; (7) 、 将上清液 e 冰浴, 加入 -15的丙酮, 放入离心机内离心后, 得到沉淀物 c。
5、, 收集 沉淀物 c 并将其溶于少量蒸馏水中透析出丙酮后稀释沉淀物 d, 向每毫升沉淀物 d 中滴加 1mol 的硫酸锌溶液, 离心后得上清液 f, 将上清液 f 透析除盐后, 用孔径为 0.22um 微孔滤膜 过滤, 经过真空冷冻干燥后得到过氧化酶干制品。 权 利 要 求 书 CN 104017783 A 2 1/2 页 3 一种农作物提取过氧化氢酶的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种生物酶的提取, 具体涉及一种农作物提取过氧化氢酶的方法。 背景技术 0002 过氧化酶是一种类似血红素为辅基的酶, 其由微生物或植物所产生, 在生物中广 泛存在, 具有多种不同的生物功能, 主要催化 H2。
6、O2 和有机过氧化物对多种有机物和无机物 的氧化作用。它在蛋白质、 多肽、 激素、 病毒、 寄生虫、 生物降解及神经系统等方面都有应 用, 具有特异性强, 灵敏度高等优点。 0003 过氧化氢酶能催化很多反应, 过氧化氢酶是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化 的酶, 主要存在于细胞的过氧化氢酶体中, 可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物, 具有消 除过氧化氢和酚类。 胺类毒性的双重作用, 大豆和小麦属于双子叶和单子叶植物, 植物体中 含有大量的过氧化氢酶, 因为它跟植物的呼吸作用、 光合作用及生长素的氧化等等许多新 陈代谢反应有关, 因而大豆和小麦的叶片含有大量的过氧化氢酶, 现在, 科学家已然对。
7、大豆皮过氧化氢酶 , 也做过相应的性质研究, 大豆皮是大豆制油 工艺的副产品, 占整个大豆体积的 10%, 占整个大豆重量的 8%, 大豆皮主要是大豆外层包被 植物, 颜色为米黄色或浅黄色, 由油脂加热脱皮法或压碎筛选两种方法所得, 主要成分是细 胞壁和植物纤维, 粗纤维含量 38%, 粗蛋白 12.2%, 氧化钙 0.53%, 磷 0.18%, 木质素含量低于 2%。从大豆皮组成可知, 大豆皮富含纤维素等非沉淀多糖, 是一种天然膳食纤维源, 作为膳 食纤维源的大豆皮具有独特的生理活性, 且其中所含的铁不但含量高, 也不易被氧化, 基于 此, 国外对大豆皮开发重点也在于饲料和膳食纤维的加工利用。
8、上, 我国是大豆生产国, 随着 我国大豆榨油工业发展和对豆粕需要量的增加, 我国每年要进口大量的大豆, 随着全国大 豆产量和加工能力的不断提高, 作为副产品的大豆皮产量是非常可观的。 发明内容 0004 本发明公开了一种农作物提取过氧化氢酶的方法。 0005 其采用的技术方案如下 : 本发明以大豆皮、 大豆荚、 大豆秸秆、 小麦叶、 小麦秸秆为原料, 提供一种从大豆皮、 大 豆秸秆、 小麦叶、 小麦秸秆中提取过氧化物酶的工艺。 0006 过氧化氢酶的提取工艺 : 1、 取 100g 大豆皮、 100g 大豆荚、 100g 大豆秸秆、 100g 小麦叶、 100g 小麦秸秆粉碎后放 入研钵中, 。
9、研碎成匀浆, 过60目筛体后, 用高速离心机 (离心速率为4000r/min) 离心15min, 取上清液 a。 0007 2、 不断搅拌上清液 a, 同时向每升上清液中慢慢加入 260g 硫酸铵粉末 (饱和度为 0.4) , 搅拌 2 小时后, 置于 0下放置 12 小时, 得上清液 b, 将上清液 b 用虹吸管移出, 下层 浑浊液用离心速率为 3000r/min 的离心机离心 15min, 弃沉淀合, 将上清液 a 和上清液 b 合 并得上清液 c, 向上清液 c 中按每升上清液添加 256g 硫酸铵粉末 (饱和度为 0.8) 边添加边 说 明 书 CN 104017783 A 3 2/2。
10、 页 4 搅拌, 搅拌 1 小时, 当硫酸铵全部溶解后置于 04下放置 12 小时后用虹吸管吸出上清 液 d, 浑浊部分用转速为 4000r/min 的离心机离心 20min, 保留沉淀物 a, 将沉淀物 a 悬浮于 150ml 蒸馏水中 (至沉淀物 a 全部溶解为止) 的混合液, 将混合液放置于透析袋内, 在 0 4下透析48h, 得到沉淀物b, 将沉淀物b在转速为4000r/min的离心机内离心15min, 得上 清液 e。将上清液 e 冰浴, 加入 -15的丙酮, 放入离心机内离心后, 收集沉淀物 d 并溶于少 量蒸馏水中, 将丙酮透析出后稀释沉淀物 d, 向每毫升沉淀物 d 中滴加 1。
11、mol 的硫酸锌溶液, 离心后得上清液 f, 将上清液 f 透析除盐后, 用微孔滤膜 (孔径 0.22um) 过滤, 经过真空冷冻 干燥后得到过氧化酶干制品, 置于干燥器低温保存。 0008 本发明的优点在于 : 本发明取材方便, 所有材料取自于天然废弃农作物, 成本低 廉, 具有经济适用性, 本发明提取过程方便, 提取出的过氧化氢酶干制品可用在食品工业中 除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢、 也可被用于食品包装, 防止食物被氧化、 在纺织工 业中, 过氧化氢酶用于除去纺织物上的过氧化氢, 保证成品不含氧化物。 具体实施方式 0009 本发明以大豆皮、 大豆荚、 大豆秸秆、 小麦叶、 小麦秸秆。
12、为原料, 提供一种从农作物 中提取过氧化物酶的工艺。 0010 过氧化氢酶的提取工艺 : 1、 取 100g 大豆皮、 100g 大豆荚、 100g 大豆秸秆、 100g 小麦叶、 100g 小麦秸秆粉碎后放 入研钵中, 研碎成匀浆, 过60目筛体后, 用高速离心机 (离心速率为4000r/min) 离心15min, 取上清液 a。 0011 2、 不断搅拌上清液 a, 同时向每升上清液中慢慢加入 260g 硫酸铵粉末 (饱和度为 0.4) , 搅拌 2 小时后, 置于 0下放置 12 小时, 得上清液 b, 将上清液 b 用虹吸管移出, 下层 浑浊液用离心速率为 3000r/min 的离心机。
13、离心 15min, 弃沉淀合, 将上清液 a 和上清液 b 合 并得上清液 c, 向上清液 c 中按每升上清液添加 256g 硫酸铵粉末 (饱和度为 0.8) 边添加边 搅拌, 搅拌 1 小时, 当硫酸铵全部溶解后置于 04下放置 12 小时后用虹吸管吸出上清 液, 浑浊部分用转速为 4000r/min 的离心机离心 20min, 保留沉淀物 a, 将沉淀物 a 悬浮于 150ml 蒸馏水中 (至沉淀物 a 全部溶解为止) 的混合液, 将混合液放置于透析袋内, 在 0 4下透析48h, 得到沉淀物b, 将沉淀物b在转速为4000r/min的离心机内离心15min, 得上 清液 d。将上清液 d 冰浴, 加入 -15的丙酮, 放入离心机内离心后, 收集沉淀物 c 并溶于少 量蒸馏水中, 将丙酮透析出后稀释沉淀物 c, 向每毫升沉淀物 c 中滴加 1mol 的硫酸锌溶液, 离心后得上清液 e, 将上清液 e 透析除盐后, 用微孔滤膜 (孔径 0.22um) 过滤, 经过真空冷冻 干燥后得到过氧化酶干制品, 置于干燥器低温保存。 说 明 书 CN 104017783 A 4 。