小麦黄素的制备方法、制剂与用途 【技术领域】
本发明涉及小麦黄素的制备方法、制剂与用途。
背景技术
肿瘤是当今世界最大的疑难病症之一，死亡人数仍有上升趋势，其正在超过心血管疾病而成为人口死亡的第一原因。目前，临床上使用的抗肿瘤药物大多对肿瘤细胞抑制的选择性不高，毒性较大。因此，研究开发高效、低毒、新颖的抗肿瘤药物仍是一项艰巨的任务，也是全球性的科研课题。近年来研究表明，中医药在肿瘤的防治和康复方面具有重要的作用。而黄酮类化合物是自然界药用植物中的主要活性成分之一，具有调节血脂、清除自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等广谱的生理活性，因此，开发黄酮类化合物已引起国内外学者的广泛关注。
小麦黄素(tricin)是一种从蒲葵等植物药材中提取分离纯化而获得，是一种已知的黄酮类化合物。小麦黄素的结构式为：
目前国内尚无小麦黄素的抗肿瘤活性的文献及专利报道，存在分离纯化工艺粗糙，质量不可控等弊端。而且，市面上也未见关于小麦黄素的药物或药物组合物的出现。
【发明内容】
本发明的目的是提供植物源小麦黄素的制备方法。
本发明的另一目的是提供含有以上植物源小麦黄素的药物或药物组合物。
本发明还提供了含有植物源小麦黄素的制剂及该成分的用途。
本发明提供了如下技术方案：
本发明的植物源小麦黄素。小麦黄素是以蒲葵等药材作为起始原料提取的，纯度可达98％以上。
本发明所述植物源小麦黄素的制备方法，包括以下步骤：(1)提取：将自然晾干的植物药材粉碎后，用8～15倍量含水或不含水的有机试剂浸泡后提取1～3次，过滤，减压蒸馏回收溶剂，得总浸膏；(2)分离纯化：将总浸膏过层析柱，以石油醚∶乙酸乙酯(1∶1～1∶10)洗脱，合并相同组分，得到小麦黄素粗组分。多步重结晶，经冷冻干燥得到小麦黄素精品。
本发明所述植物源小麦黄素可以作为活性成分，加入药剂学上可以接受的辅料，按照药剂学上记载的制剂的制备方法制成制剂。
本发明所述植物源小麦黄素还可以作为活性成分之一，加入药剂学上接受的辅料，按照药剂学上记载的制剂的制备方法制成制剂。
所述的制剂包括注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、散剂、口服剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩剂、微丸等。
本发明的植物源小麦黄素及其制剂可在制备抗肿瘤药物中应用。
本发明具有的有益效果是：提取精制方法是一种工艺简单易行、提取率高、能规模化生产。
【附图说明】
【具体实施方式】
下面将结合实施例进一步说明本发明的实质内容和有益效果，该实施例仅用于说明本发明而非对本发明的限制。
实施例一植物源小麦黄素的制备
本发明所述植物源小麦黄素的制备方法，包括以下步骤：(1)提取：将自然晾干的植物药材粉碎后，用8倍量70％乙醇浸泡后，回流提取3次，过滤，减压蒸馏回收溶剂，得总浸膏；(2)分离纯化：将总浸膏过100～200目硅胶柱层析，以石油醚∶乙酸乙酯(1∶1～1∶10)洗脱，合并相同组分，得到小麦黄素粗组分。多步重结晶，经冷冻干燥得到小麦黄素精品。测定小麦黄素的纯度为98.3％。
实施例二植物源小麦黄素的制备
本发明所述植物源小麦黄素的制备方法，包括以下步骤：(1)提取：将自然晾干的植物药材粉碎后，用10倍量70％乙醇浸泡后，索氏提取3次，过滤，减压蒸馏回收溶剂，得总浸膏；(2)分离纯化：将总浸膏过聚酰胺柱层析，以石油醚∶乙酸乙酯(1∶1～1∶10)洗脱，合并相同组分，得到小麦黄素粗组分。多步重结晶，经冷冻干燥得到小麦黄素精品。测定小麦黄素的纯度为98.5％。
实施例三植物源小麦黄素的制备
本发明所述植物源小麦黄素的制备方法，包括以下步骤：(1)提取：将自然晾干的植物药材粉碎后，用15倍量70％乙醇浸泡后，超声提取2次，过滤，减压蒸馏回收溶剂，得总浸膏；(2)分离纯化：将总浸膏过大孔树脂柱层析，以石油醚∶乙酸乙酯(1∶1～1∶10)洗脱，合并相同组分，得到小麦黄素粗组分。多步重结晶，经冷冻干燥得到小麦黄素精品。测定小麦黄素的纯度为98.0％。
实施例四：
抗肿瘤生物活性筛选试验：
将对数生长的肿瘤细胞(人肝癌细胞HepG-2、人白血病HL60、宫颈癌细胞Hela、人鼻咽癌细胞CNE-2、人乳腺癌细胞MCF-7)用0.25％的胰蛋白酶消化，然后用含10％(体积百分含量)小牛血清的RPMI1640培养基悬浮细胞，制成细胞悬液，并分别将各肿瘤稀释至1.0×105个/ml，再将其接种至96孔培养板中，每孔200ul，于37℃，5％CO2的培养箱内培养24h，然后倾去各孔培养液。
将实施例1制得的植物源小麦黄素配成终浓度为1.6，8，40ug/ml，同时设实验组和空白对照组进行实验。将以上各组的培养板同时置于37℃，5％CO2的培养箱内培养2天。2天后向每孔加入50ul新鲜配制的1mg/ml四甲基偶氮唑蓝(MTT)溶液，并在37℃，5％CO2的条件下继续培养4h；小心弃上清，加入溶剂，充分溶解MTT还原产物；在酶标仪上测定各孔在波长492nm处的光密度值(OD值)，按公式计算肿瘤细胞生长抑制率。抑制率(％)＝1-(OD实验-OD空白)/(OD对照-OD空白)×100％。植物源小麦黄素对人不同肿瘤细胞HepG-2、HL60、Hela、CNE-2、MCF-7地抑制作用的结果如表1所示。
表1植物源小麦黄素对不同癌细胞株细胞生长的影响(X±s，n＝10)
与空白对照组比较，**P＜0.01
植物源小麦黄素对多种肿瘤细胞的抑制作用实验结果表明(表1)，植物源小麦黄素对人肝癌细胞HepG-2、人白血病HL60、结肠癌细胞SW1116、人鼻咽癌细胞CNE-2、人乳腺癌细胞MCF-7均有一定程度的抑制作用，且存在一定的量效关系。因此，植物源小麦黄素可以用于制备肝癌、白血病、结肠癌、鼻咽癌、乳腺癌的药物。
实施例五滴丸剂的制备
取植物源小麦黄素0.5g与10.5g聚乙二醇-6000混合均匀，加热熔融，化料后移至滴丸滴灌中，药液滴至6-8℃液体石蜡中，除油，制得滴丸400粒。
实施例六冻干粉针剂的制备
取降香油1.5g，加入到13ml饱和的羟丙基β-环糊精中，搅拌溶解，滤过，滤液低温干燥得降香油和羟丙基β-环糊精的包合物粉末。除上述降香油合羟丙基β-环糊精的包合物粉末外，再取植物源小麦黄素0.5g、甘露醇5.5g、依地酸钙钠0.9g和蒸馏水2ml，上述组分混匀后，冷冻干燥，分装300支，即得。
实施例七冻干粉针剂的制备
取植物源小麦黄素0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸钠0.9g和蒸馏水1ml，上述组分混合均匀后，冷冻干燥，分装500支，即得。