反式-乌头酸化合物用于抑制磷酸二酯酶77的用途及用于制备药品与保健食品的用途
技术领域
本发明是有关于一种抑制磷酸二酯酶7的用途，且特别是有关于一种以反式-乌头酸化合物抑制磷酸二酯酶7的用途。
背景技术
乌头酸(aconitic acid)是一种有机酸，具有二种异构物，分别为顺式-乌头酸和反式-乌头酸。顺式-乌头酸为柠檬酸循环的中间产物。反式-乌头酸则是植物的防御代谢物(defense metabolite)。
磷酸二酯酶(Phosphodiesterases，简称PDE)为一酵素的超级家族(superfamily)，可切断磷酸二酯键。PDE酵素超级家族分为11类，即，PDE1-PDE11。虽然不同PDE之间在功能上相关连，但彼此的氨基酸序列之间可能有明显的差异。不同PDE具有不同的底物专一性(substrate specificity)。举例而言，PDE4、7和8为cAMP-选择性水解酶(cAMP-selective hydrolases)；PDE5、6和9则为cGMP-选择性水解酶(cGMP-selective hydrolases)，而PDE1、2、3、10和11则可以水解cAMP和cGMP。有鉴于磷酸二酯酶独特的组织分布、结构特性和功能特性，这些酶是多种不同疾病和症状的常见治疗标的。
发明内容
发明内容旨在提供本揭示内容的简化摘要，以使阅读者对本揭示内容具备基本的理解。此发明内容并非本揭示内容的完整概述，且其用意并非在指出本发明实施例的重要/关键组件或界定本发明的范围。
本揭示内容是基于意外发现反式-乌头酸(trans-aconitic acid，简称TAA)可专一地抑制磷酸二酯酶7(简称，PDE7)，特别是PDE7A1。
因此，本揭示内容的一个方面为提供一种抑制PDE7的方法，包含：使PDE7和一组合物接触，所述组合物包含有效量的反式-乌头酸化合物，藉以抑制PDE7的活性。在某些实施例中，所述PDE7(例如，PDE7A1)是一种人类酶。
在某些实施方式中，本揭示内容任一方法所用的组合物是一种植物萃取物，且其是由一单子叶植物所制得，所述单子叶植物为月桃(shell flower)、水稻(rice)、小麦草(wheat grasses)、玉米(maize)、大麦(barley)或高梁(sorghum)。在一实施例中，所述植物萃取物是从该植物的叶子或茎所制得，例如，水稻的叶或茎、月桃叶或小麦草。
在其它实施方式中，本揭示内容任一方法所利用的组合物所包含的反式-乌头酸化合物是由一植物纯化而得。所述植物可为单子叶植物，如，月桃、水稻、小麦草、玉米、大麦或高梁。
在其它实施方式中，本揭示内容任一方法所利用的组合物包含由化学方法所合成的反式-乌头酸化合物。
在本揭示内容所述的任一方法中，所述接触步骤是将含有反式-乌头酸化合物的组合物投予至一有需要的个体身上，其中所述组合物为一药学组合物，其可更包含一药学可接受载体。在某些实施方式中，所述个体(如，一人类患者)患有或可能罹患与PDE7失调相关的疾病。所述与PDE7失调相关的疾病可为发炎疾病(如，类风湿性关节炎、湿疹、特异性皮肤炎和过敏性鼻炎)、自体免疫疾病、心血管疾病、神经退化性疾病与癌症。
再者，本揭示内容的范畴还包括(a)可用以治疗与PDE7失调相关疾病的药学组合物，其中所述疾病可以是发炎疾病(例如，类风湿性关节炎、湿疹、特异性皮肤炎和过敏性鼻炎)、自体免疫疾病、心血管疾病、神经退化性疾病与癌症；且所 述药学组合物包含一反式-乌头酸化合物；譬如，反式-乌头酸(trans-aconitic acid，简称TAA)和一药学可接受载体；以及(b)反式-乌头酸化合物于制备医药品的用途，而该医药品可用以治疗与PDE7失调相关的疾病，如本文所述的各种疾病。
在参阅下文实施方式后，本发明所属技术领域中具有通常知识者当可轻易了解本发明的基本精神及其它发明目的，以及本发明所采用的技术手段与实施方式。
附图说明
为让本发明的上述与其它目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，附图的说明如下：
图1为依据本发明一实施方式所示，测定PDE1酶活性的流程图；
图2为依据本发明一实施方式所示，测定PDE7A1酶活性的流程图；以及
图3所示的柱形图显示依据本发明另一实施方式，反式-乌头酸、毛蕊异黄酮、堪非黄酮醇3-O-芸香糖苷和汉黄芩素对PDE1和PDE7A1的抑制活性；图中箭头所指处显示反式-乌头酸可专一性地抑制PDE7A1。
具体实施方式
为了使本揭示内容的叙述更加详尽与完备，下文针对了本发明的实施方式与具体实施例提出了说明性的描述；但这并非实施或运用本发明具体实施例的唯一形式。实施方式中涵盖了多个具体实施例的特征以及用以建构与操作这些具体实施例的方法步骤与其顺序。然而，亦可利用其它具体实施例来达成相同或均等的功能与步骤顺序。
虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，“约”通常指实际数值在一特定 数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本发明所属技术领域中具有通常知识者的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者)均经过“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随权利要求所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。
除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本发明所属技术领域中具有通常知识者所理解与惯用的意义相同。此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。
本揭示内容基于意外的发现TAA可专一性的抑制PDE7(如，PDE7A1)，但无法抑制PDE1，所述TAA化合物可以从植物中纯化制得；诸如，稻米、月桃或小麦草。因此，所述化合物及其功能性类似物能用以治疗与PDE7(例如，PDE7A1)失调相关的疾病，且可避免产生因抑制其它PDE家族成员(例如，PDE1)所造成的副作用。
据此，本说明书提出多种用以抑制PDE7活性的方法，包含以有效量的一或多个TAA化合物接触PDE7；并提出多种用以治疗与PDE7相关疾病的方法，包括将含治疗有效量的一或多个TAA的药学组合物投予一有需要治疗个体。
I.反式-乌头酸(TAA)化合物以及包含此化合物的组合物
反式-乌头酸化合物包含反式-乌头酸和其功能性类似物。反式-乌头酸(TAA)的结构如下所示：
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一种TAA功能性类似物可能具有与TAA类似的结构以及与TAA类似的生物活性(如，可专一地抑制PDE7A)。一种能够专一地抑制PDE7(如，PDE7A1)的化合物是指此化合对抗PDE7酶所产生的抑制活性，实质上大于该化合物对抗其它PDE酶(如，PDE1)所产生的抑制活性。举例而言，所述化合物对抗PDE7酶的抑制活性相较于对抗其它PDE酶(如，PDE1)的抑制活性至少高于50％(如，至少75％、80％、90％、1倍、5倍、10倍、50倍、100倍或1000-倍以上)。举例而言，在惯用的PDE酶活性分析测定试验中显示，能够专一抑制PDE7的TAA化合物对于其它PDE酶(如，PDE1)几乎没有抑制活性。
在部分实施例中，一TAA功能性类似物可以是一带有取代基的TAA，其中一或多个氢原子可被一取代基所取代。取代基的实例包含，但不限于，卤素(halogen)、氰基(cyano)、硝基(nitro)、羟基(hydroxyl)、氨基(amino)、巯基(mercapto)、烷基(alkyl)、烯基(alkenyl)、炔基(alkynyl)、芳基(aryl)、杂芳基(heteroaryl)、环基(cyclyl)、杂环基(heterocyclyl)、烷氧基(alkyloxy)、芳氧基(aryloxy)、直链烃磺酰基(alksulfanyl)、芳磺酰基(arylsulfanyl)、烷氨基(alkylamino)、芳氨基(arylamino)、二烷氨基(dialkylamino)、二芳氨基(diarylamino)、烷羰基(alkylcarbonyl)、芳羰基(arylcarbonyl)、杂芳羰基(heteroarylcarbonyl)、烷羧基(alkylcarboxyl)、芳羧基(arylcarboxyl)、杂芳羧基(heteroarylcarboxyl)、烷氧羰基(alkyloxycarbonyl)、芳氧羰基(aryloxycarbonyl)、杂芳氧羰基(heteroaryloxycarbonyl)、烷脲基(alkylcarbamido)、芳脲基(arylcarbamido)、杂芳脲基(heterocarbamido)、烷氨甲酰基(alkylcarbamyl)、芳氨甲酰基(arylcarbamyl)、杂氨甲酰基 (heterocarbamyl)，其中每一烷基(包含直链烃基)、烯基、芳基、杂芳基、环基、杂环基可任选地带有卤素、氰基、硝基、羟基、氨基、巯基、烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、烷羰基、芳羰基、烷羧基、芳羧基、烷氧羰基或芳氧羰基等取代基。
在此所述的TAA化合物可以藉由常规方法合成。举例而言，所述常规方法可利用合成化学转换法(含保护基团方法)，相关步骤请参见R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd Ed.,John Wiley and Sons(1999)；L.Fieser and M.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)以及L.Paquette,ed.,Encyclopedia 25of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其后续版本。
另外，在此所述的TAA化合物可以从一天然资源中纯化，例如，利用常规技术从植物中制得。所述植物为单子叶植物(含月桃、水稻、小麦草、玉米、大麦或高梁)。举例而言，所述纯化方法如实施例1所示。一种从天然资源(如植物)纯化的TAA化合物是指此TAA化合物(如TAA)实质上不含自然界中与其相关的分子；在含有该TAA化合物的制备物中，所述的自然界中与其相关的分子中的干重通常至多为20％。可藉由适当的方法测定纯度，如，管柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳法和HPLC。在某些实施方式中，TAA化合物可从植物中纯化制得，其是将一部份的植物(如叶片、根部、种子、花或块根)浸泡于适量的纯水或含水溶剂中，经过适当的期间(如5分钟至一小时)并置于一合适的温度下(如60℃至90℃)，再收集水溶性萃取物而制得。可进一步应用层析法或其它公知的方法从水溶性萃取物中纯化TAA化合物。
在此所述的任一TAA化合物可与一药学上可接受载体混合，以形成药学组合物。
一药学上可接受载体为一与组合物活性成分兼容的载体(较佳为，能稳定活性成分)且对于个体不会产生伤害。合适的载体包含，但不限于，(a)阳离子盐型式(如，钠(sodium)、钾(potassium)、铵(ammonium)、镁(magnesium)、钙(calcium))和聚胺类(polyamines)(即，精胺(spermine)和亚精胺(spermidine))；(b)无机酸盐型式(如，盐酸(hydrochloric acid)、氢溴酸(hydrobromic acid)、硫酸(sulfuric acid)、磷酸(phosphoric acid)、硝酸(nitric acid))；(c)有机酸盐型式(如，醋酸(acetic acid)、草酸(oxalic acid)、酒石酸(tartaric acid)、琥珀酸(succinic acid)、马来酸(maleic acid)、富马酸(fumaric acid)、葡糖酸(gluconic acid)、柠檬酸(citric acid)、羟丁二酸(malic acid)、抗坏血酸(ascorbic acid)、苯甲酸(benzoic acid)、单宁酸(tannic acid)、棕榈酸(palmitic acid)、海藻酸(alginic acid)、多聚谷氨酸(polyglutamic acid)、萘磺酸(naphthalenesulfonic acid)、甲磺酸(methanesulfonic acid)、对甲苯磺酸(p-toluenesulfonic acid)、萘二磺酸(naphthalenedisulfonic acid)、聚半乳糖醛酸(polygalacturonic acid))；和(d)阴离子盐型式(即，氯(chlorine)、溴(bromine)和碘(iodine))。其它合适的载体包含微晶纤维素(microcrystalline cellulose)、甘露糖醇(mannitol)、葡萄糖(glucose)、脱脂奶粉(defatted milk powder)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、淀粉(starch)及其组合。参见Remington’s Pharmaceutical Sciences,Edition 18,Mack Publishing Co.,Easton,Pa(1995)；和Goodman and Gilman’s"The Pharmacological Basis of Therapeutics",Tenth Edition,Gilman,J.Hardman and L.Limbird,eds.,McGraw-Hill Press,155-173,2001。此外，可利用一或多个稳定剂作为药学赋形剂，以递送含TAA的组合物。其它载体的实例包含胶态氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、十二烷基硫酸钠和D&C Yellow#10。
可针对不同的施用途径来调剂所述包含一或多个TAA化合物的组合物。
一无菌注射组合物可以是一溶液或悬浮液，溶于一无毒肠胃外可接受稀释液或溶剂(譬如1,3-丁二醇溶液)中。可接受的载体和溶剂为甘露醇、水、林格氏溶液和等渗压氯化钠溶液。此外，不具挥发性的油类亦可作为一溶剂或悬浮介质(如，合成的单一或二甘油酯)。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物可用以制备所述注射物，该些油类为天然药学上可接受油类，例如，橄榄油或蓖麻油，尤其是该些油类以聚氧乙基化形式存在。这些油溶液或悬浮液可包含一长链醇稀释剂或分散剂、羧甲基纤维素或类似的分散剂。其它常用的表面活性剂(例如，Tweens或Spans)、其它类似的乳化剂或经常被使用于制造药学上可接受固体、液体或其它剂型的生物可利用增强剂，皆可使用进行配方。
用以口服的组合物可以是任一种口服可接受剂型，包含胶囊、片剂、乳剂、水性悬浮液、水性分散剂和水性溶液。在制备片剂的过程，通常可利用含乳糖和玉米粉的载体。另外，亦可以添加润滑剂(如，硬脂酸镁)进行配方。对于口服的胶囊剂型，常用的稀释剂包含乳糖和干燥的玉米淀粉。当口服施用液体悬浮液或乳剂时，可将活性成分悬浮或溶解于与乳化剂或悬浮剂结合的油相。若有需要，可额外添加特定的甜味剂、调味剂或着色剂进行配方。
一鼻喷雾或吸入组合物可以依据药学配方的常规技术来制备。举例而言，可将组合物溶于食盐水中制成一溶液，并可另外添加芐醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂以增强生物活性、氟化碳和/或其它公知的稳定剂或分散剂。
亦可将包含一或多个TAA化合物的组合物制成栓剂，以直肠途径施用。
在部分实施方式中，包含一或多个TAA化合物的组合物，为一单子叶植物的水萃取物。所述单子叶植物为种子内具有单一子叶或胚叶的植物。适用于制备TAA化合物的单子叶植物包含，但不限于，月桃、水稻、小麦草、玉米、大麦或高梁。在较佳的情形中，所述单子叶植物是一种农作物，亦即此种植 物通常会大量种植且其主要目的是收获该植物以作为食物、家畜饲料或其它经济目的使用。可藉由浸泡上述植物的一部份(如，叶、根、花或块茎)于适当量的纯水或含水溶剂中，经适当期间(如，5分钟至一小时)并置于一适当的温度(例如，60℃-90℃)下，再收集水溶性萃取物，以制备植物的水萃取物。所述水萃取物亦可进一步干燥得到水萃取物的粉末，其中干燥技术可以利用喷干或冻干技术。可应用色层分析法或本领域公知的方法确认水萃取物中是否确实含有TAA化合物。
心血管保护功效，如血管收缩舒张和降低血压，可藉由体内和体外本领域公知的方法测定。
在其它实施方式中，可将所述包含一或多个TAA化合物的组合物调制成保健食品，此保健食品中更包含其它的营养成分，如，维生素、矿物质、纤维素、脂肪酸或胺基酸。
II.TAA化合物用于抑制PDE7和治疗与PDE7相关疾病的用途
可利用任何上述TAA化合物或包含所述TAA化合物的组合物专一地抑制PDE7(如，PDE7A1)活性，以及用以治疗与所述酶失调相关的疾病。因此，在此提出用以抑制一PDE7酶的方法，包含以一或多个TAA化合物或含有此TAA化合物的组合物与该酶接触。另外，亦揭露治疗与此酶相关疾病的方法，包含施用一治疗有效量的一或多个TAA化合物或含有此TAA化合物的组合物至一需要治疗个体。
PDE7为PDE家族成员之一，且具有两种亚型(isoform)，分别为PDE7A和PDE7B。PDE7A为一具有高亲和力的cAMP-专一性PDE，其大量表现于心脏、骨骼肌和脾脏中。PDE7A1为PDEA的剪接变异体(splice variant)，主要表现于淋巴球和前发炎细胞。PDE7B主要表现于中枢神经系统，尤其是在尾状核(caudate nucleus)和伏隔核(nucleus accumbens)中。在纹状体神经元(striatal neurons)中的D1促进剂可活化PDE7B1；由此可知PDE7在记忆中扮演重要的角色。由于PDE7与多种 疾病有关，诸如神经性或发炎性疾病，故研究者致力于开发一新的PDE7抑制剂来治疗此类疾病。
所述“治疗(treating)”一词是指应用或施用一含有一或多个活性剂的组合物至一个体，所述个体患有一与PDE7酶失调相关疾病，或所述个体出现疾病相关症状，或易患有所述疾病，以期能治疗(cure,remedy)、治愈(heal)、缓解(alleviate)、减轻(relieve)、改变(alter)、减缓(ameliorate)、改善(improve)或影响(affect)所述疾病、与疾病相关的症状或易患有所述疾病的特性。
为了实施在此所述的方法，可将包含一或多个TAA化合物的治疗有效量的组合物(如本文所述的药学组合物、植物萃取物、保健食品)经由常规投药途径施用至一个体。所述途径为经肠胃外、经口、经鼻腔、经肠、局部或经颊给药。
在此所示“肠胃外(parenteral)”一词指皮下(subcutaneous)、皮内(intracutaneous)、静脉内(intravenous)、肌肉内(intramuscular)、关节内(intraarticular)、动脉内(intraarterial)、滑液膜内(intrasynovial)、胸骨内(intrasternal)、脊髓内(intrathecal)、病灶内(intralesional)或颅内注射(intracranial injection)等给药途径。
此处所述的“治疗有效量(effective amount)”指无论在单独或与其它一或多个治疗活性剂并用下，每一活性成分的用量足以使个体产生所欲的疗效反应。具体的治疗有效量取决于多种因素，如给药途径、添加的赋形剂以及与其它活性成分并用。
以治疗有效量来施用此处所述的含有TAA化合物的组合物。所述“治疗有效量”指将单一剂的含TAA的组合物单独或和后续剂量一起能够产生预期的反应；例如，抑制PDE7酶(如，PDE7A1)的活性或缓解一与PDE7酶相关疾病。以治疗与PDE7酶失调相关的特定疾病或病征为例，所述预期反应为抑制该疾病的进程。此过程涵盖了暂时减缓疾病的进程；或较佳为，永久终止疾病的进程。疾病进程的变化可藉由常 规方法或诊断方法监控。所述治疗疾病或病征产生的预期反应指延缓发病或预防疾病或病征的发生。
具体的治疗有效量取决于多种因素，如欲治疗的特定状况、患者的生理条件(如，患者年龄、生理条件尺寸、性别、体重)、治疗持续时间、同步治疗(若有的话)的特性、特定给药途径以及医疗从业人员的知识和经验等因素。所述因素为所属领域具有通常知识者不需过度实验即可推知并实施。在较佳的实施方式中，单一成分或合并使用的最大剂量为依据合理医学判断所示的最高安全剂量。所属领域具有通常知识者可以理解的是因医疗因素、心理因素或任何其它理由，可给予患者较低的剂量或耐受剂量。
在某些实施方式中，所述TAA化合物的量足以抑制一PDE7酶(如，PDE7A1)活性达到至少30％(如，至少50％、60％、70％、80％、90％或95％)。
“与PDE7酶失调相关的疾病或病征”指PDE7酶的过度调节或向下调节，不论直接或间接，在该疾病或病征中扮演了一定的角色。所述疾病或病征包含，但不限于发炎疾病(如，类风湿性关节炎、湿疹、特异性皮肤炎和过敏性鼻炎)、自体免疫疾病、心血管疾病、神经退化疾病(如，帕金森氏症或阿兹海默症)以及癌症。
接受本发明方法的个体可以是一人类或非人类的哺乳动物。在部分实施例中，所述个体为一人类患者，且患有或疑似患有与PDE7失调相关的疾病。在其它实施例中，所述个体为一具有患病高风险的人类患者。
可依据经验法则(例如，半衰期)决定所述剂量。可非必要地基于治疗和/或抑制和/或减缓所述目标疾病的目的，在治疗的过程中，测定及调整给药的频率和剂量。此外，亦可使用缓释或长效型配方的TAA化合物。为了达到缓释或长效型释放的目的，可利用所属领域公知的技术选用合适的载体和多种不同的配方。
在一实施方式中，可依据经验法则决定施用予一个体的 TAA化合物的剂量，其中所述个体已施用一或多次化合物。所述个体可施用递增的TAA化合物剂量。为了评估化合物达成的功效，在治疗的过程中，可藉由常规医疗程序检查所述标的疾病中的治疗指标。
通常来说，施用任一在此所述的TAA化合物，一初始预设剂量(initial candidate dosage)为约2毫克/公斤。为达成本揭示内容的目的，每日剂量范围约0.1微克/公斤起，至3微克/公斤、30微克/公斤、300微克/公斤、3毫克/公斤、30毫克/公斤或100毫克/公斤以上，此剂量可基于前述因素而改变。为了于数天内或更长期间重复施用药物，基于特定状况，所述治疗需持续至一抑制病征的预期效果发生，或治疗需持续达到足以抑制PDE7酶活性的治疗阶段，以期减缓疾病病征。剂量方案的实例包含施用一初始剂量约2毫克/公斤，接着施用一周维持剂量为约1毫克/公斤(化合物)，或再施以一每周维持剂量为约1毫克/公斤。然而，亦可依据医疗从业人员预期完成的药物动力学结果，提供其它的剂量方案。在部分实施方式中，可采用的剂量范围约3微克/毫克至2毫克/公斤(如，约3微克/毫克、10微克/毫克、30微克/毫克、约100微克/毫克、300微克/毫克、约1毫克/公斤和约2毫克/公斤)。在部分实施方式中，剂量施用频率为每周一次、每二周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次或每十周一次；或者是，每月一次、每二月一次、每三月一次或经过更长的期间。所述治疗过程可藉由常规技术和分析监控。所述剂量方案(含使用抗体)可随着时间改变。
或者是，可将此处所述的任一TAA化合物应用于体外试验中，以抑制PDE7酶(即，PDE7A1)。举例而言，可将一有效量的TAA化合物加入至一酶反应混合物，其包含PDE7和一适当的底物。所述混合物可培养于适当的条件下，经过一适当的期间使酶反应发生。以常规的方法测定TAA化合物存在与否对于PDE酶活性的影响，以及测定TAA化合物对于 PDE酶的抑制效果。
用以治疗与PDE7相关疾病的套组
本揭示内容亦提供一种套组，用以抑制一PDE7酶(如，PDE7A1)，以及用以治疗所述与PDE7酶相关的疾病或病征。所述套组可包含一或多个容器，其含一或多个TAA化合物(如，TAA)。
在部分实施方式中，所述套组可以包含一说明书，用以说明依据本揭示内容所述的任一方法而使用该套组的步骤。所述说明书记载本揭示内容所示方法的详细说明，即，施用一或多个TAA化合物以抑制PDE7酶和/或治疗与酶相关疾病。所述套组可更包含另一说明书，记载基于鉴定个体是否患有所述疾病的结果，选择适合接受治疗的个体。
所述说明书涵盖TAA化合物的使用方法，其中所记载的信息包含进行治疗需投予的剂量、剂量行程及其施用途径。所述容器可以是单位剂量、散包装(即，多剂量包装)或次单位剂量。所述套组中所提供的说明书原则上以书面记载于一卷标或仿单(即，置于套组内的纸张)上；然而，所述说明书亦可以机器可读取指令(即，在磁盘或光学储存盘片上执行的指令)的形式提供。
所述标签或仿单是有关于以用于抑制PDE7酶和/或治疗一与酶相关疾病的组合物执行本揭示内容所示的方法。
在此所述套组以适当的方式包装。适当的包装方式包含，但不限于，小瓶子(vials)、瓶子(bottles)、罐子(jars)、弹性包装(flexible packaging)(如，密封的美拉袋(Mylar)或塑料袋)及其类似物。另外，所述套组可以是用以与一特定装置(即，吸入器、鼻腔施用装置(如，喷雾器)或一输液装置(即，微型帮浦)结合的包装形式。一套组可包含一无菌存取口(如，所述容器可以是一静脉溶液包装袋；或一具有塞子的小瓶子，且该塞子可供皮下注射针穿刺)。所述容器亦可含有一无菌存取口(如，所述容器可以是一静脉溶液包装袋；或一具有塞子的小瓶子，且该塞子可供皮下注射针穿刺)。组合物中所含的至 少一活性剂可以是一TAA化合物(如，TAA)。
在可任选的实施方式中，套组可提供额外的成分；例如，缓冲液或说明信息。通常情况下，所述套组可含有一容器和一与容器相关的标签或仿单。在部分实施方式中，本发明提供的制造物品包含前述套组的内容物。
下文提出多个实验例来说明本发明的某些实施方式，以利本发明所属技术领域中具有通常知识者实施本发明，且不应将这些实验例视为对本发明范围的限制。据信本领域技术人员在阅读了此处提出的说明后，可在不需过度解读的情形下，完整利用并实践本发明。此处所引用的所有公开文献，其全文皆视为本说明书的一部分。
实验例1制备含TAA的植物萃取物
将月桃(Alpiniazerumbet)的叶子、三种不同品系的稻叶或小麦草(Triticumturanicum)溶于1毫升HPLC洗提液，此洗提液包含0.2M NaH2PO4、0.025M TBA-HS、15％ACN(v/v)，其pH值为6。将所得样本以超声波震荡器震荡10分钟；再离心10分钟。将上清液以0.22微米的Nylon注射式过滤器(Dia.13mm，STERLITECH Corporation)过滤，以得到含有TAA的植物萃取物。
利用以上方法从植物萃取物中制备出的TAA浓度范围约10-19微克/毫升。请参见表1：
表1不同植物萃取物中反式-乌头酸的浓度
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a序号为台湾农业试验所提供。
实施例2 TAA可专一地抑制PDE7
(a)PDE1活性和抑制分析
以下文所述的酶分析法测定PDE1的活性，本方法使用材料如下：
酶：10微克/微升PDE1(Lot.#:SLBD8711V,SIGMA-ALDRICH)；
底物：0.001M双(对硝基苯)磷酸酯(bis-p-nitrophenylphosphate)(Lot.#:021M5003V,SIGMA-5 ALDRICH)；
缓冲液：0.1M Tris-HCl,pH 8.9；以及
反式-乌头酸(TAA)、毛蕊异黄酮(Calycosin)、堪非黄酮醇3-O-芸香糖苷(Kaempferol 3-O-rutinoside)和汉黄芩素(Wogonin)抑制剂：1微克/微升(最终浓度为0.125微克/微升)。
酶分析的实例如图1所示。简而言之，将底物(50微升)和缓冲液(200微升)置于一次性塑料比色管(Cat.#:BL6224,Basic Life)中。再将PDE1(100微升)，以及4种抑制剂(50微升)或缓冲液(50微升；控制组)各别加入至比色管中。反应物的总体积为400微升。酶反应混合物经一适当期间培养后，以分光光度计(U-3300,HITACHI)，于波长405nm条件下测定光学密度。
比较含抑制剂的反应混合物与控制组混合物之间光学密度的差异，以及计算抑制百分比。
(b)PDE7活性和抑制分析
以下文所述的酶分析法测定PDE7A1的活性，本方法使用材料如下：
酶：0.005U/微升PDE7A1(Cat.#:524751,CALBIOCHEM)；
底物：0.0008微克/微升cAMP(Lot.#:BCBF5219V,SIGMA-ALDRICH)；
缓冲液：:10mMTris-HCl,pH 7.5；以及
上文实施例2(a)所述的抑制剂：0.3微克/微升(最终浓度为0.1微克/微升)。
在一实施例中，以酶分析法测定PDE7A1酶活性，如图2所示。简而言之，将底物(10微升)、PDE7A1(10微升)和缓冲 液(10微升；控制组)加入至一微量离心管中，总体积为30微升，并立即(于第0分钟)注射至HPLC(L-7420,HITACHI)中。接着，在254nm下测定反应混合物中cAMP和AMP含量，测定条件如下：
管柱：Kromasil,100-5 C18.NO.3637(25cm x 4.6mm)；
溶剂：0.2M NaH2PO4、25mM TBA-HS、15％CAN，pH6.5；
侦测波长：254 nm；
注射量：20微升；
流速：1毫升/分钟。
测定cAMP与AMP的波峰范围。
经过90分钟后，依据前述相同的步骤，将所述控制组混合物再次注射至HPLC仪器中，接着测定cAMP和AMP波峰范围，并与初次注射的结果相比较。
依据前述相同的步骤，将各别含有四种不同抑制剂(10微升)的反应混合物，以相同的体积注射至HPLC仪器中，接着测定cAMP和AMP波峰为，并与控制组的结果相比较，以及计算抑制百分比。
(c)结果
如图3所示，TAA可专一地抑制PDE7A1，但没有抑制PDE1的活性。因此，TAA化合物可用以治疗疾病；诸如，发炎性疾病和其它本揭示内容所述疾病，且不会造成因抑制PDE1所产生的副作用。此外，所述TAA化合物可以从植物中纯化制得。
虽然上文实施方式中揭露了本发明的具体实施例，然其并非用以限定本发明，本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不悖离本发明的原理与精神的情形下，当可对其进行各种更动与修饰，因此本发明的保护范围当以附随权利要求范围所界定者为准。