一种化合物的新用途.pdf

一种化合物的新用途
技术领域
本发明涉及一种化合物的新用途，具体涉及该化合物在制备治疗抑郁方面的新用途，属于医药领域。
背景技术
抑郁症为一种常见的情感性精神障碍，以心境显著而持久的改变(高扬或低落)为基本临床表现的精神疾病，常伴有相应的思维和行为改变。临床上可分为多种类型，如内源性抑郁症、心因性抑郁症、继发性抑郁症等；以情绪低落为中心症状，表现为悲观失望，对日常生活丧失兴趣，精神萎靡不振，食欲减退，严重者甚至反复出现自杀念头或行为。严重威胁人们的身心健康，并对家庭和社会造成重大损害。属于中医“郁症”、“脏躁”、“百合病”等病证的范畴。
发明内容
本发明的目的在于提供一种化合物在制备抗抑郁药物的用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种如式I所示的化合物在制备抗抑郁药物的用途。

进一步，在制备治疗药源性抑郁症药物中的应用。
所述药源性是指：利血平或与利血平同类的降压药，或包含利血平或与利血平同类降压药的组合物；或，抗厌氧药、抗结核药、抗心律失常药、强心药、抗癫痫药、抗帕金森症药、解热镇痛药、胃肠功能调节药、抗精神失常药、催眠药、避孕药中能导致抑郁症的任意一种。
所述抗厌氧药为甲硝唑；所述抗结核药为异烟肼；所述抗心律失常药为双异丙吡胺、心律平、利多卡因或心得安；所述强心药为洋地黄；所述抗癫痫药为卡马西平或苯妥英钠；所述抗帕金森症药为左旋多巴或金刚脘胺；所述解热镇痛药为布洛芬或消炎痛；所述胃肠功能调节药为甲氰咪胍或胃复安；所述抗精神失常药为氯丙嗪；所述催眠药为安定。
本发明化合物可加入药学可接受的辅料制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括但不限于胶囊剂、片剂、颗粒剂、注射制剂、缓释剂、口服液或滴丸剂；
所述药学可接受的辅料包括：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等。
实验研究表明，式I所示的化合物可明显增加利血平化小鼠活动次数、逆转模型小鼠体温下降和闭目状况，改善小鼠的中枢神经系统功能异常的状况；且可显著的改善抑郁大鼠精神抑郁状态。
实验例1化合物I对利血平化小鼠行为学的影响
1实验材料
1.1实验动物：ICR小鼠，体重20-22g，雄性。购自北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司，动物许可证编号：SCXK(京)2009-0007。
1.2药物与试剂
受试药物：化合物I(由实施例1制备)
阳性药物：百忧解(Patheon France)，批号：0935A；
取以上药物适量，溶于0.5％CMC中，配成所需浓度；
百忧解药量为2mg／kg体重。
造模药物：利血平注射液，1g／L，天津金耀氨基酸有限公司，1104081；
利血平注射液用生理盐水稀释20倍后用，稀释后浓度为0.05g／L，给药量为0.3mg／kg。
1.3仪器：
自主活动仪：MK-ANIMEX，日本；
MC-108L型电子体温计：欧姆龙(大连)有限公司。
2实验方法
将动物随机分为：对照组，利血平模型(0.3mg／kg)组，化合物I大剂量(0.8mg／kg)、中剂量(0.4mg／kg)、小剂量(0.2mg／kg)组，百忧解(2mg／kg)组。化合物I大、中、小剂量组，百忧解组分别给予：化合物I：0.8mg／kg、0.4mg／kg，0.2mg／kg，百忧解：2mg／kg。连续灌胃给药8d，每日1次，对照组给予0.5％CMC0.2mL／10g。
除对照组外其他组小鼠给药同时皮下注射利血平(0.3mg／kg)造模，对照组小鼠皮下注射等量生理盐水。
2.1化合物I对利血平化小鼠自主活动的影响
第7日给药并皮下注射利血平后1h，将小鼠置于自主活动记录仪中，记录4分钟内动物活动次数。
2.2化合物I对利血平化小鼠体温和眼睑闭合的影响
第8日给药并皮下注射利血平后1h，将小鼠放入烧杯中，观察其眼睑闭合并评分。(评分标准：眼睑全闭4分；闭3／4，3分；闭1／2，2分；闭1／4，1分；全睁，0分)。然后将体温计探头插入小鼠肛门内约1.2cm测量体温。
数据处理：数据以表示，采用SPSS17.0统计软件分析，用ANOVA 进行方差分析，LSD进行组间比较，P<0.05为显著性差异。
3实验结果
3.1化合物I对利血平化小鼠自主活动的影响
结果见表1。
表1化合物I对利血平化小鼠自主活动的影响

组别剂量(mg／kg)动物数(只)自主活动(次)对照组-1168.18±20.97**利血平模型组0.31244.58±21.79化合物I大剂量组0.81281.75±17.79**化合物I中剂量组0.41260.42±18.83*化合物I小剂量组0.21247.42±12.41百忧解组21269.08±1.79**
注：与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
由表1可见，与对照组比较，利血平化小鼠自主活动显著下降(P<0.01)；与模型组比较，化合物I大剂量、百忧解组可显著增加小鼠自主活动次数(P<0.01)，化合物I中剂量组可明显增加小鼠自主活动次数(P<0.05)；化合物I小剂量组有增加小鼠活动次数的趋势，但无显著性差异(P>0.05)。
3.2化合物I对利血平化小鼠体温、眼睑闭合的影响
结果见表2。
表2化合物I对利血平化小鼠体温、眼睑闭合的影响
组别剂量(mg／kg)动物(只)肛温(℃)眼睑评分对照组-1137.87±0.52**1.36±0.92**利血平模型组-1235.43±0.912.92±0.90化合物I大剂量组0.81236.49±0.67**1.42±1.16**化合物I中剂量组0.41237.02±0.52**1.83±0.94**化合物I小剂量组0.21236.90±0.36**2.25±0.96百忧解组21236.60±0.09**1.54±1.44**
注：与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
利血平慢性给药可致小鼠体温下降、闭眼。由表2可知，化合物I各组、百忧解组对利血平慢性给药所致体温下降均有显著拮抗作用(P<0.01)；对照组、化合物I大剂量、中剂量组、百忧解组可显著逆转利血平化小鼠闭眼状况(P<0.01)。
实验例2化合物I对大鼠神经系统的影响
1实验材料
1.1实验动物：SD大鼠，体重140-160g，雄性。北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证编号：SCXK(京)2012-0001。动物于(20-24)℃，湿度60％-70％，12h明暗的环境中适应性饲养3天后开始实验。
1.2药物与试剂
受试药物：化合物I大剂量给药量为0.6mg／kg，中剂量给药量为0.3mg／kg，小剂量给药量为0.15mg／kg体重。灌胃给药，给药体积为1ml／100g体重。
阳性药物：盐酸氟西汀胶囊：礼来苏州制药有限公司，批号：2061A，2072A；匹维溴铵片：法国苏威制药，批号：626683,627414。
取适量以上药物，溶于蒸馏水中制成所需浓度的混悬液。氟西汀给药量为2.5mg／kg体重，匹维溴铵给药量为25mg／kg。灌胃给药，给药体积1ml／100g体重。
其它试剂：蔗糖，国药集团化学试剂有限公司，批号：20120604。
2慢性应激致抑郁大鼠模型的建立
SD雄性大鼠，随机分为：正常对照组、抑郁模型组、匹维溴铵组(25mg／kg)、氟西汀组(2.5mg／kg)、化合物I大、中、小剂量组(0.6mg／kg、0.3mg／kg、0.15mg／kg)。模型组和给药组的大鼠每笼一只孤养，并加以慢性不可预见性刺激。慢性应激包括：禁水、禁食、昼夜颠倒、冷刺激、热刺激、致痛、致动。7种刺激因子随机安排，每日一种，每种刺激不可连续出现，使动物不能预料刺激的发生。化合物I各组以及阳性药各组动物造模同时每日灌胃给药。对照组与模型组给予灌胃蒸馏水。
应激操作方法：
慢性应激：
禁水：24小时断水。
禁食：24小时断食。
昼夜颠倒：于早8时将动物放入暗室中，不开灯使动物处于黑暗状态；至晚8时将暗室照明灯打开，使动物处于光照状态，至次日早8时取出。
冷刺激：将动物置于盛有4℃冰水的桶中(水深15cm)，5min后取出。
热刺激：将动物置于45℃的SHH-500ZSD动物实验箱中，5min后取出。
致痛：用止血钳(外裹棉花)夹住大鼠距尾根3cm处，持续夹尾1min。
制动：将动物置于束缚笼中，使其四肢头部不能随意摆动，第一次制动束缚5小时，以后时间依次递增1h。
3实验方法
3.1液体消耗实验
糖水偏嗜度实验可很好的检测抑郁模型动物的精神活动状态。目前大多采用糖水偏嗜度百分率作为测定快感缺乏的有效客观指标，来判断抑郁动物中枢神经系统的焦虑或抑郁状态。
实验前进行动物蔗糖水饮用训练。在隔噪音，安静的房间内，每笼同时放置2个水瓶，第一个24小时，两瓶均装有1％蔗糖水。随后的24小时，一个瓶装有1％蔗糖水，一个瓶装纯净水。禁食禁水24小时后，进行动物的基础糖水／纯水消耗实验。同时给予每只大鼠事先定量好的两瓶水：一瓶1％蔗糖水，一瓶纯水。4h后，取走两瓶并称量，计算动物的糖水偏嗜度。测定造模前后蔗糖水偏嗜度的变化。糖水偏嗜度(％)=(糖水消耗量(g)／(糖水消耗量(g)+纯水消耗量(g))×100％。
3.2敞箱实验(open-field test)
敞箱实验可用来测试动物中枢神经系统的“兴奋”或“抑郁”状态，其中水平得分反映了反映动物的探究行为，即活泼程度，而垂直运动则反映了动物对新鲜环境的好奇程度。
所用敞箱高40cm，长宽均为80cm，周壁为黑色，白色地面用黑线划分为面积相等的25块，实验在黑暗安静的房间中进行。
将单只大鼠置于清洁敞箱中央，测定动物穿越地面方块数作为水平运动得分(3个爪以上跨入)，一个格记1分；以站立次数为垂直运动得分(两前肢离地1厘米)，站立一次记1分。每只动物每次仅进行一次测定，每次5分钟。每次试验后需将动物排泄物用乙醇清除干净.测定造模前后动物水平运动得分和垂直运动得分的变化。
4统计方法
数据以表示，采用SPSS17.0统计软件分析。多个样本均数比较用单因素方差分析(One-way ANOVA)。其中方差齐者用LSD法进行组间比较，方差不齐者采用Dunnett's T3法进行组间比较。P<0.05为差异有统计学差异。
5实验结果
5.1化合物I对模型大鼠糖水偏嗜度的影响
结果见表3-4。
表3造模前、20天时化合物I对抑郁大鼠糖水偏嗜度的影响

表4造模42天、63天时化合物I对抑郁大鼠糖水偏嗜度的影响


与模型组比：P<0.01**,P<0.05*
由表3、4可知，在造模前各组大鼠的糖水偏嗜度没有明显统计学差异(P>0.05)；
造模21天时，各组大鼠糖水偏嗜度没有明显统计学差异(P>0.05)，模型组大鼠糖水偏嗜度有下降趋势，提示模型组大鼠精神状态已经下降。阳性药组和化合物I各剂量组也都有改善糖水偏嗜度的趋势。
造模42天时，模型组大鼠的糖水偏嗜度降低(P<0.05)，说明模型组大鼠已出现焦虑、抑郁的状态。阳性药匹维溴铵和氟西汀均可改善模型大鼠糖水偏嗜度(P<0.05)；化合物I小剂量(0.15mg／kg)可改善模型大鼠糖水偏嗜度(P<0.05)。
造模63天时，模型组大鼠糖水偏嗜度显著降低(P<0.01)，提示随着应激时间的延长，模型大鼠的抑郁状态越严重。阳性药匹维溴铵和氟西汀均可显著增加模型大鼠的糖水偏嗜度(P<0.01)。化合物I大中小剂量均可改善模型大鼠糖水偏嗜度，其中化合物I大剂量(0.6mg／kg)和小剂量(0.15mg／kg)可显著增加模型大鼠的糖水偏嗜度(P<0.01)。
5.2化合物I对模型大鼠敞箱运动的影响
5.2.1化合物I对慢性应激致抑郁模型大鼠水平得分的影响
结果见表5。
表5化合物I对慢性应激致抑郁模型大鼠水平得分的影响


与模型组比：**p<0.01；*p<0.05
由表5可知，在造模12天时，与对照组比较，模型组动物水平得分增加；与模型组比较，化合物I大、中剂量组以及阳性药匹维溴铵和氟西汀均可减低模型动物的水平得分，且作用明显(P<0.05)；
在造模第33天，各组的水平得分无统计学差异；
在造模第55天，与对照组比较，模型组动物水平得分降低；与模型组比较，化合物I大、中、小剂量组以及阳性药氟西汀可增加模型动物的水平得分。
5.2.2化合物I对慢性应激致抑郁模型大鼠垂直得分的影响
结果见表6。
表6化合物I对慢性应激致抑郁模型大鼠垂直得分的影响


与模型组比：**p<0.01；*p<0.05
由表6可知，在造模12天时，与对照组比较，模型组动物垂直得分增加；与模型组比较，化合物I大、中、小剂量组以及阳性药匹维溴铵和氟西汀均可减低模型动物的垂直得分，化合物I大、中剂量作用明显(P<0.05)；
在造模第33天，各组的垂直得分无统计学差异；在造模第55天，与对照组比较，模型组动物垂直得分显著降低(P<0.05)；与模型组比较，化合物I大、中、小剂量组以及阳性药匹维溴铵和氟西汀可显著增加模型动物的垂直得分(P<0.05)。
实验例3化合物I对抑郁模型大鼠大脑内5-HT的影响
1实验材料
1.1实验动物：SD大鼠，体重140-160g，雄性。北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证编号：SCXK(京)2012-0001。动物于(20-24)℃，湿度60％-70％，12h明暗的环境中适应性饲养3天后开始实验。
1.2药物与试剂
受试药物：化合物I大剂量给药量为0.6mg／kg，中剂量给药量为0.3mg／kg，小剂量给药量为0.15mg／kg体重。灌胃给药，给药体积为1ml／100g体重。
阳性药物：盐酸氟西汀胶囊：礼来苏州制药有限公司，批号：2061A，2072A；匹维溴铵片：法国苏威制药，批号：626683,627414。
取适量以上药物，溶于蒸馏水中制成所需浓度的混悬液。氟西汀给药 量为2.5mg／kg体重，匹维溴铵给药量为25mg／kg。灌胃给药，给药体积1ml／100g体重。
2实验方法
2.1慢性应激致抑郁大鼠模型的建立(同实验例2)
2.2检测各组大鼠5-HT神经元的表达和分布：取大鼠大脑海马(Paxinos大鼠脑定位图谱确定的位置)，采用免疫组化的方法，检测外周和中枢内5-HT神经元的表达和分布情况，摄取标记后的图像，用IPP6.0软件进行定量分析。
3实验结果
由表7可知模型组大鼠海马内5-HT表达显著降低(P<0.01)，化合物I可显著升高海马内的5-HT。
表7化合物I对抑郁模型大鼠大脑内5-HT的影响
组别N／只剂量(mg／kg)5-HT阳性指数空白9--0.030±0.007**模型9--0.017±0.005化合物I大剂量组90.60.024±0.003*化合物I中剂量组90.30.023±0.005*化合物I小剂量组90.150.021±0.005匹维溴铵9250.024±0.004*氟西汀92.50.023±0.002*
具体实施方式
实施例1本发明化合物的制备
1仪器、试剂与药材
仪器：RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；KQ-S00DE型数控超声波清洗器(昆山市超生仪器有限公司)；DS电热三用水浴锅(北京医疗设备厂)；Sartorious BT25S型1／100000电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；WH-43型电热恒温 干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；Bruker-Avance VNS-600型核磁共振仪(瑞士CAMAG公司)。
试剂：AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)；柱色谱用硅胶(200～300目，青岛海洋化工厂)、硅胶G预制薄层板(20×20cm)(青岛海洋化工厂)；其他试剂均为分析纯。
药材：实验用蜘蛛香药材购自云南，经北京中医药大学石晋丽教授鉴定为败酱科缬草属蜘蛛香；环戊烷-吡喃-7-甲醛，4-乙氧基甲基对照品自制。
2化学成分的提取分离
2.1化学成分的提取
称取蜘蛛香药材8kg粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇浸泡1h，加热回流提取两次，合并提取液，减压回收乙醇；浓缩液加水稀释过滤，上清液过AB-8大孔吸附树脂，用30％乙醇除杂，再用90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，减压真空干燥24h至恒重，得80.5g蜘蛛香提取物干膏，备用。
2.2有效部位的分离
将80.5g蜘蛛香提取物的干膏上硅胶柱，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯(9：1)洗脱液，编号为Fr2-60；将Fr.52-55合并，减压回收溶剂至干，以甲醇溶解，过Sephadex LH-20凝胶柱，甲醇洗脱，收集洗脱液，以GF254硅胶板进行检识，合并相同主斑点的馏分，减压回收溶剂，用氯仿重结晶，得到黄色粉末①。将Fr.56-59合并后减压回收溶剂，用石油醚重结晶得到黄色粉末②。合并①与②，即为式I结构的化合物。
3化合物结构鉴定
黄色粉末，紫外灯下显黄色荧光。可溶于氯仿、甲醇。信号归属如下：
1H-NMR(500MHz，MeOH)δ：9.94(1H，s，H-10)，9.21(1H，s，H-1)，8.20(1H，s，H-3)，7.96(1H，d，J=3.2Hz，H-7)，6.69(1H，d，J=3.2Hz，H-6)，5.30(2H，s，H-11)，2.07(3H，s，-OCOCH3)。
13C-NMR(75MHz，MeOH)δ：185.6(C-10)，171.5(-OCOCH3)，152.2(C-1)，147.2(C-7)，144.1(C-3)，134.8(C-5)，126.6(C-8)，124.5(C-9)，121.3(C-4)，110.9(C-6)，61.6(C-11)，21.3(-OCOCH3)。 将波谱数据与现有文献对照，确定结构式为：