一种制备高纯度槲皮素的方法.pdf

本发明公开了一种制备高纯度槲皮素的方法。取槲皮素粗品加入溶剂并充分搅拌后，加热使其全部溶解，滤去残渣后取滤液；再加入低溶解性溶剂，继续加热回流，取滤液静置，待结晶析出取下层结晶物；将下层结晶物仔细碾碎，加入清洗溶剂，超声振洗减压抽滤得到固体；真空干燥除去溶剂，得到最终槲皮素。本发明方法条件简单，操作简便、处理量大，适用于中量及大量高纯度槲皮素的制备，具有很高的经济效益和应用价值。

1.   一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：依次采用溶解、重结晶和溶剂洗涤的方法从槲皮素粗品中分离制备得到。

2.   根据权利要求1所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：
1）溶解：取槲皮素粗品，加入溶剂并充分搅拌后，加热使其全部溶解，加热温度为40～100℃，滤去残渣后取滤液；
2）重结晶：往滤液中再加入低溶解性溶剂，继续加热回流，加热温度为40～100℃，取滤液静置一段时间，待结晶生成析出，取出下层结晶物；
3）溶剂洗涤：将下层结晶物仔细碾碎，加入清洗溶剂，超声振洗15min后，然后减压至0.08-0.03MPa抽滤得到固体；
4）将所得固体在50℃～100℃条件下真空干燥除去溶剂，得到最终高纯度槲皮素。

3.   根据权利要求2所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述步骤2）低溶解性溶剂的每毫升溶解度小于10mg。

4.   根据权利要求2所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述步骤1）溶解所使用的溶剂和步骤2）重结晶所使用的低溶解性溶剂均采用由脂肪醇类、脂肪酮类、脂肪酯类和醚类中的二个或以上组分组成。

5.   根据权利要求2所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述步骤1）槲皮素粗品与加入溶剂的质量体积比为1g：5～100ml，优选为1g：5～20ml。

6.   根据权利要求2所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述步骤2）槲皮素粗品与低溶解性溶剂的质量体积比为1g：5～30ml，优选为1g：5～20ml。

7.   根据权利要求2所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述步骤2）加热回流后的滤液在温度范围为0℃至90℃的环境下静置1天至15天。

8.   根据权利要求4所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述步骤2）低溶解性溶剂选自烷烃类、氯代烃类有机溶剂或者水。

9.   根据权利要求1所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述步骤3）清洗溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或者叔丁醇。

10.   根据权利要求4所述的一种高纯度槲皮素的制备方法，其特征在于：
所述的脂肪醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或者叔丁醇；所述的脂肪酮类选自丙酮或者丁酮；所述的脂肪酯类选自乙酸乙酯；所述的醚类选自二氧六环、四氢呋喃或者乙醚。

一种制备高纯度槲皮素的方法
技术领域
本发明涉及一种槲皮素的纯化方法，具体涉及一种制备高纯度槲皮素的方 法，从槲皮素粗品开始通过重结晶的方法制得。
背景技术
槲皮素又名栎精，槲皮黄素，是一种多羟基的天然黄酮类化合物，其二水 合物为黄色或黄绿色针状结晶，久置空气中颜色加深。可溶于甲醇、丙酮等， 不溶于水，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。其分子式 C₁₅H₁₀O₇·2H₂O结构如下：

槲皮素广泛分布于植物界约100多种中草药中,如地耳草(田基黄)、红枣、 番石榴叶、罗布麻、菟丝子、洋葱、桑叶、地锦草、刺五加、余甘子、三白 草、三七等。其中槐米花中含量高达4％。槲皮素不仅在自然界中广泛分布， 其药理作用也很广泛，在心血管方面，槲皮素可以降低血脂、扩张血管、增加 冠脉血流量并增加心肌收缩力，对心血管疾病具有一定的辅助治疗作用。槲皮 素还对多种恶性肿瘤细胞有抑制增殖作用，它还可以逆转肿瘤细胞的多药耐药 性，并能增强其他抗肿瘤药物对肿瘤细胞作用的敏感性，在美国，槲皮素治疗 前列腺癌已是非处方药，可以在药店买到。另外，槲皮素还具有抗炎、抗氧 化、清除自由基、抗病毒、抗菌以及治疗糖尿病的作用。
由于槲皮素在医药、食品、化妆品行业具有深远的应用前景，因此在日常 科研及生产过程中，高纯度槲皮素的需求也在不断增加。由于槲皮素本身的性 质特点，如含多个羟基，溶解性差，对光、热、空气较为敏感，使得槲皮素纯 品难以制备。目前市售的槲皮素纯品一般纯度在95％-97％左右，尚无法很好地 满足科学检测以及高质量食品药品生产的要求。目前，针对高纯度槲皮素生产 的工艺报道较少。
发明内容
本发明要解决的问题是提供一种低成本、工艺简单、产品质量高的高纯度 槲皮素制备方法。本方法采用重结晶和溶剂洗涤的方法，得到纯度大于99％的 槲皮素。
本发明采用如下方法步骤以实现上述要求：
本发明方法依次采用溶解、重结晶和溶剂洗涤的方法从槲皮素粗品中分离 制备得到。所述方法具体步骤如下：
1)溶解：取槲皮素粗品，加入溶剂并充分搅拌后，加热使其全部溶解，加 热温度为40～100℃，滤去残渣后取滤液；
2)重结晶：往滤液中再加入低溶解性溶剂，继续加热回流，加热温度为 40～100℃，取滤液静置一段时间，待结晶生成析出，取出下层结晶物；
3)溶剂洗涤：将下层结晶物仔细碾碎，加入清洗溶剂，超声振洗15min 后，然后减压至0.08-0.03MPa压力抽滤得到固体；
4)将所得固体在50℃条件下真空干燥除去溶剂，得到最终槲皮素，回收率 60％-70％左右。
所述步骤2)低溶解性溶剂的每毫升溶解度小于10mg。
所述步骤1)溶解所使用的溶剂和步骤2)重结晶所使用的低溶解性溶剂均 采用由脂肪醇类、脂肪酮类、脂肪酯类和醚类中的二个或以上组分组成。
所述步骤1)槲皮素粗品与加入溶剂的质量体积比为1g：5～100ml，优选 为1g：5～20ml。
所述步骤2)槲皮素粗品与低溶解性溶剂的质量体积比为1g：5～30ml，优 选为1g：5～20ml。
所述步骤2)加热回流后的滤液在温度范围为0℃至90℃的环境下静置1天 至15天。
所述步骤2)低溶解性溶剂选自烷烃类、氯代烃类有机溶剂或者水，优选可 为正己烷、环己烷、环戊烷、正庚烷、石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲 烷、1,2-二氯乙烷或者水。
所述步骤3)清洗溶剂优选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或者叔丁醇。
所述的脂肪醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或者叔丁醇；
所述的脂肪酮类选自丙酮或者丁酮；
所述的脂肪酯类选自乙酸乙酯；
所述的醚类选自二氧六环、四氢呋喃或者乙醚。
本发明的有益效果是：
本发明以槲皮素粗品(芦丁水解物)为原料，通过多种溶剂重结晶，溶剂 洗涤、烘干等操作，得到纯度大于99％的槲皮素。本发明方法条件简单，操作 简便、处理量大，适用于中量及大量高纯度槲皮素的制备，具有很高的经济效 益和应用价值。
附图说明
图1为槲皮素纯品的高效液相色谱图。
图2为槲皮素纯品的红外色谱图。
图3为槲皮素纯品的氢核磁共振谱图。
图4为槲皮素纯品的碳核磁共振谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
本发明的实施例如下：
实施例1
取50g槲皮素粗品溶解于500mL四氢呋喃中，充分搅拌后，滤去残渣，将 滤液加热至70℃，回流半小时得到澄清溶液。往溶液中加入750mL石油醚，有 少许固体析出，继续在70℃温度下加热回流1小时，趁热过滤，取滤液，于 50℃条件下静置冷却2天后，倒去上层溶液，取出杯底的晶体，用研钵小心碾 碎后，加入约200mL甲醇，超声清洗15min后，在0.08MPa压强下抽滤得到淡 黄色固体。将该固体在50℃真空干燥，除去溶剂，得到产品32.6g，含量 99.1％。
实施例2
取50g槲皮素粗品溶解于250mL四氢呋喃中，充分搅拌后，滤去残渣，将 滤液加热至70℃，回流半小时得到澄清溶液。往滤液中加入200mL石油醚，继 续在70℃温度下加热回流1小时，趁热抽滤，取滤液，于90℃条件下静置1天 后，倒去上层溶液，取出杯底的晶体，用研钵小心碾碎后加入约200mL乙醇， 超声清洗15min后，在0.03MPa压强下抽滤得到淡黄色固体。将该固体在100℃ 真空干燥，除去溶剂，得到产品35.6g，含量99.4％。(纯度如下表一及图1所 示)
表1图1槲皮素纯品的高效液相色谱纯度分析结果


实施例3
取10g槲皮素粗品溶解于1000mL四氢呋喃中，充分搅拌后，滤去残渣，将 滤液加热至60℃，回流半小时得到澄清溶液。往滤液中加入300mL石油醚，继 续于60℃下加热1小时，趁热抽滤，取滤液，于0℃条件下静置冷却5天后， 倒去上层溶液，取出杯底的晶体，用研钵小心碾碎后加入约40mL乙醇，超声 清洗15min后，在0.05MPa压强下抽滤得到淡黄色固体。将该固体在100℃真 空干燥，除去溶剂，得到产品3.17g，含量99.8％。
实施例4
取10g槲皮素粗品溶解于1000mL无水乙醇中，充分搅拌后，滤去残渣，将 滤液加热至90℃，回流半小时得到澄清溶液。往滤液中加入300mL石油醚，继 续在90℃下加热回流1小时，趁热抽滤，取滤液，于23℃条件下静置冷却3天 后，倒去上层溶液，取出杯底的晶体，用研钵小心碾碎后加入约40mL乙醇， 超声清洗15min后，在0.03MPa压强下抽滤得到淡黄色固体。将该固体在50℃ 真空干燥，除去溶剂，得到产品7.33g，含量98.7％。
实施例5
取10g槲皮素粗品溶解于50mL无水乙醇中，充分搅拌后，滤去残渣，将滤 液加热至80℃，回流半小时得到澄清溶液。往滤液中加入50mL石油醚，继续 加热至80℃保持1小时，趁热抽滤，取滤液，于50℃条件下静置冷却2天后， 倒去上层溶液，取出杯底的晶体，用研钵小心碾碎后加入约40mL乙醇，超声 清洗15min后，在0.08MPa压强下抽滤得到淡黄色固体。将该固体在100℃真 空干燥，除去溶剂，得到产品6.52g，含量99.0％。
实施例6
取50g槲皮素粗品溶解于1000mL二氧六环中，充分搅拌后，滤去残渣，将 滤液加热至40℃，半小时得到澄清溶液。往滤液中加入200mL石油醚，继续在 40℃下加热1小时，趁热抽滤，取滤液，于50℃条件下静置冷却1天后，倒去 上层溶液，取出杯底的晶体，用研钵小心碾碎后加入约40mL乙醇，超声清洗 15min后，在0.05MPa压强下抽滤得到淡黄色固体。将该固体在50℃真空干 燥，除去溶剂，得到产品42.16g，含量99.2％。
实施例7
取50g槲皮素粗品溶解于250mL二氧六环中，充分搅拌后，滤去残渣，将 滤液加热至100℃，回流半小时得到澄清溶液。往滤液中加入50mL水，继续加 热至100℃回流1小时，趁热抽滤，取滤液，于23℃条件下静置冷却8天后， 倒去上层溶液，取出杯底的晶体，用研钵小心碾碎后加入约20mL乙醇，超声 清洗15min后，在0.03MPa压强下抽滤得到淡黄色固体。将该固体在50℃真空 干燥，除去溶剂，得到产品34.78g，含量98.3％。
上述各个实施例的槲皮素粗品均购自西安瑞林生物科技有限公司。上述实 施例得到的高纯度槲皮素产物的红外色谱、氢核磁共振图谱以及碳核磁共振图 谱，分别如图2、图3、图4所示。由图中可见，通过该纯化的过程，原槲皮素 粗品中的杂质已经几乎完全除去，得到近乎单一物质的图谱信号(可添加相关 描述)
由此，本发明通过重结晶和溶剂洗涤等操作，经过高效液相色谱(图1)、 红外色谱(图2)、氢核磁共振图谱(图3)以及碳核磁共振图谱(图4)等检测手段检 测，得到最高纯度达99.4％的槲皮素纯品。该高纯度槲皮素可作为高纯度试剂以 及食品药品检测中的槲皮素标准对照品。所用的溶剂可为C1-C10烷烃类、氯代 烃类、脂肪醇类、脂肪酮类、脂肪酯类、醚类等非水溶剂。根据原料情况，总 收率可高达70％以上，用于中量及大量高纯度槲皮素的制备，具有成本低廉操 作简便等优点，具有突出显著的技术效果。