液体深层发酵法生产含洛伐他汀菌体粉的方法.pdf

本发明是通过一珠高产洛伐他汀的红曲红曲霉诱变菌T－180经液体深层发酵得到红曲霉菌体粉含有洛伐他汀(含洛伐他汀1.2％)，可以用来制成各种降血脂的食品和药品。红曲霉菌体粉生产分以下五步：①斜面纯种；②两级摇瓶种子；③种子罐培养；④发酵罐发酵培养；⑤红曲霉菌体经磨浆，均质，喷雾干燥即得到含洛伐他汀1.2％的红曲菌体粉。该方法工艺简单，反应参数容易控制，密封生产，不易污染，菌体纯度大，劳动强度低，产品质量好，含洛伐他汀高。

1、  一种液体深层发酵法生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，其特征在于：该方法是采用一株高产洛伐他汀的红曲红曲霉诱变菌株T-180，经菌种纯种培养、摇瓶种子培养、种子罐培养、发酵培养、磨浆均质、喷雾干燥方法制备含洛伐他汀1.2％红曲霉菌体粉。

2、  如权利要求1所述的生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，其特征在于：所述菌种培养的方法为：

1、  斜面纯种的制备：
①、斜面培养基的制备：
麦芽汁100毫升，琼脂3克，调PH4.2-4.5，加热琼脂充分溶解后分装试管，塞好棉塞，1公斤/30分灭菌后摆成斜面待用；
②、菌种纯种的培养：将制好斜面培养基在无菌条件下，接入红曲红曲霉纯种，在32℃±1培养10-15天，待用。

3、  如权利要求1所述的生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，其特征在于：所述摇瓶种子培养的方法为：
①、一级摇瓶种子的制备；
a、种子培养基的制备：
大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米浆1％，麦芽糖1％，氨基酸0.1％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.1％，PH4.2-5大米粉充分糊化后分装到500毫升容器内，装液量80毫升，1公斤/30分灭菌后冷却待用；
b、一级摇瓶种子的制备：将制备好的500毫升培养液在无菌条件下接入纯种，在32℃±1的恒温摇床，转数300转/分，培养24小时待用；
②、二级摇瓶种子的制备；
a、种子培养基的制备：大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米浆1％，氨基酸0.1％，麦芽糖1％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.1％，PH4.2-5大粉米充分糊化后分装在2000毫升容器内，装液量为300毫升，1公斤/30分灭菌后冷却待用；
b、二级摇瓶种子的制备，在无菌条件下将培养好一级种液按6％的接种量接入2000毫升的培养基中，在32℃±1的恒温摇床培养，转数300转/分，培养24小时待用；
C、将培养好二级摇瓶种子在无菌条件下接种待用。

4、  如权利要求1所述的生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，其特征在于：所述种子罐培养的方法为：

1、  50升种子罐的培养；
①、种子培养基大米粉5％，麦芽糖1％，玉米浆1％，氨基酸0.1％，蛋白胨1.5％，磷酸氨二钾0.2％，硫酸镁0.1％，PH4.2-5；
②、装液量70％，装入35公斤培养基杀菌1公斤/30分；
③、接种温度45℃，按6％接种量将接种，并用压力差法接入摇瓶种子；
④、罐压0.1MPA搅拌转数380转/分，通风比为1∶0.7；
⑤、培养温度32±1℃；
⑥、培养时间24小时；

2、  50升发酸罐的培养；
发酵液的配方：PH4.2-4.5大米粉7％，麦芽粉1.5％，玉米浆1.5％，蛋白胨2％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％；
(1)、其培养方法为：
①、装液量70％，杀菌1公斤/30分钟；
②、压力差法将二级摇瓶种子接入，接种量6％；
③、接种温度45℃；
④、培养温度35±1℃；
⑤、通风量1∶0.6；
⑥、电动机转数380转/分；
⑦、罐压0.1MPA；
⑧、培养时间24小时；
(2)、发酵罐的培养条件：
①、装液量70％；
②、接种温度45℃；
③、压力差法将种子罐的种子接入，接种量6％；
④、通风量1∶0.6；
⑤、培养温度35℃±1；
⑥、控制PH5.2-5.5；
⑦、电动机转数320转/分；
⑧、罐压0.1MPA；
⑨、培养时间168小时；

5、  如权利要求1所述的生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，其特征在于：
所述磨浆的方法为：将培养好的发酵液用胶体磨，磨2次细度为120目。

6、  如权利要求1所述的生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，其特征在于：所述均质的方法为：将磨好的红曲霉发酵液经均质机均质，均质，均质后细度300目。

7、  如权利要求1所述的生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，其特征在于：所述干燥的方法为：将均质好的红曲霉发酵液用喷雾干燥机进口温度130℃，出口温度62℃，喷雾干燥成粉，即含洛伐他汀1.2％红曲霉菌体粉。

液体深层发酵法生产含洛伐他汀菌体粉的方法
技术领域：
本发明涉及一种菌种粉体的制备方法，尤其涉及一种液体深层发酵法生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法。
背景技术：
红曲霉是用于生产红曲酒和红曲色素的主要菌种在中国已有上千年的历史《本草纲目)》、《兽医本章)》、《天工开物)》等著作中对其发酵物红曲的食品着色，食品防腐及药物医疗方面的应用已有加载。1979年日本远藤章教授从红色红曲霉中分离出胆固醇合成抑制剂后，红曲霉的功能及应用受到国内外广泛关注，得到了全面深入的研究，日本已有多家食品公司投入大量人力物力进行红曲保健食品的开发上市的产品能够降血脂很受欢迎而对于红曲的发明者我国却未见红曲保健食品占有优势。功能性红曲产品在我国只有福建、浙江、河北等几处有生产，另外北京的血脂康、成都的脂必妥等由红曲霉发酵制成的红曲作为降血脂药物也占有一定市场。但总的来说，功能性红曲产品所占市场份额并不大，红曲霉菌产生的洛伐他汀对降血脂作用很大而且没有副作用，而我国现在生产的功能性红曲还是用曲盘或通风制曲的古老方法，劳动强度大，产品易污染，产品含洛伐他汀低。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题是提供一种制备液体深层发酵法生产含1.2％洛伐他汀菌体粉的方法，该方法具有生产工艺简单易行，产品纯度和产品的保健效果明显等效果。
本发明是选择几十株红曲霉菌经过分离、筛选，得到一株产洛伐他汀较高的红色红曲霉再经过紫外线和钴60(Co⁶⁰)反复照射进行诱变。得到一株高产洛伐他汀的红色红曲霉的诱变菌株T-180。
申请人已于2004年5月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏编号为1148。中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(其简称为CGMCC)的地址为：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所(100080)。
该高产洛伐他汀的红色红曲霉的诱变菌株T-180分类命名为：属于红色红曲霉菌种。
本发明利用该该菌制成的红曲霉菌体粉含洛伐他汀的含量为1.2％，远远高于目前我国的功能红曲洛伐他汀的含量，而且我是采用全套密封自动控制液体深层发酵的生产，纯度高，生产稳定，不易污染的现代生产工艺。
本发明是采用我自己诱变的一株高产洛伐他汀的红色红曲霉诱变菌株T-180经斜面培养一级摇瓶培养，二级摇瓶培养，再经种子罐培养，再到发酵罐培养经磨浆，均质喷雾干燥成粉，即含1.2％洛伐他汀红曲霉菌体粉为粉红色，用制造各种降血脂的药品和食品。
本发明红曲霉菌体粉的生产共分菌种生产和发酵两部分：
一、菌种生产：
1、斜面纯种的制备：
①、斜面培养基的制备：麦芽汁100毫升，琼脂3克，调PH4.2-4.5，加热琼脂充分溶解后分装试管塞好棉塞1公斤/30分灭菌后摆成斜面待用；
②、斜面纯种的制备：将制好斜面培养基在无菌条件下，接入红色红曲霉纯种在32℃±1培养10-15天待用。
2、摇瓶种子的制备
①、一级摇瓶种子的制备
a、种子培养基的制备：大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米浆1％，麦芽糖1％，氨基酸0.1％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.1％，PH4.2-5大米粉充分糊化后分装到500毫升三角瓶内，装液量80毫升，1公斤/30分灭菌后冷却待用。
b、一级摇瓶种子的制备：将制备好的500毫升(三角瓶培养液在无菌条件下接入纯种，塞好棉塞放在32℃±1的恒温摇床，转数300转/分，培养24小时待用。
②、二级摇瓶种子的制备
a、种子培养基的制备：大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米浆1％，氨基酸0.1％，麦芽糖1％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.1％，PH4.2-5大粉米充分糊化后分装在2000毫升瓶内，装液量为300毫升，1公斤/30分灭菌后冷却待用。
b、二级摇瓶种子的制备，在无菌条件下将培养好一级种液按6％的接种量接入2000毫升三角瓶的培养基中，塞好棉塞，放在32℃±1的恒温摇床培养，转数300转/分，培养24小时待用。
C、将培养好二级摇瓶种子在无菌条件下倒入接种瓶中待用。
二、发酵：
1、50升种子罐的培养
①、种子培养基大米粉5％，麦芽糖1％，玉米浆1％，氨基酸0.1％，蛋白胨1.5％，磷酸氨二钾0.2％，硫酸镁0.1％，调整PH值4.2-5；
②、装液量70％，控制装入量为35公斤培养基，杀菌1公斤/30分；
③、接种温度45℃，按6％接种量将接种，并用压力差法接入摇瓶种子；
④、罐压0.1MPA搅拌转数380转/分，通风比为1∶0.7；
⑤、培养温度32℃±1；
⑥、培养时间24小时。
2、500升发酸罐的培养；
①、发酸培养基大米粉7％，麦芽糖1.5％，玉米浆1.5％，蛋白胨2％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，PH4.2-5，杀菌1公斤/30分；
②、装液量70％为350公斤，接种温度45℃；
③、接种量按6％接种，压力差法将培养好的种子接入发酵罐；
④、培养温度32℃，通气量为1∶0.7，控制PH5.2-5.5，罐压0.1MPA；
⑤、培养时间7天(168小时)搅拌转数为320转/分；
3、磨浆：
将培养好的发酵液用胶体磨，磨2次细度为120目。
4、均质：
将磨好的红曲霉发酵液经均质机均质，均质，均质后细度300目。
5、干燥：
将均质好的红曲霉发酵液用喷雾干燥机进口温度130℃，出口温度62℃，喷雾干燥成粉，即得到含洛伐他汀1.2％红曲霉菌体粉。
本发明含洛伐他汀红曲霉菌体粉的制造方法是目前我国生产含洛伐他汀红曲独有生产方法，生产出红曲菌体粉含洛伐他汀1.2％，该方法生产含洛伐他汀红曲霉体粉全部自己控制密封生产，不污染，杂质少，易控制，劳动强度小，洛伐他汀含量高。制成的降血脂的保健食品效果好。
具体实施方式：
本发明提供的红曲霉菌体粉的生产的具体实施方法共分五部分：
1、红曲霉斜面纯种培养。
2、一、二级摇瓶种子的培养。
3、红曲霉种子罐的培养。
4、红曲霉发酵的培养；
5、磨浆、匀质到喷雾干燥成粉即成品——含1.2％洛伐他汀的红曲霉体粉。
下面我们通过具体的实施办法详细描述本发明：
1、斜面纯种的培养：
①斜面培养基的制备：
将麦芽汁100毫升，琼脂3克混合，将PH值调正到3.5，加热，使琼脂充分溶解后分装试管塞好棉塞1公斤/30分灭菌后摆成斜面待用；
②斜面纯种的制备：
将上述制好斜面培养基在无菌条件下，接入红色红曲霉纯种在32℃±1培养15天待用。
2、摇瓶种子的制备：
①一级摇瓶种子的制备
a、种子培养基的制备：
按照如下成分和比例以及方法进行配制该种子培养基：
大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米浆1％，麦芽糖1％，氨基酸0.1％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.1％，将PH值4.5的大米粉充分糊化后，分装到500毫升三角瓶内，装液量为80毫升，1公斤/30分灭菌后冷却待用；
b、一级摇瓶种子地制备：
将制备好的培养液在500毫升三角瓶中，无菌条件下接入纯种，塞好棉塞放在32℃±1的恒温摇床，转数300转/分，培养24小时待用。
②、二级摇瓶种子的制备：
a、种子培养基的制备：
按照如下成分和比例以及方法进行配制该种子培养基：
大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米浆1％，氨基酸0.1％，麦芽糖1％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.1％，将PH值4.5的大粉米充分糊化后分装在2000毫升三角瓶内，装液量为300毫升，1公斤/30分灭菌后冷却待用；
b、二级摇瓶种子的制备：
在无菌条件下将培养好一级种液按6％的接种量接入2000毫升三角瓶的培养基中，塞好棉塞，放在32℃±1的恒温摇床培养，转数300转/分，培养24小时待用；
C、将培养好二级摇瓶种子在无菌条件下倒入接种瓶中，待用；
发酵过程：
1、50升种子罐的培养：
①、种子培养基的配方：
大米粉5％，麦芽糖1％，玉米浆1％，氨基酸0.1％，蛋白胨1.5％，磷酸氨二钾0.2％，硫酸镁0.1％，将PH值调整为4.5；
具体的操作方法为：
②、装液量70％，装入35公斤培养基；杀菌1公斤/30分；
③、接种温度控制在45℃左右，按6％接种量进行接种，并用常规压力差法接入摇瓶种子；
④、罐压控制在0.1MPA左右，同时进行搅拌，搅拌转数380转/分，通风比为1∶0.7；
⑤、培养温度控制在32℃左右；
⑥、培养时间为24小时；
2、500升发酸罐的培养：
①、发酸培养基的配方为：
大米粉7％，麦芽糖1.5％，玉米浆1.5％，蛋白胨2％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，调整PH值4.5，杀菌1公斤/30分；
②、装液量70％，大约控制在350公斤，接种温度45℃；
③、压力差法将培养好的种子接入发酵罐，将种子罐培养的种子按接种量6％的比例进行接种；
④、培养温度32℃，通气量为1∶0.7，控制PH5.2-5.5左右，罐压控制在0.1MPA左右；
⑤、培养时间7天(168小时)，搅拌转数为320转/分。
3、磨浆：将培养好的发酵液用胶体磨，磨2次，细度为120目。
4、均质：将磨好的红曲霉发酵液经均质机均质，均质，均质后细度300目。
5、干燥：将均质好的红曲霉发酵液用喷雾干燥机进口温度130℃，出口温度62℃，喷雾干燥成粉，即得到含洛伐他汀1.2％红曲霉菌体粉。