抗乙肝胎盘转移因子的制备方法.pdf

本发明涉及一种抗乙肝胎盘转移因子的制备方法。
    现在已知急慢性乙型肝炎患者均存在细胞免疫功能低下现象，因而急性乙肝炎患者病后少数不能顺利清除体内病毒，转为慢性;慢性肝炎（慢性迁延型、慢性活动型、慢活肝体早期肝硬变和肝硬变）则因免疫功能低下，体内长期存在乙肝病毒，肝组织不断受到免疫反应破坏，由慢性肝炎缓慢转入早期肝硬变，再转为肝硬变，甚至在肝硬变基础上再出现肝细胞癌变。因此，试用免疫调节剂提高病体免疫功能，特别是细胞免疫功能，促进肝内病变恢复和血内乙肝病毒阴转，是70年代后探讨重点。在现有的各种免疫调节剂中，虽多可证明对人体具有程度不一的非特异免疫活性，但并不能证明对乙肝病毒具有明确的特异免疫活性，因而治疗效果亦较差。因此，治疗乙肝病毒感染的特异性免调节剂一直是近年研究探讨的重点。

    转移因子是免疫调节剂之一，自50年代初提出到现在，国外仍以人体的细胞，特别是淋巴细胞为提取原材料，由于材料难得，价格昂贵，特别缺乏对乙肝病毒明确特异活性，结果限制了推广使用。试用大动物相应器官组织，作原材料或先给抗原注射致敏，制备普通转移因子（非特异性）或特异性转移因子，除同样存在上述缺点外，尚有人畜有别问题。近年国内虽有一些有关从胎盘中提取转移因子的报道，如：郭金刚等著《胎盘转移因子的提取、理化性法及临床应用》（江苏省金县科技委员会资料1984/10），刘月新等著《一种新的免疫调节剂-胎盘因子的制备与研究》（中国免疫学杂志1985，1（5）），但他们所用胎盘均为普通胎盘，缺乏对乙肝病毒明确特异免疫活性。

    本发明的目的是研制一种以乙肝病毒感染臻敏的胎盘为原料，用经过改进的提取转移因子注射液的方法，克服上述不足之处，制备抗乙肝特异性转移因子。

    本发明的目的是这样实现的：选用乙型肝炎病毒标志物抗原、抗体阳性或抗原阴性、抗体阳性胎盘为原料，将胎盘剪成小块，反复冻融3-5次，加入适量的蒸馏水，将其磨碎;再加入氯化钠溶液，使其在胎盘浆中地浓度为0.9%（重量比），搅匀，向匀浆内加入36%甲醛，使匀浆内含甲醛浓度为0.125%（体积比），置56℃水浴5-15小时，并不断搅拌;将匀浆离心后取上清液以NaOH调整PH值为6.8～7.0，再静置35-40℃孵箱内100小时以上;将上述液体过滤、超滤后即成抗乙肝胎盘特异性转移因子注射液。

    本发明原料易得，制备工艺亦不太复杂，实验证明除非特异免疫活性外，对乙肝病毒尚有明确特异性免疫活性，治疗效果较好，无任何毒剂反应。

    下面结合实施例对本发明作进一步说明。

    取出乙型肝炎病毒标志物抗原、抗体阳性的胎盘（或抗原阴性、抗体阳性胎盘）将其洗净，切成小碎块，反复冻融3次;置于胶体磨内（或高速捣碎机内），加胎盘相等重量蒸馏水，反复研磨（捣碎）3次;加入3倍胎盘重量1.2%氯化钠溶液，搅匀，使匀浆内含氯化钠0.9%（重量比），胎盘组织与水的重量比为1∶4;加入36%甲醛，使匀浆内含甲醛浓度为0.125%（V/V），混匀后，置56℃水浴5小时，并不断搅拌使温度均匀;匀浆经3000vpm离心20分钟，取出上清液用NaOH调整PH为6.8～7.0，再静置35℃孵箱内100小时;然后用西氏滤器、甲3除菌板过滤，G6耐酸滤过漏斗除菌过滤，再用截面分子量10000道而顿超滤膜超滤，即成抗乙肝胎盘特异性转移因子注射液。