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1、10申请公布号CN104146142A43申请公布日20141119CN104146142A21申请号201410363129922申请日20140728A23J3/20200601C12P13/00200601C12P21/02200601C12R1/01200601C12R1/86520060171申请人四川安益生物科技有限公司地址643000四川省自贡市自流井区春华社区19组兴大花园26层跃27层180号72发明人叶春江姜均74专利代理机构北京立成智业专利代理事务所普通合伙11310代理人黄剑冰吕秀丽54发明名称一种复合保健食品及其制备方法57摘要本发明属于功能食品领域，具体涉及一种复合。
2、型天然发酵保健食品及其制备方法。包括丙酸杆菌发酵生物合成ALA、酿酒酵母发酵生物合成GSH、发酵液的浓缩、菌体重悬液均质、澄清、超滤、浓缩、干燥，制备益生菌来源的生物制品。51INTCL权利要求书3页说明书7页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书7页10申请公布号CN104146142ACN104146142A1/3页21复合保健食品，其特征在于包含5氨基乙酰丙酸和谷胱甘肽，采用以下方法制备；15氨基乙酰丙酸制备培养基组成；酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，PH72；。
3、培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含量为8015MG/L，获得原发酵液A；2谷胱甘肽制备培养基组成；磷酸80140G/L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙0104G/L、葡萄糖600800G/L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为100300MG/L，。
4、获得发酵液B；3发酵液A和发酵液B，经过固液分离、破壁、酶解、澄清、浓缩、调配后，制成品，其中每克制品中含520MG5氨基乙酰丙酸和26MG谷胱甘肽。2如权利要求1中所述的复合保健食品，其特征在于采用下述方法制备；15氨基乙酰丙酸的制备；采用的培养基组成为酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，PH72；培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含量为8015MG/L，获得原发酵液A；2谷胱甘肽的。
5、制备；培养基组成为磷酸80140G/L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙0104G/L、葡萄糖600800G/L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为100300MG/L，获得发酵液B；3发酵液处理，取适量发酵液A，减压浓缩至原体积的1/31/6，获得浓缩发酵液C；取适量发酵液B,5000RPM离心35MIN，弃上清，获得湿酵母菌体D；4以浓缩发酵液C重悬菌体沉淀D，其。
6、中C与D的体积比为10110，混合、搅拌均匀，进行细胞破壁处理，得到均一的体系E；5在E中加入有机酸溶液调节PH3040，并搅拌均匀，获得均一体系F；6向F体系中添加酸性蛋白酶，酸性蛋白酶与F体系的重量体积比W/V为0000010000051，保温5060，并保持1830小时，进行蛋白水解；7将6中水解后的体系进行600012000RPM高速离心510MIN，除去细胞壁及变性蛋白，获得澄清体系；8将澄清体系减压浓缩至固含物5080，获得粘稠均一体系G；9将G与其他功能辅料调配，冷冻干燥至含水量69W/W的固形物H；10将H压片或制备胶囊制得成品保健食品。3如权利要求2中所述的复合保健品，其特征。
7、在于步骤5中所述有机酸选自乳酸、权利要求书CN104146142A2/3页3柠檬酸、琥珀酸、苹果酸之一或其组合。4如权利要求2中所述的复合保健品，其特征在于步骤9中的所述辅料包括食品中可接受的粘合剂，调味剂，所述粘合剂在体系G中的重量体积比W/V为12100，其粘合剂为羟丙甲纤维素；所述调味剂在体系G中的重量体积比W/V为1210，其调味剂为果葡糖浆、麦芽糖糊精、赤藓糖醇之一或其组合物。5如权利要求2中所述的复合保健品，其特征在于优选的，步骤7中得到的澄清体系在浓缩前先经过过有机超滤膜过滤，截留分子量10100KD。6如权利要求15中所述的复合保健品的制备方法，其特征在于包含以下步骤；15氨基。
8、乙酰丙酸制备培养基组成；酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，PH72；培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含量为8015MG/L，获得原发酵液A；2谷胱甘肽制备培养基组成；磷酸80140G/L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙0104G/L、葡萄糖600800G/L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种1。
9、10V/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为100300MG/L，获得发酵液B；3发酵液A和发酵液B，经过固液分离、破壁、酶解、澄清、浓缩、调配后，制成品，其中每克制品中含520MG5氨基乙酰丙酸和26MG谷胱甘肽，以保证足够的生物学活性，同时又能保证制备工艺的简易性。7如权利要求6中所述的制备方法，其特征在于采用下述方法制备；15氨基乙酰丙酸的制备；采用的培养基组成为酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，。
10、PH72；培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含量为8015MG/L，获得原发酵液A；2谷胱甘肽的制备；培养基组成为磷酸80140G/L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙0104G/L、葡萄糖600800G/L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为1003。
11、00MG/L，获得发酵液B；3发酵液处理，取适量发酵液A，减压浓缩至原体积的1/31/6，获得浓缩发酵液C；取适量发酵液B,5000RPM离心35MIN，弃上清，获得湿酵母菌体D；4以浓缩发酵液C重悬菌体沉淀D，其中C与D的体积比为10110，混合、搅拌均匀，进行细胞破壁处理，得到均一的体系E；5在E中加入有机酸溶液调节PH3040，并搅拌均匀，获得均一体系F；权利要求书CN104146142A3/3页46向F体系中添加酸性蛋白酶，酸性蛋白酶与F体系的重量体积比W/V为0000010000051，保温5060，并保持1830小时，进行蛋白水解；7将6中水解后的体系进行600012000RPM高。
12、速离心510MIN，除去细胞壁及变性蛋白，获得澄清体系；8将澄清体系减压浓缩至固含物5080，获得粘稠均一体系G；9将G与其他功能辅料调配，冷冻干燥至含水量69W/W的固形物H；10将H压片或制备胶囊制得成品保健食品。8如权利要求7中所述的复合保健品，其特征在于步骤5中所述有机酸选自乳酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸之一或其组合。9如权利要求7中所述的复合保健品，其特征在于步骤9中的所述辅料包括食品中可接受的粘合剂，调味剂，所述粘合剂在体系G中的重量体积比W/V为12100，其粘合剂为羟丙甲纤维素；所述调味剂在体系G中的重量体积比W/V为1210，其调味剂为果葡糖浆、麦芽糖糊精、赤藓糖醇之一或其组合。
13、物。10如权利要求7中所述的复合保健品，其特征在于优选的，步骤7中得到的澄清体系在浓缩前先经过过有机超滤膜过滤，截留分子量10100KD。权利要求书CN104146142A1/7页5一种复合保健食品及其制备方法技术领域0001本发明属于功能食品领域，涉及一种复合型天然发酵保健食品及其制备方法，具体涉及一种由益生菌发酵制备的复合保健食品及其制备方法。背景技术00025氨基乙酰丙酸5AMINOLEVULINICACID，5ALA是生物体内吡咯类化合物叶绿素、血红素、维生素B12等生物合成的中间体。近年来，由于发现5ALA在癌症诊断与治疗、生物除草、提高植物耐盐、抗冻性，及促进植物生长等领域具有重要。
14、的应用，因而对5ALA的研究引起了极大的关注。同时，有研究表明微量的5ALA具有促进血液再生、提高动物基础代谢率、促进增长和提高免疫力的作用，同时由于5ALA是天然存在于生物体内的物质，因而适量的5ALA对生物体没有任何毒副作用。专利“一种畜禽生长促进剂”CN102870970A公开了一种以5ALA为主效成份的畜禽生长促进剂的组合5氨基乙酰丙酸、赖氨酸、辅酶Q10；该组方能改善畜禽的体质，促进食欲，明显提高畜禽的生长及生产性能。0003然而，由于化学合成5ALA的过程极其复杂，因而5ALA纯品价格十分昂贵。专利“一种盐酸氨基乙酰丙酸酯的制新工艺”公开号102649769A公开了一种利用32N,。
15、N二苄基氨基乙酰丙酸苄酯、甲醇和钯碳，制备盐酸氨基乙酰丙酸甲酯的方法。目前，虽然通过微生物发酵生物合成5ALA是个不错的选择，但是其分离提取是目前尚未完全攻克的难题。目前，国内外学者，根据生物体中存在的两种5ALA合成途径C4和C5途径，通过合成生物学的方法构建了大肠杆菌基因工程菌，通过发酵生物合成转化5ALA，其主要操作对象是5ALA合成酶ALAS。由于大肠杆菌本身的特点，决定了此种方法生产的5ALA，只有精制后，才能得到广泛的应用。5氨基乙酰丙酸是动物体内生物体合成血红素和维生素B12的前体物质。因而5ALA能够促进血红蛋白合成，以及红细胞的发育和成熟，为机体充分的氧气运输和内环境的酸碱稳。
16、定起到了重要的作用，表现为对生长的促进作用和基础代谢率的提高。同时，补充ALA可以促进人体自身维生素B12的合成。0004费氏丙酸杆菌PROPIONIBACTERIUMFREUDENREICHII具有广泛的益生活性，并且一直应用于奶酪的生产。该菌所产生的二氧化碳形成了乳酪中的孔。同时，该菌发酵产生的丙酸造就了瑞士乳酪特有的口味。美国FDA早在70年代就将其归为可食用且安全的益生菌GRAS。研究表明费氏丙酸杆菌既具有生物合成5ALA所需的C4途径又具有C5途径。只要培养基中存在合适的前体琥珀酸和甘氨酸，该菌就可以合成并在胞外积累5ALA。同时，费氏丙酸杆菌在发酵工业中被用于制造丙酸和维生素B12。
17、。0005谷胱甘肽GLUTATHIONE,GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸缩合形成的三肽，具有很多重要的生理活性，如抗氧化、激活硒在人体中的生理作用；同时可以保护肝脏，促进并提高视力；同时，谷胱甘肽还能抑制皮肤细胞中黑色素的形成，从而具有促进全身美白的功效。另外，谷胱甘肽在食品工业中也具有广泛的用途，可以有效改善和提高食品的风味说明书CN104146142A2/7页6及延长其保质期。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，巯基SH是谷胱甘肽的活性基团，GSH易与某些药物如扑热息痛、毒素如自由基、芥子气、铅、汞、砷等重金属等结合，而具有综合的细胞解毒能力。维生素。
18、C也是一种重要的抗氧化剂，其在体内许多氧化还原反应中有重要作用。维生素C能够通过保持巯基SH处于还原状态而维持以SH为活性中心酶的活性。维生素C可以使氧化型谷胱甘肽GSSG转化为还原型谷胱甘肽GSH，而且能将有机体代谢产生的过氧化氢H2O2还原。因此，维生素C与还原性谷胱甘肽组合，能够提高谷胱甘肽的功效。0006酿酒酵母通常是天然谷胱甘肽的重要来源之一，同时酵母细胞中优质蛋白含量高达42,其中含有多种维生素和人体必需氨基酸。千百年来，酵母一直是人类有效的营养补充剂和强化剂。美国、日本及欧洲一些国家在普通的粮食制品如面包、蛋糕、饼干等食品中加入5左右的食用酵母粉或酵母抽提物以提高其营养价值。酵母。
19、自溶物可作为肉类、果酱、汤类、乳酪、面包类食品、蔬菜及调味料的添加剂；在婴幼儿食品和健康食品中作为营养强化剂。0007目前5氨基乙酰丙酸和谷胱甘肽的保健制品都采用纯品5ALA和GSH，造成成本高，进而限制了其被人们广泛接受的不足；同时本领域一直缺乏一种简单、安全的将二者组合利用的生物制品。发明内容0008针对目前5氨基乙酰丙酸和谷胱甘肽的保健制品都采用纯品5ALA和GSH，造成成本高，难以被广大普通消费者接受的不足，同时本领域一直缺乏一种简单、安全的将二者组合利用的生物制品的现状，本发明的目的是提供一种由益生菌发酵制备的保健食品。该食品富含5ALA和GSH，具有抗氧化功能，同时对酒精中毒、重金。
20、属中毒均具有缓解作用，能够保护肝脏、促进血液再生和提高人体基础代谢和抗疲劳等功效。0009采用的技术方案是0010复合保健食品，包含5氨基乙酰丙酸和谷胱甘肽，采用以下方法制备；001115氨基乙酰丙酸制备培养基组成；酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，PH72；培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含量为8015MG/L，获得原发酵液A。00122谷胱甘肽制备培养基组成；磷酸80140G/。
21、L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙0104G/L、葡萄糖600800G/L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为100300MG/L，获得发酵液B。00133发酵液A和发酵液B，经过固液分离、破壁、酶解、澄清、浓缩、调配后，制成品，其中每克制品中含520MG5氨基乙酰丙酸和26MG谷胱甘肽，以保证足够的生物学活性，同时又能保证制备工艺的简易性。说明书CN1041461。
22、42A3/7页70014更具体的，上述复合保健食品采用下述方法制备；001515氨基乙酰丙酸的制备；采用的培养基组成为酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，PH72；培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含量为8015MG/L，获得原发酵液A。00162谷胱甘肽的制备；培养基组成为磷酸80140G/L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙0104G/L、葡萄糖600800G/。
23、L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为100300MG/L，获得发酵液B。00173发酵液处理，取适量发酵液A，减压浓缩至原体积的1/31/6，获得浓缩发酵液C；取适量发酵液B,5000RPM离心35MIN，弃上清，获得湿酵母菌体D。00184以浓缩发酵液C重悬菌体沉淀D，其中C与D的体积比为10110，混合、搅拌均匀，进行细胞破壁处理，得到均一的体系E。00195在E中加入有机酸溶液调。
24、节PH3040，并搅拌均匀，获得均一体系F；00206向F体系中添加酸性蛋白酶，酸性蛋白酶与F体系的重量体积比W/V为0000010000051，保温5060，并保持1830小时，进行蛋白水解。00217将6中水解后的体系进行600012000RPM高速离心510MIN，除去细胞壁及变性蛋白，获得澄清体系。00228将澄清体系减压浓缩至固含物5080，获得粘稠均一体系G。00239将G与其他功能辅料调配，冷冻干燥至含水量69WT的固形物H；002410将H压片或制备胶囊制得成品保健食品。0025其中，步骤5中所述有机酸选自乳酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸之一或其组合。0026步骤9中的所述辅料包括。
25、食品中可接受的粘合剂，调味剂，所述粘合剂在体系G中的重量体积比W/V为12100，其粘合剂为羟丙甲纤维素。所述调味剂在体系G中的重量体积比W/V为1210，其调味剂为果葡糖浆、麦芽糖糊精、赤藓糖醇之一或其组合物。0027优选的，步骤7中得到的澄清体系在浓缩前先经过过有机超滤膜过滤，截留分子量10100KD。0028本发明的另一个目的是提供上述复合保健食品的制备方法，具体而言，本发明涉及含有5ALA丙酸杆菌菌体及发酵液上清浓缩液与含有GSH酿酒酵母菌体混合后，添加辅料制备保健食品的方法，包括丙酸杆菌发酵生物合成ALA、酿酒酵母发酵生物合成GSH、发酵液的浓缩、菌体重悬液均质与澄清、超滤、浓缩、干。
26、燥，制备益生菌来源的生物制品。0029复合保健品的制备方法，包含以下步骤；003015氨基乙酰丙酸制备培养基组成；酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，PH72；培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含说明书CN104146142A4/7页8量为8015MG/L，获得原发酵液A。00312谷胱甘肽制备培养基组成；磷酸80140G/L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙010。
27、4G/L、葡萄糖600800G/L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为100300MG/L，获得发酵液B。00323发酵液A和发酵液B，经过固液分离、破壁、酶解、澄清、浓缩、调配后，制成品，其中每克制品中含520MG5氨基乙酰丙酸和26MG谷胱甘肽，以保证足够的生物学活性，同时又能保证制备工艺的简易性。0033更具体的，所述制备方法包括一下步骤003415氨基乙酰丙酸的制备；采用的培养基。
28、组成为酵母浸膏515G/L、大豆蛋白胨818G/L、乳酸钠2035G/L，甘氨酸1018G/L、琥珀酸285G/L、葡萄糖118G/L，PH72；培养基高压湿热灭菌后，接种110V/V费氏丙酸杆菌培养液OD0510进行厌氧发酵；培养温度为322，静态培养510天；发酵结束后，发酵液中5氨基乙酰丙酸含量为8015MG/L，获得原发酵液A。00352谷胱甘肽的制备；培养基组成为磷酸80140G/L、硫酸铵80100G/L、硫酸镁2050G/L、氯化钙0104G/L、葡萄糖600800G/L、谷氨酸14G/L、甘氨酸0525G/L、半胱氨酸1535G/L，PH50，培养基高压湿热灭菌后，接种110V。
29、/V酿酒酵母培养液OD1020进行发酵；培养温度为291，培养时间6080小时，发酵结束后酵母湿重为80300G/L，谷胱甘肽发酵水平为100300MG/L，获得发酵液B。00363发酵液处理，取适量发酵液A，减压浓缩至原体积的1/31/6，获得浓缩发酵液C；取适量发酵液B,5000RPM离心35MIN，弃上清，获得湿酵母菌体D。00374以浓缩发酵液C重悬菌体沉淀D，其中C与D的体积比为10110，混合、搅拌均匀，进行细胞破壁处理，得到均一的体系E。00385在E中加入有机酸溶液调节PH3040，并搅拌均匀，获得均一体系F；00396向F体系中添加酸性蛋白酶，酸性蛋白酶与F体系的重量体积比W。
30、/V为0000010000051，保温5060，并保持1830小时，进行蛋白水解。00407将6中水解后的体系进行600012000RPM高速离心510MIN，除去细胞壁及变性蛋白，获得澄清体系。00418将澄清体系减压浓缩至固含物5080，获得粘稠均一体系G。00429将G与其他功能辅料调配，冷冻干燥至含水量69WT的固形物H；004310将H压片或制备胶囊制得成品保健食品。0044其中步骤5中所述有机酸选自乳酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸之一或其组合。0045步骤9中的所述辅料包括食品中可接受的粘合剂，调味剂，所述粘合剂在体系G中的重量体积比W/V为12100，其粘合剂为羟丙甲纤维素；所述调味。
31、剂在体系G中的重量体积比W/V为1210，其调味剂为果葡糖浆、麦芽糖糊精、赤藓糖醇之一或其组合物。0046优选的，步骤7中得到的澄清体系在浓缩前先经过过有机超滤膜过滤，截留分说明书CN104146142A5/7页9子量10100KD。0047谷胱甘肽含量测定方法0048采用HPLC系统方法柱子C18，25CM46MM，5M；检测波长200NM；流速10ML/MIN。流动相为磷酸二氢钾和庚烷磺酸钠缓冲液称取005MOL磷酸二氢钾和22G的庚烷磺酸钠，用纯化水配制成1L，用磷酸调至PH30。发酵液的处理取发酵液5ML在50ML容量瓶中加10ML纯化水，加23滴浓硫酸，摇匀，在100以上水溶液中快速。
32、加热到88，停留20S，取出快速冷却到室温，再用纯化水加到刻度，离心进样。谷胱甘肽标准溶液的配制将50MG的标准品溶于50ML的HPLC级水中，用磷酸调PH至30以下，04保存。0049本发明中5ALA的测定方法如下00505ALA的检测方法根据MAUZERALL和GRANICK的方法修改而来。反应体系中含有1ML离心后获得的上清液和05ML1乙酰丙酮缓冲液PH46。将反应体系于100水浴中保持15分钟,然后冷却至室温，与15ML新鲜配制的EHRLICHS试剂混合1G对二甲胺基苯甲醛溶于42ML冰乙酸和8ML70V/V高氯酸中，并于室温下反应10分钟。于553NM波长下，测得吸光度,换算5AL。
33、A的浓度。0051本发明的有益效果00525ALA可提高机体基础代谢速率、促进新陈代谢，为有机体细胞提供更充足的营养而实现的抗衰老，但此过程中必然会产生更多的自由基类物质。而GSH可以有效清除自由基达到抗氧化、促进细胞排毒、进而延缓衰老的作用，二者相互协同，有益于人体稳恒态的维持，抵御亚健康。具体实施方式0053以下结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。0054实施例10055发酵培养0056在1升三角瓶中，装入800毫升纯净水配制培养基，其中含有如下成份56克酵母浸膏、8克大豆蛋白胨、20克食品级乳酸钠、9克甘氨酸、3克琥珀酸、12克葡萄糖，PH72,115、高压湿热灭菌30MIN，自然冷。
34、却至室温，接种48ML的费氏丙酸杆菌培养液OD08；培养温度为33，静态培养6天，获得原发酵液A。0057在2升三角瓶中，将45G磷酸、41G硫酸铵、178G硫酸镁、015G氯化钙、32G葡萄糖溶入420ML纯净水中，调PH至50，115高压湿热灭菌20MIN；同时将07G谷氨酸、034甘氨酸、05G半胱氨酸溶入80ML纯净水中，用022M滤膜过滤除菌后，合并入盛有已灭菌培养液的2升三角瓶中。接种10ML的酿酒酵母发酵液OD10，于291、180RPM摇床转速下，连续培养50H，获得原发酵液B。0058丙酸杆菌发酵结束时，细胞浓度湿重约为18G/L，5ALA含量约为10MG/L。0059酿酒酵。
35、母发酵结束时，细胞浓度湿重约为80G/L，GSH含量约为110MG/L。后处理过程00601将500ML发酵液A减压浓缩获得浓缩发酵液C120ML；取500ML发酵液B,6000RPM离心5MIN，弃上清，获得40克湿酵母菌体。说明书CN104146142A6/7页1000612将湿酵母菌体D40克用浓缩发酵液C120ML重悬，混合、搅拌均匀，过高压均质机进行细胞破壁3次，压力为80MPA；得到均一的重量为175克的体系E。00623在E中加入体积比1的乳酸和重量比1的柠檬酸，并搅拌均匀，获得均一体系F,180ML,其PH为31。00634在F体系添加0004克酸性蛋白酶00022W/V，保温。
36、551，并保持26小时，进行蛋白水解。006459000RPM高速离心8分钟，获得澄清体系，取上清液；弃去细胞壁及变性蛋白形成的沉淀。00656将5中的澄清体系过有机超滤膜，截留分子量10KD，进一步去除杂质；获得进一步澄清的体系，该步骤只是为了获得杂质更少的澄清体系，实际上也可以省略该步骤。00667将6中的澄清体系减压浓缩获得固含物80W/W的粘稠均一体系G。00678将G与麦芽糖糊精和羟丙甲纤维素按891017G08G008G混合调配,进行真空低温干燥至含水量为6的固形物H。00689将固形物H以制粒机造粒，然后经压片机压片制得成品，每片重1克。0069实施例20070发酵培养0071在。
37、500ML三角瓶中，装入400ML纯净水配制的培养基，其中含有如下成份6克酵母浸膏、83克大豆蛋白胨、11克食品级乳酸钠、58克甘氨酸、14克琥珀酸、08克葡萄糖，PH72,112、高压湿热灭菌35MIN，自然冷却至室温，接种16ML丙酸杆菌培养液OD09；培养温度为35，静态培养7天，发酵结束后，获得原发酵液A。0072在范围内，注意此处实际上是300ML培养基22080在1升三角瓶中，将32G磷酸、25G硫酸铵、11G硫酸镁、011G氯化钙、20G葡萄糖溶入220ML纯净水中，调PH至50，112高压湿热灭菌30MIN；同时将12G谷氨酸、06G甘氨酸、09G半胱氨酸溶入80ML纯净水中，。
38、用022M滤膜过滤除菌后，合并入盛有已灭菌培养液的1升三角瓶中，即发酵体系为300ML。接种5V/V的酿酒酵母种子液15ML，于291、200RPM摇床转速下，连续培养38H，获得原发酵液B。0073丙酸杆菌发酵结束时，细胞浓度湿重约为19G/L，5ALA含量约为12MG/L。0074酿酒酵母发酵结束时，细胞浓度湿重约为86G/L，GSH含量约为132MG/L。后处理步骤00751将400ML发酵液A减压浓缩获得浓缩发酵液C80ML，；取300ML发酵液B,8000RPM离心3MIN，弃上清，获得258克湿酵母菌体D。00762将湿酵母菌体D用浓缩发酵液C重悬，混合、搅拌均匀，过胶体磨进行细胞。
39、破壁3次；得到均一的体系E。00773在E中加入07V/V的苹果酸和1V/V的柠檬酸溶液，并搅拌均匀，获得PH33的均一体系F，90ML。00784在F体系添加0005W/V百分比的酸性蛋白酶045克，保温561，并保持10小时，进行蛋白水解。0079510,000RPM高速离心6分钟，获得澄清体系，取上清液；弃去细胞壁及变性蛋白形成的沉淀。说明书CN104146142A107/7页1100806将5中的澄清体系过有机超滤膜，截留分子量100KD，进一步去除杂质；获得更为澄清的体系。00817将6中的澄清体系减压浓缩至固含物75W/W的粘稠膏状物G。00828将膏状物G与70W/V果葡糖浆和羟。
40、丙甲纤维素按8451451重量比混合调配，进行真空干燥至含水量为7的固形物H。00839将固形物H以制粒机造粒，然后经压片机压片制得成品,每片重600MG。0084实施例300855ALA发酵培养0086在3个2升三角瓶中，分别装入15升纯净水配制的培养基，其含9克酵母浸膏、13克大豆蛋白胨、45克食品级乳酸钠、24克甘氨酸、58克琥珀酸、225克葡萄糖，PH75,115、高压湿热灭菌30MIN，自然冷却至室温，接种90ML丙酸杆菌培养液OD07；培养温度为33，静态培养9天，发酵结束后，获得原发酵液A。0087GSH发酵转化0088在7升发酵罐中，将50克磷酸、35克硫酸铵、12克硫酸镁、1。
41、克氯化钙、247克葡萄糖溶入38升纯净水中，调PH至50，115高压湿热灭菌28MIN；接种200ML酿酒酵母种子液OD10，于281、搅拌转速200600RPM，连续培养32H。同时，将220克葡萄糖、6克硫酸铵、6克硫酸镁、08克氯化钙、18克谷氨酸、10克甘氨酸、13克半胱氨酸溶入800ML纯净水中，用022M滤膜过滤除菌后，加入补料流加瓶中。发酵过程中溶氧保持大于20，当发酵培养基中葡萄糖浓度低于05时，开始流加补料培养基，直至补料完成，OD值回升，发酵结束，获得原发酵液B。0089丙酸杆菌发酵结束时，细胞浓度湿重为22G/L，5ALA含量为13MG/L。0090酿酒酵母发酵结束时，细。
42、胞浓度湿重为200G/L，GSH含量为260MG/L。0091ALA和谷胱甘肽酿酒酵母发酵液的处理和生物制品制备与实例1和实例2类似，不再赘述。0092实施例40093如实施例3所述的5ALA发酵培养。0094在30升发酵罐中，装入12升培养基，首先将160克磷酸、96克硫酸铵、38克硫酸镁、35克氯化钙、720克葡萄糖溶入12升纯净水中，调PH至50，110高压湿热灭菌30MIN；接种800ML酿酒酵母种子液OD15，于281、搅拌转速200600RPM，连续培养28H。同时，将600克葡萄糖、20克硫酸铵、20克硫酸镁、25克氯化钙、55克谷氨酸、33克甘氨酸、40克半胱氨酸溶入25升纯净水中，充分溶解，用022M滤膜过滤除菌后，加入5升消毒后的补料流加瓶中。发酵过程中溶氧保持大于25，当发酵培养基中葡萄糖浓度低于08时，开始流加补料培养基，保持发酵液中糖浓度大于05，直至补料完成，OD值回升，发酵结束，获得原发酵液B。0095丙酸杆菌发酵结束时，细胞浓度湿重为25G/L，5ALA含量为12MG/L。0096酿酒酵母发酵结束时，细胞浓度湿重为260G/L，GSH含量为251MG/L。00975ALA和谷胱甘肽酿酒酵母发酵液的处理和生物制品制备与实例1和实例2类似，不再赘述。说明书CN104146142A11。