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1、10申请公布号CN104096153A43申请公布日20141015CN104096153A21申请号201410380587322申请日20140804A61K36/9062200601A61P27/1020060171申请人毕宏生地址250002山东省济南市英雄山路48号山东施尔明眼科医院72发明人毕宏生季鹏郭俊国吴建锋74专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人龚燮英54发明名称一种包含多种植物活性成分的药物组合物及其制备方法和用途57摘要本发明涉及一种包含多种植物活性成分的药物组合物及其制备方法和用途，所述药物组合物以重量份计，包括肉苁蓉提取物39份、熟地提取物10。
2、20份、淫羊藿提取物514份、益智仁提取物711份、茯苓提取物1119份、知母提取物713份，通过采用合适的提取方法，而使得包含这些活性成分的药物组合物具有良好的治疗和/或预防近视的效果，从医药临床治疗领域具有良好的应用前景和工业化潜力。51INTCL权利要求书2页说明书17页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书17页10申请公布号CN104096153ACN104096153A1/2页21一种用来防治近视的药物组合物，所述药物组合物以重量份计，包括如下组分2如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述肉苁蓉提取物的提取方法如下A1将干燥肉苁蓉加入到水中，在一定。
3、温度下进行煎煮，然后过滤得到煎液I和残渣；A2将所述残渣加入到水中，在一定温度进行煎煮，过滤得到煎液II；A3将煎液I和煎液II进行合并，然后减压浓缩，得到清膏；A4向所述清膏中加入乙醇，得到清膏乙醇溶液，然后静置分层，取上清液，并浓缩回收乙醇后，所得膏状物即为所述肉苁蓉提取物。3如权利要求12任一项所述的药物组合物，其特征在于所述熟地提取物的提取方法如下B1将熟地充分干燥至恒重，然后研磨粉碎，过50目筛，得到熟地粉末；B2向熟地粉末中加入无水乙醇和丙酮的混合有机溶剂，在一定温度和一定功率下，超声提取46小时，过滤得到滤液，将滤液减压浓缩，得到浓缩膏；B3向浓缩膏中加入乙酸乙酯，溶解充分，然后。
4、加入到硅胶柱中，其中硅胶柱中的硅胶为300400目硅胶，且在装柱前于密封容器中用乙醚充分浸泡2030小时，使硅胶充分膨胀；B4先使用醇的水溶液洗脱硅胶柱，然后有机溶剂梯度洗脱硅胶柱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述熟地提取物。4如权利要求13任一项所述的药物组合物，其特征在于所述淫羊藿提取物是按照如下方法提取得到的，或者说其提取方法如下C1将淫羊藿干燥、粉碎，过100目筛，得到淫羊藿粉末；C2将淫羊藿粉末加入丙酮中，再加入二氧化碳，密闭加压，形成膨胀体系，在一定温度下进行膨胀溶剂萃取，萃取12小时后，泻压至常压并自然冷却至室温，过滤得到萃取液，减压浓缩萃取液，得到粘稠膏；C3将粘稠膏溶。
5、解于无水乙醇中，过色谱柱，其中所述色谱柱自上而下填充柱体积35的300400目中性硅胶、柱体积25的200300目中性氧化铝和柱体积20的AB8吸附树脂，使用体积比为12的丙酮乙酸乙酯进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述淫羊藿提取物。5如权利要求14任一项所述的药物组合物，其特征在于所述益智仁提取物的提取方法如下D1将益智仁干燥、粉碎，加入质量百分比浓度为50的乙醇水溶液中，并以乙酸作权利要求书CN104096153A2/2页3为抽提助剂，进行索氏抽提12小时；然后过滤，得到滤液和固体不溶物；D2将固体不溶物装入超声波萃取仪中，以乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂作为萃取溶剂，超声萃取2。
6、030分钟，然后加入质量百分比浓度为510的碳酸钠水溶液，充分振荡，离心分离，得到上层清液；D3将步骤D1的滤液和步骤D2的上层清液进行合并，减压浓缩得到初提膏，将该初提膏用无水乙醇溶解后，过D101大孔吸附树脂柱，以石油醚和正己醇的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述益智仁提取物。6根据权利要求15任一项所述的药物组合物，其特征在于所述茯苓提取物的提取方法如下E1将茯苓干燥、粉碎，过100目筛，得到茯苓粉末；E2将茯苓粉末用质量百分浓度为7080的乙醇水溶液在回流温度下回流提取12小时，然后过滤，得到滤液；E3将滤液在8090烘箱中搅拌挥发，直至无明显的乙醇味道为止，得到浓。
7、缩后的处理液；E4向处理液中加入水，充分搅拌均匀，得到水相I，然后加入丙酮萃取，得到丙酮相和水相II；将水相II用正己烷萃取，得到正己烷相和水相III；将水相III用异丙醇萃取，得到异丙醇相和水相VI；E5将异丙醇相减压浓缩，所得膏状物即为所述茯苓提取物。7根据权利要求16任一项所述的药物组合物，其特征在于所述知母提取物的提取方法如下F1将知母干燥、粉碎，过50目筛，得到知母粉末；F2将知母粉末加入到乙酸乙酯中，回流提取051小时，然后自然冷却至室温，加入质量百分浓度为12的NAHCO3水溶液，搅拌，分层，得到水相和乙酸乙酯相；F3用水洗涤乙酸乙酯相13次，然后将乙酸乙酯相继续用质量百分浓度为。
8、50的乙醇水溶液再次洗涤13次，静置得到水相和有机相，将有机相用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩，所得膏状物即为所述知母提取物。8根据权利要求17任一项所述的药物组合物，其特征在于还包含稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、絮凝剂、反絮凝剂、甜味剂、芳香剂、调味剂、稳定剂、赋形剂或防腐剂中的一种或任意几种。9如权利要求18任一项所述的药物组合物的制备方法，所述方法包括如下步骤1分别称取上述重量份的肉苁蓉提取物、熟地提取物、淫羊藿提取物、益智仁提取物、茯苓提取物和知母提取物，然后进行混合，得到混合物；2向所得混合物中加入为混合物重量的25倍重量的去离子水，并调节PH值为7173，搅。
9、拌均匀，然后静置、过滤，得到滤液；得到所述滤液后，分装得到口服液，或者将其浓缩至稠膏，然后制粒、干燥，装入胶囊得到胶囊剂，或者装袋则得到颗粒剂，或者所述稠膏制成各种丸剂、片剂、混悬剂、乳剂、滴剂、药酒或酊剂等。10权利要求18任一项所述的药物组合物在制备用来防治近视的药物中的用途。权利要求书CN104096153A1/17页4一种包含多种植物活性成分的药物组合物及其制备方法和用途技术领域0001本发明涉及一种防治近视的包含中药活性成分提取物的药物组合物，更特别地涉及一种包含多种植物即肉苁蓉、熟地、淫羊藿、益智仁、茯苓、知母的各自提取物的药物组合物及其制备方法和用途，属于天然植物的活性成分提取及。
10、其应用领域。背景技术0002近视是指眼在自然状态下，由于眼轴的延长或角膜晶状体曲率的原因导致平行光线在视网膜前方聚焦，进而导致视物模糊的一种屈光不正。0003随着时代的发展和科技的进步，随之带来的电脑、智能手机的广泛使用、学生课业负担的加重等诸多因素，导致我国近视眼人数已居世界第一，尤以青少年是近视的高发群体，如何预防和减缓青少年近视已成为重大的医学和社会问题。0004目前青少年期近视的发病机理不明，传统医学认为“阳不足，阴有余，病于火少者也，故光华不能发远，而收敛近耳”审视瑶函。0005而现代医学认为该时期处于青春发育期，身体处于快速发育阶段，在视近负荷过重等因素共同作用下可能促进眼轴过快增。
11、长使近视度增加，有前期临床实践表明采用温肾益精法可延缓青少年近视的发展，但机理尚未明确。0006目前，近视治疗通常采用框架眼镜、角膜接触镜、手术治疗以及针灸、中药等方法。一般认为，在医学验光后充分考虑视觉功能并给予适当的近视矫正会减缓近视发展，已在临床上得到认可。0007框架眼镜在视力的矫正方面应用最为广泛，但由于存在镜眼距离、周边像差大和视野受限等缺陷，框架眼镜并不是最佳的近视矫正选择。0008硬性透气性角膜接触镜对青少年近视的发展有抑制作用，但停戴后近视屈光度有加速发展的趋势。0009手术治疗具有严格的适应征和不同程度的并发症，不具有普遍性和广泛适用性。0010祖国医学临床研究证实针刺治疗。
12、近视具有良好的疗效，但是部分患者对治疗方法接受度低，也存在一定的风险。0011迄今为止，尚未有使用天然植物活性成分来防治近视且取得显著治疗疗效的报道。因此，如何从天然植物中提取活性成分，并将其用来防治近视，正是目前该领域内的一个重要发展方向和关注焦点。发明内容0012有鉴于此，为了得到一种能够有效防治近视的包含天然植物活性成分提取物的药物组合物，以及研究如何进行活性成分的提取等诸多方面，本发明人对此进行了深入研究，在付出了大量创造性劳动后，从而完成了本发明。0013本发明完成的基础是通过参阅古代文献，并结合多年临床经验，认为肾气不足、说明书CN104096153A2/17页5天癸未至、肝肾同源。
13、、气血同源、肝肾不足亦易出现气血亏虚，不能上濡以目，目失所养，阴精不能收敛出现短视，故青少年近视病机多为肾阳不足，精血亏虚所致，如禀赋不足，阳衰过阴以致光华不能远及，而视近不能视远，正如审视瑶函说“阳不足，阴有余，病于火少者也，故光华不能发远，而收敛近耳”。0014而本发明人发现，当采用特定的提取方法时，可从多种天然植物中提取得到活性成分，当使用这些活性成分用来防治近视时，取得了优异的临床治疗和/或防治效果，这是出人意料的。0015具体而言，本发明主要涉及如下几个方面。0016第一个方面，本发明涉及一种用来防治近视的药物组合物，所述药物组合物以重量份计，包括如下组分00170018在本发明的所。
14、述药物组合物中，所述肉苁蓉提取物的重量份为39份，例如可为3份、4份、5份、6份、7份、8份或9份。0019在本发明的所述药物组合物中，所述熟地提取物的重量份为1020份，例如可为10份、12份、14份、16份、18份或20份。0020在本发明的所述药物组合物中，所述淫羊藿提取物的重量份为514份，例如可为5份、7份、9份、11份、13份或14份。0021在本发明的所述药物组合物中，所述益智仁提取物的重量份为711份，例如可为7份、8份、9份、10份或11份。0022在本发明的所述药物组合物中，所述茯苓提取物的重量份为1119份，例如可为11份、13份、15份、17份或19份。0023在本发明。
15、的所述药物组合物中，所述知母提取物的重量份为713份，例如可为7份、8份、9份、10份、11份、12份或13份。0024在本发明的所述药物组合物中，所述肉苁蓉提取物是按照如下方法提取得到的，或者说其提取方法如下0025A1将干燥肉苁蓉加入到水中，在一定温度下进行煎煮，然后过滤得到煎液I和残渣；0026A2将所述残渣加入到水中，在一定温度进行煎煮，过滤得到煎液II；0027A3将煎液I和煎液II进行合并，然后减压浓缩，得到清膏；0028A4向所述清膏中加入乙醇，得到清膏乙醇溶液，然后静置分层，取上清液，并浓缩回收乙醇后，所得膏状物即为所述肉苁蓉提取物。0029其中，所述步骤A1中的干燥肉苁蓉与水。
16、的重量比为1410，例如可为14、16、18或110。说明书CN104096153A3/17页60030所述煎煮温度为90100，例如可为90、95或100。0031煎煮时间为052小时，例如可为05小时、1小时、15小时或2小时。0032其中，所述步骤A2中的残渣与水的重量比为148，例如可为14、16或18。0033所述煎煮温度为90100，例如可为90、95或100。0034煎煮时间为0515小时，例如可为05小时、1小时或15小时。0035其中，所述步骤A3中的减压浓缩的程度，应使得所得清膏相对于水的密度为113，例如可为1、11、12或13。0036其中，所述步骤A4中，所加入乙醇的。
17、质量浓度为9298，例如可为92、94、96或98。0037所加入乙醇的量应使得所得清膏乙醇溶液的醇含量依重量百分比计为5862，例如可为58、60或62。0038静置分层的时间为2024小时，例如可为20小时、22小时或24小时。0039在本发明的所述药物组合物中，所述熟地提取物是按照如下方法提取得到的，或者说其提取方法如下0040B1将熟地充分干燥至恒重，然后研磨粉碎，过50目筛，得到熟地粉末；0041B2向熟地粉末中加入无水乙醇和丙酮的混合有机溶剂，在一定温度和一定功率下，超声提取46小时，过滤得到滤液，将滤液减压浓缩，得到浓缩膏；0042B3向浓缩膏中加入乙酸乙酯，溶解充分，然后加入到。
18、硅胶柱中，其中硅胶柱中的硅胶为300400目硅胶，且在装柱前于密封容器中用乙醚充分浸泡2030小时，使硅胶充分膨胀；0043B4先使用醇的水溶液洗脱硅胶柱，然后有机溶剂梯度洗脱硅胶柱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述熟地提取物。0044其中，所述步骤B2中的无水乙醇和丙酮的体积比为137，例如可为13、14、15、16或17。0045所述熟地粉末与所述混合有机溶剂即无水乙醇和丙酮的混合有机溶剂的质量体积比为135G/ML，即每1G熟地粉末使用35ML所述混合有机溶剂，例如可为13G/ML、14G/ML或15G/ML。0046所述提取温度即“一定温度”为4060，例如可为40、45、50。
19、、55或60。0047所述提取功率为100140W，例如可为100W、120W或140W。0048其中，所述步骤B3中的乙酸乙酯用量并无特别的限定，只要能够将浓缩膏充分溶解即可，为了后续处理方便考虑，其量优选为恰恰将所述浓缩膏刚好溶解为宜。0049其中，所述步骤B4中的醇的水溶液是C14醇的水溶液，其质量百分浓度为2040，例如可为20、30或40；优选为质量百分浓度为30的正丙醇水溶液；所述醇水溶液的使用量为硅胶柱床层体积的35倍，例如可为3倍、4倍或5倍。0050所述步骤B4中的有机溶剂为正己烷和丙酮的不同体积比的混合液。0051所述步骤B4中的梯度洗脱具体为使用等体积的正己烷和丙酮的体积。
20、比分别为101、71、51、31、11的混合液洗脱硅胶柱，收集51、31的洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述熟地提取物。说明书CN104096153A4/17页70052每个不同体积比的正己烷和丙酮的混合液的使用量均为硅胶柱床层体积的24倍，优选为3倍。0053在本发明的所述药物组合物中，所述淫羊藿提取物是按照如下方法提取得到的，或者说其提取方法如下0054C1将淫羊藿干燥、粉碎，过100目筛，得到淫羊藿粉末；0055C2将淫羊藿粉末加入丙酮中，再加入二氧化碳，密闭加压，形成膨胀体系，在一定温度下进行膨胀溶剂萃取，萃取12小时后，泻压至常压并自然冷却至室温，过滤得到萃取液，减压浓缩萃取液，得。
21、到粘稠膏；0056C3将粘稠膏溶解于无水乙醇中，过色谱柱，其中所述色谱柱自上而下填充柱体积35的300400目中性硅胶、柱体积25的200300目中性氧化铝和柱体积20的AB8吸附树脂，使用体积比为12的丙酮乙酸乙酯进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述淫羊藿提取物。0057其中，所述步骤C2中以毫升ML计的丙酮与以克G计的二氧化碳的比为158，例如可为15、16、17或18。0058以克G计的所述淫羊藿粉末与以毫升ML计的丙酮的比为11216，例如可为112、114或116。0059进行膨胀溶剂萃取的温度为7585，例如可为75、80或85。0060其中，所述步骤C3中的无水乙醇。
22、的用量并无特别的限定，只要能够将粘稠膏充分溶解即可，为了后续处理方便考虑，其量优选为恰恰将所述粘稠膏刚好溶解为宜。0061在本发明的所述药物组合物中，所述益智仁提取物是按照如下方法提取得到的，或者说其提取方法如下0062D1将益智仁干燥、粉碎，加入质量百分比浓度为50的乙醇水溶液中，并以乙酸作为抽提助剂，进行索氏抽提12小时；然后过滤，得到滤液和固体不溶物；0063D2将固体不溶物装入超声波萃取仪中，以乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂作为萃取溶剂，超声萃取2030分钟，然后加入质量百分比浓度为510的碳酸钠水溶液，充分振荡，离心分离，得到上层清液；0064D3将步骤D1的滤液和步骤D2的上层清液进行。
23、合并，减压浓缩得到初提膏，将该初提膏用无水乙醇溶解后，过D101大孔吸附树脂柱，以石油醚和正己醇的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述益智仁提取物。0065其中，所述步骤D1中，益智仁与质量百分比浓度为50的乙醇水溶液的质量比为11015，例如可为110、112、114或115。0066益智仁与乙酸的质量比为10105，例如可为101、102、103、104或105。0067其中，所述步骤D2中，乙酸乙酯和正己烷的体积比为113，例如可为11、12或13。0068乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂与碳酸钠水溶液的体积比为10408，例如可为104、106或108。0069所述超声波萃。
24、取仪是本领域中的公知萃取装置，在此不再赘述。0070其中，所述步骤D3中，乙醇的用量并无特别的限定，只要能够将初提膏充分溶说明书CN104096153A5/17页8解即可，为了后续处理方便考虑，其量优选为恰恰将所述初提膏刚好溶解为宜。0071在石油醚和正己醇的混合溶剂中，石油醚和正己醇的体积比为10406，优选为105。0072在本发明的所述药物组合物中，所述茯苓提取物是按照如下方法提取得到的，或者说其提取方法如下0073E1将茯苓干燥、粉碎，过100目筛，得到茯苓粉末；0074E2将茯苓粉末用质量百分浓度为7080的乙醇水溶液在回流温度下回流提取12小时，然后过滤，得到滤液；0075E3将滤。
25、液在8090烘箱中搅拌挥发，直至无明显的乙醇味道为止，得到浓缩后的处理液；0076E4向处理液中加入水，充分搅拌均匀，得到水相I，然后加入丙酮萃取，得到丙酮相和水相II；将水相II用正己烷萃取，得到正己烷相和水相III；将水相III用异丙醇萃取，得到异丙醇相和水相VI；0077E5将异丙醇相减压浓缩，所得膏状物即为所述茯苓提取物。0078其中，所述步骤E2中的乙醇水溶液的用量并无特别的限定，可根据具体需要进行合适的选择，例如其与茯苓粉末的质量比可为20501。0079其中，所述步骤E4中，加入处理液中的水的质量为处理液质量的410倍，例如可为4倍、6倍、8倍或10倍。0080丙酮与水相I的体积。
26、比、正己烷与水相II的体积比、异丙醇与水相III的体积比均为10515，例如可为105、11或115。0081在本发明的所述药物组合物中，所述知母提取物是按照如下方法提取得到的，或者说其提取方法如下0082F1将知母干燥、粉碎，过50目筛，得到知母粉末；0083F2将知母粉末加入到乙酸乙酯中，回流提取051小时，然后自然冷却至室温，加入质量百分浓度为12的NAHCO3水溶液，搅拌，分层，得到水相和乙酸乙酯相；0084F3用水洗涤乙酸乙酯相13次，然后将乙酸乙酯相继续用质量百分浓度为50的乙醇水溶液再次洗涤13次，静置得到水相和有机相，将有机相用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩，所得膏状物即为所述知。
27、母提取物。0085其中，在步骤F2中，知母粉末与乙酸乙酯的质量比为14060，例如可为140、150或160。0086乙酸乙酯与NAHCO3水溶液的体积比为113，例如可为11、12或13。0087其中，在步骤F3中，水与乙酸乙酯相的体积比、乙醇水溶液与乙酸乙酯相的体积比均为112。0088本发明的药物组合物除包含上述肉苁蓉提取物、熟地提取物、淫羊藿提取物、益智仁提取物、茯苓提取物和知母提取物外，还可以根据需要，如制剂形式的不同而包含稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、絮凝剂、反絮凝剂、甜味剂、芳香剂、调味剂、稳定剂、赋形剂或防腐剂中的一种或任意几种。0089本发明所述药物。
28、组合物可制成多种制剂形式，例如可为颗粒剂、口服液、浓缩丸、滴丸、胶囊剂、片剂、散剂、胶囊剂、水丸剂、蜜丸剂、混悬剂、乳剂、滴剂、药酒或酊剂。说明书CN104096153A6/17页90090第二个方面，本发明涉及用来防治近视的上述药物组合物的制备方法，所述方法包括如下步骤00911分别称取上述重量份的肉苁蓉提取物、熟地提取物、淫羊藿提取物、益智仁提取物、茯苓提取物和知母提取物，然后进行混合，得到混合物；00922向所得混合物中加入为混合物重量的25倍重量的去离子水，并调节PH值为7173，搅拌均匀，然后静置、过滤，得到滤液；0093而得到所述滤液后，分装则得到口服液，或者将其浓缩至稠膏，然后制。
29、粒、干燥，装入胶囊即得胶囊剂，装袋则得到颗粒剂，也可将所述稠膏制成各种丸剂、片剂、混悬剂、乳剂、滴剂、药酒或酊剂等。0094其中，步骤2中对于PH值调节可使用食品领域中的可食用酸或可食用碱来进行调节，这些物质都是公知的常规食用物质，在此不再赘述。0095第三个方面，本发明涉及上述制备方法得到的口服液。0096第四个方面，本发明涉及上述药物组合物在防治近视方面的用途，也即在制备用来防治近视的药物中的用途。0097通过研究，本发明人发现，本发明的药物组合物对于青少年近视患者具有良好的防治和/或治疗作用，同时依从性好、携带方便、植物提取从而安全无毒，具有良好的治疗价值和应用潜力。具体实施方式0098。
30、下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。0099其中，在所有实施例和对比例中，所使用的各种提取物均为提取制备例中的相应提取物。0100制备例1肉苁蓉提取物的制备0101A1将1重量份的干燥肉苁蓉加入到7重量份的水中，在95温度下煎煮1小时，然后过滤得到煎液I和残渣；0102A2将所述残渣加入到水中，其中残渣与水的重量为16，在100煎煮1小时，过滤得到煎液II；0103A3将煎液I和煎液II进行合并，然后减压浓缩，得到相对于水的密度为12的清膏；0104A4向所。
31、述清膏中加入质量百分浓度为95的乙醇，得到其中醇的重量百分含量为60的清膏乙醇溶液，然后静置分层24小时，取上清液，并浓缩回收乙醇后，所得膏状物即为肉苁蓉提取物，命名为RCR。0105制备例2熟地提取物的制备0106B1将熟地充分干燥至恒重，然后研磨粉碎，过50目筛，得到熟地粉末；0107B2向熟地粉末中加入无水乙醇和丙酮的混合有机溶剂无水乙醇与丙酮的体积比为15，熟地粉末与混合有机溶剂的质量体积比为14G/ML，在50和120W的功率下，超声提取5小时，过滤得到滤液，将滤液减压浓缩，得到浓缩膏；说明书CN104096153A7/17页100108B3向浓缩膏中加入乙酸乙酯，使得浓缩膏恰恰溶解。
32、充分为止，然后加入到硅胶柱中，其中硅胶柱中的硅胶为300400目硅胶，且在装柱前于密封容器中用乙醚充分浸泡25小时，使硅胶充分膨胀；0109B4先使用质量百分浓度为30的正丙醇水溶液洗脱硅胶柱，该正丙醇水溶液的体积为硅胶柱床层体积的4倍；然后用等体积的正己烷和丙酮的体积比分别为101、71、51、31、11的混合物洗脱硅胶柱每个不同体积比的正己烷和丙酮混合液的使用量均为硅胶柱床层体积的3倍，收集51、31的洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述熟地提取物，命名为SD。0110制备例3淫羊藿提取物的制备0111C1将淫羊藿干燥、粉碎，过100目筛，得到淫羊藿粉末；0112C2将淫羊藿粉末加入丙酮中。
33、以克G计的所述淫羊藿粉末与以毫升ML计的丙酮的比为114，再加入二氧化碳以毫升ML计的丙酮与以克G计的二氧化碳的比为17，密闭加压，形成膨胀体系，在80下进行膨胀溶剂萃取，萃取2小时后，泻压至常压并自然冷却至室温，过滤得到萃取液，减压浓缩萃取液，得到粘稠膏；0113C3将粘稠膏溶解于能使其恰恰溶解完全的无水乙醇中，过色谱柱，其中所述色谱柱自上而下填充柱体积35的300400目中性硅胶、柱体积25的200300目中性氧化铝和柱体积20的AB8吸附树脂，使用体积比为12的丙酮乙酸乙酯进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述淫羊藿提取物，命名为YYH。0114制备例4益智仁提取物的制备01。
34、15D1将1重量份的益智仁干燥、粉碎，然后加入到13重量份的质量百分比浓度为50的乙醇水溶液中，并以02重量份的乙酸作为抽提助剂，进行索氏抽提2小时；然后过滤，得到滤液和固体不溶物；0116D2将固体不溶物装入超声波萃取仪中，以乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂两者体积比为12作为萃取溶剂，超声萃取25分钟，然后加入质量百分比浓度为8的碳酸钠水溶液乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂与碳酸钠水溶液的体积比为106，充分振荡，离心分离，得到上层清液；0117D3将步骤D1的滤液和步骤D2的上层清液进行合并，减压浓缩得到初提膏，将该初提膏用刚刚能将其溶解完全的无水乙醇溶解后，过D101大孔吸附树脂柱，以体积比为10。
35、5的石油醚和正己醇的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，所得膏状物即为所述益智仁提取物，命名为YZR。0118制备例5茯苓提取物的制备0119E1将茯苓干燥、粉碎，过100目筛，得到茯苓粉末；0120E2将1重量份的茯苓粉末用8重量份的质量百分浓度为70的乙醇水溶液在回流温度下回流提取2小时，然后过滤，得到滤液；0121E3将滤液在90的烘箱中搅拌挥发，直至无明显的乙醇味道为止，得到浓缩后的处理液；0122E4向处理液中加入等体积的水，充分搅拌均匀，得到水相I，然后加入与水相I等体积的丙酮萃取，得到丙酮相和水相II；将水相II用等体积的正己烷萃取，得到正己烷相和水相III；将水相III用等体积。
36、的异丙醇萃取，得到异丙醇相和水相VI；说明书CN104096153A108/17页110123E5将异丙醇相减压浓缩，所得膏状物即为所述茯苓提取物，命名为FL。0124制备例6知母提取物的制备0125F1将知母干燥、粉碎，过50目筛，得到知母粉末；0126F2将1重量份的知母粉末加入到50重量份的乙酸乙酯中，回流提取1小时，然后自然冷却至室温，加入质量百分浓度为15的NAHCO3水溶液乙酸乙酯与NAHCO3水溶液的体积比为12，搅拌，分层，得到水相和乙酸乙酯相；0127F3用水洗涤乙酸乙酯相13次水与乙酸乙酯相的体积比为115，然后将乙酸乙酯相继续用质量百分浓度为50的乙醇水溶液再次洗涤13次。
37、乙醇水溶液与乙酸乙酯相的体积比为12，静置得到水相和有机相，将有机相用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩，所得膏状物即为所述知母提取物，命名为ZM。0128对比制备例1对比肉苁蓉提取物的制备0129除未进行步骤A4外，即将步骤A3中得到的清膏直接进行减压浓缩，以与制备例1的相同方式进行了对比制备例1，得到对比例肉苁蓉提取物，命名为DRCR。0130对比制备例23对比熟地提取物的制备0131对比制备例2除步骤B3中的硅胶未在装柱前于密封容器中用乙醚充分浸泡25小时以充分膨胀外，以与制备例2的相同方式进行了对比制备例2，得到对比例熟地提取物，命名为DSD1。0132对比制备例3除步骤B4中一直使用体积比。
38、为51的正己烷和丙酮混合物进行洗脱外即未进行梯度洗脱，以与制备例2的相同方式进行了对比制备例3，得到对比例熟地提取物，命名为DSD2。0133对比制备例46对比淫羊藿提取物的制备0134对比制备例4除步骤C3中色谱柱填充的仅为300400目中性硅胶外即将中性氧化铝和AB8吸附树脂均替换为中性硅胶，以与制备例3的相同方式进行了对比制备例4，得到对比例淫羊藿提取物，命名为DYYH1。0135对比制备例5除步骤C3中色谱柱填充的仅为200300目中性氧化铝外即将中性硅胶和AB8吸附树脂均替换为中性氧化铝，以与制备例3的相同方式进行了对比制备例5，得到对比例淫羊藿提取物，命名为DYYH2。0136对比。
39、制备例6除步骤C3中色谱柱填充的仅为AB8吸附树脂外即将中性硅胶和中性氧化铝均替换为AB8吸附树脂，以与制备例3的相同方式进行了对比制备例6，得到对比例淫羊藿提取物，命名为DYYH3。0137对比制备例7对比益智仁提取物的制备0138除步骤D1中未加入作为抽提助剂的乙酸外，以与制备例4相同的方式进行了对比制备例7，得到对比例益智仁提取物，命名为DYZR。0139对比制备例8对比茯苓提取物的制备0140除步骤E4中未进行丙酮萃取和正己烷萃取外即将步骤E3的处理液直接用异丙醇萃取，以与制备例5相同的方式进行了对比制备例7，得到对比例茯苓提取物，命名为DFL。0141对比制备例9对比知母提取物的制备。
40、0142除步骤F2中未加入质量百分浓度为15的NAHCO3水溶液外即将步骤F2说明书CN104096153A119/17页12中乙酸乙酯回流提取完后，直接进行步骤F3的水洗涤处理，以与制备例6相同的方式进行了对比制备例8，得到对比例知母提取物，命名为DZM。0143实施例101441分别称取制备例1的肉苁蓉提取物6重量份、制备例2的熟地提取物15重量份、制备例3的淫羊藿提取物9重量份、制备例4的益智仁提取物9重量份、制备例5的茯苓提取物15重量份、制备例6的知母提取物10重量份，然后将其混合，得到混合物；01452向所得混合物中加入195重量份去离子水，并调节PH值为7173之间，搅拌均匀，然。
41、后静置、过滤，得到滤液，分装，即得可防治/治疗近视的药物组合物可服液，命名为KF。0146实施例201471分别称取制备例1的肉苁蓉提取物3重量份、制备例2的熟地提取物10重量份、制备例3的淫羊藿提取物12重量份、制备例4的益智仁提取物10重量份、制备例5的茯苓提取物12重量份、制备例6的知母提取物13重量份，然后将其混合，得到混合物；01482向所得混合物中加入240重量份去离子水，并调节PH值为7173之间，搅拌均匀，然后静置、过滤，得到滤液，向滤液中加入适量甜菊素和淀粉，搅拌均匀，然后浓缩至稠膏、制粒、干燥，得到颗粒剂，命名为KL0149在上述实施例12的基础上，按照实施例12的相当方式。
42、区别仅在于使用的提取物不同，而制得了分别为口服液和颗粒剂形式的多种药物组合物，其中所包含的具体提取物、所制得的口服液或颗粒剂的命名编号如下表1和2所示包括了实施例12的KF和KL。其中所有以“KF”命名的为口服液形式，其按照实施例1的方式进行；而所有以“KL”命名的为颗粒剂形式，其按照实施例2的方式进行。0150表1包含不同提取物时的口服液0151说明书CN104096153A1210/17页130152表2包含不同提取物时的颗粒剂0153说明书CN104096153A1311/17页140154防治近视效果测试0155选取60只健康豚鼠，随机分为5组，每组12只。分组情况为0156组空白对照。
43、组。0157组凹透镜诱导近视模型对照组。说明书CN104096153A1412/17页150158组凹透镜诱导近视模型低剂量灌药组。0159组凹透镜诱导近视模型中剂量灌药组。0160组凹透镜诱导近视模型高剂量灌药组。0161组、组、组、组均选取右眼凹透镜远视离焦造模，左眼为对照眼。五组动物采用远视性光学离焦法制作近视豚鼠模型选取普通6D球面树脂镜片，采用JD168型全自动磨边机将镜片磨至直径25CM，然后改用手动磨边机将其加工为直径为10CM的镜片；然后用医用胶带缠绕后万能胶粘附于豚鼠右眼，注意勿粘连眼睑，避免胶水流入眼内；镜片与眼睛的距离控制在3MM左右；每日早晚巡视2次，如发现镜片掉下，及。
44、时再次粘附；注意保持镜片清洁透明，如有明显磨损划痕则及时更换。0162将本发明实施例1制备得到的口服液即KF浓缩至体积为原来的一半，即为200浓度，作为高剂量治疗组的药物，将其保存于4冰箱中，灌药时将药液水浴加热至30，并于三天内用完。用完之后如果再需要，则重新开启口服液再次进行浓缩，以防止长期放置致药液疗效下降或变质。0163分组给药空白对照组，生理盐水1ML/100G灌胃，每日1次；凹透镜诱导近视模型对照组以下也称为“模型对照组”生理盐水1ML/100G灌胃，每日1次；各治疗组给予上述浓缩药液灌胃0164凹透镜诱导近视模型低剂量灌药组以下也称为“低剂量治疗组”025M1/100G；0165。
45、凹透镜诱导近视模型中剂量灌药组以下也称为“中剂量治疗组”05ML/100G；0166凹透镜诱导近视模型高剂量灌药组以下也称为“高剂量治疗组”1ML/100G；0167三组均为每日1次。造模后连续灌胃给药2周至实验结束，结束后对各组进行下面的屈光度检测、眼轴长度的测量和闪光视网膜电图检查。0168屈光度检测检影验光前给予1盐酸环喷托酯滴眼液美国爱尔康公司，赛飞杰点眼散瞳；每5分钟点1次，连续点4次，60分钟后观察瞳孔散大，对光反应情况，开始检影；检影过程中如发现仍有明显调节反应，则停止检影，再点眼2次，等待10分钟后再验光。检影过程中保持豚鼠头部处于水平位，保持稳定不动，沿头面部走行方向选取水平。
46、、垂直两条主子午线，在距离眼角膜50CM处分别检影，中和镜片距离眼球5MM处放置，取两条子午线屈光度代数平均值为该豚鼠眼的屈光度值。0169本实验采用单盲法进行，检影工作由同一名验光师在未知分组的情况下完成，验光过程应尽量迅速控制在5分钟内，避免强光刺激引起调节反应。0170眼轴长度的测量检测前用盐酸奥布卡因滴眼液点眼表面麻醉，间隔1分钟连点两次，如豚鼠不配合；通过颈套将动物头部固定于水平面，轻轻用手摆正头位，A超探头对准瞳孔并垂直于角膜顶点进行测量；观测波形时取较标准者测量，测得值为角膜顶点前表面至眼球后极部视网膜前表面的距离；以手动模式连续测量10次，计算平均值，精确到001MM，排除明显。
47、偏离的数值，取平均值。0171闪光视网膜电图检查暗适应12H以上的豚鼠，实验前30MIN滴加盐酸环喷托酯滴眼液散瞳，腹腔注射10的水合氯醛麻醉豚鼠，剂量为2ML/KG，棉拭子测试角膜反射消失，肌肉松弛情况通过检查四肢有无抵抗，判断是否达到全麻状态。将豚鼠固PHOENIX视说明书CN104096153A1513/17页16觉电生理系统仪器托盘上，尾部、左侧颊部和左眼角膜表面分别安放接地电极、参考电极和记录电极，并在角膜表面滴10G/L的甲基纤维素。参考电极和接地电极为不锈钢针制成，记录电极为02MM银氯化银制成的环形电极，采用PHOENIX视觉电生理系统进行FERG检测，分别记录暗适应眼的最大混。
48、合反应MAXERG各时期ERGA，B波波幅、A到B潜伏期、最大振幅。以上过程全部在暗室红灯光下进行。刺激及记录条件采用全视野刺激球白色闪光刺激，闪光强度20CD/S1/M2，单次刺激，间隔5S，共刺激8次，单通道记录，通频带为100300HZ，每次采样时间250MS，每个测定眼至少测量3次，每次间隔时间20S，检测完毕，角膜表面滴加氧氟沙星滴眼液，对FERG的A波和B波振幅、A到B潜伏期、最大振幅进行统计分析。0172实验前各组豚鼠屈光度见表3、4，各组间豚鼠屈光度采用单因素方差分析各组比较差异无统计学意义P005。0173表3干预前后右眼各组豚鼠屈光度DIOPTER，D01740175表4干。
49、预前后左眼各组豚鼠屈光度DIOPTER，D01760177实验前后各组豚鼠前房深度、晶状体厚度、玻璃腔长度、眼轴长度值分别见表5、6、7和8。0178表5双眼干预前后前房深度ACD测量数值毫米，MM0179说明书CN104096153A1614/17页1701800181表6双眼干预前后晶状体厚度LENS测量数值毫米，MM01820183表7双眼干预前后玻璃体腔长度VITREOUS测量数值毫米，MM01840185表8双眼干预前后眼轴长度AXIALLENGTH测量数值毫米，MM0186说明书CN104096153A1715/17页1801870188表9豚鼠FERGA、B波振幅值的比较XSV01890190由表9可见，FERGA波、B波及总振幅两周后各组豚鼠凹透镜诱导眼视网膜电图A波、B波及总振幅的差异均有统计学意义F324、253、287,PKFD11、KFD15、KFD25KFD29KFD36KFD38KFD38效果高度接近于空白对照组，无实际效果，其中的“”表示“优于”的意思。01972、使用表2中的不同颗粒剂形式，分别将其配制成与上表3表10所使用药液相同浓度的对比药液，其中除分别使用KLD2、KLD。