一种药物及其制备方法与应用.pdf

本发明公开了一种药物及其制备方法及应用。本发明所提供的药物，它的活性成分为人参提取物和丹参提取物；所述人参提取物和丹参提取物的重量份数比为1∶(0.1-20)；所述人参提取物中，人参总皂苷的质量百分含量大于50％；所述丹参提取物中，丹参酚酸的质量百分含量大于50％。通过大鼠急性心肌梗塞实验和心肌缺血实验，结果表明，采用人参总皂苷与丹参总酚酸相配伍具有最佳的药效作用，能够有效抑制大鼠心肌梗塞面积，改善心肌缺血情况，而且保持了与原药材配伍方相同的疗效，本发明的药物组分清楚，质量容易控制。

1、  一种药物，它的活性成分由人参和丹参组成的原料制成；
所述人参为人参植株的根、茎、叶和花中的至少一种；
所述丹参为丹参植株的根；
所述人参和丹参的重量份数比为1∶(0.08-20)。

2、  一种药物，它的活性成分为人参提取物和丹参提取物；所述人参提取物和丹参提取物的重量份数比为1∶(0.1-20)；
所述人参提取物中，人参总皂苷的质量百分含量大于50％，优选为大于等于80％；所述丹参提取物中，丹参酚酸的质量百分含量大于50％，优选为大于等于80％。

3、  根据权利要求2所述的药物，其特征在于：所述人参总皂苷中，人参皂苷Rg1在人参总皂苷中的质量百分含量大于等于2％，人参皂苷Re在人参总皂苷中的质量百分含量大于等于2.5％，人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的质量百分含量大于等于2％。

4、  根据权利要求1-3中任一所述的药物，其特征在于：所述药物为以下三种药物中的任意一种：治疗和/或预防血管疾病的药物、促进骨髓间充质干细胞分化的药物和诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的药物。

5、  根据权利要求4所述的药物，其特征在于：所述血管疾病为心血管疾病、脑血管疾病或周围血管疾病；所述心血管疾病为冠心病、心绞痛、心肌缺血或缺氧或心肌梗塞；所述脑血管疾病为缺血性脑血管病或血管性痴呆；所述周围血管疾病为血栓闭塞性脑血管炎或静脉血栓。

6、  根据权利要求1-5中任一所述的药物，其特征在于：所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、栓剂、口腔崩解片、注射剂、输液剂、缓控释片剂、缓控释微丸、气雾剂或吸入剂。

7、  根据权利要求2-6中任一所述的药物，其特征在于：所述人参提取物和丹参提取物按照如下方法制备：
1)用乙醇水溶液或水对人参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到人参皂苷提取液；用乙醇水溶液对丹参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到丹参酚酸提取液；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的人参皂苷提取液进行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到人参总皂苷洗脱液；采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的丹参酚酸提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到丹参酚酸洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的人参总皂苷洗脱液进行干燥，得到人参提取物；对上述步骤2)获得的丹参酚酸洗脱液进行干燥，得到丹参提取物。

8、  根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述步骤1)中制备人参皂苷提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为50-95％，优选为90％；所述回流时间为30min-120min，优选为60min；
所述步骤1)中制备丹参酚酸提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为10-60％，优选为50％；所述回流时间为30min-120min，优选为30min；
所述步骤2)中制备人参皂苷洗脱液时，洗脱水溶性杂质时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量小于10％；洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为50-90％，优选为60-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤2)中制备丹参酚酸洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为40-60％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对人参总皂苷洗脱液和丹参酚酸洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。

9、  根据权利要求2-6中任一所述的药物，其特征在于：所述人参提取物和丹参提取物按照如下方法制备：
1)将人参和丹参按照1∶(0.08-20)的重量份数比混合，用乙醇水溶液或水对人参和丹参的混合物进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到含有人参皂苷和丹参酚酸的混合提取液；
所述人参为人参植株的根、茎、叶和花中的至少一种；
所述丹参为丹参植株的根；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的混合提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到含有人参总皂苷和丹参酚酸的混合洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的混合洗脱液进行干燥，得到人参提取物和丹参提取物的混合提取物。

10、  根据权利要求9所述的药物，其特征在于：所述步骤1)中制备混合提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为60％；所述回流时间为30-120min，优选为45min；
所述步骤2)中制备混合洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为50-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对混合洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。

11、  一种制备权利要求2、3、4、5和7中任一所述药物的方法，包括以下步骤：
1)用乙醇水溶液或水对人参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到人参皂苷提取液；用乙醇水溶液对丹参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到丹参酚酸提取液；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的人参皂苷提取液进行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到人参总皂苷洗脱液；采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的丹参酚酸提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到丹参酚酸洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的人参总皂苷洗脱液进行干燥，得到人参提取物粉末；对上述步骤2)获得的丹参酚酸洗脱液进行干燥，得到丹参提取物粉末；
4)将上述步骤3)获得的人参提取物粉末与丹参提取物粉末混合，得到权利要求2、3、4、5和7中任一所述的药物。

12、  根据权利要求11所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中制备人参皂苷提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为50-90％；所述回流时间为30min-120min，优选为60min；所述步骤1)中制备丹参酚酸提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为10-60％，优选为50％；所述回流时间为30min-120min，优选为30min；
所述步骤2)中制备人参皂苷洗脱液时，洗脱水溶性杂质时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量小于10％；洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为50-90％，优选为60-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤2)中制备丹参酚酸洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为40-60％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对人参总皂苷洗脱液和丹参酚酸洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。

13、  一种制备权利要求2、3、4、5和9中任一所述药物的方法，包括以下步骤：
1)将人参和丹参按照1∶(0.08-20)的重量份数比混合，用乙醇水溶液或水对人参和丹参的混合物进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到含有人参皂苷和丹参酚酸的混合提取液；
所述人参为植物人参的根、茎、叶和花中的至少一种；
所述丹参为植物丹参的根；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的混合提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到含有人参总皂苷和丹参酚酸的混合洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的混合洗脱液进行干燥，得到人参和丹参的混合提取物粉末，即为权利要求2、3、4、5和9中任一所述的药物。

14、  根据权利要求13所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中制备混合提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为50-70％；所述回流时间为30-120min，优选为45min；
所述步骤2)中制备混合洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为50-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对混合洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。

一种药物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种药物及其制备方法与应用，特别是涉及一种以人参和丹参为原料的药物及其制备方法与应用。
背景技术
心脑血管疾病是严重危害人类健康的一类疾病，随着社会压力的增加和我国人口老龄化的加剧，心血管疾病在我国的发病率居高不下。因此，开发治疗心血管疾病的药物具有重要的社会意义。
中药材人参是五加科人参属植物人参(Panax.ginsengC.A.Mey)的根。人参的根味甘、微苦、性温，具有调气养血、安神益智、生津止咳、滋补强身之功效。人参中主要含有皂苷、挥发油(人参炔醇、人参倍半萜烯、甾醇、脂肪酸)、糖、氨基酸、肽和维生素类等成分，到目前为止，已从红参、生晒参和白参中共分离得到40种人参皂苷，即人参皂苷R0、Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、20-glc-Rf、Rg1、Rg2、20(R)-人参皂苷-Rg2、Rg3、20(S)-人参皂苷-Rg3、Rg5、Rh1、20(R)-人参皂苷-Rh1、Rh2、20(S)-人参皂苷-Rh2、Rh4、Ri、Rs1、Rs2、丙二酰基人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、三七人参苷R1、西洋参皂苷R1、20(R)-人参皂苷-La、F4、25-hydroxy-ginsenoside-Rg2、25-hydroxy-ginsenoside-Rg2、Ia、Ib、koryoginsenoside-Rg1和-Rg2。人参的茎、叶和花也含有人参皂苷类成分，亦可代替人参入药。此外，将人参的根经过加工、炮制，制备成生晒参、红参，亦可入药。
中药材丹参是唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge.)的干燥的根及根茎。丹参在心血管疾病方面具有广泛的药理作用，其中丹参酚酸是一类含有酚羟基的有机酸类化合物，是丹参水溶性成分中重要的组成部分，可减轻缺血缺氧所致血管内皮损伤、促进血管内皮增生，具有改善缺血缺氧所致的心肌细胞损伤、抗动脉粥样硬化、抑制血小板聚集和抗血栓形成的作用。丹参酚酸A、B、C、D、E、F、G、H、I和异丹参酚酸C等都具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基的作用，其中含量最高的两个成分丹参酚酸A(SalA)和丹参酚酸B(SalB)的活性最强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护及抗动脉粥样硬化等作用。机体代谢过程中产生的氧自由基不能被清除时，可对机体产生有害损伤，其中心肌细胞受害尤为显著。氧自由基具有明显的抑制钾离子通道活动的作用，SalA则具有促进钾离子通道开放的作用，并能逆转被氧自由基抑制的钾离子通道的活动，从而起到保护作用。
目前，人参中皂苷的提取方法一般多采用乙醇提取后再用正丁醇萃取处理的方法，该方法的缺点是萃取操作繁琐，容易产生乳化现象，给操作带来不便。此外，正丁醇的沸点较高(117.7℃)，难以挥发去除，因而其在提取物里易于残留。亦有采用水提醇沉的提取方法，但工艺繁琐、能耗大。丹参的水溶性酚酸类组分多采用水提醇沉、水提后过树脂再醇沉(中国专利CN1129572A)、水提醇沉后过大孔树脂(中国专利CN1384090A)或聚酰胺柱(中国专利CN1242364A)、水提后先后用聚酰胺柱和大孔树脂层析(中国专利CN1459448A)，然后减压或冷冻干燥等方法来获得。但以上提取丹参总酚酸的方法存在以下缺点：1、所制得的丹参提取物中，丹参总酚酸的含量不高，产率较低，一般在2～4％；2、采用高浓度乙醇醇沉，使产业化生产安全性大大降低，乙醇消耗量大，生产成本高；3、高浓度乙醇醇沉步骤，影响丹参提取物中丹参总酚酸的产率；4、需要大量浓缩水，不便于工业化大生产，操作较为复杂；5、一般选取丹参素和原儿茶醛作为控制丹参制剂质量的指标成分，但原儿茶醛有毒副作用，用丹参素代表丹参的活性不甚合理。
发明内容
本发明的目的是提供一种药物及其制备方法与应用，该药物可治疗和/或预防血管疾病、促进骨髓间充质干细胞分化和诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞。
所述血管疾病可为心血管疾病、脑血管疾病或周围血管疾病；所述心血管疾病可为冠心病、心绞痛、心肌缺血或缺氧或心肌梗塞，所述脑血管疾病可为缺血性脑血管病或血管性痴呆，所述周围血管疾病可为血栓闭塞性脑血管炎或静脉血栓。
本发明所提供的药物，它的活性成分由人参和丹参组成的原料制成；所述人参为植物人参的根、茎、叶和花中的至少一种；所述丹参为植物丹参的根；所述人参和丹参的重量份数比为1∶(0.08-20)。其中，人参和丹参可以为炮制后人参和丹参，也可以为人参和丹参的鲜药材。
该药物的活性成分具体可为人参提取物和丹参提取物，所述人参提取物和丹参提取物的重量份数比为1∶(0.1-20)；所述人参提取物中，人参总皂苷的质量百分含量大于50％，优选为大于等于80％，如80-83％；其中，人参总皂苷包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rf，所述人参皂苷Rg1在人参总皂苷中的质量百分含量大于等于2％，人参皂苷Re在人参总皂苷中的质量百分含量大于等于2.5％，人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的质量百分含量大于等于2％；所述丹参提取物中，丹参酚酸的质量百分含量大于50％，优选为大于等于80％，如89-95％。
本发明的药物，在需要时，可以加入药学上可接受的载体，制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、口腔崩解片、注射剂、输液剂、缓控释片剂、缓控释微丸、气雾剂或吸入剂；所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂等，还可以加入香味剂或甜味剂等。
本发明药物中的人参提取物和丹参提取物可按照如下方法制备：
1)用乙醇水溶液或水对人参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到人参皂苷提取液；用乙醇水溶液或水对丹参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到丹参酚酸提取液；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的人参皂苷提取液进行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到人参总皂苷洗脱液；采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的丹参酚酸提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到丹参酚酸洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的人参总皂苷洗脱液进行干燥，得到人参提取物；对上述步骤2)获得的丹参酚酸洗脱液进行干燥，得到丹参提取物。
上述步骤1)中制备人参皂苷提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为50-95％，优选为90％；所述人参和乙醇水溶液的重量份数比为1∶(6-15)，优选为1∶10；所述回流时间为30min-120min，优选为60min；所述步骤1)中制备丹参酚酸提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为10-60％，优选为50％；所述丹参和乙醇水溶液的重量份数比为1∶(5-15)，优选为1∶10；所述回流时间为30min-120min，优选为30min；
所述步骤2)中制备人参皂苷洗脱液时，洗脱水溶性杂质时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量小于10％；洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为50-90％，优选为60-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤2)中制备丹参酚酸洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为40-60％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对人参总皂苷洗脱液和丹参酚酸洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。
本发明药物中的人参提取物和丹参提取物还可以按照如下方法制备：
1)将人参和丹参按照1∶(0.08-20)的重量份数比混合，用乙醇水溶液或水对人参和丹参的混合物进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到含有人参皂苷和丹参酚酸的混合提取液；
所述人参为植物人参的根、茎、叶和花中的至少一种；
所述丹参为植物丹参的根；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的混合提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到含有人参总皂苷和丹参酚酸的混合洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的混合洗脱液进行干燥，得到人参提取物和丹参提取物的混合提取物。
所述步骤1)中制备混合提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为30-90％％，优选为60％；所述人参和丹参混合物与乙醇水溶液的重量份数比为1∶(6-15)，优选为1∶10；所述回流时间为30-120min，优选为45min；
所述步骤2)中制备混合洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为50-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对混合洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。
本发明的另一个目的是提供上述药物的制备方法。
本发明所提供的药物可以采用以下两种方法中的任意一种方法制备得到。
其中一种制备方法包括以下步骤：
1)用乙醇水溶液或水对人参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到人参皂苷提取液；用乙醇水溶液或水对丹参进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到丹参酚酸提取液；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的人参皂苷提取液进行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到人参总皂苷洗脱液；采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的丹参酚酸提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到丹参酚酸洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的人参总皂苷洗脱液进行干燥，得到人参提取物粉末；对上述步骤2)获得的丹参酚酸洗脱液进行干燥，得到丹参提取物粉末；
4)将上述步骤3)获得的人参提取物粉末与丹参提取物粉末混合，得到本发明的药物。
所述步骤1)中制备人参皂苷提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为50-95％，优选为90％；所述人参和乙醇水溶液的重量份数比为1∶(6-15)，优选为1∶10；所述回流时间为30min-120min，优选为60min；所述步骤1)中制备丹参酚酸提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为10-60％，优选为50％；所述丹参和乙醇水溶液的重量份数比为1∶(5-15)，优选为1∶10；所述回流时间为30min-120min，优选为30min；
所述步骤2)中制备人参皂苷洗脱液时，洗脱水溶性杂质时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量小于10％；洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为50-90％，优选为60-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤2)中制备丹参酚酸洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为40-60％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对人参总皂苷洗脱液和丹参酚酸洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。
本发明所提供的药物的另外一种制备方法包括以下步骤：
1)将人参和丹参按照1∶(0.08-20)的重量份数比混合，用乙醇水溶液或水对人参和丹参的混合物进行回流提取，将得到的提取液离心，取上清液，得到含有人参皂苷和丹参酚酸的混合提取液；
所述人参为植物人参的根、茎、叶和花中的至少一种；
所述丹参为植物丹参的根；
2)采用大孔吸附树脂柱对上述步骤1)获得的混合提取液进行吸附，先用水洗脱水溶性杂质，然后再用乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到含有人参总皂苷和丹参酚酸的混合洗脱液；
3)对上述步骤2)获得的混合洗脱液进行浓缩、干燥，得到人参和丹参的混合提取物粉末，得到本发明的药物。
所述步骤1)中制备混合提取液时，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为60％；所述人参和丹参混合物与乙醇水溶液的重量份数比为1∶(6-15)，优选为1∶10；所述回流时间为30-120min，优选为45min；
所述步骤2)中制备混合洗脱液时，洗脱树脂柱时，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为30-90％，优选为50-70％；所述大孔吸附树脂柱中的树脂填料为下述A)或B)：
A)下述三种树脂中的任意一种：HPD100型树脂、HPD700型树脂和S-8型树脂；
B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型这四种树脂中的任意一种与SephadexLH-20凝胶、C18键合相和C8键合相这三种中的至少一种组成的复合树脂；
所述步骤3)中，对混合洗脱液进行干燥的温度为50-60℃。
本发明的药物及其制备方法，具有以下优点：
1、本发明的药物药效物质基础明确，包括配伍比例明确的人参总皂苷与丹参总酚酸；通过大鼠急性心肌梗塞实验和心肌缺血实验，结果表明，采用人参总皂苷与丹参总酚酸相配伍具有最佳的药效作用，能够有效抑制大鼠心肌梗塞面积，改善心肌缺血情况，而且保持了与原药材配伍方相同的疗效，本发明的药物组分清楚，质量容易控制。
2、在提取丹参总酚酸的步骤中，采取直接醇提的方法，克服了现有技术中需要大量浓缩水的缺陷，简化了生产步骤，优化了生产条件，不污染环境，具有步骤简单、操作方便、易于产业化的优点；
3、本发明方法避免了现有技术中因醇沉造成丹参酚酸类有效组分损失的问题，具有有效组分损失少、成品产率高的优点；
4、本发明方法避免了现有技术中渗漉提取耗费时间长的缺点，具有提取效率高的优点；
5、采用本发明方法得到的丹参提取物中的丹参总酚酸含量高，大大提高了丹参药材的利用率；
6、采用本发明方法制备治疗心血管疾病的药物进行产业化生产时，较目前采用的其它方法可以使生产成本大大降低；
7、本发明方法工艺稳定，所制备出的药物各批次之间质量差异小，同时可通过色谱指纹图谱，对药物中的人参总皂苷与丹参总酚酸的组分进行含量测定，能有效控制本发明药物的质量。
附图说明
图1为本发明药物颗粒剂对异丙肾上腺素所致急性心肌缺血大鼠心电图的影响曲线图
图2为本发明药物颗粒剂干预中国小型猪骨髓间充质干细胞体外分化过程实验的具体流程
图3为含药血清诱导30d时，干预MSCs细胞形态变化的情况
图4为含药血清诱导30d时，各组细胞的2-DE电泳检测结果
图5为含药血清诱导30d时，部分蛋白的变化情况
图6为蛋白Lamin A/C在MSCs分化过程中的表达情况
图7为含药血清干预MSCs定向分化过程中蛋白的2-DE图谱
图8为含药血清干预MSCs定向分化过程中蛋白的差异变化趋势
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图，对本发明做进一步说明。
实施例1、治疗心血管疾病的药物的制备
本实施例的治疗心血管疾病的药物由人参提取物和丹参提取物组成，其中，人参提取物和丹参提取物的制备方法如下：
一、人参提取物的制备
取人参(Panax.ginsengC.A.Mey)的根粉碎过筛后得到10目的人参粗粉。准确称取人参粗粉10kg，加入80L体积百分含量为90％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min；收集提取液，然后再向残渣中加入80L体积百分含量为90％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min；再重复上述提取过程一次。将三次的提取液混合，冷却至室温，过滤，取滤液减压浓缩至无醇味，得到2.3kg提取物浸膏；取2.3kg提取物浸膏加入14L水稀释至20℃时溶液的密度为1.06g/ml，得到15L人参皂苷提取液。
采用预处理好的弱极性大孔吸附树脂柱(在树脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙烯苯为骨架的型号为HPD100的树脂填料，该弱极性大孔吸附树脂柱和HPD100树脂填料购自河北沧州宝恩化工有限公司)，对上述获得的15L人参皂苷提取液进行分离纯化，填料后柱床体积为21L。人参皂苷提取液经色谱柱吸附后，用3倍于树脂柱床体积的水以2bv/h(1bv/h即每小时按1倍柱床体积的流量)的流速冲洗树脂柱，除去多糖等水溶性杂质，弃去洗脱液；再用4倍于树脂柱床体积的体积百分含量为70％的乙醇以1bv/h的流速洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到人参总皂苷洗脱液；将人参总皂苷洗脱液减压浓缩为稠清膏，将稠清膏再经60℃恒温常压干燥，得到500g人参提取物粉末。
采用HPLC法检测人参提取物粉末中人参总皂苷的含量，具体的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱。流速：1ml/min，检测波长为203nm。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算，不低于6000。具体的梯度洗脱条件如下：

结果表明，上述得到的人参提取物粉末中，人参总皂苷的质量百分含量为80％，人参皂苷Rg1在人参总皂苷中的质量百分含量为3.4％，人参皂苷Re在人参总皂苷中的质量百分含量为3.7％，人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的质量百分含量为4.1％；人参皂苷Rf在人参总皂苷中的质量百分含量为0.12％。
二、丹参提取物的制备
取丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge.)的根10kg，切成饮片，加入100L体积百分含量为50％的乙醇浸泡4h后进行回流提取，提取时间为30min；收集提取液，然后再向残渣中加入100L体积百分含量为50％的乙醇进行回流提取，提取时间为30min。将两次的提取液混合，得到150L丹参提取液，再将该150L丹参提取液进行抽滤、浓缩至50L。
采用大孔吸附树脂柱(以型号为HPD700的苯乙烯型树脂为填料，购自河北沧州宝恩化工有限公司)，对上述获得的50L丹参提取液进行分离纯化，填料后柱床体积为65L。丹参提取液经色谱柱吸附后，用3倍于树脂柱床体积的水以2bv/h(1bv/h即每小时按1倍柱床体积的流量)的流速冲洗树脂柱，弃去洗脱液，然后再用3倍于树脂柱床体积的体积百分含量为60％的乙醇以1bv/h的流速洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到丹参酚酸洗脱液；将丹参酚酸洗脱液进行减压浓缩，得到775g为比重为1.2(60℃)的稠清膏；对稠清膏再经60℃恒温常压干燥，得到620g丹参提取物粉末。
采用HPLC法检测丹参提取物粉末中丹参总酚酸的含量，具体的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以按以下体积比混合的溶液作为流动相：甲醇∶乙腈∶甲酸∶水＝30∶10∶1∶59；检测波长286nm。理论塔板数按丹酚酸B峰计算，不低于2000。
精确称取2.5g上述获得的丹参提取物粉末，加入40ml水，浸泡1h后用超声处理0.5h，取上清液；向剩余残渣中再加入40ml水，超声处理0.5h，取上清液；再重复过程一次。将三次收集的上清液混合并用水定容至250ml，作为供试样品。将供试样品稀释5倍，取2ml置于50ml的量瓶中，加无水乙醇至10ml，再加入4ml质量百分含量为0.3％的十二烷基磺酸钠和2ml按照1∶0.9的体积比混合的由三氯化铁溶液和铁氰化钾溶液组成的混合液(其中，三氯化铁溶液的质量百分含量为0.6％，铁氰化钾溶液的质量百分含量为0.9％)，将混合后的溶液摇匀，暗处放置5min后，用0.1mol·L^-1盐酸溶液定容，摇匀，暗处放置20min后，分光光度计720nm处进行检测。取配制好的1mg/mL的丹酚酸B标准溶液分别稀释2、5、10、20、50和100倍，用上述方法检测，记录结果。以浓度mg·mL^-1为横坐标，以吸光度Abs值为纵坐标，经excel软件处理得到回归方程。根据丹酚酸B标准溶液的回归方程计算出总酚酸的含量与产率。
结果表明，上述得到的丹参提取物粉末中，丹参总酚酸的质量百分含量为89.8％，丹参总酚酸的产率为6.6％。
三、治疗心血管疾病的药物的制备
将210g上述步骤一制备的人参提取物粉末与90g上述步骤二制备的丹参提取物粉末混合，得到本发明的药物。
实施例2、治疗心血管疾病的药物的制备
人参提取物和丹参提取物的制备方法同实施例1。将200g按照上述实施例1步骤一的方法制备的人参提取物粉末与20g按照上述实施例1步骤二的方法制备的丹参提取物粉末混合，得到本发明的药物。
实施例3、治疗心血管疾病的药物的制备
人参提取物和丹参提取物的制备方法同实施例1。将20g按照上述实施例1步骤一的方法制备的人参提取物粉末与400g按照上述实施例1步骤二的方法制备的丹参提取物粉末混合，得到本发明的药物。
实施例4、治疗心血管疾病药物的药效实验
1、大鼠急性心肌缺血与心肌梗塞药效实验
分别取上述实施例1、2和3制备的药物，用生理盐水配为1g/ml的药液进行药效实验。
取SD大鼠(购自北京玛斯实验动物公司)75只，随机分为5组，分别为正常组、模型组、阳性对照组、高剂量药物组和低剂量药物组，每组15只。其中模型组、阳性对照组、高剂量药物组和低剂量药物组大鼠均腹腔多点注射异丙肾上腺素(ISO)，每日1次，每次10mg·kg^-1体重，连续注射2d，构建急性心肌缺血模型大鼠，正常组给予相同剂量的生理盐水。建模成功后，高剂量药物组大鼠按照320mg·kg^-1体重的剂量分别灌胃给予上述实施例1、2和3制备的治疗心血管疾病的药物提取物；低剂量药物组大鼠按照64mg·kg^-1体重的剂量分别灌胃给予上述实施例1、2和3制备的治疗心血管疾病的药物提取物；阳性对照组大鼠按照200mg·kg^-1体重的剂量灌胃给予复方丹参滴丸(购自天津天士力公司)；模型组大鼠和正常组大鼠按照7.5ml·kg^-1体重的剂量灌胃给予同体积的生理盐水。以上各组每天给药一次，共给药7天。
最后1次给药1h后，用乌拉坦按照1.3g·kg^-1体重的剂量对上述各组大鼠进行腹腔注射麻醉。将各组大鼠仰卧位固定，接MPA2000多道生物信号分析系统(II导联)，记录各组大鼠5min内的正常心电图，将发生异常的大鼠弃去不用。待稳定后，除正常组大鼠给予以生理盐水外，其余各组大鼠均腹腔多点注射异丙肾上腺素(ISO)，注射计量为10mg·kg^-1体重。分别记录注射ISO后0.5、1、2、5、10、15和20min时各组大鼠的心电图，观察J点(QRS波群的终点与T波交接处)的变化。以其降低的mV数作为指标，ΔJ(心电图J点变化值)＝腹腔注射ISO后各时间点心电图J点值(mV)-腹腔注射ISO前心电图J点值(mV)。
具备以下条件之一者判断为大鼠心肌缺血阳性标准：
1)J点向下或向上偏移≥0.1mV；
2)T波高耸，超过同导联R波的1/2；
3)T波高耸伴J点移位。
以QRS复合波起点的连线作等电线，以J点的偏移程度为诊断依据，并选择2秒内心跳计算J点改变的毫伏平均数作为心肌缺血程度的指标。
实施例1的治疗心血管疾病的药物提取物对异丙肾上腺素(ISO)所致的急性心肌缺血大鼠心电图的影响结果如图1所示。从图中可以看出，各组大鼠腹腔注射ISO后，心电图J点均发生明显变化，短暂升高后，随着时间的延长，逐渐下降；对抗ISO诱导的大鼠心电图J点升高作用以给药组最优，给药组大鼠各时间点ΔJ与模型组大鼠相比，差异较显著(P＜0.05)。
测完心电图以后，给予实施例1的药物的各组SD大鼠在ip ISO后1h，开腹腔自下腔静脉取血，分离血清冷冻保存，测量其中LDH、CK、SOD和MDA的含量。结果如表1所示。
表1急性心肌缺血大鼠血清中LDH、CK、SOD以及MDA值(x±s，n＝9)

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
结果表明，与正常组相比，模型组大鼠LDH和CK值显著升高(P＜0.01)，SOD值显著降低(P＜0.05)，MDA值极显著升高(P＜0.001)。与模型组相比，给药组的LDH、CK和MDA值均显著降低(P＜0.05)。对于LDH，高剂量组与低剂量组均好于阳性对照组，对于CK，高剂量组效果最好，低剂量组与阳性对照组相近，对于SOD与MDA，三者效果相近。
取血结束后，迅速取出各组SD大鼠的心脏，以生理盐水清洗干净后，剔除非心肌组织，用滤纸吸干，称重，在冰箱里冷冻30分钟，取出后将心室切成0.1cm厚的心肌片，置于硝基四氮唑蓝(NBT)溶液中，在37℃水浴中温孵染色15min，将心肌非兰染区(梗塞区)切下，称湿重，计算心肌非兰染区重量与总心脏重量之比即为心肌梗塞面积(心肌梗塞面积＝(梗塞区心脏重/总心脏重量)×100％)。结果如表2所示。
表2急性心肌缺血大鼠心脏梗塞面积(x±s，n＝9)

与模型组比较，*P＜0.05  ***P＜0.001。
结果表明，与正常组相比，模型组大鼠的心脏梗塞面积显著升高(P＜0.001)；与模型组相比，高剂量药物组大鼠心肌梗塞面积明显减少，具有显著性差异(P＜0.05)。
2、治疗心血管疾病的药物提取物促进中国小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化过程实验
具体实验流程如图2所示。
分别将上述实施例1、2和3的药物溶液以10ml·kg^-1体重的剂量对SD大鼠进行灌胃给药，每日灌胃2次，连续给药3d，最后一次给药1h后，取大鼠的血清，加入培养基中，制成4％的含药血清。
中国小型猪的骨髓间充质干细胞(MSCs)(购自北京协和医院动物室)经提取、纯化后培养于DMEM/F12培养基中，使细胞密度达100个/100μL。将中国小型猪MSCs分为A、B、C三组，A组为MSCs增殖组；B组为5-aza诱导组，即在培养过程中加入5-氮胞苷(5-aza)(购自上海生工生物工程技术服务有限公司)，使其在培养基中的终浓度为10μmol/L；C组为含药血清组，即在培养过程中加入5-aza，使其在培养基中的终浓度为10μmol/L，同时加入上述制备的4％含药血清。
给予实施例1的药物的各组细胞培养30d时的细胞形态如图3所示。其中，图3A、3B和3C分别表示上述A、B、C三个实验组。结果表明，在培养基中加入上述制备的含药血清，可以使细胞形态发生变化，结合单用5-aza诱导MSCs定向分化时细胞形态变化的情况，初步表明含药血清在5-aza诱导MSCs定向分化过程中起到抑制细胞增殖、促进细胞分化的作用。用实施例2或3的药物制备的含药血清在5-aza诱导MSCs定向分化过程中也能起到抑制细胞增殖、促进细胞分化的作用。
给予实施例1的药物的上述各组细胞培养30d时，分别提取蛋白，进行2-DE电泳，进行蛋白质组学分析2-DE电泳的具体条件如下：蛋白上样量：150μg；2-DE电泳条件和参数：pH 5-8IPG线性胶条(17cm)；10kV下聚焦60kVh；12％PAGE用于分离蛋白，恒流电泳(30mA/gel)运行约8h。银染检测凝胶蛋白点，结果如图4所示。其中，图4A、4B和4C分别表示上述A、B、C三个实验组。结果表明，含药血清能够干预MSCs分化过程中蛋白的表达。
上述各组细胞培养30d时，部分蛋白的变化情况如图5所示。实验设两次重复。图5中，横坐标表示不同的蛋白，表3中仅列出显著性变化蛋白；纵坐标表示各蛋白的表达情况。
表3含药血清干预MSCs分化过程中差异蛋白鉴定情况

从图5中可以看出，类似核纤层蛋白A/C在MSCs分化前没有表达，分化后可以检测出该蛋白的表达，在含药血清的作用下，该蛋白表达呈现约5.7倍的上调趋势，表明含药血清可以促进MSCs的分化过程；抗氧化酶2在MSCs分化过程中呈现递增趋势，而含药血清作用于MSCs分化过程后，抑制了抗氧化酶2的表达。
核纤层蛋白A/C在MSCs分化过程中的表达情况如图6所示。从图6中也可以看出，类似核纤层蛋白A/C在MSCs分化前没有表达，分化后可以检测出该蛋白的表达，在含药血清的作用下，该蛋白表达呈现出上调趋势，表明含药血清可以促进MSCs的分化过程。
用实施例1的药物制备的含药血清干预MSCs定向分化过程中不同时间点(6d和30d)的蛋白2-DE图谱如图7所示。其中，图7A为含药血清干预MSCs定向分化6d时蛋白的2-DE图谱，图7B为含药血清干预MSCs定向分化30d时蛋白的2-DE图谱。通过对这两个时间点的2-DE图谱的比较，可以分析在含药血清干预分化过程中蛋白的变化趋势。图8中列出了两次重复实验中，含药血清干预诱导MSCs分化前后一些显著性变化蛋白的表达情况。图8中，横坐标表示不同的蛋白，各蛋白的编号及名称如表4所示；纵坐标表示各蛋白的表达情况。6C1表示第一次实验，含药血清组6d时的表达情况，6C2表示第二次实验，含药血清组6d时的表达情况，30C1表示第一次实验，含药血清组30d时的表达情况，30C2表示第二次实验，含药血清组30d时的表达情况。
表4定向分化过程蛋白鉴定结果

以上实验结果表明，在含药血清干预MSCs定向分化过程中，部分蛋白根据其分子结构特点及其在细胞内的分布情况，通过不同的信号途径参与细胞增殖或分化过程，并由此导致上述多种蛋白表达上呈现差异。在5-aza诱导下，MSCs体外定向分化为心肌细胞过程中，表达呈现差异的蛋白参与了MSCs的分化过程，而含药血清与5-aza协同作用可以诱导MSCs的分化，在相关蛋白的表达上有所体现。用实施例2或3的药物制备的含药血清与5-aza协同作用也可以诱导MSCs的分化。
3、诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的基因表达检测
已有许多文献报道5-aza可以诱导BMMSCs向心肌细胞分化，其分化的机制可能是由于5-aza能够使细胞DNA中某些胞嘧啶去甲基化而引起的。
取上述步骤2中经5-aza诱导后的MSCs细胞(即B组细胞)和经5-aza和实施例1的药物制备的含药血清诱导30天后的MSCs细胞(即C组细胞)，分别提取其总RNA，并反转录为cDNA，以该cDNA为模板，分别设计引物PCR扩增以下10个基因：Il1a、Pla2g2a、Ccl20、Ccl2、Mmp9、IL6、Sncg、2’5’-AS、Pem、3αHSD。具体引物如下：

根据基因表达的上调、下调，以及含药血清诱导作用的时间点、作用持续时间和基因的生理功能将含药血清诱导作用方式分为五种作用模式：组分长时间诱导方式、组分全程上调诱导方式、促进MSCs代谢发育的作用方式、抑制MSCs癌变的作用方式和增强细胞生命基础指征的作用方式。
1)组分长时间诱导方式：基因Il1a、Ccl20、Ccl2、Pla2g2a和Mmp9对含药血清的敏感方式类似，以10天、20天时间点为活跃期。以10天时间点基因Il1a、Ccl20、Ccl2、Pla2g2a和Mmp9的变化量进行对比，整体趋势是5-aza组近似或强于含药血清组；但以连续作用时间长短进行比对，含药血清组在10天、20天时，基因Il1a、Ccl20、Ccl2、Pla2g2a和Mmp9都有表达上升趋势，明显强于5-aza诱导组。说明上述步骤三制备的药物有更缓慢、更稳定的功效。
2)组分全程上调诱导方式：Mmp9(基质金属肽酶9)是一种蛋白水解酶，有实验证实，在人动脉粥样硬化不稳定性斑块中MMP9过度表达，活性增强，并能够分解动脉粥样硬化斑块中的胶原片段。含药血清诱导刺激作用下，Mmp9基因在10天至40天的时间内均呈上调表达，表明上述步骤三制备的药物用于急性心肌梗塞治疗时，会持续性的刺激Mmp9基因表达上调，作用在心肌梗塞产生的动脉粥样硬化斑块处，使斑块的基质降解，从而为新生的心肌细胞替代斑块处坏死的心肌细胞创造有利的条件。
3)促进MSCs代谢发育的作用方式：Il6(白细胞介素6)基因定量检测结果显示，只有含药血清组10天时间点时Il6基因表达明显升高。说明含药血清对Il6基因有明显的干预作用，而且发挥作用的最佳时间为10天。20天、30天和40天时，所有样本中Il6基因表达均呈现下调，30天时下调最为明显，考虑此时细胞凋亡已经开始。
4)抑制MSCs癌变的作用方式：Sncg(同型核蛋白γ)基因定量检测结果显示，5-aza诱导组和含药血清组中Sncg基因均在30天时有明显的表达下降。Sncg基因变异是多种癌症恶化关键因素，与癌细胞的生长、浸润、转移和预后有关。
5)增强细胞生命基础指征的作用方式：Pem(多态上皮黏液素)基因是胞内信号转导分子，在成体细胞中没有表达，但在生殖细胞中有表达，与胚胎细胞分化和性腺发育有关；2’5’-AS(2′5′寡聚腺苷酸合成酶)基因是干扰素发挥作用的一个媒介，具有抗病毒、抑制DNA合成和细胞生长、调节免疫反应等生物功能；3αHSD(3α-羟-类固醇脱氢酶)是类固醇代谢途径中最初的酶之一，血清中的总胆汁酸(TBA)是一类具有3α-羟基的类固醇衍生物，在3αHSD催化下，脱氢生成相应的3-酮类固醇，在此过程中将辅酶NAD+还原为NADH+H+，进一步调节6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活性，参与糖的代谢循环。
分析以上各基因的功能发现，与生物体生命维持的10大类基本基因功能均有涉及。结果分析表明，Il1a、Pla2g2a、Ccl20、Ccl2、Mmp9这5个基因可能在诱导分化MSCs成为心肌样细胞的作用机制上发挥了主要功能，而其它5个基因又分别在促进MSCs代谢发育、抑制MSCs的癌变过程、增强细胞生命基础指征方面发挥了辅助性的功能。因此认为上述步骤三制备的药物诱导MSCs分化成心肌样细胞的过程是多功能、多网络、多基因的协调作用的结果。
免疫荧光结果表明，5-aza诱导组诱导MSCs分化成心肌样细胞的诱导转化率高于含药血清组，但基因定量检测结果表明，含药血清组的关键基因的表达改变持续时间长于5-aza诱导组，考虑5-aza诱导作用显效快，能够在短时间内发挥其作用，而含药血清组恰恰相反，表明上述实施例1、2或3制备的药物可能对遗传表达的物质基础-基因发挥范围更大、程度更深的诱导作用，这种作用由量到质达到显效所需的时间更长。所以，认为上述实施例1、2或3制备的药物诱导MSCs分化成心肌样细胞的作用，表观现象不如5-aza明显，但作用的本质基础的改善效率要优于5-aza。
实施例5、治疗心血管疾病的药物颗粒剂的制备
一、治疗心血管疾病的药物颗粒剂的制备
取上述实施例1步骤一制备的人参提取物粉末100g和上述实施例1步骤二制备的丹参提取物粉末10g，将二者混合均匀，再加入360g糊精(加入糊精的重量是人参提取物粉末与丹参提取物粉末重量之和的3倍)和240g蔗糖粉(加入蔗糖粉的重量是人参提取物粉末与丹参提取物粉末重量之和的2倍)，混合均匀，制成为粒度为16目的药物颗粒，60℃条件下对药物颗粒进行干燥，得到治疗心血管疾病的药物颗粒剂。
二、动物实验
具体实验方法同实施例4。结果表明，本实施例的药物颗粒剂对大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治疗效果与实施例1、2和3的药物的效果相同。
实施例6、治疗心血管疾病的药物注射剂的制备
一、人参提取物的制备
取人参(Panax.ginsengC.A.Mey的花粉碎过筛后得到10目的人参花粗粉。准确称取人参花粗粉150g，加入1500ml体积百分含量为90％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min；收集提取液，然后再向残渣中加入1500ml体积百分含量为90％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min。将两次提取液混合，冷却至室温，过滤，取滤液减压浓缩至无醇味，得到32g提取物浸膏；取32g提取物浸膏加入90ml水稀释至20℃时溶液的密度为1.06g/ml，得到96ml人参皂苷提取液。
采用预处理好的弱极性大孔吸附树脂柱(在树脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙烯苯为骨架型号为HPD700的树脂填料，该弱极性大孔吸附树脂柱和HPD700树脂填料购自河北沧州宝恩化工有限公司)，对上述获得的96ml人参皂苷提取液进行分离纯化，填料后柱床体积为117ml。人参皂苷提取液经色谱柱吸附后，用3倍于树脂柱床体积的水以2bv/h(1bv/h即每小时按1倍柱床体积的流量)的流速冲洗树脂柱，除去多糖等水溶性杂质，弃去洗脱液；再用4倍于树脂柱床体积的体积百分含量为60％的乙醇以1bv/h的流速洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到人参总皂苷洗脱液；将人参总皂苷洗脱液减压浓缩为稠清膏，将稠清膏再经60℃恒温常压干燥，得到9g人参花提取物粉末(其中人参总皂苷的含量达83％(测定方法同实施例1))，人参皂苷Rg1在人参总皂苷中的质量百分含量为2.3％，人参皂苷Re在人参总皂苷中的质量百分含量为2.6％，人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的质量百分含量为3.1％；人参皂苷Rf在人参总皂苷中的质量百分含量为0.015％。
二、丹参提取物的制备
取丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge.)的根10kg，切成饮片，将饮片粉碎过10目筛制成丹参粗粉，加入100L体积百分含量为50％的乙醇浸泡4h后进行回流提取，提取时间为30min；收集提取液，然后再向残渣中加入100L体积百分含量为50％的乙醇进行回流提取，提取时间为30min。将两次的提取液混合，得到150L丹参提取液，再将该150L丹参提取液进行抽滤、浓缩至50L。
采用大孔吸附树脂柱(以型号为HPD300的苯乙烯型树脂为填料，购自河北沧州宝恩化工有限公司)，对上述获得的50L丹参提取液进行分离纯化，填料后柱床体积为65L。丹参提取液经色谱柱吸附后，用3倍于树脂柱床体积的水以2bv/h(1bv/h即每小时按1倍柱床体积的流量)的流速冲洗树脂柱，弃去洗脱液，然后再用3倍于树脂柱床体积的体积百分含量为40％的乙醇以1bv/h的流速洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到丹参酚酸洗脱液；将丹参酚酸洗脱液进行减压浓缩，得到820g为比重为1.2(60℃)的稠清膏；对稠清膏再经60℃恒温常压干燥，得到660g丹参提取物粉末(其中丹参总酚酸的产率为6.6％)。经检测，丹参提取物粉末中，丹参总酚酸的含量为94.7％(测定方法同实施例1)。
三、治疗心血管疾病的注射剂的制备
取上述步骤一制备的人参提取物粉末10g和上述步骤二制备的丹参提取物粉末200g，再加入630ml注射用水，搅拌均匀，于4℃条件下静置24h。吸取上清液，按0.05g注射剂用活性炭/100ml上清液的比例在上清液中加入注射剂用活性炭，40℃条件下保温30min，用0.22μm微孔滤膜过滤；取滤液，再加入注射用水使混合液的总重量为840g，搅拌均匀，安瓿灌封，115℃条件下热压灭菌30分钟，包装，得到治疗心血管疾病的药物注射剂。
四、动物实验
具体实验方法同实施例4。结果表明，本实施例的药物注射剂对大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治疗效果与实施例1、2和3的药物的效果相同。
实施例7、治疗心血管疾病的药物缓释片的制备
一、人参提取物的制备
准确称取取人参(Panax.ginsengC.A.Mey)的叶片8kg，加入64L体积百分含量为90％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min；收集提取液，然后再向残渣中加入64Lml体积百分含量为90％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min；再重复上述提取过程一次。将三次的提取液混合，冷却至室温，过滤，取滤液减压浓缩至无醇味，得到1.15kg提取物浸膏；取1.15kg提取物浸膏加入4.1L水稀释至20℃时溶液的密度为1.06g/ml，得到4.4L人参皂苷提取液。
采用预处理好的弱极性大孔吸附树脂柱(以聚苯乙烯或聚二乙烯苯为骨架，在树脂柱中填充型号为S-8的树脂填料，购自河北沧州宝恩化工有限公司)，对上述获得的4.4L人参皂苷提取液进行分离纯化，填料后柱床体积为5.7L。人参皂苷提取液经色谱柱吸附后，用3倍于树脂柱床体积的体积百分含量为5％的乙醇以2bv/h(1bv/h即每小时按1倍柱床体积的流量)的流速冲洗树脂柱，除去多糖等水溶性杂质，弃去洗脱液；再用4倍于树脂柱床体积的体积百分含量为70％的乙醇以1bv/h的流速洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到人参总皂苷洗脱液；将人参总皂苷洗脱液减压浓缩为稠清膏，将得到的450g稠清膏再经60℃恒温常压干燥，得到320g人参提取物粉末(其中人参总皂苷的含量达81％(测定方法同实施例1))，人参皂苷Rg1在人参总皂苷中的质量百分含量为2.1％，人参皂苷Re在人参总皂苷中的质量百分含量为2.6％，人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的质量百分含量为2.5％；人参皂苷Rf在人参总皂苷中的质量百分含量为0.03％。
二、丹参提取物的制备
取丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge.)的根10kg，切成饮片，将饮片粉碎过10目筛制成丹参粗粉，加入100L体积百分含量为50％的乙醇浸泡4h后进行回流提取，提取时间为30min；收集提取液，然后再向残渣中加入100L体积百分含量为50％的乙醇进行回流提取，提取时间为30min。将两次的提取液混合，得到150L丹参提取液，再将该150L丹参提取液进行抽滤、浓缩至50L。
采用大孔吸附树脂柱(以型号为HPD300的苯乙烯型树脂为填料，购自河北沧州宝恩化工有限公司)，对上述获得的50L丹参提取液进行分离纯化，填料后柱床体积为63L。丹参提取液经色谱柱吸附后，用3倍于树脂柱床体积的水以2bv/h(1bv/h即每小时按1倍柱床体积的流量)的流速冲洗树脂柱，弃去洗脱液，然后再用3倍于树脂柱床体积的体积百分含量为50％的乙醇以1bv/h的流速洗脱树脂柱，收集洗脱液，得到丹参酚酸洗脱液；将丹参酚酸洗脱液进行减压浓缩，得到812g为比重为1.2(60℃)的稠清膏；对稠清膏再经60℃恒温常压干燥，得到640g丹参提取物粉末(其中丹参总酚酸的产率为6.4％)。经检测，丹参提取物粉末中，丹参总酚酸的含量为91.6％(测定方法同实施例1)。
三、治疗心血管疾病的药物缓释片的制备
取上述步骤一制备的人参提取物粉末50g和上述步骤二制备的丹参提取物粉末50g，将二者混合均匀，再加入100g羟丙基甲基纤维素(规格为SH4000)(加入羟丙基甲基纤维素的重量是人参提取物粉末与丹参提取物粉末的重量之和)和100g乳糖(加入乳糖的重量是人参提取物粉末与丹参提取物粉末的重量之和)，混合均匀，制成为粒度为20目的颗粒，60℃条件下对颗粒进行干燥，再加入1.5g硬脂酸镁，使硬脂酸镁覆于已制成的颗粒表面(硬脂酸镁的重量占缓释片总重量的0.5％)，最后再进行压片，得到治疗心血管疾病的药物缓释片，每片重1g。
四、动物实验
具体实验方法同实施例4。结果表明，本实施例的药物缓释片对大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治疗效果与实施例1、2和3的药物的效果相同。
实施例8、一种治疗心血管疾病的药物片剂的制备
一、人参和丹参混合提取物的制备
将250g红参饮片与250g丹参饮片混合，加入4000ml体积百分含量为50％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min，收集提取液，然后再向残渣中加入3500ml体积百分含量为50％的乙醇进行回流提取，提取时间为45min；再重复上述提取过程一次。将三次的提取液混合，冷却至室温，过滤，取滤液减压浓缩至无醇味，得到127g提取物浸膏；取127g提取物浸膏加入600ml水进行稀释，得到640ml混合提取液。
采用预处理好的弱极性大孔吸附树脂柱(在树脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙烯苯为骨架的型号为HPD100的树脂填料，购自河北沧州宝恩化工有限公司)，对上述获得的640ml混合提取液进行分离纯化，填料后柱床体积为790ml。混合提取液经色谱柱吸附后，用7倍于树脂柱床体积的水以2bv/h(1bv/h即每小时按1倍柱床体积的流量)的流速冲洗树脂柱，除去水溶性杂质，弃去洗脱液；再用3倍于树脂柱床体积的体积百分含量为40％的乙醇以2bv/h的流速洗脱树脂柱一次，用3倍于树脂柱床体积的体积百分含量为65％的乙醇以2bv/h的流速洗脱树脂柱一次，收集两次的洗脱液并将其合并，得到人参总皂苷和丹参酚酸的混合洗脱液；将人参总皂苷和丹参总酚酸的混合洗脱液进行干燥，得到22g人参和丹参的混合提取物粉末。其中，人参总皂苷的含量为31.3％，人参皂苷Rg1在人参总皂苷中的质量百分含量为4.1％，人参皂苷Re在人参总皂苷中的质量百分含量为4.3％，人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的质量百分含量为3.9％，人参皂苷Rf在人参总皂苷中的质量百分含量为0.4％；丹参总酚酸的含量为33.7％(测定方法同实施例1)。
二、治疗心血管疾病的药物片剂的制备
称取22g上述步骤一制备的人参和丹参的混合提取物粉末，加入22g淀粉(加入淀粉的重量和混合提取物粉末的重量相等)和11g乳糖(加入乳糖的重量是混合提取物粉末重量的一半)，混合均匀，制成粒度为16目的颗粒，经干燥，压片，得到治疗心血管疾病的药物片剂。
四、动物实验
具体实验方法同实施例4。结果表明，本实施例的药物片剂对大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治疗效果与实施例1、2和3的药物的效果相同。
实施例9、一种治疗心血管疾病的药物汤剂的制备及其药效实验
一、治疗心血管疾病的药物汤剂的制备
取生晒参饮片与丹参饮片按7∶3的重量比混合，在得到的100g混合物中加入800ml水煎煮1小时，过滤，分别取煎煮液和滤渣，在滤渣中再加入600ml水煎煮1小时，将两次的煎煮液合并，过滤、浓缩，得到1100ml滤液，该滤液即为治疗心血管疾病的药物汤剂。该汤剂中，人参总皂苷的含量为3.4mg/ml，人参皂苷Rg1的含量为Rg1的含量0.18mg/ml，人参皂苷Re在人参总皂苷中的含量为0.23mg/ml，人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的含量为0.14mg/ml；丹参总酚酸的含量为1.1mg/ml(测定方法同实施例1)。
二、治疗心血管疾病的药物汤剂的药效实验
按照上述实施例4的方法构建急性心肌缺血模型大鼠，并分为模型组和给药组，给药组大鼠按照5.0ml/kg体重的剂量灌胃给予上述步骤一制备的治疗心血管疾病的药物汤剂，模型组给予相同剂量的生理盐水，考察该药物对异丙肾上腺素(ISO)所致急性心肌缺血大鼠心脏梗死面积的影响(x±s，n＝9)。结果如表5所示。
表5治疗心血管疾病的药物汤剂对急性心肌缺血大鼠心脏梗死面积的影响

与模型组比较，*P＜0.05  **P＜0.01
结果表明，给药组在一定程度上可以有效抑制心脏梗死面积。