一种治疗肝炎的颗粒剂的制备方法和质量控制方法.pdf

本发明涉及一种治疗肝炎的颗粒剂的制备方法和质量控制方法。由三白草等4味中药为原料药制成，药剂还含包合剂β－环糊精50－80重量份，含矫味剂甜菊糖苷0.05重量份，含成型剂低聚乳糖45－75重量份。制备工艺中采用β－环糊精包合，喷雾干燥及干式制粒的方法，使有效成分尽可能保留完全，便于连续性GMP条件下大型生产。该种治疗肝炎的颗粒剂的质量控制方法有三白草的薄层鉴别、黄芩苷的高效液相法含量测定和槲皮素的高效液相法含量测定。

1.  一种治疗肝炎的颗粒剂，由三白草450重量份、地耳草300重量份、黄芩150重量份、茯苓150重量份为原料药制成，其特征是：含包合剂β-环糊精50-80重量份，含成型剂低聚乳糖45-75重量份，含矫味剂甜菊糖苷0.05重量份。

2、  根据权利要求1所述的一种治疗肝炎的颗粒剂，其特征是：含包合剂β-环糊精56重量份。

3、  根据权利要求1或2所述的一种治疗肝炎的颗粒剂的制备方法，按具体步骤如下：
a.称取三白草、地耳草、黄芩、茯苓，备用。
b.加水煎煮2次，合并煎液，进行过滤，滤液静置12小时，取上清液浓缩至适量，放冷至室温后，加入适量的乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置，滤过，取上清液回收乙醇至50℃测定相对密度为1.07，得清膏，充分搅拌，再加成型剂低聚乳糖45-75重量份，加入包合剂β-环糊精56-80重量份，充分搅拌，滤过，进行喷雾干燥，干燥进风温度170-180℃，出风温度70-90℃，得喷干粉；喷干粉加入矫味剂甜菊糖苷0.05重量份，物料在20-60℃温度下干式制粒，整粒。

4.  根据权利要求1或2所述的一种治疗肝炎的颗粒剂的质量控制方法，其特征是：
三白草鉴别  取本品4g，加醋酸乙酯20ml，振摇，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三白草对照药材1g，加甲醇10ml，超声提取，滤过，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解滤液作为对照溶液；吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5∶1∶4的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶丙酮为展开剂，展开，取出，在365nm下观察，在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

5.  根据权利要求1或2所述的一种治疗肝炎的颗粒剂的质量控制方法，黄芩苷的含量测定方法是：
对照品溶液制备：精密称取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀配制成每1ml中含黄芩苷0.25mg，即得；
供试品溶液的制备：取本品内容物粉末0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声提取30min，放冷，定容，10000rpm高速离心10分钟，取上清液，即得；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
体积比为43∶57的甲醇-0.1％三氟乙酸水为流动相；
检测波长为280nm
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。

6.  根据权利要求5所述的种治疗肝炎的颗粒剂的的黄芩苷含量测定方法，其特征是：体积比为43∶57的甲醇-0.1％乙酸水为流动相。

7.  根据权利要求5所述的种治疗肝炎的颗粒剂的的黄芩苷含量测定方法，其特征是：体积比为43∶57的甲醇-0.1％磷酸水为流动相。

8.  根据权利要求1所述的一种治疗肝炎的颗粒剂的质量控制方法，槲皮素的含量测定方法是：
对照品溶液制备：精密称取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀配制成每1ml中含槲皮素0.07mg；
供试品溶液的制备：取本品内容物粉末1.0g，精密称定，各加60％甲醇40ml，超声40min，放冷，定容，过滤，精密移取30ml，加入25％盐酸7.5ml水浴回流水解40分钟，快速冷却，定容至50ml，10000rpm离心10分钟，取上清液过膜，即得；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
体积比为53∶47的甲醇-0.1％三氟乙酸水为流动相；
检测波长为360nm
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。

9.  根据权利要求8所述的种治疗肝炎的颗粒剂的的槲皮素含量测定方法，其特征是：体积比为53∶47的甲醇-0.1％乙酸水为流动相。

10.  根据权利要求8所述的种治疗肝炎的颗粒剂的的槲皮素含量测定方法，其特征是：体积比为53∶47的甲醇-0.1％磷酸水为流动相。

一种治疗肝炎的颗粒剂地制备方法和质量控制方法
〔技术领域〕
本发明涉及一种具有清热利湿，舒肝解郁，祛瘀退黄，利胆降酶功效，治疗急性黄疸和无黄疸型肝炎，迁延性、慢性肝炎的药物及其制备方法，属中药领域。
〔背景技术〕
我国是病毒性肝炎的高发地区，据卫生防疫部门的疫情报告，我国病毒性肝炎的年发病率为95万，在法定传染病中其发病率位居第三，仅次于感染性腹泻和流行性感冒。现代化学药物中还没有一种治疗该类疾病的特效、可供长期服用的药物，而发扬中医药传统优势，开发制剂稳定、用药安全、剂量准确、质量可控、疗效可靠的中药制剂具有重要意义。
中药“三白草肝炎糖浆”是一种用于治疗急性黄疸和无黄疸型肝炎，迁延性、慢性肝炎等疾病的中药成药制剂，由主原料药三白草、地耳草、黄芩、茯苓制成，具有清热利湿，舒肝解郁，祛瘀退黄，利胆降酶作用。但目前该制剂为液体糖浆制剂，剂型落后，药物稳定性差；含防腐剂及大量蔗糖，防腐剂和过多糖分的摄入对人体并无好处，影响制剂的安全使用；对同时患有某些忌糖疾病的病人还会产生高血糖等不良反应；据文献报道，长期服用含有防腐剂苯甲酸的食品及药物会存在潜在的肝毒性，特别是对于肝脏疾病患者，会加重肝功能损伤，因三白草肝炎糖浆治疗的为肝炎病人，病人肝功能异常，因其中含有防腐剂苯甲酸，也不宜长期服用。
此外，糖浆剂每次服药量由病人自己量取，剂量不准确，会影响制剂的疗效。
〔发明内容〕
本发明目的之一在于提供一种中药三白草肝炎颗粒剂；目的之二在于提供一种中药三白草肝炎颗粒剂的制备方法；目的之三在于提供中药三白草肝炎颗粒剂的质量控制方法。
本发明将三白草肝炎糖浆剂改为颗粒剂(固体制剂)，采用β-环糊精包合工艺、技术，使其黄酮等苦味成分包合，明显地改善了制剂口味而不影响疗效。再进行喷雾干燥、干式制粒，使黄芩苷等有效成分保留更多，提高了本方的疗效。
本发明三白草肝炎颗粒剂具体如下：
本发明三白草肝炎颗粒剂由450重量份三白草、300重量份地耳草、150重量份黄芩、150重量份茯苓为原料药制成，药剂还含包合剂β-环糊精50-80重量份，含矫味剂甜菊糖苷0.05重量份，含成型剂低聚乳糖45-75重量份。
本发明三白草肝炎颗粒剂的制备方法按如下步骤：
三白草450重量份、地耳草300重量份、黄芩150重量份、茯苓150重量份加水煎煮2次，合并煎液，进行过滤，滤液静置12小时，取上清液浓缩至适量，放冷至室温后，加入适量的乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置，滤过，取上清液回收乙醇至相对密度为1.07(50℃)，得清膏，加入包合剂β-环糊精50-80重量份，充分搅拌，再加成型剂低聚乳糖45-75重量份，滤过，在喷雾状态下通入热空气，进行喷雾干燥，干燥进风温度170-180℃，出风温度70-90℃，得喷干粉。喷干粉加入矫味剂甜菊糖苷0.05重量份，物料在≤60℃温度下干式制粒，整粒、分装即得。
本发明三白草肝炎颗粒的质量控制方法，具体如下：
(1)三白草鉴别
取本品4g，加醋酸乙酯20ml，振摇，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三白草对照药材1g，加甲醇10ml，超声提取，滤过，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解滤液作为对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1∶4的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶丙酮为展开剂，展开，取出，在365nm下观察，在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)黄芩苷的含量测定
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相为：
甲醇                           43体积
0.1％三氟乙酸水溶液            57体积
流动相还可以为
甲醇                           43体积
0.1％乙酸水溶液                57体积
检测波长为280nm；
理论板数按黄芩苷计算应不低于2000
(3)槲皮素的含量测定
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相为：
甲醇                           53体积
0.1％三氟乙酸水溶液            47体积
流动相还可以为
甲醇                           53体积
0.1％乙酸水溶液                47体积
流动相还可以为
甲醇                           53体积
0.1％磷酸水溶液                47体积
检测波长为360nm；
理论板数按槲皮素计算应不低于2000
〔具体实施方式〕
实施例一  三白草肝炎颗粒剂的制备
称取原料三白草450g、地耳草300g、黄芩150g、茯苓150g。
以上四味，加水煎煮二次，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度约为1.20，加乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量，加β-环糊精65g，加热溶解，充分搅拌，再加低聚乳糖45g，滤过，进行喷雾干燥，热空气进风温度180℃，出风温度80℃，喷干粉加入甜菊糖苷0.05g，在≤60℃温度下干式制粒，整粒，得棕色颗粒225g。按每次服用量4.5g分装成袋。
实施例二  包结条件的选择
由于该药苦味较大，故采用β-环糊精包合的方法减小苦味，为了选择包合的最佳条件，设计了正交试验。选用L9(3⁴)正交表，以药液的苦味作为考察指标，进行了9次试验，各因素水平见表1。
表1  药液β-环糊精包结正交结果表

^*得分是按照药液苦味的程度而确定的，以最苦为0分，依次递减分为2分、4分、6分、8分、10分共六个等级，再六人测定，平均评分值。
        表2  药液β-环糊精包结正交试验方差分析表
方差来源    平方和    自由度    均方    F        显著性
药液浓度     2.14       2       1.07    16.03    不显著
温度         0.78       2       0.39    5.83     不显著
β-CD用量    9.69       2       4.85    72.60    显著
误差         0.13       2       0.07
由表2的方差分析表可以看出：β-CD用量对苦味有显著影响，其它二个因素对苦味的影响均不显著。由表2的正交试验结果表明，其中K2a＞K1a＞K3a，故因素A选择水平2，即选择药液浓度为2.0g/ml；其中K2b＞K3b＞K1b，故因素B选择水平2，即选择温度为60℃；其中K3c＞K2c＞K1c，故因素C选择水平3，即选择β-环糊精量为65g。即：浓缩至药液浓度为2.0g/ml，相对密度为1.10(50℃)，β-环糊精用量为65g，保温为60℃进行搅拌，包合。
同时，β-环糊精有助溶作用，在上述条件下，考察黄芩苷、槲皮素及总黄酮的含量，结果见表3。
表3  β-环糊精用量优选表

结果表明，β-环糊精用量为35g时助溶效果不理想，当增加至50g时，黄芩苷含量较高，如β-环糊精用量再增加为65和80g时，与50g时指标成分的保留率差异很小，故选择β-环糊精的用量为50-80g。
实施例三  进、出风温度对喷雾干燥粉的影响
喷雾干燥条件对成分的保留及颗粒成型极为重要。为利于有效成分的保留和颗粒成型，对进风温度、出风温度进行比较如表4。
                  表4  进、出风温度对喷雾干燥粉的影响
进风温度(℃)  出风温度(℃)  黄芩苷保留率(％)  含水量(％)  对制粒的影响
   190           90              90.5           3.6          稍差
   180           80              95.6           4.5          非常好
   170           70              98.2           6.1          较好
制粒试验结果表明，本制剂半成品细粉粒的含水量在4.0～6.0％时，可以直接干式制得粒度、硬度适宜的颗粒；含水量高于8.0％时，颗粒流动性较差，制粒后水分难以控制在5％以内；含水量小于4.0％时，颗粒的细粉稍多，产率会下降。因此应控制喷雾干燥的进风温度为170-180℃，出风温度70-80℃。
实施例四  三白草肝炎糖浆、三白草肝炎颗粒的含量及稳定性研究
对三白草肝炎糖浆、三白草肝炎颗粒进行了稳定性对比试验，以黄芩苷和槲皮素的含量为指标，实验结果如表5。
      表5  三白草肝炎糖浆、三白草肝炎颗粒的含量及稳定性对比试验
品种                检验项目      0个月    3个月    6个月    12个月
                  黄芩苷(mg/支)   25.6     22.7     20.9     15.3
三白草肝炎糖浆
                  槲皮素(mg/支)   14.1     12.9     11.3     8.1
                  黄芩苷(mg/袋)   42.3     42.1     42.2     42.1
三白草肝炎颗粒
                  槲皮素(mg/袋)   21.8     21.7     21.5     21.6
从上可知，三白草肝炎颗粒的含量比三白草肝炎口服液的含量显著提高(黄芩苷的含量提高了65.2％，槲皮素的含量提高了54.6％)；同时三白草肝炎颗粒的稳定性也大大得到了提高。
实施例五  三白草肝炎颗粒剂按下列方法质量控制(一)
三白草鉴别  取本品4g，加醋酸乙酯20ml，振摇，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三白草对照药材1g，加甲醇10ml，超声提取，滤过，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解滤液作为对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1∶4的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶丙酮为展开剂，展开，取出，在365nm下观察，在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例六  三白草肝炎颗粒剂按下列方法质量控制(二)
黄芩苷的含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录61页)测定。系统适用性试验Waters510泵，紫外486检测器，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶0.1％三氟乙酸水溶液(43∶57)为流动相，流速为1ml/min；检测波长为280nm。理论塔板数按黄芩苷计算应不低于2000。
对照品溶液制备：精密称取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并配制成每1ml中含黄芩苷0.25mg，即得。
供试品溶液的制备：取本品内容物粉末0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声提取30min，放冷，定容，高速离心(10000rpm)10分钟，取上清液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
本品每袋含黄芩苷不得少于40mg。
实施例七  三白草肝炎颗粒剂按下列方法质量控制(三)
槲皮素的含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录61页)测定。系统适用性试验Waters510泵，紫外486检测器，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶0.1％三氟乙酸水溶液(53∶47)为流动相，流速为1ml/min；检测波长为360nm。理论塔板数按槲皮素计算应不低于2000。
对照品溶液制备：精密称取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀配制成每1ml中含槲皮素0.07mg。
供试品溶液的制备：取本品内容物粉末1.0g，精密称定，各加60％甲醇40ml，超声40min(超声功率为250w，频率为50KHz)，放冷，定容，过滤，精密移取30ml，加入25％盐酸7.5ml水浴回流水解40分钟，快速冷却，定容至50ml，取样高速离心(10000rpm)10分钟，取上清液过膜，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，计算，即得。
本品每袋含槲皮素不得少于19mg/袋。
附图说明：
图1  槲皮素标品HPLC图
图2  缺三白草、地耳草阴性样品HPLC图
图3  三白草肝炎颗粒样品HPLC图(6号峰为槲皮素峰)