头孢氨苄的提纯方法 本发明涉及将D-苯基甘氨酰胺或D-苯基甘氨酸酯和/或7-氨基去乙酰氧基-头孢菌酸(cephalosporanic acid)和可选的蛋白质从含有这类杂质的固体头孢氨苄中除去的方法。
已知通过借助于D-苯基甘氨酰胺(PGA)或D-苯基甘氨酸酯，特别是D-苯基甘氨酸甲酯，进行7-氨基去乙酰氧基-头孢菌酸(7-ADCA)的(酶促)乙酰化，制备头孢氨苄(CEX)。这一方法例如在WO-A-93/12250中进行了描述。然而已发现，沉淀后获得的头孢氨苄一般含有相对大量的PGA和7-ADCA以及可选的蛋白质。在实践中，获得的头孢氨苄通常含有头孢氨苄量的0.1-3.0％(重量)的PGA和0.5-2.0％(重量)的7-ADCA。这样大量的杂质存在于头孢氨苄抗生素中是不合需要的。
本发明的目的是提供基本上除去存在于头孢氨苄中杂质的方法。
按照本发明，通过溶解固体头孢氨苄，并将其用活性炭处理便可达到该目的。
令人惊讶的是，已发现用碳处理期间，PGA和/或7-ADCA从溶液中除去，而用PGA乙酰化7-ADCA后，将活性炭加入反应混合物中不能使得沉淀后获得的固体头孢氨苄的PGA和7-ADCA的含量显著降低。
令人惊讶的是，用碳处理也被证明是从头孢氨苄中除去残留蛋白质的最有用的方法。诸如Bradford测定Anal.Biochem.1976，72，248-254之类的蛋白质染色法表明，用碳处理使得蛋白质含量明显降低。当如此用碳处理用PGA乙酰化7-ADCA后获得的反应混合物时，该方法对蛋白质地除去有效。
使用活性炭作为净化器是已知的，特别是用它除去诸如聚芳族物质之类的共轭物质。令人惊讶的是，现已发现相对于头孢氨苄，实际上可大量并高度选择性地除去例如PGA，而没有显著损失头孢氨苄。大部分7-ADCA和蛋白质也可以用该方法除去。为了防止头孢氨苄的损失，最好将头孢氨苄溶解，使得获得饱和头孢氨苄溶液。
原则上，任何类型的活性炭都可以用于本发明的方法。适宜的活性炭类型是例如市售的标准产品。适宜的活性炭实例是蒸汽活化碳，例如Brilloniet、NoritSX和NoritSA；和化学活性炭，例如NoritCA和NoritCX。
从溶液中除去含有PGA和7-ADCA以及可选的蛋白质的活性炭可以用已知方法，例如通过G4滤器(＝大约10μm孔径)过滤。碳也可以用作柱材料，让待处理溶液通过该柱。
用活性炭处理的温度不特别重要，为例如-5-35℃，最好为-2-30℃，特别是0-25℃。用活性炭处理优选的pH值基本上由头孢氨苄的稳定性和溶解度决定。处理既可以在酸性介质、也可以碱性介质中进行。在实践中，pH值通常为5.5-10，最好为6.0-9，或者为0-3，最好为0.5-2.5。
用活性炭处理后，头孢氨苄可以用通常已知的方法回收，例如通过蒸发、温度的降低或pH值的改变来回收。
现在参考实施例进一步阐述本发明，然而本发明不限于这些实施例。实施例I从头孢氨苄中选择性地除去PGA和7-ADCA
在该试验中，使用含有以下组分的组合物(PG＝D-苯基甘氨酸)：
CEX 95.7％
7-ADCA 0.07％
PG 0.01％
PGA 0.16％
将100g具有上述组成(即含有0.16％的PGA)的头孢氨苄悬浮于900g水中。滴加25％氨水溶液，直至pH值为8.1，这导致清亮溶液的生成。将5g Brilloniet加入该溶液中。然后于室温下搅拌1.5小时。
将混合物通过G4玻璃滤器过滤。接着在1小时内将混合物加入2g纯头孢氨苄在100g水中的溶液中，该溶液用25％氨水溶液预先调至pH7。在混合物加入期间，用6N含水硫酸保持pH值为7。
获得的浆液再搅拌1.5小时，然后通过G3玻璃滤器过滤。洗涤滤饼(3×100ml丙酮)并进行干燥，产生76.7g固体物质。
该固体物质的组分为：
CEX 95.2％
ADCA 0.02％
PG 0.01％
PGA 0.006％
结果，相对于头孢氨苄的PGA含量降低了27倍。母液中没有检测到PGA(因此它已都吸附到Brilloniet上)，母液含有大约20g头孢氨苄。
相对于头孢氨苄的7-ADCA含量也降低了3.5倍。实施例II从含蒸汽的头孢氨苄中除去残留的蛋白质
制备具有以下组分的溶液：50g头孢氨苄25g7-ADCA7.5gPGA2gPG440g软化水。
pH值设定为8.5，使得生成清亮溶液。借助于Bradford测定，测定A600，它上升为0.699(＝空白值)。接着将0.4ml酰基转移酶蛋白加入100g该溶液中。A600/Bradford：0.905。
然后加入1g Brilloniet，将混合物于室温下搅拌2小时，此后通过G4玻璃滤器过滤。A600/Bradford：0.762。该值表明，已除去大约加入蛋白质的50％。