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1、10申请公布号CN104178517A43申请公布日20141203CN104178517A21申请号201410408895222申请日20140819CGMCCNO664520121008C12P1/02200601A24B3/12200601C12R1/64520060171申请人云南中烟工业有限责任公司地址650231云南省昆明市五华区红锦路367号云烟科技园C区72发明人者为段焰青王明锋张伟王家俊刘娟陈微夏建军刘秀明74专利代理机构昆明协立知识产权代理事务所普通合伙53108代理人谢嘉旃习涵54发明名称一种金银花发酵提取物及其制备方法和应用57摘要本发明公开了一种金银花发酵提取物及其。
2、制备方法和应用。以金银花为原料，用长孢洛德酵母进行发酵，再由发酵液中提取致香成分后制成。所述的长孢洛德酵母LODDEROMYCESELONGISPORUS保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏号为CGMCCNO6645；保藏日期2012年10月08日。产品中含有多种致香物质，如苯乙醇、棕榈酸、棕榈酸乙酯、亚油酸、9,12,15十八碳三烯酸甲酯、肉豆蔻酸十四烷酸、二十五烷、月桂酸、芳樟醇、叶醇等。加香评吸试验结果表明，其能与烟香谐调，可明显提调烟香、细腻醇和烟气、降低刺激性、掩盖杂气、改善卷烟吸味，并产生一种清新的特殊香韵。83生物保藏信息51INTCL权利要求书1页说明书4页1。
3、9中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页10申请公布号CN104178517ACN104178517A1/1页21一种金银花发酵提取物，其特征在于以金银花为原料，用长孢洛德酵母进行发酵，再由发酵液中提取致香成分即得产品；所述的长孢洛德酵母LODDEROMYCESELONGISPORUS保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏号为CGMCCNO6645；保藏日期2012年10月08日。2制备权利要求1所述金银花发酵提取物的方法，包括以下步骤1取长孢洛德酵母CGMCC6645活化培养，得到长孢洛德酵母活化菌液；菌种活化培养条件为2830、160180R/。
4、MIN振荡培养，培养时间为1224小时；2将金银花压碎，过40目筛，加入1522倍蒸馏水，灭菌；3将活化菌液接种于金银花物料中，接种量为1525；接种后的发酵培养条件同活化培养条件；培养时间为1224小时；4发酵液过滤后8000R/MIN离心10分钟，取上清液，减压浓缩成浸膏，即为所需的金银花发酵提取物。3根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤4中所述的减压浓缩的温度优选为4565。4权利要求1所述的金银花发酵提取物在卷烟生产中的应用，具体为将金银花发酵提取物均匀地喷洒在烟丝上，添加量为812G/箱烟丝。权利要求书CN104178517A1/4页3一种金银花发酵提取物及其制备方法和应用技。
5、术领域0001本发明属于烟用添加剂技术领域，具体是涉及一种由金银花发酵物中提取致香成分得到的烟用香料。同时，本发明还涉及所述烟用香料的制备方法和在烟草加工中的具体应用。背景技术0002卷烟香气是卷烟品质的核心内容。不论是国际还是国内，降低焦油量已成为卷烟生产的一个重要课题，而伴随着焦油量的降低，烟味变淡，香气减弱，又难以被消费者接受。在降低卷烟焦油的同时，通过添加香料添加剂增进和提高烟气浓度和香味，是一种有效的弥补方式。0003天然香精香料是高价值的精细化工产品，而原来从天然动、植物提取的天然香料，由于原料有限，提取成本高，远远满足不了卷烟香料市场的需求。利用微生物发酵技术可以制备香料或进行香。
6、料的转化，制备得到的香料为天然级产品，在提高香料产品质量的同时，节约能源、降低成本，实现了天然香料加工技术的革命。因此，人们对香料的生物合成越来越感兴趣，生物技术将在天然香精香料研究和制备中发挥越来越大的作用。植物细胞中的某些多糖可以在产香酵母作用下转化成苯乙醇等致香物质，因此，可筛选产苯乙醇等致香物质的酵母种类，以适当的天然植物材料为底物，利用现代微生物发酵技术，制备天然香料添加剂，用于卷烟加香。0004金银花为忍冬科植物忍冬LONICERAJAPONICATHUNB的干燥花蕾，为常用中药，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症，应用历史悠久。
7、。药理研究表明，金银花具有抑菌、抗病毒、解热、抗炎、保肝、止血、抗氧化及免疫调节等作用。金银花的化学成分主要有黄酮类、三萜类及有机酸等，且还富含挥发油，尤其是挥发油和绿原酸，为主要有效成分。0005现有技术中，以金银花为底物，以产香酵母菌进行发酵，制备烟用香料添加剂的研究尚未见报道。发明内容0006本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种对改善卷烟吸味有益的金银花发酵提取物。0007本发明的另一目的是提供一种制备所述金银花发酵提取物的方法。0008本发明的目的还在于提供所述的金银花发酵提取物在卷烟生产中的应用。0009本发明的目的通过下述技术方案予以实现0010除非另有说明，本发明所采用的。
8、百分数均为质量百分数。0011一种金银花发酵提取物，其特征在于以金银花为原料，用长孢洛德酵母进行发酵，再由发酵液中提取致香成分即得产品；所述的长孢洛德酵母LODDEROMYCESELONGISPORUS保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏号为CGMCC说明书CN104178517A2/4页4NO6645；保藏日期2012年10月08日。0012制备所述金银花发酵提取物的方法，包括以下步骤00131取长孢洛德酵母CGMCC6645活化培养，得到长孢洛德酵母活化菌液；菌种活化培养条件为2830、160180R/MIN振荡培养，培养时间为1224小时；00142将金银花压碎，过40。
9、目筛，加入1522倍蒸馏水，灭菌；00153将活化菌液接种于金银花物料中，接种量为1525；接种后的发酵培养条件同活化培养条件；培养时间为1224小时；00164发酵液过滤后8000R/MIN离心10分钟，取上清液，减压浓缩成浸膏，即为所需的金银花发酵提取物。0017步骤4中所述的减压浓缩的温度优选为4565。0018所述的金银花发酵提取物在卷烟生产中的应用，具体为将金银花发酵提取物均匀地喷洒在烟丝上，添加量为812G/箱烟丝。0019本发明获得的金银花发酵提取物中含有多种挥发性成分，含量较高的致香物质主要有苯乙醇、棕榈酸十六烷酸、棕榈酸乙酯、亚油酸、9,12,15十八碳三烯酸甲酯、肉豆蔻酸十。
10、四烷酸、二十五烷、月桂酸、芳樟醇、叶醇等。加香评吸试验结果表明，该金银花发酵提取物能与烟香谐调，可明显提调烟香、细腻醇和烟气、降低刺激性、掩盖杂气、改善卷烟吸味，并产生一种清新的特殊香韵。0020与现有技术相比，本发明具有以下有益效果00211采用现代微生物发酵技术，制备纯天然香料添加剂；所用菌株易于保存，易于活化和发酵；00222所用原料价格低廉，来源丰富；00233生产工艺简单、操作性、规范性及可控性强，便于实现大规模工业化生产，具有良好的开发应用前景。0024保藏生物材料的说明0025本发明的菌株是从烤烟叶面上分离得到，鉴定结果表明该酵母菌属于长孢洛德酵母，该菌株命名为LODDEROMY。
11、CESELONGISPORUS。该菌株已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址中国北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所；保藏日期2012年10月08日；保藏号为CGMCCNO6645。长孢洛德酵母能转化细胞中的多糖生成苯乙醇等致香成分。具体实施方式0026为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明的保护范围。0027实施例100281培养基和培养条件0029将实验所用的长孢洛德酵母CGMCC6645接种于50ML的YPD液体培养基中，28、160R/MIN培。
12、养24小时，获得活化的液体菌种。00302金银花样品的制备说明书CN104178517A3/4页50031金银花充分干燥后，粉碎，过40目筛。称取金银花粉末20G，加入400ML蒸馏水20体积倍，灭菌，备用。00323金银花的产香酵母菌发酵处理0033将1中制备的长孢洛德酵母活化菌液8ML接种于2中准备好的金银花样品中接种量为2，28、160R/MIN振荡培养24小时，用于下一步实验。00344香料添加剂的提取0035将上述发酵液过滤后8000R/MIN离心10分钟，取上清液，50减压浓缩至浸膏状，即得所需的金银花发酵提取物，保存待用。00365产品特征及理化性质0037本产品为红棕色膏体，不。
13、澄清。产品的理化性质见表10038表1香料添加剂的理化性质003900406卷烟加香试验0041将制备得到的香料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量为10G/箱40KG烟丝/箱，并以不加添加剂的烟叶作为对照。00427评吸试验0043将处理组和对照组的烟丝放入恒温恒湿箱内平衡24H后，制成卷烟，样品和对照均随机编号，由评吸专家组成的评吸小组进行感官评吸。00448香料添加剂致香成分检测和应用效果评价0045致香成分检测结果表明香料添加剂含有近38种挥发性成分，其中含量较高的致香成分主要有苯乙醇、棕榈酸十六烷酸、棕榈酸乙酯、亚油酸、9,12,15十八碳三烯酸甲酯、肉豆蔻酸十四烷酸、二十五烷、月桂酸、。
14、芳樟醇、叶醇等。0046加香评吸试验结果表明，该香料添加剂与烟香较为谐调，可明显提高烟香、细腻醇和烟气、降低刺激性、掩盖杂气、改善卷烟吸味，并产生一种清新的特殊香韵。0047实施例20048重复实施例1，有以下不同点说明书CN104178517A4/4页60049菌种长孢洛德酵母CGMCC6645的活化培养条件为28、160R/MIN振荡培养，培养时间为24小时；金银花粉碎后加22倍蒸馏水，灭菌；活化菌液接种于金银花材料的接种量为25；接种后发酵培养时间为24小时；发酵液上清减压浓缩温度为55；将制备得到的香料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量为12G/箱。0050加香评吸试验结果表明，该香料添。
15、加剂能与烟香谐调，提高香气质，增加香气量，改善余味，掩盖杂气，并具有一种清新的特殊香韵。0051实施例30052重复实施例1，有以下不同点0053菌种长孢洛德酵母CGMCC6645的活化培养条件为30、180R/MIN振荡培养，培养时间为12小时；金银花粉碎后加15倍蒸馏水，灭菌；活化菌液接种于金银花材料的接种量为15；接种后发酵培养时间为12小时；发酵液上清减压浓缩温度为45；将制备得到的香料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量为8G/箱。0054加香评吸试验结果表明，该香料添加剂能与烟香谐调，提高香气质，增加香气量，改善余味，掩盖杂气，并具有一种清新的特殊香韵。0055实施例40056重复实施例1，有以下不同点0057菌种长孢洛德酵母CGMCC6645的活化培养条件为30、180R/MIN振荡培养，培养时间为12小时；金银花粉碎后加22倍蒸馏水，灭菌；活化菌液接种于金银花材料的接种量为25；接种后发酵培养时间为12小时；发酵液上清减压浓缩温度为65；将制备得到的香料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量为8G/箱。0058加香评吸试验结果表明，该香料添加剂能与烟香谐调，提高香气质，增加香气量，改善余味，掩盖杂气，并具有一种清新的特殊香韵。说明书CN104178517A。