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1、10申请公布号CN104136040A43申请公布日20141105CN104136040A21申请号201380010142X22申请日2013011861/589,12320120120USA61K39/0020060171申请人费尔南多托姆克罗伊茨地址巴西阿雷格里港72发明人费尔南多托姆克罗伊茨74专利代理机构北京市金杜律师事务所11256代理人吴亦华谢燕军54发明名称自体癌细胞疫苗57摘要自体癌细胞疫苗包含在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者的癌细胞。MHCI呈递癌抗原，且MHCII呈递非自身抗原。根据一个方面，提供了用于制备分离的免疫原性癌细胞的方法，所述方法包括诱导从受试者分。
2、离的癌细胞上MHCII的表达；将所述癌细胞与非自身抗原孵育，使得非自身抗原结合表达的MHCII；和杀死所述癌细胞。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014082086PCT国际申请的申请数据PCT/BR2013/0000472013011887PCT国际申请的公布数据WO2013/106895EN2013072551INTCL权利要求书7页说明书23页附图10页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书7页说明书23页附图10页10申请公布号CN104136040ACN104136040A1/7页21用于制备分离的免疫原性癌细胞的方法，所述方法包括诱导从受试者分离。
3、的癌细胞上MHCII的表达；将所述癌细胞与非自身抗原孵育，使得所述非自身抗原结合表达的MHCII；和杀死所述癌细胞。2权利要求1所述的方法，其进一步包括在MHCII诱导后鉴定MHCII阳性细胞。3权利要求2所述的方法，其进一步包括将MHCII阳性癌细胞与MHCII阴性癌细胞分离，以获得包含MHCII阳性细胞的纯化的组合物。4权利要求13中任一项所述的方法，其进一步包括从受试者分离癌细胞。5权利要求4所述的方法，其中在活检程序过程中或在肿瘤的手术去除过程中分离所述细胞。6权利要求15中任一项所述的方法，其进一步包括冷冻保存所述癌细胞。7权利要求16中任一项所述的方法，其中通过致死照射、在不存在冷。
4、冻保存剂的情况下冷冻和解冻、或用细胞毒性化合物处理来杀死所述细胞。8权利要求7所述的方法，其中通过致死照射杀死所述细胞。9权利要求18中任一项所述的方法，其中使用MHCII诱导剂诱导所述癌细胞上的MHCII。10权利要求9所述的方法，其中所述MHCII诱导剂是细胞因子。11权利要求10所述的方法，其中所述细胞因子是IFN、IFN、IFN、IL4、IL13、IL23、TNF或其组合。12权利要求11所述的方法，其中所述细胞因子是IFN。13权利要求9所述的方法，其中所述MHCII诱导剂是MHCII表达构建体。14权利要求9所述的方法，其中所述MHCII诱导剂是将与所述癌细胞融合的MHCII表达细。
5、胞。15权利要求114中任一项所述的方法，其中所述非自身抗原是非人抗原。16权利要求15所述的方法，其中所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合。17权利要求9所述的方法，其中所述非自身抗原是卵清蛋白或KLH。18权利要求9所述的方法，其中所述非自身抗原是BSA。19权利要求114中任一项所述的方法，其中所述非自身抗原不是牛抗原。20权利要求19所述的方法，其中所述非自身抗原不是BSA。21权利要求120中任一项所述的方法，其中所述。
6、诱导步骤是在不含BSA的培养基中。22其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者的分离的免疫原性癌细胞，其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。23权利要求22所述的细胞，其中所述非自身抗原是非人抗原。24权利要求23所述的细胞，其中所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白权利要求书CN104136040A2/7页3BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合。25权利要求24所述的细胞，其中所述非自身抗原是卵清蛋白或KLH。26权利要求24所述的细胞，其中所。
7、述非自身抗原是BSA。27权利要求22所述的细胞，其中所述非自身抗原不是牛抗原。28权利要求27所述的细胞，其中所述非自身抗原不是BSA。29免疫原性组合物，其包含在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者的分离的免疫原性癌细胞，其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。30权利要求29所述的组合物，其进一步包含至少一种赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或其组合。31权利要求29或30所述的组合物，其中所述非自身抗原是非人抗原。32权利要求31所述的组合物，其中所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白B。
8、SA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合。33权利要求32所述的组合物，其中所述非自身抗原是卵清蛋白或KLH。34权利要求32所述的组合物，其中所述非自身抗原是BSA。35权利要求29或30所述的组合物，其中所述非自身抗原不是牛抗原。36权利要求35所述的组合物，其中所述非自身抗原不是BSA。37权利要求2936中任一项所述的组合物，基于所述组合物中的总细胞数，所述组合物包含约5至约100MHCII阳性癌细胞。38权利要求37所述的组合物，其包含至少约50MHCII阳性癌细胞。39权利要求38所述的组合物，其包含至少约90MHCII阳性癌细胞。40权利要。
9、求39所述的组合物，其包含至少约99MHCII阳性癌细胞。41自体癌症疫苗，其包含在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者的分离的免疫原性癌细胞，其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。42权利要求41所述的疫苗，其进一步包含至少一种佐剂。43权利要求42所述的疫苗，其中所述佐剂选自单磷酰脂质A/合成的海藻糖棒杆菌分枝菌酸二酯MPLTDM、AS021/AS02、非离子型嵌段共聚物佐剂、CRL1005、磷酸铝ALPO4、R848、咪喹莫特、PAM3CYS、聚IC、洛索立宾、卡介苗BCG、短小棒杆菌、CPG寡脱氧核苷酸ODN、霍乱毒素衍生抗原、CTA1DD、脂多糖佐剂、完全弗氏。
10、佐剂、不完全弗氏佐剂、皂苷、矿物凝胶、氢氧化铝、表面活性物质、溶血卵磷脂、普朗尼克多元醇、聚阴离子、肽、水中的油或烃乳液、MF59、MONTANIDEISA720，钥孔血蓝蛋白KLH、二硝基苯酚及其组合。44权利要求43所述的疫苗，其中所述佐剂是BCG。45权利要求4144中任一项所述的疫苗，其进一步包含至少一种赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或其组合。46权利要求4145中任一项所述的疫苗，其中所述非自身抗原是非人抗原。47权利要求46所述的疫苗，其中所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷权利要求书CN104136040A3/7页4酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白。
11、蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合。48权利要求47所述的疫苗，其中所述非自身抗原是卵清蛋白或KLH。49权利要求47所述的疫苗，其中所述非自身抗原是BSA。50权利要求4145中任一项所述的疫苗，其中所述非自身抗原不是牛抗原。51权利要求50所述的疫苗，其中所述非自身抗原不是BSA。52权利要求4151中任一项所述的疫苗，基于所述疫苗中的总细胞数，所述组合物包含约5至约100MHCII阳性癌细胞。53权利要求52所述的疫苗，其包含至少约50MHCII阳性癌细胞。54权利要求53所述的疫苗，其包含至少约90MHCII阳性癌细胞。
12、。53权利要求54所述的疫苗，其包含至少约99MHCII阳性癌细胞。54权利要求4153中任一项所述的疫苗，其以用于多次接种的分次剂量提供。55权利要求54所述的疫苗，其以七个分次剂量提供。56权利要求4155中任一项所述的疫苗，其中每个剂量包含约1X104至约1X109个癌细胞。57权利要求56所述的疫苗，其中每个剂量包含约1X107个癌细胞。58用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用分离的免疫原性癌细胞，其中所述细胞对于所述受试者是自体的，且在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者，且其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。59权利要求58所述的方法，。
13、其中将所述细胞配制为免疫原性组合物。60权利要求58所述的方法，其中将所述细胞配制为癌症疫苗。61权利要求5860中任一项所述的方法，其中所述非自身抗原是非人抗原。62权利要求61所述的方法，其中所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合。63权利要求62所述的方法，其中所述非自身抗原是卵清蛋白或KLH。64权利要求62所述的方法，其中所述非自身抗原是BSA。65权利要求5860中任一项所述的方法，其中所述非自身抗原不是牛抗原。66权。
14、利要求65所述的方法，其中所述非自身抗原不是BSA。67权利要求5866中任一项所述的方法，其中基于施用的总细胞数，约5至约100的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞。68权利要求67所述的方法，其中至少约50的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞。69权利要求68所述的方法，其中至少约90的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞。70权利要求69所述的方法，其中至少约99的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞。71权利要求5870中任一项所述的方法，其中与常规化疗、放疗、激素治疗和生物治疗中的至少一种同时或依序施用所述细胞。72权利要求5871中任一项所述的方法，其中在手术肿瘤切除之前或之后施用所述。
15、权利要求书CN104136040A4/7页5细胞。73权利要求5872中任一项所述的方法，其中以多剂量施用所述细胞。74权利要求73所述的方法，其中每周施用所述细胞持续预定周数。75权利要求73所述的方法，其中作为继续维持治疗施用所述细胞。76权利要求75所述的方法，其中按每周、每月、每3个月、每6个月、每年或其组合施用所述细胞。77权利要求5876中任一项所述的方法，其中当观察到癌症复发迹象时施用所述细胞。78受试者自体的分离的免疫原性癌细胞在治疗受试者的癌症中的用途，其中所述细胞在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者，且其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。79权利。
16、要求78所述的用途，其中将所述细胞配制为免疫原性组合物。80权利要求78所述的用途，其中将所述细胞配制为癌症疫苗。81权利要求7880中任一项所述的用途，其中所述非自身抗原是非人抗原。82权利要求81所述的用途，其中所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合。83权利要求82所述的用途，其中所述非自身抗原是卵清蛋白或KLH。84权利要求82所述的用途，其中所述非自身抗原是BSA。85权利要求7880中任一项所述的用途，其中所述非自身抗。
17、原不是牛抗原。86权利要求85所述的用途，其中所述非自身抗原不是BSA。87权利要求7886中任一项所述的用途，包括使用基于总细胞数的约5至约100的MHCII阳性癌细胞。88权利要求87所述的用途，其包括使用至少约50的MHCII阳性癌细胞。89权利要求88所述的用途，其包括使用至少约90的MHCII阳性癌细胞。90权利要求89所述的用途，其包括使用至少约99的MHCII阳性癌细胞。91权利要求7890中任一项所述的用途，其中与常规化疗、放疗、激素治疗和生物治疗中的至少一种同时或依序使用所述细胞。92权利要求7891中任一项所述的用途，其中在手术肿瘤切除之前或之后使用所述细胞。93权利要求7。
18、892中任一项所述的用途，其中以多剂量使用所述细胞。94权利要求93所述的用途，其中每周使用所述细胞持续预定周数。95权利要求93所述的用途，其中作为继续维持治疗使用所述细胞。96权利要求95所述的用途，其中按每周、每月、每3个月、每6个月、每年或其组合使用所述细胞。97权利要求7896中任一项所述的用途，其中当观察到癌症复发迹象时使用所述细胞。98用于确定患者是否是用分离的免疫原性癌细胞治疗的候选者的方法，所述方法包权利要求书CN104136040A5/7页6括用MHCII诱导剂处理来自所述受试者的分离的癌细胞；且筛选所述癌细胞，以确定表达的MHCII的存在；其中所述癌细胞上表达的MHCII。
19、的存在表明所述患者是该治疗的候选者。99权利要求99所述的方法，其进一步包括从受试者分离所述癌细胞。100权利要求99所述的方法，其中在活检程序过程中或在肿瘤的手术去除过程中分离所述细胞。101权利要求98或100中任一项所述的方法，其中所述MHCII诱导剂是细胞因子。102权利要求101所述的方法，其中所述细胞因子是IFN、IFN、IFN、IL4、IL13、IL23、TNF或其组合。103权利要求102所述的方法，其中所述细胞因子是IFN。104权利要求98100中任一项所述的方法，其中所述MHCII诱导剂是MHCII表达构建体。105权利要求98100中任一项所述的方法，其中所述MHCII。
20、诱导剂是将与所述癌细胞融合的MHCII表达细胞。106用于免疫具有癌症的受试者的癌症疫苗，所述癌症疫苗包含所述受试者自体的分离的免疫原性癌细胞，其中所述癌细胞已经通过用MHCII诱导剂处理和随后与非自身抗原孵育而修饰，从而在其细胞表面上的MHCII的背景下呈递所述非自身抗原，且其中所述癌症疫苗已经被纯化以包含增加浓度的MHCII表达细胞。107制备免疫原性提取物的方法，所述方法包括诱导从受试者分离的癌细胞上MHCII的表达；将所述癌细胞与非自身抗原孵育，使得所述非自身抗原结合表达的MHCII；和从所述癌细胞提取具有结合的非自身抗原的MHCII。108权利要求107所述的方法，其中所述免疫原性提。
21、取物是膜部分。109权利要求107所述的方法，其中所述免疫原性提取物包含纯化的MHCII。110权利要求107109中任一项所述的方法，其进一步包括在MHCII诱导后鉴定MHCII阳性细胞。111权利要求110所述的方法，其进一步包括将MHCII阳性癌细胞与MHCII阴性癌细胞分离，以获得含有MHCII阳性细胞的纯化的组合物。112权利要求107111中任一项所述的方法，其进一步包括从受试者分离所述癌细胞。113权利要求112所述的方法，其中在活检程序过程中或在肿瘤的手术去除过程中分离所述细胞。114权利要求107113中任一项所述的方法，其进一步包括冷冻保存所述癌细胞。115权利要求1071。
22、14中任一项的方法，其中通过致死照射、在不存在冷冻保存剂的情况下冷冻和解冻、或用细胞毒性化合物处理来杀死所述细胞。116权利要求115所述的方法，其中通过致死照射杀死所述细胞。117权利要求107116中任一项所述的方法，其中使用MHCII诱导剂诱导所述癌细胞上的MHCII。权利要求书CN104136040A6/7页7118权利要求117所述的方法，其中所述MHCII诱导剂是细胞因子。119权利要求118所述的方法，其中所述细胞因子是IFN、IFN、IFN、IL4、IL13、IL23、TNF或其组合。120权利要求119所述的方法，其中所述细胞因子是IFN。121权利要求117所述的方法，其中。
23、所述MHCII诱导剂是MHCII表达构建体。122权利要求117所述的方法，其中所述MHCII诱导剂是将与所述癌细胞融合的MHCII表达细胞。123权利要求107122中任一项所述的方法，其中所述非自身抗原是非人抗原。124权利要求123所述的方法，其中所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合。125权利要求117所述的方法，其中所述非自身抗原是卵清蛋白或KLH。126权利要求117所述的方法，其中所述非自身抗原是BSA。127权利。
24、要求107122中任一项所述的方法，其中所述非自身抗原不是牛抗原。128权利要求127所述的方法，其中所述非自身抗原不是BSA。129权利要求107128中任一项所述的方法，其中所述诱导步骤是在不含BSA的培养基中。130权利要求2228中任一项所述的细胞的免疫原性提取物，其中所述提取物包含来自细胞的具有结合的非自身抗原的MHCII。131权利要求130所述的提取物，其中所述提取物是膜部分。132权利要求130所述的提取物，其中所述提取物包含纯化的MHCII。133免疫原性组合物，其包含权利要求130132中任一项所述的提取物。134权利要求133所述的组合物，其进一步包含至少一种赋形剂、载体。
25、、缓冲剂、稳定剂或其组合。135自体癌症疫苗，其包含权利要求130132中任一项所述的提取物。136权利要求135所述的疫苗，其进一步包含至少一种佐剂。137权利要求136所述的疫苗，其中所述佐剂选自单磷酰脂质A/合成的海藻糖棒杆菌分枝菌酸二酯MPLTDM、AS021/AS02、非离子型嵌段共聚物佐剂、CRL1005、磷酸铝ALPO4、R848、咪喹莫特、PAM3CYS、聚IC、洛索立宾、卡介苗BCG、短小棒杆菌、CPG寡脱氧核苷酸ODN、霍乱毒素衍生抗原、CTA1DD、脂多糖佐剂、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、皂苷、矿物凝胶、氢氧化铝、表面活性物质、溶血卵磷脂、普朗尼克多元醇、聚阴离子、肽、。
26、水中的油或烃乳液、MF59、MONTANIDEISA720，钥孔血蓝蛋白KLH、二硝基苯酚及其组合。138权利要求137所述的疫苗，其中所述佐剂是BCG。139权利要求135138中任一项所述的疫苗，其进一步包含至少一种赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或其组合。140用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求130132中任一项所述的提取物，其中所述细胞对于所述受试者是自体的。权利要求书CN104136040A7/7页8141权利要求140所述的方法，其中将所述提取物配制为免疫原性组合物。142权利要求140所述的方法，其中将所述提取物配制为癌症疫苗。143权利要求14014。
27、2中任一项所述的方法，其中与常规化疗、放疗、激素治疗和生物治疗中的至少一种同时或依序施用所述提取物。144权利要求140143中任一项所述的方法，其中在手术肿瘤切除之前或之后施用所述提取物。145权利要求140144中任一项所述的方法，其中以多剂量施用所述提取物。146权利要求145所述的方法，其中每周施用所述提取物持续预定周数。147权利要求145所述的方法，其中作为继续维持治疗施用所述提取物。148权利要求147所述的方法，其中按每周、每月、每3个月、每6个月、每年或其组合施用所述提取物。149权利要求140148中任一项所述的方法，其中当观察到癌症复发迹象时施用所述提取物。150权利要求。
28、130132中任一项所述的提取物在治疗受试者的癌症中的用途，其中所述细胞对于所述受试者是自体的。151权利要求150所述的用途，其中将所述提取物配制为免疫原性组合物。152权利要求150所述的用途，其中将所述提取物配制为癌症疫苗。153权利要求150152中任一项所述的用途，其中与常规化疗、放疗、激素治疗和生物治疗中的至少一种同时或依序使用所述提取物。154权利要求150153中任一项所述的用途，其中在手术肿瘤切除之前或之后使用所述提取物。155权利要求150154中任一项所述的用途，其中以多剂量使用所述提取物。156权利要求155所述的用途，其中每周使用所述提取物持续预定周数。157权利要求。
29、155所述的用途，其中作为继续维持治疗使用所述提取物。158权利要求157所述的用途，其中按每周、每月、每3个月、每6个月、每年或其组合使用所述提取物。159权利要求150158中任一项所述的用途，其中当观察到癌症复发迹象时使用所述提取物。权利要求书CN104136040A1/23页9自体癌细胞疫苗技术领域0001本发明涉及癌症的治疗。更具体地，本发明在各个方面涉及分离的和改变的免疫原性癌细胞、包含所述免疫原性癌细胞的免疫原性组合物和疫苗、用于治疗癌症的方法、以及用于制备免疫原性癌细胞、免疫原性组合物和疫苗的方法。背景技术0002在所有脊椎动物中，主要组织相容性复合体MHC是由大基因家族编码的。
30、细胞表面分子。MHC基因家族被分为三类I类；II类；和III类。0003在机体的每一种有核细胞上发现MHCI类分子。它们的功能是将来自细胞内的胞质蛋白质的片段呈递至细胞毒性T细胞。呈递“自身”肽的细胞将被忽略，而呈递非自身肽的细胞将被细胞毒性T细胞识别并杀死。0004仅在抗原呈递细胞APC包括巨噬细胞、树突状细胞和B细胞上发现MHCII类分子。MHCII类分子将胞外蛋白质的片段呈递至辅助性T细胞。呈递“自身”肽的细胞将被忽略，而呈递非自身肽的细胞将被辅助性T细胞识别，这有助于主要经由产生各种细胞因子而引发适当的免疫应答，这可以包括由于募集吞噬细胞导致的局部炎症和肿胀，或由于B细胞激活导致的抗体。
31、介导的免疫应答。0005从例如，国际专利申请公开号WO1995/13092、国际专利申请公开号WO2001/77301和BERGER等人JPHARMPHARMACEUTSCI,102144152,2007已知，干扰素IFN可用于增加肿瘤细胞上MHCI类的表达，从而使得细胞可用于癌症疫苗中。然而，用IFN处理之后肿瘤细胞的MHCII表达是高度可变的，其中一些细胞对IFN处理是响应的，而一些对IFN处理不响应。此外，任何表达MHCII的肿瘤细胞只能在MHCI和MHCII的背景下呈递自身或癌抗原。癌抗原不总是免疫原性的，因为许多被识别为自身抗原。在癌症发展和变得更具侵袭性时更是如此。缺乏在MHCII。
32、的背景下呈递的高度免疫原性抗原意味着T辅助性细胞不会被活化，并且强烈和稳定的免疫应答不会总是由此产生。0006因此，存在对于克服或减轻至少一些现有技术的缺陷的替代疗法的需要。0007发明概述0008本发明在各个方面涉及分离的免疫原性癌细胞、使用所述免疫原性癌细胞的免疫原性组合物和癌症疫苗、制备此类免疫原性癌细胞、免疫原性组合物和癌症疫苗的方法，以及用于治疗癌症的方法。本发明的组合物和方法涉及已经修饰以在其表面上表达MHCII的分离的癌细胞的用途。一旦癌细胞经修饰以表达MHCII，则通过将MHCII表达细胞与非自身抗原孵育以赋予它们免疫原性。在注入癌细胞由其分离的受试者中之后，以这种方式修饰的癌。
33、细胞在MHCI的背景下将癌抗原呈递至CD8细胞毒性T细胞，并在MHCII的背景下将非自身抗原呈递至CD4辅助性T细胞。因此，修饰的癌细胞是双功能的，能够活化辅助性T细胞和细胞毒性T细胞两者，导致细胞因子产生并令人惊讶地稳定的和癌症特异性的免疫应答。0009可以将以这种方式产生的免疫原性癌细胞掺入免疫原性组合物和疫苗中。此类组说明书CN104136040A2/23页10合物和疫苗可用于治疗自体受试者的癌症的方法中。0010根据一个方面，提供了用于制备分离的免疫原性癌细胞的方法，所述方法包括0011诱导从受试者分离的癌细胞上MHCII的表达；0012将所述癌细胞与非自身抗原孵育，从而使得非自身抗原。
34、结合表达的MHCII；和0013杀死所述癌细胞。0014在一个方面，所述方法进一步包括在MHCII诱导后鉴定MHCII阳性细胞。在另一个方面，所述方法进一步包括将MHCII阳性癌细胞与MHCII阴性癌细胞分离，以获得包含MHCII阳性细胞的纯化的组合物。0015在另一个方面，所述方法进一步包括从受试者分离癌细胞。在一个方面，在活检程序过程中或在肿瘤的手术去除过程中分离所述细胞。0016在另一个方面，所述方法进一步包括冷冻保存癌细胞。0017在一个方面，通过致死照射、在不存在冷冻保存剂的情况下冷冻和解冻、或用细胞毒性化合物处理杀死细胞，诸如通过致死照射杀死细胞。0018在另一个方面，使用MHCI。
35、I诱导剂在癌细胞上诱导MHCII。在一个方面，MHCII诱导剂是细胞因子，诸如IFN、IFN、IFN、IL4、IL13、IL23、TNF或其组合，诸如IFN。在另一个方面，MHCII诱导剂是MHCII表达构建体或将与癌细胞融合的MHCII表达细胞。0019在另一个方面，非自身抗原是非人抗原。0020在另一个方面，非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合，诸如卵清蛋白或KLH，或诸如BSA。0021在另一个方面，所述非自身抗原不是牛抗原如。
36、BSA。0022在另一个方面，所述诱导步骤是在无BSA的培养基中。0023根据另一个方面，提供了在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者的分离的免疫原性癌细胞，其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。0024在一个方面，非自身抗原是非人抗原。0025在另一个方面，所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合，诸如非自身抗原是卵清蛋白或KLH，或诸如BSA。0026在另一个方面，所述非自身抗原不是牛抗原如BSA。002。
37、7根据另一个方面，提供了包含在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者的分离的免疫原性癌细胞的免疫原性组合物，其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。0028在一个方面，所述组合物进一步包含至少一种赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或其组合。0029在另一个方面，非自身抗原是非人抗原。0030在另一个方面，所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖说明书CN104136040A103/23页11氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合，诸如卵清蛋白或KLH，或诸。
38、如BSA。0031在另一个方面，所述非自身抗原不是牛抗原如BSA。0032在另一个方面，基于组合物中的总细胞数，所述组合物包含约5至约100MHCII阳性癌细胞，诸如至少约50MHCII阳性癌细胞，至少约90MHCII阳性癌细胞，或至少约99MHCII阳性癌细胞。0033根据另一个方面，提供了包含在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者的分离的免疫原性癌细胞的自体癌症疫苗，其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。0034在一个方面，所述疫苗进一步包含至少一种佐剂，诸如单磷酰脂质A/合成的海藻糖棒杆菌分枝菌酸二酯TREHALOSEDICORYNOMYCOLATEMPLTDM、。
39、AS021/AS02、非离子型嵌段共聚物佐剂、CRL1005、磷酸铝ALPO4、R848、咪喹莫特、PAM3CYS、聚IC、洛索立宾、卡介苗BCG、短小棒杆菌、CPG寡脱氧核苷酸ODN、霍乱毒素衍生抗原、CTA1DD、脂多糖佐剂、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、皂苷、矿物凝胶、氢氧化铝、表面活性物质、溶血卵磷脂、普朗尼克多元醇、聚阴离子、肽、水中的油或烃乳液、MF59、MONTANIDEISA720，钥孔血蓝蛋白KLH、二硝基苯酚及其组合，诸如BCG。0035在另一个方面，所述疫苗进一步包含至少一种赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或其组合。0036在一个方面，非自身抗原是非人抗原。0037在另一个方。
40、面，所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合，诸如卵清蛋白或KLH，或诸如BSA。0038在另一个方面，所述非自身抗原不是牛抗原如BSA。0039在另一个方面，基于疫苗中的总细胞数，所述疫苗包含约5至约100MHCII阳性癌细胞，诸如至少约50MHCII阳性癌细胞，至少约90MHCII阳性癌细胞，或至少约99MHCII阳性癌细胞。0040在另一个方面，所述疫苗以用于多次接种的分次剂量，诸如七个分次剂量提供。0041在一个方面，每个剂。
41、量包含约1X104至约1X109个癌细胞，诸如约1X107个癌细胞。0042根据另一个方面，提供了用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用分离的免疫原性癌细胞，其中所述细胞对于所述受试者是自体的，且在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者，且其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。0043在一个方面，将细胞配制为免疫原性组合物。在另一个方面，将细胞配制为癌症疫苗。0044在另一个方面，非自身抗原是非人抗原。0045在另一个方面，所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血。
42、清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合，诸如卵清蛋说明书CN104136040A114/23页12白或KLH，或诸如BSA。0046在一个方面，所述非自身抗原不是牛抗原如BSA。0047在另一个方面，基于施用的总细胞数，约5至约100的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞，诸如至少约50的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞，至少约90的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞，或至少约99的施用的癌细胞是MHCII阳性癌细胞。0048在一个方面，细胞与常规化疗、放疗、激素治疗和生物治疗中的至少一种同时或依序施用。0049在另一个方面，细胞在手术肿瘤切除之前或之后施用。00。
43、50在另一个方面，细胞以多剂量施用。0051在一个方面，细胞每周施用持续预定周数。在另一个方面，作为继续维持治疗施用细胞。0052在一个方面，按每周、每月、每3个月、每6个月、每年或其组合施用细胞。0053在另一个方面，当观察到癌症复发迹象时施用细胞。0054根据另一个方面，提供了受试者自体的分离的免疫原性癌细胞用于治疗受试者的癌症的用途，其中所述细胞在其细胞表面上表达MHCI和MHCII两者，且其中癌抗原结合所述MHCI且非自身抗原结合所述MHCII。0055在一个方面，将细胞配制为免疫原性组合物或癌症疫苗。0056在另一个方面，非自身抗原是非人抗原。0057在另一个方面，所述非自身抗原选自。
44、甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合，诸如卵清蛋白或KLH，或诸如BSA。0058在另一个方面，所述非自身抗原不是牛抗原，诸如BSA。0059在另一个方面，基于总细胞数，所述用途包括使用约5至约100MHCII阳性癌细胞，诸如至少约50MHCII阳性癌细胞，至少约90MHCII阳性癌细胞，或至少约99MHCII阳性癌细胞。0060在一个方面，细胞与常规化疗、放疗、激素治疗和生物治疗中的至少一种同时或依序使用。0061在另一个方面，在手术肿瘤切除之。
45、前或之后使用细胞。0062在另一个方面，以多剂量使用细胞。0063在一个方面，每周使用细胞持续预定周数，或作为继续维持治疗使用细胞。0064在另一个方面，按每周、每月、每3个月、每6个月、每年或其组合使用细胞。0065在另一个方面，当观察到癌症复发迹象时使用细胞。0066根据另一个方面，提供了用于确定患者是否是用分离的免疫原性癌细胞治疗的候选者的方法，所述方法包括0067用MHCII诱导剂处理来自所述受试者的分离的癌细胞；和0068筛选所述癌细胞以确定表达的MHCII的存在；0069其中所述癌细胞上表达的MHCII的存在表明所述患者是用于该治疗的候选者。0070在一个方面，所述方法进一步包括从。
46、受试者分离癌细胞。说明书CN104136040A125/23页130071在另一个方面，在活检程序过程中或在肿瘤的手术去除过程中分离所述细胞。0072在另一个方面，MHCII诱导剂是细胞因子，诸如IFN、IFN、IFN、IL4、IL13、IL23、TNF或其组合，诸如IFN。0073在另一个方面，MHCII诱导剂是MHCII表达构建体或将与癌细胞融合的MHCII表达细胞。0074根据另一个方面，提供了用于免疫具有癌症的受试者的癌症疫苗，所述癌症疫苗包含所述受试者自体的分离的免疫原性癌细胞，其中所述癌细胞已经通过用MHCII诱导剂处理和随后与非自身抗原孵育而修饰，从而在其细胞表面上的MHCII的。
47、背景下呈递所述非自身抗原，且其中所述癌症疫苗已经被纯化，以包含增加浓度的MHCII表达细胞。0075根据另一个方面，提供了用于制备免疫原性提取物的方法，所述方法包括0076诱导从受试者分离的癌细胞上MHCII的表达；0077将所述癌细胞与非自身抗原孵育，从而使得非自身抗原结合表达的MHCII；和0078从所述癌细胞提取具有结合的非自身抗原的MHCII。0079在一个方面，所述免疫原性提取物是膜部分。在另一个方面，所述免疫原性提取物包含纯化的MHCII。0080在另一个方面，所述方法进一步包括在MHCII诱导后鉴定MHCII阳性细胞。0081在另一个方面，所述方法进一步包括将MHCII阳性癌细胞。
48、与MHCII阴性癌细胞分离，以获得包含MHCII阳性细胞的纯化的组合物。0082在另一个方面，所述方法进一步包括从受试者分离癌细胞。在一个方面，在活检程序过程中或在肿瘤的手术去除过程中分离所述细胞。0083在另一个方面，所述方法进一步包括冷冻保存癌细胞。0084在另一个方面，通过致死照射、在不存在冷冻保存剂的情况下冷冻和解冻、或用细胞毒性化合物处理杀死细胞，诸如通过致死照射杀死细胞。0085在另一个方面，使用MHCII诱导剂诱导癌细胞上的MHCII，所述MHCII诱导剂诸如IFN、IFN、IFN、IL4、IL13、IL23、TNF或其组合，诸如IFN。0086在另一个方面，MHCII诱导剂是M。
49、HCII表达构建体或将与癌细胞融合的MHCII表达细胞。0087在另一个方面，非自身抗原是非人抗原。0088在一个方面，所述非自身抗原选自甲状腺球蛋白、半乳糖苷酶、葡聚糖、聚赖氨酸、结核菌素衍生蛋白、卵清蛋白OVA、血清白蛋白诸如牛血清白蛋白BSA、绵羊血清白蛋白、山羊血清白蛋白、或鱼血清白蛋白和钥孔血蓝蛋白KLH及其组合，诸如卵清蛋白或KLH，或诸如BSA。0089在另一个方面，所述非自身抗原不是牛抗原如BSA。0090在另一个方面，所述诱导步骤是在无BSA的培养基中。0091根据另一个方面，提供了本文所述的细胞的免疫原性提取物，其中所述提取物包含来自细胞的具有结合的非自身抗原的MHCII。0092在一个方面，所述提取物是膜部分。在另一个方面，所述提取物包含纯化的MHCII。0093根据另一个方面，提供了包含本文所述的提取物的免疫原性组合物。0094在一个方面，所述组合物进一步包含至少一种赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或其说明书CN104136040A136/23页14组合。0095根据另一个方面，提供了包含本文所述的提取物的自体癌症疫苗。0096在一个方面，所述疫苗进一步包含至少一种佐剂，诸如单磷酰脂质A/合成的海。