用作腺苷A1受体拮抗剂的黄嘌呤衍生物 本发明涉及一类化合物，该类化合物为黄嘌呤衍生物，并选择性地作用于腺苷受体。作用于A1受体的腺苷拮抗剂既可以使突触后神经元去极化，又可以增强突触前一系列神经递质的释放，这些神经递质包括乙酰胆碱、谷氨酸、5—羟色胺和去甲肾上腺素，因而可以有效地治疗识别缺损并增强识别功能。
首次认识腺苷的深度低血压、镇静、解痉和舒血管作用已经50多年。后来，假定的腺苷的一系列生物学作用已经明显增加。腺苷酸受体在许多细胞中似乎都与腺苷酸环化酶相连接。为了研究这些受体的功能，已经引入了一系列腺苷类似物。烷基黄嘌呤，例如咖啡因和萘碱就是最熟悉的腺苷受体拮抗剂。
由于没有特殊的细类型或组织是腺苷形成的唯一来源，所以腺苷仅表述为一类普通的调节物质。按照这种考虑，腺苷不同于各种内分泌激素。既没有腺苷由神经细胞储存或释放的证据，也没有腺苷由其它细胞储存或释放的证据。这样一来，腺苷又不同于各种神经递质，它似乎是作为神经调节物质出现，而不是作为神经递质起作用。
虽然腺苷有多种生理功能，但过去的几年里对腺苷的注意力集中于可能导致临床应用的功能。现在已经认识到在腺苷作用中，至少涉及两类细外受体，而不是一类受体。其中的一类受体对腺苷具有高度亲和力。而且至少在一些细胞中以抑制的方式与腺苷酸环化酶偶联。这些受体已被定义为A1受体。另一类受体对腺苷具有低亲和力，而且在很多细胞类型中以兴奋的方式与腺苷酸环化酶偶联。这些受体被定义为A2受体。
腺苷类似物在A1和A2腺苷受体上显示的作用强度级别不一，从而为生理学应答的分类提供了以腺苷受体的性质为依据的简单方法。腺苷受体的阻断作用(拮抗作用)为以牵涉地腺苷受体为依据对应进行分类，提供了另一种方法。
腺苷在中枢神经系统(CNS)，通过A1和A2受体作为神经调节剂，发挥作用(G.L.Stiles，TIPS，12，486(1986))。大多数腺苷受体分布在大脑中，其中A2受体分布在纹状体，而A1受体仅仅出现在海马和皮质中(这些区域与学习及记忆有关)。从一般的意义上讲，A1受体引起对兴奋剂释放的抑制作用，以及抑制释放抑制性神经递质和抑制突触后兴奋性降低。这些作用是G—蛋白依赖的，并由抑制腺苷酸环化酶和钙内流介导，以及由增加钾外流介导(B.B.Fredliolm，et al.，TIPS，9，130(1988))。反过来，A1拮抗剂可以预料使突触后神经元去极化，并通过突触前神经元增加各种神经递质释放(例如增加乙酰胆碱，谷氨酸、5—羟色胺和去甲肾上腺素的释放)。由于这些神经递质已经影响到学习和记忆，而且这些神经递质在Alzheimer疾病患者中是低下的，所以这种作用将有助于治疗识别功能受损，例如治疗与Alzheimer疾病有关的症状。
按照上述观点，本发明的化合物将是治疗识别功能失调的有用试剂。
本发明涉及具有下述共同结构的化合物；包括它们的(R)和(S)对映异构体及外消旋体，以及它们的可供药用的盐，其中R1和R2各自独立为(C1—C4)低级烷基或(C2—C4)低级烯基，Z为：或R3为(C1—C3)低级烷基，硝基，氨基、羟基，氟，溴或氯，m为零或1至4的整数，n为1至4的整数，X为H或OH。
在本申请中，(C1—C3)低级烷基为甲基，乙基，正丙基或异丙基。本申请中的(C1—C4)低级烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基，仲丁基或叔丁基。
此外，本申请中的(C2—C4)低级烯基为乙烯基，丙烯基，异丙烯基，丁烯基，异丁烯基等。
本申请中R3表示的取代基可以位于苯环2位至6位的任何位置。它们可以多达3个苯环取代基，各自独立取代，但不为氢原子。
依据假定的黄嘌呤在腺苷受体上唯一结合的模式，使用新的合成路线，合成了几种8位取代的黄嘌呤。根据大鼠大脑中的取代性结合研究其中的一种化合物，3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯基乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮是一种高效的，选择性的腺苷A1受体拮抗剂(A1受体Ki，6.9nM；A2受体Ki，157nM)。3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯基乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮对III型或IV型磷酸二酯酶活性几乎没有作用。在麻醉豚鼠上，3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕1，3—二丙基，—1H—嘌呤—2，6—二酮完全逆转A1受体介导的腺苷引起的心率降低。在离体的豚鼠气管上，3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯基乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮对由N6—环己基腺苷引起的收缩几乎没有影响，后者是A1受体的选择性激动剂。这些观察提示，多重的A1受体亚型可能是以正交的方式存在的(Secrest，et al.，FASEB Journal，6，1992)。
我们发现，使用后面详细描述的方法，上述化合物是有用的识别增强剂，所以上述化合物可用于治疗以识别功能受损为特征的病例。
3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯基乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮和(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤〔aka 3，7—二氢—8〔(R)—1—苯丙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮〕是有效的A1选择性拮抗剂(Dudley et al.，SocNeurosci Abstr.，1992；Secrest，et al.)。这些化合物已经在体外(海马长期强化)和体内(水迷宫学习)学习和记忆两种模型上进行了试验。
在海马切片上的长期强化(LTP)已经被建议作为在学习和记忆过程中可能出现的细胞水平上的事件的评价模型。(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤和3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤二酮可以增加记录在海马CAl神经元中的LTP诱导前后的基础群峰。另一种A1拮抗剂KFM—19也出现类似的结果。
在水迷宫空间学习模型上，大鼠需要使用绕循环水桶中的远缩空间暗示，以便通过隐基的空间平台。胆碱能拮抗剂茛菪胺剂量依赖性地减少大鼠在水迷宫运动中的心得。(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤，3，7—二氢—8(R)—1—甲基—2—苯乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮和KFM—19明显拮抗由茛菪胺引起的学习能力减退。
下面将详细描述的这些结果表明，腺苷A1拮抗剂(R)—1，3—二丙基—8—(1一苯丙基)—黄嘌呤和3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，无论是体外还是体内都具有很强的识别增强作用。从而(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤和3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮具有治疗识别能力受损的功能。附图说明图1
显示(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤对茛菪胺引起的大鼠水迷宫学习能力减退的影响，给出了三个试验组定位在木块平台上的平均潜伏期(±s.e.m)，三个试验组分别服用赋型剂加赋型剂(VEH—VEH)，赋型剂加茛菪胺1.2mg/kg(VEH—SCOP1.2)，(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤5mg/kg加茛菪胺1.2mg/kg(MDL 5—SCOP 1.2)或(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤25mg/kg加茛菪胺1.2mg/kg(MDL 25—SCOP 1.2)。+表示与VEH—VEH组有显著性差异；*表示与VEH—SCOP 1.2组有显著性差异。图2
显示3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮对茛菪胺引起的大鼠水迷宫学习能力减退的影响，给出了三个试验组定位在木块平台上的平均潜伏期(±s.e.m.)，三个试验组分别服用赋型剂加赋型剂(VEH—VEH)，赋型剂加茛菪胺1.5mg/kg(VEH—SCOP 1.5)和3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮25mg/kg加茛菪胺1.5mg/kg(MDL25—SCOP 1.5)。+表示与VEH—VEH组有显著性差异。图3a
显示在赋型剂〔DMSO〕中暴露之后“雷管爆炸”诱导前后大鼠脑切片中基础群峰对时间的增加的百分数。图3b
显示在药物〔(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤中暴露之后“雷管爆炸”诱导前后大鼠脑切片中基础群峰对时间的增加的百分数。图3c
显示在药物〔3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮〕中暴露之后“雷管爆炸”诱导前后大鼠脑切片中基础群峰对时间的增加的百分数。
受体结合
下面的方法用来检测这里发明的代表性化合物与A1和A2受体的亲和力方法A1受体亲和力
下面描述的测定用于确定待测化合物与配基〔3H〕环己基腺苷竞争由大鼠脑膜制备的腺苷A1受体的强度。雄性Sprague—Dawhey大鼠断头处死，从整体动物的大脑分离膜。见于R.Good-man，et al.，Guanme Nucleotide and Cootion Requ—laction of theBinding of〔3H〕Diethylphenylxanthine to Adenosine A—1 Re-ceptors in Brain Membrane，Molecular Pharmacology，21，21，329—335(1982)。
得到的膜在25倍体积的冰冷却的50mM三羧甲基氨基甲烷—盐酸(Tris—HCl)缓冲液(pH7.7)中匀浆化(使用Polytron放置7至10秒钟)。匀浆在19000rpm及4℃下离心10分钟。得到的球状物通过在25倍体积的缓冲液中再悬浮来洗涤，每毫升缓冲液中含2IU腺苷脱氨酶，并在37℃孵育30分钟。匀浆再离心。最终的球状物再悬浮到25倍体积的冰冷却的缓冲溶液中。
往孵育管(一式三份)中加100μl〔3H〕环己基腺苷(测定中为0.8nM)，200μl待测化合物(浓度在10-10M至10-6M之间，用50nM Tris—HCl缓冲液稀释〔pH7.7)，0.2ml膜悬浮液(湿重8mg)，用50nM Tris—HCl缓冲液稀释至终体积为2ml。孵育在25℃进行2小时，在10秒钟之内通过GF/B玻璃纤维漏斗减压过滤终止孵育。漏上的膜转移到闪烁瓶中。漏斗用液闪仪在含5％Proto-sol的8ml Omniflour中计数。
高出以10-5 M2—氯腺苷为空白的结合率的使化作测得的〔3H〕环己基腺苷结合率。总的膜结合的放射强度大约为加到试管中的放射强度的5％。膜结合率大约为总结合率的90％。膜悬浮液的蛋白组分按O.H.Lowry等的方法测定，见于O.H.Lowry et al.，Protein Measurements With Folin Phenol Reagent，J.Biol.Chem.，193，265—275(1951)。
〔3H〕环己基腺苷结合的15％或更多被测化合物取代，表明了腺苷结合部位的亲和力A2受体亲和率
下面描述的测定用来确定待测化合物与配基〔3H〕5′—N—乙基—羧酰胺基腺苷(NECA)竞争由大鼠脑膜制备的腺苷A2受体的强度。见于R.R.Bruns，et al.，Characterization of the A—2Adenosime Receptor labeled by〔3H〕NECA in Rat StriatalMembranes，Mol.Pharmacol.，29，331—346(1986)。年轻雄性大鼠(C—D种，得自Charles River)断头处死，取出大脑。作配基结合用的膜从大鼠的脑纹状体上分离。得到的该组织在20倍体积的冰冷却50mM Tris—HCl缓冲液(pH7.7)中用Polytron(放置6至20秒)制成匀浆。得到的匀浆于4℃下50000×g离心10分钟。得到的球状物在Polytron中用20倍体积的缓冲液再匀浆化，并象前面一样离心。球状物最后悬浮到50mM的Tris—HCl(pH7.7)缓冲溶液中，每克原始湿重量组织加40倍体积的缓冲数。
往孵育试管(一式3份)中加100μl〔3H〕NECA(测定中为94nM)，100μl 1μM的环己基腺苷(CHA)，100μl 100mM的MgCl2，100μl 1Iμ/ml的腺苷脱氨酶，100μl待测化合物(浓度范围为10-10M至10-4M)，用测定用的缓冲溶液(50mM Tris—KCl，pH7.7)以及0.2μl膜悬浮液(5mg湿重)稀释，再加到终体积为1μl50mM的Tris—HCl(pH7.7)的缓冲溶液中。在25℃孵育60分钟。各试管都用GF/B玻璃纤维漏减压过滤。漏斗用5ml冰冷却的缓冲溶液淋洗2次。漏斗上的膜移到闪烁瓶中，往瓶中加8ml含5％Protosal的Omnifluor。漏斗用液闪仪计数。
超出以100μm 2—氯腺苷为空白的结合率记作测得的〔3H〕NECA结合率。总的膜结合的放射性大约为加到试管中的放射性的2.5％。由于该条件限制了总结合率并使小于放射强度的10％，所以在结合检测中游离配基的浓度不发生明显变化。对膜的结合率大约是总结合的50％。膜悬浮液中的蛋白含量按Lowry等的方法测定。
结合的〔3H〕NECA被待测化合物取代15％或更多，表示了腺苷A2部位的亲和力。引起配基结合抑制50％的化合物的克分子浓度为IC50。取值在100至1000nM范围内的化合物为高效化合物。结果
下面的表1给出了几种化合物与腺苷受体结合的亲和力。
表1与腺苷受体结合的亲和力
A1Ki A2Ki A2/A13，7—二氢—8—〔(S)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 60.7nm 848nm 143，7—二氢—8—〔(±)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 32.6nm 644nm 203，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 6.9nm 157nm 233，7—二氢—8—〔(S)—1—苯基乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 174.7nm 12900nm 743，7—二氢—8—〔(±)—1—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 49.4nm 4900nm 993，7—二氢—8—〔(R)—1—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 25.3nm 4220nm 1603，7—二氢—8—〔(±)—1—苯甲基)—丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 161.2nm 1230nm 83，7—二氢—8—〔(±)—1—(苯甲基)丁基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 73.8nm 610nm 83，7—二氢—8—〔(±)—1—(2—(2.3—二氢化茚基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 64.3nm 8350nm 129
表1 与腺苷受体结合的亲和度
A1Ki A2Ki A2/A13，7—二氢—8—〔(±)羟甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 1294nm 12800nm 103，7—二氢—8—〔(±)—苯丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 32.6nm 644nm 203，7—二氢—8—〔(R)—苯丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮{aka(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤} 23.2nm 3510nm 1533，7—二氢—8—〔(S)—苯丙基〕——1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 60.7nm 848nm 143，7—二氢—8—〔(±)—2—苯丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 94.3nm 1740nm 183，7—二氢—8—〔(±)—反式—2—苯基取戊基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮 164.3nm 2720nm 103，7—二氢—8—〔(±)—1，2，3，4—四氢—2—萘基—1H—嘌呤—2，6—二酮 94.6nm 10300nm 108
识别增强效应
下面的方法用于检测本发明的代表性化合物的识别增强效应。待测化合物在学习和记忆的体外(孵长期强化)及体内(水迷宫学习)两种模型上进行了检测。水迷宫学习方法训练
在120cm直经的充满水的桶中进行大鼠训练使大鼠能定位在水面下放置一个隐秘的平台上。平台的位置固定不变，在每次训练中大鼠都需要从三个不同的起始位置之一沿桶边游泳。桶中没有邻近的暗示，所以大鼠不得不使用远端的暗示依空间地图的战略，沿着空地通过隐秘的平台。计算机控制的电视监测系统使可以自动获取数据。每个训练日，使大鼠受12次成功的训练，训练方法见于O.Buresova，et al.，Differential Effects of Cholinergic Bockade onPerformance of Rats in The Water Tank Navigation Task and ina Radial Water Maze，Behavioral Nearoscienoe，100，476—482(1986)。每次训练最长持续60秒钟钟。在此时间内大鼠若不能定位到平台上，就把它放到平台上。当大鼠发现平台或放到平台上之后，让它在平台上呆30秒钟。在平台呆足30秒钟后立即进行下一次训练。记录每次训练中定位平台的潜伏期。施药
每5只大鼠组成一治疗组，每组大鼠进行一种实验。VEH—VEH组于首次训练的前40分钟和前20分钟分别经腹膜内注射赋型剂(蒸馏水加吐温)。VEH—Scop组在首次训练的前40分钟经腹膜内注射赋型剂和首次训练的前20分钟经腹膜内注射茛菪胺的氢溴酸盐。MDL—Scop组在首次训练的前40分钟经腹膜内注射(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)黄嘌呤或3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯基乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮和首次训练的前20分钟经腹膜内注射茛菪胺氢溴酸盐。数据分析
每只大鼠的潜伏期都均分为每3次训练的4组(每开始定位记作一次训练)。按照每个训练使组的数据计算与治疗组相比较的单方式ANOVA。如果总体ANOVA显示统计意义，各治疗组间的比较就可以用Fisher的PLSD进行检验。结果与讨论(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤
如图1所示，在5mg/kg和25mg/kg剂量下，腹膜内注射选择性的A1拮抗剂(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤，可以逆转茛菪胺引起的记忆能力下降。第2组和第3组的总体ANOVA具有显著性差异，F(3，16)＝4.861，P＜0.02，和F(3，16)＝4.219，P＝0.02。组间比较表明，VEH—SCOP组与VEH—VEH组显示统计学差异(P＜0.05)，而MDL—SCOP组与VEH—VEH组无显著性差异。此外，第3组中的MDL 5—Scop组与VEH—Scop组具有显著性差异(P＜0.05)，在第2组和第3组中MD2 25—Scop组与VEH—Scop组具有显著性差异。3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
如图2所示，在25mg/kg剂量下，腹膜内注射选择性A1拮抗剂3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，可以部分递转由茛菪胺引起的大鼠水迷宫学习能力的下降。第3组和第4组的整体ANOVA具有显著性差异，F(2，13)＝4.184，P＜0.05，F(2.13)＝4.881，P＜0.05。组间比较表明，VEH—SCOP组与VEH—VEH组有显示性差异(P＜0.05)，而MDL—Scop组与VEH—VEH组之间统计学差异。
这些结果说明，(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤和3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮具有很强的识别增强效应，可能用于治疗识别损害。
我们使用选择性的A1拮抗剂KFM—19(Boehringer Ingel-heim)在大鼠水迷宫试验中得到了类似的结果，已报道该化合物在学习和记忆的其它动物模型上显示活性(G.Schingnitz，et al.，Selective Al—Antagonists For Treatment of Cognitive Deficits，Nucheosides and Nucheotides，10(5)，1067—76(1991))。海马长期强化方法海马切片的体外实验
由雄性Sprague—Dawley大鼠制备切片。切片的制备技术由A.L.Mueller等改进，见于A.L.Mueller et al.，NoradrenergicResponses in Rat Hippocampus；Evidence For Medliatiom By Al-pha and Beta Receptors in the In Vitor Slice，Brain Res.，214，113—26(1981)。简言之，在冰上将海马迅速而又轻轻地分剖。用MacIl-wain组织刀制备400μ断面，并在34℃的Kreb缓冲液(124mMNacl；4.9mM KH2PO4；2.4mM MgSO4；2.5mM CaCl2；25.6mMNaHCO3；10mM葡萄糖)的界面孵育至少1小时。温暖潮湿的95％O2/5％CO2在孵育腔上方吹过。为了记录，将一个切片浸入到温暖的充氧介质中，介质的流速为2ml/分。记录
将记录电极放置到海马的CA1区域，将一刺激电极放到该同一切片的CA3区域—纹状级射体中。双偶极刺激电极由两根弯曲的62μ的镍铬酸制成。在30秒的间隔中被加100微秒的脉冲，并使用玻璃记录电极，电阻为1—2MΩ，内装3M NaCl，以便携带产生的CA1群峰。将来自CA1细胞实体层的信号放大，过滤(1赫兹至4赫兹)，并在高波器上跟踪。在IBM—AT上运行使产生的波形也用计算机显示器A/D极(RC Electronics，InC.，Santa Berbara，CA)数字化，并储存以便用神经显示软件(Levin and Associates，Den-ver，Co)进行分析。为了确保切片的生存能力，建立了“最小生存能力标准”。首先，当刺激电压调至产生临界群峰时，极大EPSP不得不大于1mV。同时，可获得的群峰振幅也不得不大于5mV。最后，完成配对的脉冲测试，并建立至少30毫秒的最小配对脉冲抑制延续，以便保证抑制性中间神经元的生存能力(P.Disenna，Method andMyth in Maintaining Erain Slice，in A.Schurr，et al.，Eds，Brain Slices：Fundamentals，Applications，and Implications，(1987)Switzerland；S.Karger AG，10—21)。仅使用满足于这三项标准的制品。
获得20种或更多的对照群峰，以便建立一条基线(至少10分钟)。对于大多数切片，为建立对基线群峰的影响，在20分钟的期间将浓药溶液稀释成介质。在药物中暴露20分钟之后，完成“雷管爆炸”式强直。一次100微秒的脉冲之后，接着4次类似的脉冲，即170毫秒、180毫秒、190毫秒和200毫秒。在实验过程中始终保持药物过冷。用药
往7份切片中加DMSO，浓度为0.25％(赋型剂对照)。往6份切片中加(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤2.5μm，另6份切片中加3，7—二氢—8〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮5μM。化合物溶入DMSO，并按1∶400稀释成灌流液。在我们的实验中，这种DMSO稀释液对切片具有最小的影响。数据分析
每组杂乱的峰波形都使用Neuroscope软件进行数字化处理、储存和分析。每种波形的杂乱峰的振幅都加以确定，并使这些振幅都标准化到前强直水平。结果表示为这种对照水平的变化百分数，并对时间作图。各次实验的数据都用Lotus 123按治疗数平均并绘图。结果与讨论
3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮使基础杂乱峰增加133％。(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤使基础杂乱峰增加130％。DMSO本身只使基础杂乱峰增加7.8％。强直之后，3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮使形成的LTP稳定在216％，(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤使形成的LTP稳定在270％，DMSO自身只使形成的LTP稳定在109％。此外，3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮和(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤使LTP直线上升并在观察的时间内始终保持稳定。在强直化的对照切片中LTP也直线上升，但10至14分钟后降低到一个稳定的水平(见图3)。
这些结果表明，(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤和3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮可以有效在治疗识别缺损。我们得到的结果与报道的另一种A1拮抗剂KFM—19相似(见于G.Schingnitz，etal.)。(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤，3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮和KFM—19都能增强海马切片中的突触传递。这种突触传递的增强正是化合物识别增强效应的指征。
本研究表明，腺苷A1拮抗剂(R)—1，3—二丙基—8—(1—苯丙基)—黄嘌呤和3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮在体外和体内都有强的识别增强效应。这些化合物因而可以有效地治疗识别缺损。
下面的表2总结了本发明的化合物的一些识别增强效应的指征，同时也说明使用它们可以改善一些识别缺损。
表2 记忆增强剂的效应指征
指征 近似的流行情况(1990)*改进缺损的应用Alzheimer病 620万多重梗塞性痴呆 420万年龄有关的记忆低下(衰老) 6000万Korsakoff综合症 22000头部创伤引起的痴呆 360万其它的痴呆 600000Down综合症 600000注意力下降 500万精神滞迟 550万增强正常功能治疗的辅助治疗 1000乃至5000万胜任学术活动 2000万胜任工作 27000万增长智慧/目击计数 100万至200万*法国、德国、意大利、日本、英国和美国等6个主要市场
一般说来，本发明的化合物可以按后面的反应路线I和II中详细介绍的方法制备。
反应路线I
选择适宜的烷基取代的原料化合物，1，即6—氨基—2，4(1H，3H)—嘧啶二酮，其中R1和R2的定义同上，以便使取代基R1和R2的定义与终产品中R1和R2的期望的定义相同。
用20％的乙酸使6—氨基—2，4(1H，3H)—嘧啶二酮悬浮到水中。往里分次加入1.5当量亚硝酸钠水溶液，同时用浓盐酸保持溶液的中度酸性。将悬浮液搅拌数小时。反应混合物过滤，用水洗，真空干燥，得紫色的烷基取代的6—氨基—5—亚硝基—2，4(1H，3H)—嘧啶二酮(2)。
得到的烷基取代的6—氨基—5—亚硝基—2，4(1H，3H)—嘧啶二酮悬浮到水中，用50％氢氧化铵将溶液调至碱性(pH约为11)，并用过量的连二硫酸钠处理直至紫色消失。反应混合物然后用氯仿萃取。合并有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用闪或径层析纯化(用5％至10％的甲醇/氯仿洗脱)。粗产品然后用10％异丙醇/己烷重结晶，得烷基取代的5，6—二氨基—2，4—(1H，3H)—嘧啶二酮(3)。(见于J，W，Docly，J.Med，Chem.，28，487(1985))。
由反应路线I制得的化合物3然后按反应路线II进行反应。
反应路线II
烷基取代的5，6—二氨基—2，4(1H，3H)—嘧啶二酮(3)与2—烷基取代的链烷酸(4)反应，其中m，n，X和R3的定义同上。选择酸(4)时要使得m和n的定义与终产物中的m和n期望的定义相同。应当注意到，用—CH—标明的碳原子显示手性，并且选择的酸的手性应与终产物中期望的手性相同。包括进来的这类酸的例子如下：
S—(＋)—2—苯基丙酸
R—(－)—2—苯基丙酸
此外，其它这类酸可以按下法制备：
HOOC—(CH2)m—CH3＋氯苄＝HOOC—CHX—(CH2)n—CH3(其中m为1至4的整数，n为m—1，X为苄基，即：将酸溶入四氢呋喃，然后在室温下用2当量的二异丙基酰胺锂处理。反应混合物在40℃加热30分钟。反应混合物然后用1当量氯苄处理并在40℃继续加热数小时。将反应混合物冷至室温，倾入水中，用乙醚萃取。水相用1M盐酸酸化，并用乙醚萃取。全并有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(40％至50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得2—烷基取代的3—苯基丙酸(4)。
能够与氯苄反应生成2—烷基取代的3—苯基丙酸的酸的例子如下：
正丁酸
正戊酸
此外，其它这种类型的酸可以按反应路线III制备：
反应路线III
选择适当的烷基取代的丙二酸二乙酯(A)时，其中n的定义同上，应使n与终产物中期望的n的定义相同。在0℃下将1当量的氢化钠悬浮在四氢呋喃中，然后把丙二酸酯滴加到该悬浮液中。搅拌大约30分钟以后，往里加1当量氯苄，然后反应混合物加热回流约3小时。反应混合物冷却后倾入水中，并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得烷基取代的苄基丙二酸二乙酯(B)。
烷基取代的苄基丙二酸二乙酯(B)然后在乙醇中用氢氧化钾水溶液处理，并加热回流14小时。冷却之后，反应混合物用乙醚萃取。水相用浓盐酸酸化，并用乙醚萃取。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得烷基取代的苄基丙二酸(C)。
将烷基取代的苄基丙二酸(C)溶入乙腈中，然后用催化量的氧化亚铜处理。(见于M.Maumy，et al.，Synthesis，1029(1986)。)反应混合物然后加热回流5小时。减压除去溶剂。将残留物溶入乙醚中，然后依次用10％盐酸和饱和氯化钠溶液洗。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，减压收缩。残留物用闪式层析柱纯化(5％至10％甲醇/氯仿洗脱)，得2—烷基取代的—3—苯基丙酸(4)，(见反应路线II)。
将2—烷基取代的—3—苯基丙酸(4)溶入四氢呋喃中，然后用1当量N—甲基吗啉(NMM)处理，并冷至-20℃。往反应混合物中加1当量氯甲酸异丁酯，然后搅拌大约30分钟。将烷基取代的5，6—二氨基—1，3—二丙基尿嘧啶(3)溶入二甲基甲酰胺中，反应混合物在—20℃搅拌4小时。升温至室温后，减压除去溶剂。残留物溶入到氯仿中，先用饱和碳酸氢钠溶液洗，再用饱和氯化钠溶液洗。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(3％至5％至10％的甲醇/氯仿和10％至15％的异丙酸/己烷洗脱)，得酰胺(5)。
将酰胺(5)溶入无水苯中，用6.5当量四氟化硼酸三乙基氧鎓盐(1M的二氯甲烷溶液)处理。反应混合物于50℃反应约2小时。冷却之后，反应混合物倾到磷酸盐缓冲溶液中，用乙醚萃取。有机层用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(3％至6％甲醇/氯仿洗脱)，得烯氨基醚(6)。
将烯氨基醚(6)溶入无水苯，氮气保护下加热回流约2小时。减压除去溶剂，残留物用径向色谱纯化(50％的乙酸乙酯/己烷洗脱)，得1，3—二烷基—8—取代黄嘌呤(7)。
反应路线IV另一类2—取代的链烷羧酸可以按上面的反应路线IV制备。
β—丙酸内酯(A)溶解到甲醇中，然后用1当量三乙胺处理，生成了3—羟基丙酸甲酯(B)。用2当量二异丙基酰胺锂将化合物B转化为双负离子，并用1当量溴苄烷基化，使生成2—苄基—3—羟基丙酸甲酯(C)。化合物C保护成叔丁基二甲基硅醚(D)。化合物D然后用氢氧化钾皂化，并小心酸化成酸(E)。将酸(E)溶解到四氢呋喃中，然后用1当量N—甲基吗啉处理，并冷至-20℃。往反应混合物中加1当量氯甲酸异丁酯，接着再加1当量5，6—二氨基—1，3—二丙基尿嘧啶与二甲基甲酰胺配制的溶液，使生成酰胺。该酰胺然后在70℃下用氢氧化钾水溶液处理，使环化、脱保护，生成3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮。
反应路线V
能用于制备反应路线II中描述的目标化合物的另一类羧酸可以按上面的反应路线V制备。
α，α—二溴—邻二甲苯(A)在回流下用丙二酸二乙酯负离子处理，得二酯(B)。化合物B用氢氧化钾水溶液皂化，生成化合物C，化合物C在200℃热解脱羧，使生成2，3—二氢化茚基—2—羧酸(D)。(见于J.Med，Chem.，32，1989(1989))。酸(C)溶入四氢呋喃中，然后用1当量N—甲基吗啉处理并冷至-20℃。往反应混合物中加1当量氯甲酸异丁酯，接着加1当量5，6—二氨基—1，3—二丙基尿嘧啶的二甲基甲酰胺溶液，使生成酰胺。得到的酰胺用氢氧化钾水溶液处理，加热回流使生成环化产物，3，7—二氢—8—(2—(2，3—二氢化茚基)—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮。
以下是本发明的化合物一览表：
3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—〔(S)—1—甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—〔(R)—1—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—〔(S)—1—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—〔1—(苯甲基)丁基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—(1—苯乙基)—1，3—二—2—丙烯基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—〔1—(苯甲基)丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—(1—苯乙基)—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—(1—苯乙基—2—苯乙基)—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—(2—(2，3—二氢茚基)—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—(1—羟甲基—2—苯乙基)—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—〔(R)—1—苯丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
3，7—二氢—8—〔(S)—1—苯丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮
腺苷受体剂的药物制品
最佳给药途径是口服。对于口服，本发明的化合物可以制成固体或液体制品，例如胶囊、丸剂、片剂、锭剂、糖锭、熔融剂、粉剂、溶液剂、悬浮剂或乳化剂。固体单位剂量的剂型可以装成胶囊，胶囊可以是通常的硬壳或软壳胶囊，含有表面活性剂、润滑剂，以及惰性充填剂，例如乳糖、蔗糖、磷酸钙、以及玉米淀粉。另一途径是将本发明化合物与常用的片剂基质一块压片，通常的基质有乳糖、蔗糖、以及玉米淀粉，此外还使用粘合剂，例如阿拉伯树胶，玉米淀粉，或明胶，使用崩解剂协助片剂口服之后破裂和溶解，常用的崩解剂有土豆溶粉、藻酸、玉米淀粉，以及瓜尔胶，使用润滑剂改进片剂颗粒的流动性并防止片剂的物料粘到冲模表面上，常用的润滑剂有滑石粉，硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌，此外还有染料、着色剂和芳香剂，以便增强片剂的外观质量并使更容易为患者接受。制作常用的口服液体制剂时，赋型剂有稀释剂，例如水和醇类，例如乙醇、苄醇和聚乙二醇，可以含有也可以不含可以药用的表面活性剂，悬浮剂或乳化剂。
本发明的化合物也可以非肠道给药，例如皮下注射、静脉注射，肌肉注射，或者腹膜内注射，作为注射剂使用时，本发明的化合物用生理上可以接受的稀释剂稀释，其中还含有药用载体，该药用载体可以是无药理作用的液体或混合液体，例如水、生理盐水、葡萄糖水溶液及相关的糖溶液，醇类，例如乙醇、异丙醇、或十六烷基醇，二元醇类，例如丙二醇或聚乙二醇，甘油缩醛类，例如2，2—二甲基—1，3—二氧戊环—4—甲醇，醚类，例如聚(1，2—亚乙基二醇)400，油、脂肪酸、脂肪酸酯或甘油酯，或乙酰化脂肪酸甘油酯，可以不加能供药用的表面活性剂，也可以加能供药用的表面活性剂，例如肥皂或洗涤剂，悬浮剂，例如果胶、Carbomers、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、或羧甲基纤维素、或乳化剂和其它的药物赋型剂。可以用于本发明的非肠道制剂的表述性的油有石油、动物油、植物油、或合成的原料，例如花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄榄油、凡士林及矿物油。适宜的脂肪酸有油酸、硬脂酸和异硬脂酸。适宜的脂肪酸酯有油酸乙酯和十四烷酸异丙酯。适宜的肥皂有脂肪酸的碱金属盐、铵盐和三乙醇铵盐。适宜的洗涤剂有阳离子洗涤剂，例如卤化二甲基二烷基四级铵和卤化烷基吡啶；阴离子洗涤剂，例如磺酸烷基酯、磺酸芳基酯和磺酸烯基酯，醚，硫酸烷基酯，硫酸烯基酯，硫酸醚酯和硫酸单甘油酯，以及磺基琥珀酸酯；非离子型洗涤剂，例如氧化脂肪胺、脂肪酸链醇酰胺、以及聚氧乙烯—聚丙烯共聚物；两性洗涤剂，例如β—氨基丙酸烷基酯、和2—烷基咪唑啉四级铵盐，以及它们的混合物。本发明的化合物也可以换一种方式气雾给药，通过适宜的载体直接用到鼻腔，或者将本发明的化合物做成溶液性滴剂，选择适宜的溶剂，直接通过鼻腔给药。
本发明的非肠道组合物典型地通常在溶液中含重量百分数的大约0.5％至25％活性成分。使用防腐剂和缓冲溶液则更加有利。为了避免或限制在注射部位引起的刺激，这类组合物可以含有亲水—亲脂平衡的非离子型表面活性剂(HLB)大约12至17。处方中这种表面活性剂的含量范围为重量百分数的大约5％至15％。表面活性剂可以是具有上述HLB的单一成分，也可以是两种或多种具有期望的HLB组分的混合物。用于非肠道处方的描述性表面活性剂有聚乙烯山梨醇脂肪酸酯，例如山梨醇单油酸酯，以及氧化乙烯和疏水性碱的高分子量加合物，该加合物由氧化乙烯与丙二醇缩合生成。
使用的化合物的确切的量，即用以产生期待的效应的目标化合物的量取决于各种因素，例如使用的化合物；药物剂型、动物的大小、年龄和种族；给药途径、时间和频率；以及期待的生理效应。特殊情形下，给药量可以用常规的确定范围的技术来决定。
本发明的化合物最好以组合物的形式给药，该组合物含有本发明的化合物与可以药用的载体，这类载体对于活性的化合物是化学惰性的，在使用的条件下也无有害的副作用或毒性。这类组合物可以含有每毫升载体中0.1μg或更少至500mg活性化合物至大约重量百分数的99％活性化合物，以及可以药用的载体。
按照文献的已知方法，本发明的化合物也可以掺入到任何惰性载体中，以便它们可以用于常规的血清检测、血水平和脲水平检测等等。
组合物可以是固体，例如片剂、胶囊、颗粒剂、调制食品、食物添加剂、以及浓缩物、粉剂、颗粒或类似的制品；可以是液体剂，例如无菌的可注射的悬浮剂，口服悬浮剂或溶液。可以药用的载体包括赋型剂，例如表面活性分散剂、悬浮剂、片剂粘合剂、润滑剂、芳香剂及着色剂。适宜的赋型剂可以在例如教科书Remington′s Pharma-ceutical Manufacturing，13 Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsg lvania(1965)中查到。
下面给出一些实施例仅来解释本发明，它们不应当被解释为对本发明构成任何限制。
实施例1
1，3—二正丙基—6—氨基尿嘧啶(30g)悬浮于1升水和40ml20％的乙酸中，彻底搅拌。分次加入亚硝酸钠(9.03g)和41ml水的溶液，用12ml浓盐酸使反应溶液保持酸性。生成紫色沉淀。加样在10分钟内完成。悬浮液使搅拌2小时。反应混合物过滤，滤渣用水洗，真空干燥，待46g 1，3—二正丙基—5—亚硝基—6—氨基尿嘧啶。
将1，3—二正丙基—5—亚硝基—6—氨基尿嘧啶(61.6g)悬浮在1升水中，用50％氢氧化铵使悬浮液显碱性，pH为11，然后用100g连二硫酸钠分次处理直至紫色消退。水性混合物用氯仿萃取(8×200ml)，无水硫酸镁干燥，过滤、浓缩。残留物用闪式柱层析纯化(50％至10％甲醇/氯仿洗脱)，并用10％异丙醇/己烷重结晶，再用10％异丙醇重结晶，得31.29g 1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶，m.p.127—128℃。
氢化钠(矿物油的50％是悬浮物，15.2g)用100ml四氢呋喃洗，然后悬浮于300ml四氢呋喃中，冷却至0℃，往里滴加50g甲基丙二酸二乙酯与75ml四氢呋喃配成的溶液，45分钟滴加完。搅拌30分钟后，加入36.8ml氯苄，再加24ml四氢呋喃。将反应混合物加热并缓慢回流小时，冷却后倾到400ml水中，并用乙酸乙酯萃取(3×500ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得75g苄基甲基丙二酸二乙酯。
将苄基甲基丙二酸二乙酯(75g)、300ml乙醇及100g氢氧化钾与300ml水配成的溶液混合，反应混合物加热并缓慢回流5小时。冷却之后，混合物用乙醚萃取(2×300ml)。然后水层用120ml浓盐酸酸化，用乙醚萃取(3×300ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得49.2g苄基甲基丙二酸，为黄色固体(收率83％)。
将苄基甲基丙二酸(49.2g)溶于400ml含1.69g氧化亚酮的乙腈中，加热回流5小时。减压除去溶剂。残留物溶入400ml乙醚中，并依次用10％盐酸洗(2×300ml)，300ml饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％甲醇/氯仿洗脱)，得38.3g 2—苄基丙酸(产率99％)。
2—苄基丙酸(38.3g)与400ml 50％乙醇水溶液及83.88g含2分子结晶水的奎宁混合，用蒸气浴加热20分钟使溶液澄明。静置过夜后，滤出生成的结晶，得97.37g奎宁盐。用50％乙酸水溶液重结晶6次之后，得18.8g奎宁盐。
奎宁盐(0.34g)用100ml 1M硫酸处理，然后用氯仿萃取(2×100ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(5％至10％甲醇/氯仿洗脱，2mm板)，得89mg(S)—2—甲基—3—苯基丙酸。
1g(S)—2—甲基—3—苯基丙酸与0.67ml N—甲基吗啉混合，冷至-20℃后用0.79ml氯甲酸异丁酯处理。15分钟后加入1.38g1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与2ml二甲基甲酰胺配成的溶液。经2小时使反应液升温至室温。然后将反应混合物倾入300ml氯仿中，依次用200ml饱和碳酸氢钠溶液洗，200ml饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(3％至5％至10％甲醇/氯仿洗脱，2mm板)及(10％至15％异丙醇/己烷洗脱，2mm板)得1.6g酰胺。该酰胺再用闪式柱层析纯化(3％至5％至10％甲酸/氯仿洗脱；5％至10％异丙醇/己烷洗脱)，得1.05g酰胺。该酰胺再用径向色谱纯化(5％异丙醇/己烷洗脱，2mm板)得0.44g酰胺。
将得到的酰胺(430mg)溶入40ml无水苯，然后加入7.5ml四氟化硼酸三乙氧鎓盐(1M的二氯甲烷溶液)。反应混合物加热回流5小时。反应混合物倾入到磷酸盐缓冲液中，用300ml甲苯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(3％至6％甲醇/氯仿洗脱，2mm板)，得209mg烯胺醚和122mg原料。烯胺醚再次按上面的方法纯化，得121mg纯手性烯胺醚。
将121mg手性烯胺醚溶入14ml苯中，并加热回流4小时。薄层色谱指示反应完全。减压除去溶剂，残留物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得87mg粗品，用20％乙醚/己烷重结晶得76mg 3，7—二氢—8—〔(S)—1—甲基—2—苯基—乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，60℃真空干燥2小时，为白色固体，mp，141—142℃。
实施例2
(S)—(＋)—2—苯基丙酸(0.69g)，0.46ml N—甲基吗啉和10ml四氢呋喃混合，冷却至-20℃。加入0.46ml氯甲酸异丁酯，反应混合物搅拌25分钟。往该反应混合物中加0.84g 1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与5ml二甲基甲酰胺配成的溶液，反应混合物在-20℃搅拌4小时。然后将反应混合物升温至室温，放置过夜。在高真空下减压除去溶剂，残留物溶入300ml氯仿中。有机层依次用200ml饱和碳酸氢钠水溶液和200ml饱合氯化钠水溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％至15％异丙醇/己烷洗脱)，得0.94g泡沫状酰胺(收率69％)。
将上面的酰胺(0.90g)溶入50ml无水苯，用16.3ml四氟化硼酸三乙氧鎓盐(1M的二氯甲烷溶液)处理，然后在50℃加热15小时。将反应液倾入300ml磷酸盐缓冲溶液中，然后用400ml乙醚萃取。有机层用300ml饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向层谱纯化(3％至5％至10％甲醇/氯仿洗脱，2mm板)得0.70g烯胺醚(产率72％)。
将上面的烯胺醚(0.70g)溶入50ml无水苯中，然后在氮气保护下回流4小时。在高真空下减压除去溶剂，残留物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，重结晶后得0.415g产物。该产物在高真空下用P2O5干燥，得0.413g产物，m.p.134.5—136℃。该产物再用20％乙醚/己烷重结晶，得255mg产物，然后再在高真空下用干燥枪于39℃干燥20小时，得252mg产物，3，7—二氢—8—〔(S)—1—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮。
实施例3
将正戊酸(1g)溶入75ml四氢呋喃，然后在室温下用2当量二异丙基酰胺锂处理。反应混合物于40℃加热30分钟，加入1.1ml氯苄。在40℃加热1.5小时后将反应混合物冷至室温，倾入300ml水中，用乙醚萃取(2×200ml)。水溶液然后用1M盐酸酸化，用乙醚萃取(2×300ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(40％至50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得1.63g 2—苄基戊酸(产率87％)。
2—苄基戊酸(0.88g)溶入15ml含0.46ml N—甲基吗啉的四氢呋喃中。溶液冷至-20℃后加入0.60ml氯甲酸异丁酯。30分钟之后，在-20℃与搅拌下往里加0.84g 1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与5ml二甲基甲酰胺配成的溶液。3小时后将反应溶液升至室温，减压除去溶剂。残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％异丙醇/己烷洗脱)，得0.55g泡沫状酰胺。
将上面得到的酰胺(0.55g)与20ml 30％氢氧化钾水溶液及5ml乙醇混合，加热至80℃后搅拌5小时。反应溶液冷却，用浓盐酸酸化，氯仿萃取(3×200ml)，合并有机层，无水硫酸镁干燥。混合物过滤，滤液减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(5％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)。产物用20％乙醚/己烷研磨，39℃下真空干燥16小时，得217mg 3，7—二氢—8—〔1—(苯甲基)丁基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.158—160℃。
实施例4
1，3—二烯丙基—6—氨基尿嘧啶(5g)在1升的圆底瓶中用400ml水悬浮，彻底搅拌。加入6.7ml 20％乙酸水溶液，间歇地加入2ml浓盐酸和亚硝酸钠(1.53g溶入7ml水中)。4小时后反应混合物过滤，沉淀用水洗收集的沉淀于80℃真空干燥20小时，得4.54g1，3—二烯丙基—5—亚硝基—6—氨基尿嘧啶，为紫色固体，m.p.170—180℃(产率87％)。
1，3—二烯丙基—5—亚硝基—6—氨基尿嘧啶(4.5g)悬浮于150ml乙酸乙酯中，然后用23.6g连二硫酸钠与64ml水配成的溶液处理。1小时后，分层，水层用乙酸乙酯萃取(4×100ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残留的用闪式柱层析纯化(10％甲醇/氯仿洗脱)，得4.41g 1，3—二烯丙基—5，6—二氨基尿嘧啶。
在-20℃下将2—苯基丙酸(1.0g)溶入10ml含0.73ml N—甲基吗啉的乙腈中。加入氯甲酸异丁酸(0.86ml)。15分钟后，加入1.48g 1，3—二烯丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与3ml二甲基甲酰胺配成的溶液。4小时后将反应混合物升温至室温，减压除去溶剂。残留物用闪式柱层析纯化2次(3％至5％甲醇/氯仿洗脱)，得0.5g酰胺。
得到的酰胺(0.5g)溶入30ml无水苯中，用9.2ml四氟化硼酸三乙氧鎓盐(1M的二氯甲烷溶液)处理，在50℃加热5小时。冷却后反应混合物倾入200ml磷酸盐缓冲液中，用甲苯萃取(3×200ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物溶入100ml甲苯中，然后在100℃加热4小时。冷却后减压除去溶剂，残留物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得0.45g白色固体，m.p.142—143℃。得到的固体用30％乙醚/己烷重结晶，得280mg 3，7—二氢—8—(1—苯乙基)—1，3—二丙烯—2—基—1H—嘌呤—2，6—二酮。
实施例5
二异丙胺(3.2ml)溶入20ml四氢呋喃，冷至0℃后用14.2ml1.6M的异丁基锂处理。30分钟后，在-78℃下将得到的二异丁胺基锂加到1g正丁酸与75ml四氢呋喃配成的溶液中。10分钟后将反应混合物升至-20℃。再过10分钟，使反应混合物缓慢升至室温。反应溶液在大约35℃加热30分钟，然后再降至室温，加入1.3ml氯苄。1.5小时后，反应混合物在35℃加热2.5小时。反应溶液冷却，用300ml水稀释，用乙醚洗(2×200ml)，水相用1M盐酸酸化，用乙醚萃取(3×200ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得1.56g 2—苄基丁酸(产率77％)。
将2—苄基丁酸(0.82g)溶入10ml四氢呋喃中，冷至-20℃，并用0.46ml N—甲基吗啉和0.60ml氯甲酸异丁酯处理。30分钟后，往里加0.84g 1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与5ml二甲基甲酰胺配成的溶液，反应混合物在-20℃下搅拌4小时。反应溶液升温至室温，放置过夜。反应溶液然后用200ml二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(100ml)。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％至15％至20％异丙酸/己烷洗脱)，得1.04g酰胺(产率71％)。
得到的酰胺(1.04g)溶入10ml乙醇中，然后加入40ml 30％氢氧化钾水溶液，于90℃加热1.5小时。反应溶液使冷至室温，放置过夜，用浓盐酸酸化。反应混合物用200ml水稀释，用氯仿萃取(3×200ml)，合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(40％至50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得0.49g产物。使产物用20％乙醚/己烷研磨，收集白色沉淀，于39℃真空干燥，得418mg 3，7—二氢—8—〔1—(苯甲基)丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.180℃。
上面的产品于39℃高真空下再干燥6小时，得407mg 3，7—二氢—8—〔1—(苯甲基)丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p，186—187℃。该产品于39℃用无水磷酸高真空干燥24小时，得342mg终产物3，7—二氢—8—〔1—(苯甲基)丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.186—188℃。
实施例6
(R)—(－)—2—苯基丙酸(0.69g)与15ml四氢呋喃混合，然后加0.46ml N—甲基吗啉，冷至-20℃，用0.6ml氯甲酸异丁酯处理。30分钟后，往反应混合物中加0.84g 1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与5ml二甲基甲酰胺配成的溶液，然后在—30℃搅拌4小时。在15小时内使反应混合物升温至室温，在高真空下除去溶剂。残留物溶入300ml氯仿中，有机层用200ml饱和碳酸氢钠水溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％至15％至20％异丙醇/己烷洗脱)，得1.21g期望的酰胺(产率89％)。
所得酰胺(1.1g)溶于50ml苯中，用19.9ml四氟化硼酸三乙氧翁盐(1M的二氯甲烷溶液)处理，反应混合物在50℃加热15小时。反应混合物冷却，倾入300ml乙醚中，依次用200ml磷酸盐缓冲液洗、200ml水洗、200ml饱和氯化钠溶液洗。有机层用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(2％至5％甲醇/氯仿洗脱，2mm板)，得0.65g期望的烯胺醚。
将烯胺醚(0.65g)溶于60ml无水苯中，加热回流4小时。冷却之后减压除去溶剂，残留物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得0.56g 3，7—二氢—8—〔(R)—1—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.136—137℃。
实施例7
2—苯基丙酸(0.69g)溶入15ml四氢呋喃，用0.46ml N—甲基吗啉处理后，冷至-20℃，然后加入0.6ml氯甲酸异丁酯。30分钟后加入0.84g 1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与5ml二甲基甲酰胺配成的溶液。反应混合物于-20℃搅拌4小时，然后升温至室温。高真空下除去溶剂，残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％至15％至20％异丙醇/己烷洗脱)，得0.96g期望的酰胺(产率70％)。
得到的酰胺(0.95g)与10ml乙醇、40ml氢氧化钾水溶液混合后，于90℃加热1.5小时。反应溶液在冰浴中冷却并小心地用浓盐酸酸化。反应混合物用100ml水稀释，水层用氯仿萃取(3×200ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得0.91g产物。产物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得0.78g产物，用20％乙醚/己烷重结晶，得0.591g 3，7—二氢—8—(1—苯乙基)—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.148—150℃。
实施例8
氢化钠(15.2g，50％溶液)用100ml四氢呋喃洗。洗过的氢化钠悬浮于300ml四氢呋喃中，冷至0℃，然后在45分钟内往里加50g甲基丙二酸二乙酯与75ml四氢呋喃的溶液。再搅拌30分钟后，加入36.8ml氯苄和25ml四氢呋喃。反应混合物加热缓慢回流3小时，冷却，倾入500ml水中，用乙酸乙酯萃取(3×500ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得75g苄基甲基丙二酸二乙酯。
苄基甲基丙二酸二乙酯(75g)与300ml乙醇以及100g氢氧化钾与300ml水配成的溶液混合，加热缓慢回流5小时。冷却之后，混合物用乙醚萃取(2×300ml)。水层用120ml浓盐发酸化，用乙酸萃取(3×300ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得49.2g苄基甲基丙二酸，为黄色固体(产率83％)。
苄基甲基丙二酸(49.2g)溶于400ml乙腈中，用1.69g氧化亚铜处理，加热回流5小时。减压除去溶剂，残留物溶入400ml乙醚中，依次用10％盐酸(2×300ml)和饱和氯化钠溶液(300ml)洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％甲醇/氯仿洗脱)，得38.37g 2—苄基丙酸(产率99％)。
2—苄基丙酸(38.3g)、400ml 50％乙醇水溶液以及83.88g含2分子结晶水的奎宁混合，然后在蒸气浴上加热20分钟，使成澄明溶液。放置过夜后，收集形成的结晶，得97.37g奎宁盐。用50％乙醇水溶液再重结晶6次后，仍有18.8g奎宁盐。
上面的重结晶母液酸化并萃取，回收24.86g 2—苄基丙酸。将该2—苄基丙酸与18.4g α—(＋)—α—甲基苄胺与160ml乙酸乙醌的溶液混合，在蒸气浴上加热使溶解，冷却，收集沉淀，得35g胺盐。用乙酸乙酯再重结晶3次后，胺盐(0.4g)用100ml 1M硫酸处理。水层用氯仿萃取(2×100ml)，合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(5％甲醇/氯仿洗脱，2mm板)，得186mg(R)—2—苄基丙酸。
(R)—2—苄基丙酸(0.69g)溶于15ml四氢呋喃，溶液冷至—20℃，用0.46ml N—甲基吗啉处理，加入0.6ml氯甲酸异丁酯，搅拌30分钟。往反应混合物中加0.84g 1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶与5ml二甲基甲酰胺配成的溶液，然后再-20℃下搅拌4小时。溶液升温至室温，放置过夜。高真空下除去溶剂，紫色的残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％至15％至20％异丙醇/己烷洗脱)，得0.87g期望的酰胺(产率64％)。
所得酰胺(0.85g)溶入100ml无水苯，用14.8ml四氟化硼酸三乙基氧鎓盐(1M二氯甲烷溶液)处理，溶液在50℃加热15小时。反应溶液冷却，倾入500ml乙醚中，先用300ml磷酸盐缓冲液洗，再用200ml饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用径向色谱纯化(2％至5％甲醇/氯仿洗脱，2mm板)，得0.36g期望的烯胺醚。
将上面得到的烯胺醚(0.36g)溶入100ml无水苯，加热加3小时。减压除去溶剂，残留物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，2mm板)，得0.23g 3，7—二氯—8—〔(R)—1—甲基—2—苯基乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮。该固体用20％乙醚/己烷重结晶，于39℃高真空干燥后得187mg 3，7—二氢—8—〔(R)—1—甲基—2—苯基乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.141—142℃。
实施例9
β—丙酸内酯(5.5g)溶入100ml甲醇中，室温搅拌下用10.8ml三乙胺处理。3天后减压除去溶剂，残留物用闪式柱层析纯化(10％至20％异丙醇/己烷洗脱)，得3.3g 3—羟甲基丙酸酯。
3—羟甲基丙酸酯(3.23g)溶入100ml四氢呋喃，冷至-50℃，用2.1当量二异丙基酰胺锂与100ml四氢呋喃的溶液处理。20分钟后，-50℃下往该二价阴离子物中加3.68ml溴苄。1小时内使温度升至-20℃。反应混合物用500ml饱和氯化铵水溶液稀释，水层用乙醚萃取(2×500ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。粗残留物用闪式柱层析纯化(10％至20％异丙醇/己烷洗脱)，得2.65g 2—苄基—3—羟甲基丙酸酯。
2—苄基—3—羟甲基丙酸酯(2.6g)在氮气保护下溶入75ml无水二甲基甲酰胺中。搅拌下往里加入氯化叔丁基二甲基硅烷(2.2g)，然后加2.0g咪唑。0.5至1小时后反应混合物用500ml乙醚稀释。有机层依次用50％氯化钠水溶液洗(3×200ml)、饱和氯化钠水溶液(300ml)洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用闪式柱层析纯化(5％至10％异丙醇/己烷洗脱)，得3.49g 2—苄基—3—(叔丁基二甲基硅氧基)丙酸甲酯。
2—苄基—3—(叔丁基二甲基硅氧基)丙酸甲酯(3.3g)溶入100ml甲醇中，冷至0℃后在激烈搅拌下用50ml 30％氢氧化钾处理。在5小时内将反应混合物升至室温。反应混合物用200ml水稀释，用乙醚洗，水溶液冷至0℃。先加入二氯甲烷(100ml)，再缓慢加260ml 1M盐酸，同时搅拌。分层后水层用二氯甲烷萃取(3×200ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(2％至4％甲醇/氯仿洗脱，4mm板)，得2.14g 2—苄基—3—(叔丁基二甲基硅氧基)丙酸。
2—苄基—3—(叔丁基二甲基硅氧基)丙酸(2.1g)溶入20ml四氢呋喃中，冷至—20℃，用0.71ml N—甲基吗啉处理。加入氯甲酸异丁酯(0.92ml)，反应混合物在-20℃搅拌20分钟。往里加1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶(1.62g)与10ml二甲基甲酰胺的溶液，反应混合物在-20℃搅拌3小时。反应混合物升温至室温，用400ml氯仿稀释，有机层依次用50％氯化钠水溶液洗(2×200ml)，饱和碳酸氢钠水溶液洗(200ml)，无水硫酸镁干燥，过滤，再减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(5％至10％甲醇/氯仿洗脱，4mm板)，得4.25g酰胺。
上面得到的酰胺(3.1g)溶入50ml乙醇中，用100ml 30％氢氧化钾处理。反应混合物加热回流1.5小时。冷至0℃后反应混合物用42ml浓盐酸酸化。水层用氯仿萃取(2×200ml)。合并有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(5％至10％甲醇/氯仿洗脱，4mm板)和(5％至10％至20％异丙醇/己烷洗脱，4mm板)，得1.1g粗品。该粗品用25％乙醚/己烷研磨，得0.82g3，7—二氢—8—〔1—(羟甲基—2—苯乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，为白色固体，于39℃真空干燥5小时后，m.p.为145—146℃。
实施例10
将金属钠(3.7g)溶于80ml乙醇，然后加入150ml乙醚。往反应混合物中加丙二酸二乙酯(12.5ml)以及α，α’—二溴—邻二甲苯与150ml乙醇配成的溶液，充分搅拌。加热回流5小时。反应混合物冷却，过滤，减压蒸去溶剂。残留物用氢氧化钾水溶液处理(20g溶于125ml水)，加热回流15小时。反应混合物冷却后用200ml乙醇洗。水层用30％盐酸酸化。收集沉淀，在干燥石膏上真空干燥5小时，得8.86g 2，3—二氢茚基—2，2—二羧酸。
2，3—二氢茚基—2，2—二羧酸(8.86g)置于500ml圆底烧瓶中，搅拌下在200℃加热15分钟。反应混合物冷至室温，用10％异丙醇/己烷重结晶，生成1.77g 2，3—二氢茚基—2—羧酸。(见于J.Med，Chem.，23，1995(1989))。
将2，3—二氢茚基—2—羧酸(1.0g)溶于15ml四氢呋喃，用0.62ml N—甲基吗啉处理后冷至-20℃。加氯甲酸异丁酯(0.80ml)，反应混合物于-20℃搅拌30分钟。加1，3—二正丙基—5，6—二氨基尿嘧啶后，反应混合物在-20℃搅拌4小时。升温至室温，反应液倾入300ml氯仿中，依次用50％氯化钠水溶液洗(2×100ml)和饱和碳酸氢钠水溶液洗(2×100ml)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(5％至10％甲醇/氯仿洗脱，4mm板)和(10％至20％至30％异丙醇/己烷洗脱，4mm板)，得2.19g酰胺。
上面得到的酰胺(2.19g)用100ml 30％氢氧化钾水溶液以及40ml乙醇处理，加热回流2小时。反应液冷至0℃，用42ml浓盐酸酸化。收集沉淀，并使溶于300ml氯仿中。有机层用200ml饱和碳酸氢钠水溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。残留物用80％乙醚/己烷研磨，60℃真空干燥后得1.10g 3，7—二氢—8—(2—(2，3—二氢茚基)—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.223—224℃。
实施例11
2—苯基丁酸(1.1g)用5，6—二氨基—1，3—二丙基尿嘧啶处理，得酰胺，然后按实施例7中的方法环合，得454g 3，7—二氢—8—〔(±)—苯基丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.137—138℃。
实施例12
按实施例6的方法将(S)—(＋)—2—苯基丁酸(0.93g)用5，6—二氨基—1，3—二丙基尿嘧啶处理，得酰胺，然后按实施例6的方法将酰胺转化为烯胺醚，然后再按实施例6的方法热环合，得547mg 3，7—二氢—8—〔(S)—苯基丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.128—131℃。
实施例13
按实施例6的方法将(R)—(－)—2—苯基丁酸(0.98g)用5，6—二氨基—1，3—二丙基尿嘧啶处理，得酰胺。该酰胺按实施例6的方法转化为烯胺醚，并加热环合，得190mg 3，7—二氢—8—〔(R)—苯丙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.128—130℃。
实施例14
1.9g 2—苄基丙酸用0.65g氢氧化钾与60ml水配成的溶液处理，同时搅拌。往该溶液中加2.0g5，6—二氨基—1，3—二甲基尿嘧啶水合物，2.3g 1—乙基—3—〔3—(二甲氨基)丙基〕碳化二亚胺盐酸盐。2小时后除去溶剂，残留物用径向色谱纯化(40％异丙醇/己烷洗脱，4mm板)，得1.85g产物，该产物用乙醚研磨，得0.40g酰胺，为白色固体。
上面得到的酰胺(0.33g用10ml30％氢氧化钾水溶液和2ml乙醇处理，在70℃加热1.5小时。冷却后反应混合物用55ml 1M盐酸酸化，然后用300ml乙醚萃取。有机层依次用200ml水洗，200ml饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。残留物用己烷研磨，用五氧化二磷真空干燥后得142mg 3，7—二氢—8—〔(±)—(甲基—2—苯乙基)〕—1，3—二甲基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.198—199℃。
实施例15
22g 4—苄氧基氯苄用甲基丙二酸二乙酯的阴离子物按实施例8的方法处理。按照实施例8中的方法将烷基化的甲基丙二酸酯皂化和脱羧，得18.06g 2—(4—苄氧苄基)丙酸，m.p.93—95℃。按实施例7的方法收该酸3.6g用5，6—二氨基—1，3—二丙基尿嘧啶处理，得到酰胺，酰胺环化后得1.46g产物，该产物用5％乙醚/己烷重结晶，得0.72g 3，7—二氢—8—〔(甲基—2—(4—苄氧苯基)乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.124—126℃。260mg 3，7—二氢—8—〔甲基—2—(4—苄氧苯基)乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮溶于20ml甲醇，并用催化量5％钯碳处理。然后在一大气压的氢气下搅拌1小时。用硅藻土过滤，滤液减压浓缩。残留物用径向色谱纯化(50％乙酸乙酯/己烷洗脱，4mm板)，得182mg产物，用5％乙醚/乙烷研磨后，于39℃真空干燥3小时，得162mg 3，7—二氢—8—〔甲基—2—(4—羟苯基)乙基〕—1，3—二丙基—1H—嘌呤—2，6—二酮，m.p.218—220℃。