一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法 【技术领域】
本发明属于天然产物提取领域，特别涉及一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，具体地说是先用有机溶剂从木醋液中萃取出有机酸、酚类等具有抗菌和抗氧化活性的有机物质混合物，通过调节萃取液的酸碱度以改变萃取液中抗菌物质和抗氧化物质的存在形式(离子与分子形式间的转化)，再用有机溶剂分别萃取出抗菌物质和抗氧化物质的一种方法。
背景技术
木醋液是以木质材料为原料(如木材、木材加工废弃物或森林抚育采伐所产生的枝桠等)干馏得到的冷凝液经澄清分离出沉淀木焦油后所形成的红褐色或深褐色液体。随着制炭工业的发展，除木材以外的植物(如竹材、玉米核、松塔、棕榈核、核桃壳、杏核壳和椰壳等)也可以通过干馏得到与木醋液性质相似的液体。
木醋液来源于天然植物原料，制取过程不污染环境，产品对人畜无毒害作用，属绿色化学产品。木醋液较好的抗菌、抗氧化作用与其中含有丰富的活性物质有关，其中含量最多的是有机酸和酚类物质，占有机物总量的60～80％，是木醋液抗菌和抗氧化作用的主要物质。但由于木醋液中水分含量高，抗菌和抗氧化能力与其它抗菌剂、抗氧化剂比较不够突出，因而影响了其实际应用。现有技术中虽有利用减压蒸馏法从竹醋液中提取杀菌抑菌物质，但在提取时去掉了含量较高且具有较强抗氧化作用的酚类物质。
【发明内容】
针对上述现有技术中木醋液具有水分含量高、抗菌、抗氧化效果差、提取时不能同时得到抗菌物质和抗氧化物质的不足，本发明提供了一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法。该方法可连续获得抗菌物质和抗氧化物质，同时还大大增加了木醋液中抗菌物质和抗氧化物质的浓度，提高了木醋液的抗菌活性和抗氧化活性。
实现上述发明目的的技术方案是：一种从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)将木醋液原液用体积比为0.3∶1～1∶1的乙酸乙酯或二氯甲烷或氯仿或乙醚萃取至无色，萃取液用0.5～0.8mol/L NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取至少3次，合并NaHCO3萃取液；
2)调节萃取液至原木醋液pH值，以体积比为0.3∶1～1∶1的乙酸乙酯萃取至少3次，所得萃取液经减压蒸馏、干燥得到固体即所述的抗菌物质；
3)将萃取后余下的溶液用0.4～0.7mol/L Na2CO3溶液或0.7～1.3mol/LNaOH溶液以1∶1体积比萃取至少3次，合并Na2CO3或NaOH萃取液；
4)调节萃取液至原木醋液pH值，以体积比为0.3∶1～1∶1的二氯甲烷萃取至少3次，所得萃取液经常压蒸馏、干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
本发明的方法中所选用的木醋液为高温干馏核桃壳所产生的气体冷凝而成的液体。
本发明的方法中调节萃取液至原木醋液pH值所选用的试剂是3mol/L H2SO4溶液。
本发明的方法中提取抗菌物质时其减压蒸馏的条件为：40℃、真空度为0.1MPa，干燥条件为：在常压下、70℃；提取抗氧化物质时其常压蒸馏的条件为：40℃，干燥条件为：常压下、50℃。
本发明从木醋液中连续提取抗菌物质和抗氧化物质的方法的原理是：有机酸具有较强的抗菌活性，酚类具有较强的抗氧化活性。在木醋液原液中，有机酸和酚类物质以分子形式存在于溶液中，先用有机溶剂(乙酸乙酯或二氯甲烷)将其从木醋液中萃取出，以弱碱(NaHCO3溶液)调节木醋液萃取液的pH值使其中的有机酸(强酸)以离子形式转入到NaHCO3溶液中(而酚类等物质仍留在有机溶剂中)，用H2SO4溶液调节至原木醋液pH值时，有机酸又以分子形式游离出，则可采用有机溶剂(乙酸乙酯)萃取出。木醋液原液萃余液以强碱(Na2CO3溶液或NaOH溶液)萃取时，酚类物质(弱酸)以离子形式转入到Na2CO3溶液或NaOH溶液中，用H2SO4溶液调节至原木醋液pH值时，酚类物质又以分子形式游离出，则可采用有机溶剂(二氯甲烷)萃取出。
本发明通过抗菌试验和抗氧化试验以及有机酸和酚类物质的含量对提取方法进行了验证；本发明方法的抗菌试验是采用常规的细菌、霉菌和植物病原菌的测试方法，采用的菌种为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉菌、苹果腐烂病原菌和葡萄炭疽病原菌。本发明方法的抗氧化试验是采用清除DPPH·自由基能力和对Fe2+的还原能力的FRAP测定方法。本发明方法的有机酸含量是采用GC-MS(气相色谱-质谱)分析，酚类物质含量是采用Folin-Ciocalteu法测定。
与现有技术相比，本发明的方法具有以下优点：
1)采用本发明方法可以连续从木醋液中提取出抗菌物质和抗氧化物质；
2)本发明方法是利用溶剂萃取、分配的方法连续从木醋液中提取抗菌物质和抗氧化物质；
3)从木醋液中提取出的抗菌物质对食品腐败菌和植物病原菌的抑菌效果大大增强；
4)从木醋液中提取出的抗氧化物质清除DPPH·自由基能力和对Fe2+的还原能力大大增强。
5)本发明方法简单，易操作。
【具体实施方式】
以下通过发明人给出的具体实施例对本发明进行进一步描述，以说明本发明地有益效果，但本发明的保护范围并不仅限于此。
以下实施所采用的试剂均为分析纯。所用的溶液有：0.5～0.8mol/L的NaHCO3溶液；3mol/L的H2SO4溶液；0.4～0.7mol/L的Na2CO3溶液；0.7～1.3mol/L的NaOH溶液；乙酸乙酯；二氯甲烷。对细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)、霉菌(黑曲霉菌)和植物病原菌(苹果腐烂病原菌、葡萄炭疽病原菌)的抗菌活性测定根据常规的方法(见试验例1)进行；抗氧化活性测定采用清除DPPH·自由基能力的测定方法(见试验例2)和对Fe2+的还原能力的FRAP测定方法(见试验例3)；有机酸含量采用GC-MS(气相色谱-质谱)分析(见试验例4-5)；总酚含量采用Folin-Ciocalteu法测定(见试验例6)。
木醋液是以当年生产的核桃壳为原料通过高温干馏所产生的气体冷凝而成的液体。减压蒸馏设备是BC-R型数字旋转薄膜蒸发仪，干燥设备是实验室常用的鼓风干燥箱。
实施例1：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用体积比为0.5∶1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/LH2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以体积比为0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.6mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/LH2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48.07％、52.98％、75.56％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小75.15％和76.95％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大42.03％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.11％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例2：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用体积比为1∶1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.7mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/LH2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以体积比为1∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.7mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.5mol/LNa2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48.21％、52.63％、75.77％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小75.61％和76.55％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.33％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大42.23％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例3：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用体积比为0.3∶1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.5mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/LH2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以体积比为0.3∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.4mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/LH2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.3∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大46.58％、50.63％、73％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小73.91％和75.21％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.16％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大42.01％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例4：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用体积比为0.5∶1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.8mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/LH2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以体积比为0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.8mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.7mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/LH2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.7∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大47.11％、50.03％、72.51％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小73.51％和74.03％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.79％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大42.81％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例5：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.6mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大47.97％、52.65％、75.09％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小74.22％和75.74％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.93％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大42.63％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例6：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用1∶1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0.7mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.7mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.5mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48.11％、52.97％、75.27％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小74.62％和75.96％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.03％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大41.85％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例7：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.3∶1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0.5mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.3∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.4mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.3∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大46.21％、50.39％、72.77％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小73.39％和74.91％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.08％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大41.93％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例8：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0.8mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.8mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.7mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并Na2CO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.7∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大46.91％、50.68％、72.97％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小73.57％和75.11％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.91％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大42.59％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例9：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的氯仿萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用1.3mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大45.57％、51.22％、73.09％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小74.01％和75.31％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大42.75％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.69％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例10：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用1∶1的氯仿萃取至无色，萃取液用0.7mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.7mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用1.0mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大45.91％、51.38％、73.23％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小74.19％和75.52％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大43.13％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.91％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例11：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.3∶1的氯仿萃取至无色，萃取液用0.5mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.3∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.9mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.3∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大44.37％、50.67％、73.26％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小73.15％和74.75％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.51％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大42.43％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例12：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的氯仿萃取至无色，萃取液用0.8mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.8mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.7mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.7∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大43.33％、50.26％、71.29％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小72.56％和73.18％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大42.67％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.61％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例13：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的乙醚萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用1.3mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大41.62％、46.36％、70.56％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小70.11％和71.97％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大40.02％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大41.52％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例14：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用1∶1的乙醚萃取至无色，萃取液用0.7mo1/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.7mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用1.0mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大42.58％、48.63％、71.79％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小71.14％和72.21％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大43.66％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.49％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例15：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.3∶1的乙醚萃取至无色，萃取液用0.5mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.3∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.9mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.3∶1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大40.97％、42.65％、68.09％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小68.22％和69.74％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大39.83％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大40.37％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例16：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的乙醚萃取至无色，萃取液用0.8mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.8mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.7mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.7∶1的二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大40.12％、41.05％、68.31％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小69.62％和70.23％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.52％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大41.89％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例17：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用1∶1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.9mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大49.12％、53.15％、75.19％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小74.39％和75.03％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大42.71％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.55％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例18：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的二氯甲烷萃取至无色，萃取液用0.7mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.7mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用1.1mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大47.21％、52.39％、74.77％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小74.39％和75.91％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大43.96％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.91％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例19：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用1∶1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.6mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用1.3mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以1∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48.21％、53.39％、75.77％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小75.39％和76.91％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大43.36％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大43.81％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
实施例20：抗菌物质和抗氧化物质的提取
将木醋液原液用0.5∶1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.5mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将上述0.5mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.7mol/L NaOH溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。
按照试验例1的测定方法对本发明方法提取的抗菌物质(浓度为40mg/mL)进行抗菌活性测定，试验结果表明，本发明方法提取的抗菌物质对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌的抗菌圈直径比木醋液原液大48.35％、53.04％、75.82％；对测试的葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的半抑制浓度EC50(mg/mL)比木醋液原液小75.27％和76.36％。可知，经此方法得到的抗菌物质抗菌效果明显好于木醋液原液。
按照试验例2和试验例3的测定方法对本发明方法提取的抗氧化物质进行抗氧化活性测定。试验结果表明，本发明方法提取的抗氧化物质(浓度为0.010mg/mL)对DPPH·自由基的清除率比木醋液原液大41.75％，对Fe2+的还原能力比木醋液原液大42.48％。可知，经此方法得到的抗氧化物质，抗氧化效果明显好于木醋液原液。
试验例1：抗菌试验测定方法
细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)培养基：蛋白胨6g，牛肉膏2.5g，酵母膏3g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0；
霉菌(黑曲霉菌)培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，氯化钠5g，琼脂20g，水1000mL，自然pH。
菌悬液或孢子悬液制备：预先将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉菌菌种分别用其适宜的斜面培养基进行活化，然后各挑取四环菌苔，用无菌水分别制成含菌数约109cfu/mL的菌悬液，备用。
将固体培养基溶化倒入各培养平皿，待冷却凝固后，加入0.1mL金黄色葡萄球菌、大肠杆菌悬液以及黑曲霉菌孢子悬液，然后用无菌涂布棒涂布均匀。将直径为6mm的消毒滤纸片放入木醋液原液及其提取物(样液)中浸泡12小时后，再等距离、平稳地将3个浸泡有样液的滤纸片放在含菌的固体培养基平面上，以无菌水作为对照。每个处理重复3次，最后将各皿放入各种菌适宜的温度培养。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌采用37℃，培养24h；黑曲霉菌采用28℃，培养72h。取出后，测量抗菌圈直径。
抗菌圈直径(cm)＝测量直径平均值-0.6；
以上方法参考文献：程丽娟，薛泉宏，2000微生物学实验技术，西安：世界图书出版社出版所述方法进行。
对葡萄炭疽病原菌和苹果腐烂病原菌的抑制作用采用菌丝生长速率法。将木醋液原液及其木醋液提取物用无菌水配制成一定浓度的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基。对照样培养基为同等体积的无菌水和PDA培养基混合。在预实验的基础上，选择合适的5个质量浓度梯度，每个设3次重复，接入生长旺盛的直径为6mm的葡萄炭疽病原菌(Gloeosporium fructigenum)、苹果腐烂病原菌(Valsa ceratosperma)菌饼，在25℃条件下培养，定期观察并测定菌落直径，每个菌落十字交叉测2个直径，以其平均数代表菌落大小。用下列公式计算菌丝生长抑制率：
菌落直径(cm)＝测量菌落直径平均值-0.6；
抗菌率(％)＝(对照菌落直径-样液处理菌落直径)/对照菌落直径×100
所得数据经Finney机率值分析法用DPS统计软件求出EC50值，对各种植物病原菌的抑制效果以EC50表示。
以上方法参考文献：慕立义，1994，植物化学保护研究方法.北京：中国农业出版社出版所述方法进行。
试验例2：清除DPPH·自由基能力测定
在2.0mL 60μmol/L DPPH·无水乙醇溶液中分别加入3mL一定浓度的木醋液原液或木醋液提取物，用力摇匀后于室温下放置30min，测定其在517nm下的吸光值(As)；以3mL水代替样品为空白对照(A0)；以3mL样品与2mL无水乙醇混合液为样品对照(Ax)，以消除样品本身颜色的影响；以3mL水和2mL无水乙醇的混合液调仪器零点。每个样品每个浓度重复3次，取平均值。清除率按下式计算：
DPPH·清除率(％)＝[A0-(As-Ax)]/A0×100％
以上方法参考文献：牛鹏飞，仇农学，杜寅.2008.苹果渣中不同极性多酚的分离及体外抗氧化活性研究，农业工程学报，24(3)：237-242所述方法进行。
试验例3：FRAP法测定木醋液的还原能力
取一定浓度的木醋液原液或木醋液提取物各2mL，加入3mL TPTZ工作液，混合后于37℃反应，30min后，于593nm处测定吸光度值和还原力标准曲线，计算FeSO4浓度，以FeSO4浓度(mg/L)表示木醋液的还原能力大小。
以上方法以及TPTZ工作液的配制和还原力标准曲线的制作参考文献：牛鹏飞，仇农学，杜寅.2008.苹果渣中不同极性多酚的分离及体外抗氧化活性研究.农业工程学报，24(3)：237-242所述方法进行。
试验例4：木醋液原液的化学组成
采用气-质联用仪(GC-MS)测定了原木醋液的化学组成。气-质联用测定条件：将脱水木醋液或木醋液提取物用乙醚稀释后，直接进行GC-MS分析。气相色谱条件：DB-WAX毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，进样口温度220℃，柱温60℃，恒温2min后，以6.0℃/min速度升温至240℃，恒温8min。分流进样80∶1。载气流速1.0mL/min。质谱条件：EI源，电子能量70eV，离子源温度250℃，质量扫描范围35～400amu。质谱标准库：NIST库。
结果见表5。由表5可以看出，木醋液原液中含量最多的是有机酸和酚类物质，其中有机酸含量为32.46％。
表5木醋液原液化学成分的GC-MS分析结果
序号 化合物名称 相对含量/％
1 酮类(Ketones) 6.42
2 有机酸类(organic acid) 32.46
3 呋喃及其衍生物(Furan and pyran derivatives) 5.56
4 酯类(esters) 0.98
5 酚类(Phenol and derivatives) 39.34
6 醇(Alcohols) 0.40
7 醛(Aldehydes) 0.37
8 烷芳醚(Alkyl aryl ether) 7.9
9 含氮化合物(Nitrogenated compounds) 0.33
试验例5从木醋液中提取的抗菌物质的化学组成
将木醋液原液用0.5∶1的乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用0.6mol/L的NaHCO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaHCO3萃取液并以3mol/L H2SO4溶液调节至原木醋液pH值，以0.5∶1的乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液在40℃、真空度为0.1MPa条件下减压蒸馏、在常压、70℃下干燥得到固体即所述的抗菌物质。将此物质采用上述试验例4相同的气-质联用测定条件测定了化学组成，结果见表6。由表6可以看出，提取出的抗菌物质中有机酸含量提高到78.21％，其它物质的含量都有很大程度降低。
表6从木醋液中提取出的抗菌物质的GC-MS分析结果
序号 化合物名称 相对含量/％
1 酮类(Ketones) 4.35
2 有机酸类(organic acid) 78.21
3 呋喃及其衍生物(Furan and pyran derivatives) 1.71
4 酯类(esters) 0.35
5 酚类(Phenol and derivatives) 13.61
试验例6木醋液原液及其提取的抗氧化物质的总酚含量
将试验例5中0.6mol/L NaHCO3萃取后余下的溶液用0.6mol/L Na2CO3溶液以1∶1体积比萃取3次，合并NaOH萃取液并调节至原木醋液pH值，以0.5∶1二氯甲烷萃取3次，所得萃取液在40℃条件下常压蒸馏，在常压、50℃下干燥得到固体即所述的抗氧化物质。按照Folin-Ciocalteu法(参考文献：钱华等，竹醋液中酚类化合物Folin-Ciocalteu法测定[J].林产化学与工业.2007，10(27)：105-108)测定了此物质的总酚含量。
结果见表7。由表7可以看出，提取出的抗氧化物质中酚类物质的含量比木醋液原液有很大程度提高。
表7总酚含量测定结果
样品 总酚浓度/(mg/g)
木醋液原液 462.17
0.4mol/L Na2CO3萃取液 1036.21
0.5mol/L Na2CO3萃取液 1168.84
0.6mol/L Na2CO3萃取液 1247.99
0.7mol/L Na2CO3萃取液 1121.01
0.7mol/L NaOH萃取液 1186.32
0.9mol/L NaOH萃取液 1197.59
1.0mol/L NaOH萃取液 1398.78
1.1mol/L NaOH萃取液 1288.75
1.3mol/L NaOH萃取液 1186.95