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1、10申请公布号CN104164505A43申请公布日20141126CN104164505A21申请号201410388922422申请日20140808C12Q1/6820060171申请人重庆医科大学附属第一医院地址400016重庆市渝中区医学院路1号重庆医科大学附属第一医院72发明人杨培增杨正林侯胜平杜利平雷博74专利代理机构重庆志合专利事务所50210代理人胡荣珲54发明名称一种用于检测VKH综合征的试剂盒57摘要本发明涉及一种用于检测VKH综合征的试剂盒，该试剂盒包含用于扩增位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS1256179。
2、8、RS76436269、RS3021304、RS442309和RS224058的基因片段的试剂的引物对，以及特异性检测个体基因型的SEQUENOMMASSARRAY单碱基延伸引物。该试剂盒通过检测受试者所述的SNP位点是否有变异，预测受试者对VKH综合征的遗传易感性，可用于早期筛查汉族人群VKH综合征的发生，为临床诊断和治疗提供依据。51INTCL权利要求书1页说明书12页序列表9页附图14页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书12页序列表9页附图14页10申请公布号CN104164505ACN104164505A1/1页21一种用于检测VKH综合征的试剂盒，。
3、其特征在于该试剂盒包含用于扩增位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12561798、RS76436269、RS3021304、RS442309和RS224058的基因片段的试剂的引物对，以及特异性检测个体基因型的SEQUENOMMASSARRAY单碱基延伸引物。2根据权利要求1所示的试剂盒，其特征在于所述基因片段的试剂的引物RS78377598基因片段的试剂的PCR引物对序列如SEQIDNO12所示；RS77258390基因片段的PCR引物对序列如SEQIDNO34所示；RS78597810基因片段的PCR引物对序列如SEQIDNO5。
4、6所示；RS12568393基因片段的PCR引物对序列如SEQIDNO78所示；RS12561798基因片段的PCR引物对序列如SEQIDNO910所示；RS76436269基因片段的PCR引物对序列如SEQIDNO1112所示；RS3021304基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO1314所示；RS442309基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO1516所示；RS224058基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO1718所示。3根据权利要求1所示的试剂盒，其特征在于所述特异性检测个体基因型的SEQUENOMMASSARRAY单碱基延伸引物的序列如SEQIDNO1927所。
5、示。4根据权利要求1所示的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括TAQ酶，SAP，SAPBUFFER，无酶水，以及位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12561798、RS76436269、RS3021304、RS442309和RS224058的标准DNA样本。权利要求书CN104164505A1/12页3一种用于检测VKH综合征的试剂盒技术领域0001本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于检测VKH综合征的试剂盒。背景技术0002VOGTKOYANAGIHARADAVKH综合征又名伏格特小柳原田综合征，是一种累及全身多系统的炎症性疾病。
6、。该综合征的其特征为突发性色素膜炎；眉毛及毛发变白、秃发及白癜风等皮肤损害；头痛、头晕、恶心等神经系统表现；耳鸣、耳聋及眩晕等内耳症状。0003VKH综合征以急性发作开始，病程迁延反复。分两个临床类型，即以渗出性虹膜睫状体炎为主的VOGT小柳型VK型和渗出性脉络膜炎为主的原田型H型。VKH综合征多发生于有色人种，中国、日本、巴西及美国印第安人为高危人群，并且其好发于青壮年，以2040岁为多，男女无明显差别。双眼同时受累是VKH综合征的重要临床表现，据统计约占患者总数的94100，双眼先后受累者间隔多小于10天。0004VKH综合征是我国葡萄膜炎中常见的一种类型，约占所有葡萄膜炎患者的14。其确。
7、切病因目前尚不清楚，所致的葡萄膜炎具有发作频繁、受累组织广泛，病程长及并发症多等特点。VKH综合征如未得到及时有效的治疗，可引起许多并发症，如带状角膜变性、角膜水肿、并发性白内障、继发性青光眼、黄斑部及视盘水肿、黄斑表面褶纹样改变以及视网膜脱离等，造成严重后果。预后与炎症的控制程度相关，反复多次的炎症可致眼部病情迁延及并发症，使眼组织的进一步破坏和视力的逐渐下降，最后严重影响患者视功能，降低患者的劳动力，并对其生理、心理造成不同程度的妨碍。0005VKH综合征是一种多因素复杂疾病，现被普遍认为是一种免疫遗传基因病，在遗传和环境等因素共同作用下，由T细胞介导的自身免疫反应以黑色素相关抗原、视网膜。
8、S抗原或光感受器维生素A类结合蛋白为靶点，引起眼部抗原抗体反应而表现出免疫源性葡萄膜炎。虹膜睫状体的病理改变在本质上与脉络膜改变相同，系由上皮样细胞、淋巴细胞和浆细胞等构成的病灶，有时可见有淋巴细胞的有丝分裂征象，但在虹膜内上皮样细胞形成不及脉络膜内明显。既往流行病学研究发现VKH综合征有明显的家族聚集倾向，呈现地域性聚集，特定种群发病率高等现象，这些现象揭示了遗传因素在其致病机理中发挥重要作用。VKH综合征属于多基因遗传复杂疾病，并不遵循经典孟德尔遗传定律，在这类遗传病中，每个基因对表型的贡献相差不大，其遗传性状表达受多对等效、微效和累加的多基因控制，环境因素在其中所起的作用也不可忽视。00。
9、06近年来，遗传学理论、研究手段和认识水平的不断进步和发展给疾病遗传学研究带来了新的思路和突破。应用候选基因筛查、连锁分析等技术进行VKH综合征的基因定位和候选基因的克隆筛查工作，已经发现了多个VKH综合征的候选基因位点。在日本人群中，HLADR4/DR53与VKH综合征有强相关性早被证实，随后在中国，北美，西班牙人群中，此遗传区域与VKH综合征的易感性得到进一步验证。其他候选基因包括TRAF5RS114065494、JAK1RS4916004、PTPN22RS974404、CTLA4RS187762111、STAT4RS34946552、说明书CN104164505A2/12页4OPNRS1。
10、42608941、TNIP1RS2287721、TNFAIP3RS3799491、MIFRS2012133等。目前，对VKH综合征遗传易感性研究成果多集中于人类白细胞抗原HLADR4/DR53，HLADR1，HLADRB10405等与此病的相关性，非HLA抗原与此病的相关性报道并不多见，而且大部分报道结果很难在其他人群中重复。0007未来针对VKH综合征治疗的发展趋势是切实有效、疗效持久、降低复发的综合治疗手段，以长久地保存患者有用的视功能，提高患者的生活质量。为此，需要寻求更加有效和精准的遗传标记物和检测方法，以利于早期筛查VKH综合征高危人群，并实施早期的检测和预防，减少其视力损害。发明内。
11、容0008本发明的目的是提供一种用于检测VKH综合征的试剂盒，该试剂盒通过检测位于染色体区域1P312的SNP位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12561798、RS76436269，以及位于1P312且与上述位点连锁遗传的RS117633859、RS12564219、RS12563505、RS34017352、RS114661385、RS117301158、RS115009271、RS76091599、RS78865162、RS78917656、RS6693659、RS12566159、RS117282985；位于染色体区域6P2。
12、13的SNP位点RS3021304以及连锁遗传位点RS114800139；和位于染色体区域10Q213的SNP位点RS442309和RS224058以及位于10Q213且与上述位点连锁遗传的RS224048、RS224052、RS224057、RS10995307、RS10995281、RS7088592、RS224071、RS224031、RS224032、RS224033的变异，用于早期筛查汉族人群VKH综合征，为临床诊断和治疗提供依据。0009本发明的技术方案是0010用于检测VKH综合症的试剂盒，包含用于扩增位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12。
13、568393、RS12561798、RS76436269、RS3021304、RS442309和RS224058的基因片段的试剂的引物对，以及特异性检测个体基因型的SEQUENOMMASSARRAY单碱基延伸引物。0011所述基因片段的试剂的引物RS78377598基因片段的试剂的PCR引物对序列如SEQIDNO12所示；RS77258390基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO34所示；RS78597810基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO56所示；RS12568393基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO78所示；RS12561798基因片段的的PCR引物对序列如SE。
14、QIDNO910所示；RS76436269基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO1112所示；RS3021304基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO1314所示；RS442309基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO1516所示；RS224058基因片段的的PCR引物对序列如SEQIDNO1718所示。0012所述特异性检测个体基因型的SEQUENOMMASSARRAY单碱基延伸引物的序列如SEQIDNO1927所示。0013所述试剂盒还包括TAQ酶，SAP，SAPBUFFER，无酶水，以及位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568。
15、393、RS12561798、RS76436269、RS3021304、RS442309和RS224058的标准DNA样本。0014本发明的试剂盒中含有特异性扩增目的片段的PCR引物对、特异性检测个体基因说明书CN104164505A3/12页5型的SEQUENOMMASSARRAY单碱基延伸引物，以及用于PCR扩增和进行SEQUENOMMASSARRAY分型检测试剂盒的常规组件、试剂、操作步骤等。0015申请人在研究中发现，在汉族人中当位点RS78377598CT变异、RS77258390GA变异、RS78597810TC变异、RS12568393GA变异、RS12561798TC变异、RS。
16、76436269GA变异、以及连锁遗传位点RS117633859AG变异、RS12564219GA变异、RS12563505CT变异、RS34017352AC变异、RS114661385GA变异、RS117301158TA变异、RS115009271CA变异、RS76091599CG变异、RS78865162CT变异、RS78917656TG变异、RS6693659CA变异、RS12566159CT变异、RS117282985GC变异、RS3021304CG变异连锁遗传位点RS114800139GA变异、RS442309CT变异和/或RS224058GA变异以及连锁遗传位点RS224048GA。
17、变异、RS224052GT变异、RS224057CT变异、RS10995307TC变异、RS10995281TC变异、RS7088592AG变异、RS224071GA变异、RS224031TG变异、RS224032GA变异、RS224033CG变异，即上述33个位点之一发生变异，均不同程度地增加了VKH综合征的患病风险。0016本发明的测定方法用于测定来源于人的基因组DNA，临床取材样本来源广泛，如体液如血液、腹水和房水、组织细胞如皮肤组织、虹膜组织等，通过提取和纯化这些样本均可制备基因组DNA。0017本发明首次公开了上述多态性位点与VKH综合征的相关性，提供了一种预测VKH综合征易感性的试。
18、剂盒，该试剂盒可用于1此疾病的辅助诊断通过所述试剂盒明确受试者的这33个位点的基因型，预测受试者对VKH综合征的易感性。2指导个体化治疗，新药开发在临床实践和科研中，RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12561798、RS76436269，RS117633859、RS12564219、RS12563505、RS34017352、RS114661385、RS117301158、RS115009271、RS76091599、RS78865162、RS78917656、RS6693659、RS12566159、RS117282985；RS30。
19、21304RS114800139；RS442309和RS224058RS224048、RS224052、RS224057、RS10995307、RS10995281、RS7088592、RS224071、RS224031、RS224032、RS224033可用作药物设计的分子靶标的筛选，以帮助寻找具有调节这些基因表达的活性分子，促进新药开发。3为判断预后提供分子生物学依据。携带有上述位点危险等位基因的病人可能在一定程度上预后差于其他未携带有危险等位基因的病人。0018本发明所述试剂盒可对VKH综合征高危的人群进行早期的筛查、正确诊断、及时有效治疗，对可能发生的严重并发症尽早发现以及预防病变发展。
20、。附图说明0019图13是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS78377598位点的基因分型图谱；0020图46是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS77258390位点的基因分型图谱；0021图79是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS78597810位点的基因分型图谱；0022图1012是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS12568393位点的基因分型图谱；0023图1315是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS12561798位点的基因分型图谱；说明书CN104164505A4/12页60024图1618是。
21、SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS76436269位点的基因分型图谱；0025图1921是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS3021304位点的基因分型图谱；0026图2224是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS442309位点的基因分型图谱；0027图2527是SEQUENOMMASSARRAYSNP技术检测RS224058位点的基因分型图谱。具体实施方式0028本发明所用试剂均为市售产品，其中。乙二胺四乙酸二钠EDTA作为抗凝剂，QIAGENQIAAMPDNAMINIBLOODKIT购自德国QIAGEN公司为市售的快速高效抽提基因组DN。
22、A的试剂盒。0029实施例1样本收集和基因组DNA的提取0030样本来自于重庆医科大学附属第一医院，共收集VKH患者1559例，其中男性占550，女性占450；正常对照者5640例，其中男性占508，女性占492。所有受试者均为汉族，且自愿签署知情同意书，这一研究也得到了伦理委员会批准。0031根据QIAGENQIAAMPDNAMINIBLOODKIT试剂盒购自德国QIAGEN公司说明书提供的操作步骤，制备人外周血基因组DNA。0032实施例2包括RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12561798、RS76436269，RS117633。
23、859、RS12564219、RS12563505、RS34017352、RS114661385、RS117301158、RS115009271、RS76091599、RS78865162、RS78917656、RS6693659、RS12566159、RS117282985；RS3021304RS114800139；RS442309和RS224058RS224048、RS224052、RS224057、RS10995307、RS10995281、RS7088592、RS224071、RS224031、RS224032、RS224033单核苷酸多态性DNA片段的PCR扩增和基因型分析0033本。
24、发明采用SEQUENOMMASSARRAYSNP检测技术对位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12561798、RS76436269、RS3021304、RS442309和RS224058变异进行检测如下所示。00341用SEQIDNO12、SEQIDNO34、SEQIDNO56、SEQIDNO78、SEQIDNO910、SEQIDNO1112、SEQIDNO1314、SEQIDNO1516、SEQIDNO1718所示的引物进行包含特异位点的目的基因片段；0035PCR扩增944MIN；9420S，5630S，721MIN，共45个循。
25、环；725MIN；4保持。每个反应体积为5UL，包括2ULTAQ酶，15UL无酶水，PCR上游和下游引物各025UL，1ULDNA样本溶液浓度为50NG/UL。00362PCR产物碱性磷酸化处理；0037在PCR结束后，将PCR产物用SAPSHRIMPALKALINEPHOSPHATASE,虾碱性磷酸酶处理，以去除体系中游离的DNTPS。0038配制碱性磷酸酶处理反应液，SAPMIX。每个反应体积为2UL，其中包括153UL无酶水，017ULSAPBUFFER，03ULSAPENZYME。0039反应条件3740MIN，855MIN，4保持，启动PCR仪进行碱性磷酸酶处理。00403用特异的单。
26、碱基延伸引物包括SEQIDNO28、SEQIDNO29、SEQIDNO30、SEQIDNO31、SEQIDNO32、SEQIDNO33、SEQIDNO34、SEQIDNO35、SEQIDNO36说明书CN104164505A5/12页7进行单碱基延伸；0041将2UL单碱基延伸反应液加入上述每个反应体系中，按照以下PCR反应条件进行反应0042I94FOR30S，II94FOR5S，III52FOR5S，IV80FOR5S，VGOTOIII,4MORETIMES，VIGOTOII,39MORETIMES，VII72FOR3MIN，4保持。00434树脂纯化，芯片点样，质谱分析，检测结果用TYP。
27、ER40软件SEQUENOM分型并输出结果见图127。0044采用如下PCR引物对AI以及单碱基延伸引物AI根据上述方法进行分型。0045PCR引物对ARS78377598如SEQIDNO12所示0046F5ACGTTGGATGGAGACATTTATCAGTGCAGG30047R5ACGTTGGATGCTCCAAGAAGAAGGGTATAG30048PCR引物对BRS77258390如SEQIDNO34所示0049F5ACGTTGGATGAAGAGGCAAAATGTCATCCC30050R5ACGTTGGATGGAAAAATACAGCTGTGTGTG30051PCR引物对CRS78597810。
28、如SEQIDNO56所示0052F5ACGTTGGATGATGACTGACTTGAAAACAGC30053R5ACGTTGGATGGGAATGATGAACAACCCCTG30054PCR引物对DRS12568393如SEQIDNO78所示0055F5ACGTTGGATGGTTGATAGTGGTGATTTGTC30056R5ACGTTGGATGGAACTGAATTCTTAAGAAGC30057PCR引物对ERS12561798如SEQIDNO910所示0058F5ACGTTGGATGGTTGATAGTGGTGATTTGTC30059R5ACGTTGGATGGAACTGAATTCTTAAGAAGC。
29、30060PCR引物对FRS76436269如SEQIDNO1112所示0061F5ACGTTGGATGCAGATTACAACTAGCCAAGG30062R5ACGTTGGATGGAGGACAATAAAAGCTCCAC30063PCR引物对GRS3021304如SEQIDNO1314所示0064F5ACGTTGGATGCCTAGTCTCACTGTCACCTC30065R5ACGTTGGATGTTGGTAAGGCAAGTGTCATA30066PCR引物对HRS442309如SEQIDNO1516所示0067F5ACGTTGGATGTCTCTGTGAAGTGAAGGGAC30068R5ACGTTG。
30、GATGGTTCTGTTCTTTGCAGACCG30069PCR引物对IRS224058如SEQIDNO1718所示0070F5ACGTTGGATGTAGGCACGTGATAGTGATTC30071R5ACGTTGGATGTGGGTAGTCTAAATCCCAGG30072所得到的扩增序列如下其中序列中的方框中表示碱基发生变异0073序列28RS78377598126BP0074方框处为SNP0075AAACCAAGATGTTCAACATGTCCAGACAAGTAAATCTAAGACTAGAGACATTTATCAGTGCAGGATACC说明书CN104164505A6/12页8TCCCTATCT。
31、TCACGATTATCTGCTAACAGCTATACCCTTCTTCTTGGAGAAATTGC0076序列29RS7725839096BP0077方框处为SNP0078AGGACATTTTAAGAGGCAAAATGTCATCCCATTATACACACACACATACCACATGCACGCACATGCACACACAGCTGTATTTTTCTATATACAGT0079序列30RS78597810114BP0080方框处为SNP0081TAATCTAAAAATGACTGACTTGAAAACAGCTTGTATTTAATTTAAAATGATGGGGAATTTCACAAATTGGTTACATTTTAAGT。
32、CAGGGGTTGTTCATCATTCCAAGAATGTAC0082序列31RS12568393112BP0083方框处为SNP0084CTGGAATCTAGTTGATAGTGGTGATTTGTCTAAGATTGTTTAATACCTTCAGCTCAAAAATTTGTACAGAGGTGAAAATTAGCTTCTTAAGAATTCAGTTCAGAAACGTTA0085序列32RS12561798112BP0086方框处为SNP0087CTGGAATCTAGTTGATAGTGGTGATTTGTCTAAGATTGTTGTAATACCTTCAGCTCAAAAATTTGACAGAGGTGAAAATTAGC。
33、TTCTTAAGAATTCAGTTCAGAAACGTTA0088序列33RS76436269101BP0089方框处为SNP0090GGAAAGGTTACAGATTACAACTAGCCAAGGAAAGAAGTTCACAGGGCAAGTCAGTCCCGAAATAACAAATGTGGAGCTTTTATTGTCCTCTTCCTGTGGA0091序列34RS117633859119BP0092方框处为SNP0093GGAGTGAGCCATCGTGCCAGGCCATAAATGGGATTTTTGATGAACCATTACTTTTTTTTTTTAAACATTGGATAAAATTTATATGTAAAATTTTA。
34、CTTGATTTCTTTCAGATTTGGTT0094序列35RS302130488BP0095方框处为SNP0096AAACCAGTACCCTAGTCTCACTGTCACCTCCCCAGCCTTGATGCTCCTCCTTACCTATATGACACTTGCCTTACCAACAGATGATTT0097序列36RS44230998BP0098方框处为SNP0099TTGGTCAGCATCTCTGTGAAGTGAAGGGACTACCCAGCACACATGGCCTCTCTGCCCTAGAAGAGCCCGGTCTGCAAAGAACAGAACTTGACATAAA说明书CN104164505A7/12页90。
35、100序列37RS224058106BP0101方框处为SNP0102TGGGATGTAGTAGGCACGTGATAGTGATTCAAAGATTAGTCTCCAAAGTTAAATTCTGCTGTTCGTAAAAGTGGCCCTGGGATTTAGACTACCCATGATCCTTGT0103延伸引物ARS78377598如SEQIDNO19所示01045CCCTGCAGGATACCTCCC30105延伸引物BRS77258390如SEQIDNO20所示01065CCATTATACACACACACATAC30107延伸引物CRS78597810如SEQIDNO21所示01085TGATGGGGAAT。
36、TTCACAA30109延伸引物DRS12568393如SEQIDNO22所示01105AGTGGTGATTTGTCTAAGATTGTT30111延伸引物ERS12561798如SEQIDNO23所示01125AGCTAATTTTCACCTCTGT30113延伸引物FRS76436269如SEQIDNO24所示01145AAACGAAGTTCACAGGGCA30115延伸引物HRS3021304如SEQIDNO25所示01165ACTTGATGCTCCTCCT30117延伸引物IRS442309如SEQIDNO26所示01185GAATTGAAGGGACTACCCA30119延伸引物JRS22。
37、4058如SEQIDNO27所示01205CCCAGGGCCACTTTTAC30121统计方法利用SPSS130软件进行分析，检测HARDYWEINBERG平衡，数量变量采用T检验，质量变量采用卡方检验。双侧P005认为有统计学意义的差异。结果如下图127为SNP基因分型结果图0122SNP位点多态性与VKH综合征密切相关0123说明书CN104164505A8/12页100124在未考虑VKH综合征传统危险因子的情况下，RS78377598危险等位基因T的携带者对VKH综合征的患病风险增至167倍；RS77258390危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至181倍；RS78597。
38、810危险等位基因C的携带者对VKH综合征的患病风险增至181倍；RS12568393危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至184倍；RS12561798危险等位基因C的携带者对VKH综合征的患病风险增至184倍；RS76436269危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至183倍；RS3021304危险等位基因G的携带者对VKH综合征的患病风险增至297倍；RS442309危险等位基因T的携带者对VKH综合征的患病风险增至137倍；RS224058危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至137倍。其他与上述位点连锁遗传的SNP位点与VKH综合征的相关性详见上说。
39、明书CN104164505A109/12页11表。0125实施例4检测试剂盒0126本发明试剂盒中的全部组分、含量和使用方法如下0127PCR扩增试剂50人份0128其中，引物对AI分别为SEQIDNO12SEQIDNO1920所示的引物。引物AI为PCR扩增引物，AI为特异性延伸引物。0129组分浓度体积TAQ酶4MLSAP虾碱性磷酸酶80ULSAPBUFFER1060UL单碱基延伸反应液500ULPCR引物对ARS7837759810UM400ULPCR引物对BRS7725839010UM400ULPCR引物对CRS7859781010UM400ULPCR引物对DRS1256839310U。
40、M400ULPCR引物对ERS1256179810UM400ULPCR引物对FRS7643626910UM400ULPCR引物对GRS302130410UM400ULPCR引物对HRS44230910UM400ULPCR引物对IRS22405810UM400UL延伸引物ARS7837759810UM400UL延伸引物BRS7725839010UM400UL延伸引物CRS7859781010UM400UL延伸引物DRS1256839310UM400UL延伸引物ERS1256179810UM400UL延伸引物FRS7643626910UM400UL说明书CN104164505A1110/12页12。
41、0130延伸引物GRS302130410UM400UL延伸引物HRS44230910UM400UL延伸引物IRS22405810UM400UL无酶水4ML0131标准DNA样品样本是由重庆医科大学附属第一医院提供，收集的病例和正常自愿者的静脉血样，经过QIAGENQIAAMPDNAMINIBLOODKIT购自德国QIAGEN公司试剂盒抽提的DNA溶液样品。0132组分浓度体积RS78377598位点AA基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS78377598位点AG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS78377598位点GG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS7725839。
42、0位点AA基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS77258390位点AG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS77258390位点GG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS78597810位点CC基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS78597810位点CT基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS78597810位点TT基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS12568393位点AA基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS12568393位点AG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS12568393位点GG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS1。
43、2561798位点CC基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS12561798位点CT基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS12561798位点TT基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS76436269位点AA基因型的标准DNA50NG/UL10UL说明书CN104164505A1211/12页13RS76436269位点AG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS76436269位点GG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS3021304位点CC基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS3021304位点CG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS302130。
44、4位点GG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS442309位点CC基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS442309位点CT基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS442309位点TT基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS224058位点AA基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS224058位点AG基因型的标准DNA50NG/UL10ULRS224058位点GG基因型的标准DNA50NG/UL10UL0133本发明的检测方法可用于分析位于染色体区域1P312的SNP位点RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12。
45、561798、RS76436269，以及位于1P312且与上述位点连锁遗传的RS117633859、RS12564219、RS12563505、RS34017352、RS114661385、RS117301158、RS115009271、RS76091599、RS78865162、RS78917656、RS6693659、RS12566159、RS117282985；位于染色体区域6P213的SNP位点RS3021304以及连锁遗传位点RS114800139；和位于染色体区域10Q213的SNP位点RS442309和RS224058以及位于10Q213且与上述位点连锁遗传的RS224048、R。
46、S224052、RS224057、RS10995307、RS10995281、RS7088592、RS224071、RS224031、RS224032、RS224033变异SNP位点的多态性，应用在VKH综合征的辅助性诊断和对个体VKH综合征患病风险进行评估，以利于开展VKH综合征的早期干预和治疗。在未考虑VKH综合征传统危险因子的情况下，RS78377598危险等位基因T的携带者对VKH综合征的患病风险增至167倍；RS77258390危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至181倍；RS78597810危险等位基因C的携带者对VKH综合征的患病风险增至181倍；RS1256839。
47、3危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至184倍；RS12561798危险等位基因C的携带者对VKH综合征的患病风险增至184倍；RS76436269危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至183倍；RS3021304危险等位基因G的携带者对VKH综合征的患病风险增至297倍；RS442309危险等位基因T的携带者对VKH综合征的患病风险增至137倍；RS224058危险等位基因A的携带者对VKH综合征的患病风险增至137倍。其他与上述位点连锁遗传的SNP位点与VKH综合征的相关性详见上表。0134利用本发明阐述的VKH综合征易感区域/位点的多态性，作为疾病生物学标志之一。
48、。RS78377598、RS77258390、RS78597810、RS12568393、RS12561798、RS76436269，说明书CN104164505A1312/12页14RS117633859、RS12564219、RS12563505、RS34017352、RS114661385、RS117301158、RS115009271、RS76091599、RS78865162、RS78917656、RS6693659、RS12566159、RS117282985；RS3021304RS114800139；RS442309和RS224058RS224048、RS224052、RS224。
49、057、RS10995307、RS10995281、RS7088592、RS224071、RS224031、RS224032、RS224033变异可用作药物设计的分子靶标，以帮助寻找具有调节这些基因表达的活性分子，促进新药开发。0135本发明公开了中国汉族人VKH综合征相关的易感区域/位点，并利用这些位点的特殊性开发了VKH综合征筛查的试剂盒。且在鉴定受试者特定位点的基因型时，临床采血量少至1ML，单个PCR反应体系为5UL，所需试剂少，本试剂盒灵敏度高，只需要少量DNA样本单次实验只需1UL浓度为50NG/UL的DNA稀释液就足以测定所述位点的变异，达到早期筛查的目的见附图127。说明书CN104164505A141/9页1500010002序列表CN104164505A152/9页160003序列表CN104164505A163/9页170004序列表CN104164505A174/9页180005序列表CN104164505A185/9页190006序列表CN104。