一种利福平纳米混悬剂及其制备方法 【技术领域】
本发明属于兽用药物领域， 尤其涉及一种治疗禽大肠杆菌、 沙门氏菌、 鸭浆膜炎等 疾病的利福平纳米混悬剂的制备方法。背景技术
利福平， 又名甲哌利复霉素， 甲哌力复霉素， 力复平。由利福霉素 SV 半合成的衍生 物， 利福平为超广谱抗菌药， 易溶于氯仿、 甲醇， 微溶于乙醇、 丙酮或乙醚， 难溶于水。室温 下、 对热均稳定， 遇光易变质。其分子结构式如下 ：
利福平的抗菌机理为特异性地与细菌依赖的 RNA 多聚酶 β 亚单位结合， 阻止 mRNA 合成， 使 DNA 和蛋白质的合成停止而达到杀菌作用。在治疗剂量时， 仅抑制细菌的 RNA 多聚 酶， 对人和动物细胞内的 RNA 多聚酶无影响， 故对人和动物安全。利福平对繁殖期和静止期 的细菌均有作用， 且能透入细胞内， 对胞内菌也有强大的杀灭作用， 属全效杀菌药。利福平 抗菌谱广， 对革兰氏阳性 (G+) 菌和革兰氏阴性 (G-) 菌均有很强的杀灭作用。可杀灭多种 G+ 球菌和 G- 球菌， 如金黄色葡萄球菌等， 对 G- 杆菌如大肠杆菌等也有抑制作用， 尤其对结 核杆菌及麻风杆菌有强大的杀灭作用， 高浓度利福平对衣原体和某些病毒也有作用， 利福 平对许多 G+ 菌的 MIC ＜ 0.1μg/mL( 血清浓度 )， 而对许多 G- 菌， MIC 介于 8 ～ 32μg/mL， MIC 差异并不是因为利福平对 G+ 菌和 G- 菌 RNA 多聚酶的抑制程度不同， 而是由于其渗透 G+ 菌外膜比渗透 G- 菌外膜更容易所致。
利福平的给药途径有多种， 本品口服吸收良好， 空腹口服， 0.45-0.6g， 2 ～ 3 小时 血浓度达峰值 ( 分别为 15 和 23mg/L)， 利福平有效血浓度维持 12 小时。吸收后迅速分布于 组织器官和体液中， 血清蛋白结合率 75 ～ 80％·t1/2 为 5.2 小时。利福平大部分自胆汁 排出， 可由肠道再吸收形成肝肠循环， 以致长时间维持较高的血液浓度。 同时利福平脂溶性 高， 穿透力强， 可广泛分布到全身各组织， 包括奶、 骨、 脑脊液、 渗出液、 腹水、 软组织等， 尤其 在肺、 肝、 胆汁、 尿液中的浓度较高， 利福平也可进入巨噬细胞， 以杀死胞内感染菌。
兽医临床上， 因其具有超高效广谱杀菌、 体内分布广 ( 可分布到细胞内 ) 等优点，
除用于防治结核杆菌、 麻风杆菌感染外， 也适合用于防治对其他抗生素耐药难治的细菌感 染及胞内菌感染。药敏实验结果显示， 利福平对猪、 家禽大肠杆菌、 鸭疫李氏杆菌等有较好 的抑制作用。国内将利福平用于畜禽大肠杆菌病、 鸭传染性浆膜炎的防治取得了非常理想 的临床效果。
利福平在临床上虽有诸多优点， 由于其属于难溶药物， 不但难溶于水， 而且难溶于 有机溶剂， 使得其运用非常受限。 利福平大多作为预混剂拌料给药， 由于禽类采食习惯的特 殊性， 拌料给药方式不仅不方便， 而且还有药物浪费严重、 给药剂量不准等缺点。 正是如此， 近年来利福平混悬液越来越受到人们的青睐， 但利福平水混悬液存在易氧化， 效价损失严 重的特点， 在生产储存过程中不稳定。使用有机溶剂做成的利福平混悬液， 虽相对稳定， 但 存在成本高， 同时对机体有一定的刺激性作用， 在治疗大肠杆菌、 沙门氏菌等疾病时， 可引 起的肠道粘膜受损或出血， 应用起来更是危害较大。 本发明所述的利福平纳米混悬液， 其溶 剂主要为纯化水， 不但生产成本较低， 对机体无任何刺激性作用， 更是由于新型稳定剂和抗 氧化剂的引入， 使得利福平水混悬液即使在长期储存中也能保持良好的稳定性、 不降解、 不 变色、 无结晶、 易混悬等诸多优点， 同时由于利福平水混悬液为纳米级别， 混悬体系更稳定， 即使药物原液在稀释后也可稳定、 均匀的悬浮于水中， 不但不会堵塞饮水器， 而且给药剂量 准确， 使用方便， 见效快。此外纳米混悬剂还有以下优点 ： (1) 增加了药物的溶出速率 ；
(2) 增加了药物的饱和溶解度 ；
(3) 纳米混悬剂的药物粒子对体内的黏膜组织具有黏附性， 延长了药物在体内的 滞留时间， 提高了药物的生物利用度 ；
发明内容
本发明目的在于提供一种利福平纳米混悬剂及其制备方法， 以解决其方便给药， 减少浪费和保证剂量的问题。
本发明一方面涉及提供利福平纳米混悬剂的组方， 其中主药为利福平 ； 药用辅料 包括润湿剂、 表面活性剂、 助悬剂、 反絮凝剂、 稳定剂和抗氧化剂。
所述的主药利福平用量为 3 ～ 30％ (W/V)。
所述药用辅料中的润湿剂包括但不限于乙醇、 丙三醇、 丙二醇中的一种或组合， 用 量为 1 ～ 10％ (V/V)。
所述药用辅料中的表面活性剂包括但不限于月桂醇硫酸钠、 十二烷基磺酸钠、 失 水山梨醇单月桂酸酯、 失水山梨醇单硬脂酸酯、 失水山梨醇单油酸酯、 聚氧乙烯失水山梨醇 单油酸酯等的一种或组合， 用量为 0.01 ～ 0.1％ (W/V)。
所述药用辅料中的助悬剂包括但不限于甘油、 山梨醇、 海藻酸钠、 羧甲基纤维素、 羧甲基纤维素钠等的一种或组合， 用量为 0.1 ～ 10％ (W/V)。
所述药用辅料中的反絮凝剂包括但不限于枸橼酸盐、 枸橼酸氢盐、 酒石酸盐、 酒石 酸氢盐， 用量为 1 ～ 2.5％ (W/V)。
所述药用辅料中的稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮 (PVP-K15)， 用量为 1.0 ％～ 5.0 ％ (W/V) ； 抗氧化剂为二氧化硫脲， 用量为 0.1％～ 3.0％ (W/V)。
本发明另一方面涉及提供利福平纳米混悬剂的制作工艺， 它包括如下步骤 ：(1) 先将反絮凝剂溶入少量纯化水中， 再加入主药利福平、 润湿剂、 表面活性剂， 搅 拌得溶液 A。
(2) 取适量纯化水， 以 20％氢氧化钠溶液调节 PH 值为 10.5 ～ 11.5 之间， 加入抗 氧化剂， 加热溶解后放置至室温， 再加入稳定剂和助悬剂， 搅拌溶解得溶液 B。
(3) 将溶液 B 倒入溶液 A 中， 搅拌混匀后， 用纯化水定溶至 100％ (V/V)， 得到溶液 C。
(4) 将溶液 C 通过高压均质机进行分散和微粉化， 选择适宜的压强以保证药物的 粒度和确保制剂温度不要过高。
(5) 通过 2 次循环均质后得到纳米级利福平混悬液。
本发明所述的利福平纳米混悬剂可饮水给药， 并且原液稀释后可均匀分散于水 中， 并保持稳定的悬浮状态， 不但解决了方便给药、 减少浪费、 确保剂量的问题， 而且还拥有 了药物的溶出速率增加、 药物的饱和溶解度增加、 药物在体内的滞留时间延长， 生物利用度 提高、 不堵塞饮水器等新的特性。使得利福平在治疗禽大肠杆菌、 沙门氏菌、 鸭浆膜炎等疾 病时能够充分的发挥药物作用。 具体实施方式
实施例 1 ：
利福平纳米混悬剂的组方 ：
组分 用量
利福平 3％ (W/V)
乙醇 3％ (V/V)
月桂醇硫酸钠 0.06％ (W/V)
羧甲基纤维素钠 0.5％ (W/V)
枸橼酸氢钠 2％ (W/V)
聚乙烯吡咯烷酮 1.0％ (W/V)
二氧化硫脲 0.1％ (W/V)
纯化水 加至 100％ (V/V)
利福平纳米混悬剂的配制方法 ：
(1) 先将枸橼酸氢钠溶入少量纯化水中， 再加入利福平、 乙醇和月桂醇硫酸钠， 搅 拌得溶液 A。
(2) 取适量纯化水， 以 20％氢氧化钠溶液调节 PH 值为 10.5 ～ 11.5 之间， 加入二 氧化硫脲， 加热溶解后放置至室温， 再加入聚乙烯吡咯烷酮和羧甲基纤维素钠， 搅拌溶解得 溶液 B。
(3) 将溶液 B 倒入溶液 A 中， 搅拌混匀后， 用纯化水定溶至 100％ (V/V)， 得到溶液 C。
(4) 将溶液 C 通过高压均质机进行分散和微粉化， 选择适宜的压强以保证药物的 粒度和确保制剂温度不要过高。
(5) 通过 2 次循环均质后得到纳米级利福平混悬液。
实施例 2 ：利福平纳米混悬剂的组方 ：
组分 用量
利福平 15％ (W/V)
甘油 6％ (V/V)
十二烷基磺酸钠 0.05％ (W/V)
羧甲基纤维素钠 0.5％ (W/V)
枸橼酸氢钠 2％ (W/V)
聚乙烯吡咯烷酮 1.5％ (W/V)
二氧化硫脲 0.5％ (W/V)
纯化水 加至 100％ (V/V)
利福平纳米混悬剂的配制方法 ：
(1) 先将枸橼酸氢钠溶入少量纯化水中， 再加入利福平、 甘油和十二烷基硫酸钠， 搅拌得溶液 A。
(2) 取适量纯化水， 以 20％氢氧化钠溶液调节 PH 值为 10.5 ～ 11.5 之间， 加入二 氧化硫脲， 加热溶解后放置至室温， 再加入聚乙烯吡咯烷酮和羧甲基纤维素钠， 搅拌溶解得 溶液 B。
(3) 将溶液 B 倒入溶液 A 中， 搅拌混匀后， 用纯化水定溶至 100％ (V/V)， 得到溶液C。 (4) 将溶液 C 通过高压均质机进行分散和微粉化， 选择适宜的压强以保证药物的 粒度和确保制剂温度不要过高。
(5) 通过 2 次循环均质后得到纳米级利福平混悬液。
实施例 3 ：
利福平纳米混悬剂的组方 ：
组分 用量
利福平 30％ (W/V)
乙醇 10％ (V/V)
十二烷基硫酸钠 0.05％ (W/V)
羧甲基纤维素钠 0.5％ (W/V)
枸橼酸氢钠 2％ (W/V)
聚乙烯吡咯烷酮 2.0％ (W/V)
二氧化硫脲 0.2％ (W/V)
纯化水 加至 100％ (V/V)
利福平纳米混悬剂的配制方法 ：
(1) 先将枸橼酸氢钠溶入少量纯化水中， 再加入利福平、 乙醇和十二烷基硫酸钠， 搅拌得溶液 A。
(2) 取适量纯化水， 以 20％氢氧化钠溶液调节 PH 值为 10.5 ～ 11.5 之间， 加入二 氧化硫脲， 加热溶解后放置至室温， 再加入聚乙烯吡咯烷酮和羧甲基纤维素钠， 搅拌溶解得 溶液 B。
(3) 将溶液 B 倒入溶液 A 中， 搅拌混匀后， 用纯化水定溶至 100％ (V/V)， 得到溶液
C。 (4) 将溶液 C 通过高压均质机进行分散和微粉化， 选择适宜的压强以保证药物的 粒度和确保制剂温度不要过高。
(5) 通过 2 次循环均质后得到纳米级利福平混悬液。
实施例 4 ：
利福平纳米混悬剂的稳定性 ：
试验样品 ： 利福平纳米混悬液。
强光影响试验 ：
试验条件 ： 照度为 4500Lx±500Lx 的光照厨， 避免自然光的影响。
试验过程 ： 将利福平纳米混悬液在照度为 4500Lx±500Lx 条件下放置 10 天， 分别 于 5 天和 10 天时取样， 主要考察含量的稳定性， 与 0 天的检测检结果对比， 试验结果如下 表：
加速试验
试验条件 ： 202-3S 型电热恒温干燥箱上海锦屏仪器仪表有限公司
实验过程 ： 将利福平纳米混悬液在 40±2 ℃、 相对湿度 75±5 ％ ( 饱和氯化钠溶 液 ) 条件下放置 6 个月， 于第 0、 1、 2、 3、 6 个月时取样， 主要考察含量的稳定性， 与 0 月的检 测结果对比。
试验结果如下表 ：
结论 ： 对比光加速试验和温度加速结果， 本发明所述的利福平纳米混悬液制剂稳定。7