CN200510123230.8
2005.11.15
CN1965872A
2007.05.23
撤回
无权
发明专利申请公布后的视为撤回|||实质审查的生效|||公开
A61K36/185(2006.01); C12P1/00(2006.01); A61P35/00(2006.01); A61K125/00(2006.01)
A61K36/185
中国科学院化学研究所;
张虹; 向俊锋; 唐亚林; 管烨; 陈旭征
100080北京市海淀区中关村北一街2号
北京泛华伟业知识产权代理有限公司
高存秀
本发明涉及一种藤梨根的酶解提取方法,其为在常规的浸提之前对原料进行酶解处理,由于纤维素酶破坏了藤梨根的细胞壁,使其释放出细胞内的物质,从而可以使得藤梨根提取物的产率大幅度提高。该方法与现有技术的提取方法相比,其优点在于:1)操作简单,成本低廉;2)安全可靠,不会造成环境污染。3)收率高,醇提取三次的产率可由约为3%提高至11%。
1、 一种藤梨根的酶解提取方法,包括如下步骤:1)溶酶:按0.1~0.2g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中,搅拌均匀,滴加HCl溶液,调节混合溶液的pH值至弱酸性;2)酶解:将藤梨根溶于上述纤维素酶的水溶液中,搅拌均匀;水浴加热到40~55℃,恒温酶解2~3小时;而后升温至70℃,恒温30分钟,进行灭酶;得到酶解后的藤梨根混合液;3)除水后浸提:将步骤2)得到的酶解后的藤梨根混合液中的蒸馏水倒出,离心分离,去除上清液,滤渣中加入乙醇,加热,回流提取;4)除去溶剂:将经步骤3)醇提后的藤梨根溶液在30~45℃旋转蒸发除去溶剂,直至得到红色膏状物,真空干燥,得到藤梨根提取物。2、 如权利要求1所述的藤梨根的酶解提取方法,其特征在于:所述步骤1)中的HCl溶液的pH值为2~4。3、 如权利要求1所述的藤梨根的酶解提取方法,其特征在于:所述步骤1)中调节混合溶液的pH值至5~6.5。4、 如权利要求1所述的藤梨根的酶解提取方法,其特征在于:所述步骤2)中的藤梨根加入量与酶加入量的重量比为1100~1300∶1。5、 如权利要求1所述的藤梨根的酶解提取方法,其特征在于:所述步骤3)中加入乙醇体积量与滤渣的重量比为11~14∶1。6、 如权利要求1所述的藤梨根的酶解提取方法,其特征在于:所述步骤3)中回流提取时间为5~10小时。7、 如权利要求1所述的藤梨根的酶解提取方法,其特征在于:所述步骤3)中回流提取的次数为1~3次。8、 如权利要求1所述的藤梨根的酶解提取方法,其特征在于:所述步骤3)中的乙醇为工业乙醇。
藤梨根的酶解提取方法 技术领域 本发明涉及一种藤梨根抗肿瘤成分的酶解提取方法。 背景技术 藤梨根为猕猴桃科植物猕猴桃(Actinidia chinensis Planch)和软枣猕猴桃(A.argutaPlanch)的根,始载于《开宝本草》,其全株富含猕猴桃碱,根含熊果酸、齐墩果酸、琥珀酸、胡萝卜甙以及精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸等并富含Fe、Cu、Mn、Se等元素成分,具有健胃、清热、利湿的功效(中药材科技,1981,4(1),30)。除此之外,清热解毒类中药藤梨根具有抗癌作用,民间用其根治疗胃癌、鼻咽癌、乳腺癌,取得一定疗效,其是对消化道癌的作用更为明显。藤梨根的乙醇提取物的腹腔给药对S180的抑制率可达30~40%(中药材,2004,27(2),86-87)。 近年来藤梨根的研究主要集中在藤梨根有效成分的提取(药学学报,1985,20(10),778-781)及药理作用(广西中医药,2003,26(6),49-50;中国中药杂志,1995,20(1),42-44;中药材,2005,28(3),215-218)等方面。目前,对于藤梨根药材的提取工艺大多采用醇提(甲醇或乙醇)方式,其产率很低,约为3.46%(中草药,1999,30(5),323-326)。低产率不仅会造成原料的浪费而且提取过程中采用的大量有机溶剂对环境也有一定的负面作用。因此,如何能够采用一种简单、有效、安全的方法提高藤梨根的产率是迫切需要解决的问题。 发明内容 本发明的目的在于克服现有提取工艺中藤梨根药材提取产率低下,且采用有机溶剂量大对环境有害的缺陷,从而提供一种简单、有效、安全且产率较高的藤梨根的酶解提取方法。 本发明的目的是通过如下的技术方案实现的: 本发明提供一种藤梨根的酶解提取方法,具体包括如下步骤: 1)溶酶:按0.1~0.2g纤维素酶/L水的比例将市售的纤维素酶溶于蒸馏水中,搅拌均匀,滴加HCl溶液,调节溶液的pH值至弱酸性; 所述的HCl溶液的pH值为2~4; 调节溶液pH值为5~6.5; 2)酶解:将藤梨根溶于上述纤维素酶的水溶液中,搅拌均匀;水浴加热到40~55℃,恒温酶解2~3小时;而后升温至70℃,恒温30分钟,进行灭酶;得到酶解后的藤梨根混合液; 上述过程中藤梨根加入量与酶加入量的重量比为1100~1300∶1; 3)除水后浸提:将步骤2)得到的酶解藤梨根混合液中的蒸馏水倒出,离心分离,去除上清液,滤渣加入乙醇,加热,回流提取; 所加入乙醇体积与滤渣的重量比为11~14∶1; 回流提取时间为5~10小时; 回流提取的次数为1~3次; 所述的乙醇为工业乙醇; 4)除去溶剂:将经步骤3)醇提后的藤梨根溶液在30~45℃旋转蒸发除去溶剂,直至得到红色膏状物,真空干燥24h,得到藤梨根提取物。 本发明提供的藤梨根的酶解提取方法是在常规的浸提之前对原料进行酶解处理,由于纤维素酶破坏了藤梨根的细胞壁,使其释放出细胞内的物质,从而可以使得藤梨根提取物的产率大幅度提高。该方法与现有技术的提取方法相比,其优点在于: 1)操作简单,成本低廉; 2)安全可靠,不会造成环境污染。 3)收率高,醇提取三次的产率可由约为3%提高至11%。 具体实施方式 实施例1、 将0.1g市售的纤维素酶溶于1000ml蒸馏水中,搅拌均匀,滴加pH值为2的HCl,调节溶液的pH值至5。将110g藤梨根溶于该纤维素酶的水溶液中,搅拌均匀;水浴加热到40℃,恒温酶解3小时;而后升温至70℃,恒温30分钟,进行灭酶;得到酶解后的藤梨根混合液。将混合液中的蒸馏水倒出,离心分离,去除上清液,得到滤渣120g,将此滤渣加入1700ml的工业乙醇,加热,回流10小时,提取2次。将醇提后的藤梨根溶液倒出,在45℃旋转蒸发除去溶剂,直至得到红色膏状物,然后在真空干燥24h,得到藤梨根提取物13.2g,产率为12%。 实施例2、 将0.2g市售的纤维素酶溶于1000ml蒸馏水中,搅拌均匀,滴加pH值为3的HCl,调节溶液的pH值至6.5。将260g藤梨根溶于该纤维素酶的水溶液中,搅拌均匀;水浴加热到55℃,恒温酶解2小时;而后升温至70℃,恒温30分钟,进行灭酶;得到酶解后的藤梨根混合液。将混合液中的蒸馏水倒出,离心分离,去除上清液,得到滤渣285g,将此滤渣加入3705ml的工业乙醇,加热,回流5小时,提取3次。将醇提后的藤梨根溶液倒出,在30℃旋转蒸发除去溶剂,直至得到红色膏状物,然后在真空干燥24h,得到藤梨根提取物33.8g,产率为13%。 实施例3、 将0.15g市售的纤维素酶溶于1000ml蒸馏水中,搅拌均匀,滴加pH值为4的HCl,调节溶液的pH值至5.8。将180g藤梨根溶于该纤维素酶的水溶液中,搅拌均匀;水浴加热到45℃,恒温酶解2.5小时;而后升温至70℃,恒温30分钟,进行灭酶;得到酶解后的藤梨根混合液。将混合液中的蒸馏水倒出,离心分离,去除上清液,得到滤渣210g,将此滤渣加入2740ml的工业乙醇,加热,回流8小时,提取1次。将醇提后的藤梨根溶液倒出,在35℃旋转蒸发除去溶剂,直至得到红色膏状物,然后在真空干燥24h,得到藤梨根提取物22.5g,产率为12.5%。
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本发明涉及一种藤梨根的酶解提取方法,其为在常规的浸提之前对原料进行酶解处理,由于纤维素酶破坏了藤梨根的细胞壁,使其释放出细胞内的物质,从而可以使得藤梨根提取物的产率大幅度提高。该方法与现有技术的提取方法相比,其优点在于:1)操作简单,成本低廉;2)安全可靠,不会造成环境污染。3)收率高,醇提取三次的产率可由约为3提高至11。。
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