一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法.pdf

本发明涉及一种从枳壳黄酮粗提物中分离纯化高纯度新橙皮苷的方法，主要包括用水和乙醇从枳壳中提取枳壳提取物，用大孔树脂柱层析法获取枳壳黄酮类粗提物，用正丁醇萃取及溶剂重结晶方法纯化制备高纯度的新橙皮苷。本发明扩大了提取新橙皮苷的原料取材范围，为制备高纯度的新橙皮苷提供了一种经济、可行的全新的方法。本发明方法取材方便，纯化工艺简单易行、成本低廉，适合于大批量生产。

1.  一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法，以枳壳药材饮片为原料，用溶剂回流提取，减压浓缩除去溶剂，得到枳壳粗提物，其特征是：
(a)对枳壳粗黄酮提取物用正丁醇进行萃取；
(b)对正丁醇萃取液进行减压浓缩，浓缩液放置使析出沉淀，收集沉淀物；
(c)沉淀物用甲醇或乙醇重结晶，获取高纯度新橙皮苷。

2.  根据权利要求1所述的一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法，其特征是：对正丁醇萃取液进行减压浓缩至正丁醇浓缩液∶药材为1～3∶1。

3.  根据权利要求1和2所述的一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法，其特征是：以水、5～95％乙醇为枳壳药材饮片提取溶剂，回流提取。

4.  根据权利要求1～3所述的一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法，其特征是：可用大孔树脂富集方式获取枳壳药材饮片中枳壳粗黄酮提取物。

一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法
技术领域
本发明属中药有效成分提取方法，主要涉及从中药中提取、分离单体化合物的方法，特别是涉及一种从枳壳黄酮粗提物中分离高纯度新橙皮苷的方法。
背景技术
新橙皮苷属于黄酮类化合物中的二氢黄酮类，通常在酸橙、枳实、枳壳、陈皮中有较多的含量。药理研究表明：枳实、枳壳中的黄酮类对大鼠平滑肌的非生理性收缩呈抑制作用，并可对抗氯化钡、乙酰胆碱引起的痉挛性收缩，此外还有抗炎作用。临床用于治疗胃胀痛，胃及十二指肠溃疡。新橙皮苷经氢化处理后形成新橙皮苷二氢查尔酮，是一种特殊的甜味剂，其甜度是蔗糖的1000倍。新橙皮苷具有较好的耐热、耐酸性，可作为饮料、食品的添加剂。目前，在欧美一些国家已开始应用，但由于生产成本较高，使用量受到限制。
新橙皮苷多从柑橘类植物中提取，但柑橘类植物中除了新橙皮苷之外，往往还含有柚皮苷、橙皮苷等理化性质非常接近的黄酮苷类，这使得从柑橘类提取物中分离新橙皮苷非常困难。J.A.Del Rio等研究了西班牙产的不同品种不同季节时期柑橘中的新橙皮苷、柚皮苷和橙皮苷的含量，选择了一个新橙皮苷含量很高，而柚皮苷和橙皮苷含量很少的柑橘品种来提取新橙皮苷，在国内则尚无相关的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法，本发明的方法通过以下技术方案实现：
1.提取枳壳粗黄酮提取物：取枳壳药材饮片，用溶剂回流提取，减压浓缩除去溶剂，得到枳壳粗黄酮提取物，其中(1)用60％的乙醇回流提取，提取液减压浓缩除去溶剂，过D101大孔树脂柱，分别用水及30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩除去溶剂，得粗黄酮提取物；(2)用水回流提取后再用95％的乙醇回流提取，将水提物减压浓缩，浓缩液过D101大孔树脂，用30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，收集60％乙醇洗脱液与95％的乙醇提取液合并，减压浓缩除去溶剂，得粗黄酮提取物；(3)用95％的乙醇回流提取，减压浓缩除去溶剂，得粗黄酮提取物。
2.获取高纯度新橙皮苷：将枳壳粗黄酮提取物水溶液用正丁醇萃取数次，对正丁醇萃取液减压浓缩，将浓缩液静置数小时使析出沉淀，收集沉淀物，沉淀物用甲醇或乙醇重结晶数次，获取高纯度新橙皮苷。
本发明利用新橙皮苷和柚皮苷等其它黄酮类化合物在正丁醇中溶解度的差异进行分离纯化，大大扩大了提取新橙皮苷的原料取材范围，使一些柚皮苷和新橙皮苷含量都较高的黄酮粗提物(如枳壳)也可用于制备新橙皮苷单体。本发明的突出进步和显著效果在于枳壳是一种常见易得的酸橙的干燥未成熟果实，取材方便，本发明纯化工艺简单易行、成本低廉，适合于大批量生产。
具体实施方式
本发明结合具体实施例作进一步说明。
实施例1：
取枳壳药材饮片，加8倍量水回流提取2小时；再用8倍95％地乙醇回流提取2次，每次2小时，将水提液减压浓缩至浓缩液∶药材为2∶1，过滤，滤液上样于D101型大孔树脂柱中，用3.2倍量30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，再用4倍量60％乙醇洗脱，收集洗脱液与95％的乙醇提取液合并，减压浓缩除去溶剂，加适量的水，使浓缩液∶药材为1∶1。
取浓缩液用6倍量正丁醇分4次萃取，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至正丁醇浓缩液∶药材为1∶1，冷却，放置过夜使沉淀，沉淀用50％的甲醇重结晶3次，得白色针状晶体，经分析此结晶为新橙皮苷，纯度为97.7％。
实施例2：
取枳壳药材饮片，用8倍量60％的乙醇回流提取3次，每次1.5小时。将提取液减压浓缩成浸膏，加水稀释成每ml含1g药材的浓度。过滤，滤液上样于D101型大孔树脂柱中，分别用水、30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，再用60％乙醇洗脱，收集8倍量洗脱液，减压浓缩除去溶剂，加适量的水，使药材∶浓缩液为1∶1.2。
取浓缩液用7倍量正丁醇分5次萃取，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至药材∶正丁醇浓缩液为1∶1.6，冷却，放置过夜使沉淀，沉淀物用50％的甲醇重结晶3次，得白色针状晶体，纯度为98.3％。
实施例3：
按实施例2获取枳壳粗黄酮浓缩液，用7倍量正丁醇分5次萃取，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至药材∶正丁醇浓缩液为1∶3，冷却，放置过夜使沉淀，沉淀物用50％的甲醇重结晶3次，得白色针状晶体。纯度为98.7％。
实施例4：
取枳壳药材，用8倍量95％的乙醇回流提取4次，每次1.5小时，将提取物减压浓缩成浸膏，加水稀释至提取液∶药材为1∶1的浓度。
取浓缩液用6倍量正丁醇分5次萃取，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至正丁醇浓缩液∶药材为1∶1，冷却，放置4小时使沉淀，沉淀用50％的甲醇重结晶3次，得白色针状晶体，纯度为98.1％。
无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的具体实施例应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。