一种高粱外种皮提取物及其提取方法和应用 【技术领域】
本发明涉及一种高粱外种皮提取物，本发明还涉及一种所述高粱外种皮提取物的提取方法及其在制备具有护肝作用的保健食品中的应用。
背景技术
原花青素是广泛存在于植物中的一类多酚聚合物。自1951年法国教授Jacques Masquelier首次从地中海松树皮提取得到原花青素以后，人们不断在自然中发现新的富含原花青素的资源，并对其组成和结构进行分析鉴定。现代生物学和药理学证明，原花青素具有无毒、无致癌、无致畸变、无过敏等特点，其抗氧化能力远强于维生素E和维生素C，能够有效清除自由基，保护细胞免遭自由基的损伤，从而减少由于自由基的破坏作用而造成的多种疾病的发生，如能降低癌症、冠心病、糖尿病引起的视网膜病等疾病的发病几率；减轻过敏症状，提高人体免疫力，减缓早老性痴呆和老年性白内障等疾病的进程，降低动脉样硬化和心血管疾病的发病率，同时还可以预防太阳光线对皮肤的辐射损伤。
目前，原花青素的提取原料主要有葡萄籽、葡萄皮、松树皮等，其提取方法主要有机溶剂法，超临界二氧化碳萃取法和吸附层析法等，而对高粱外种皮的原花青素的研究甚少。我国幅员辽阔，高粱的种植面积和产量居世界前列，充分利用我国的高粱资源优势，从其外种皮中提取具有生物活性的原花青素，有利于提高农作物高粱的附加值，具有广泛地经济效益和社会效益。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种富含低聚原花青素的高粱外种皮提取物。
本发明的另一目的在于提供该高粱外种皮提取物的提取方法。
本发明的目的还在于提供该高粱外种皮提取物在制备具有护肝作用的保健食品中的应用。
本发明提供的高粱外种皮提取物含有重量含量不少于95％的原花青素，其中含有重量含量不少于90％、分子量在289～1441之间的低聚原花青素。
本发明提供的高粱外种皮提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取高粱及其外种皮粉碎，过10～60目筛；
(2)加入浸提剂搅拌提取1～3次，提取温度10～100℃，提取时间1～6小时，料液比1∶1～20，过滤，减压浓缩，得浓缩液；
(3)所得浓缩液加入无机盐，过滤或离心去除固体残渣，得到清液；
(4)取清液体积1～5倍的萃取剂对所得清液进行萃取，重复1～3次，合并萃取液，减压浓缩，过滤得到浓缩液；
(5)加入步骤(4)浓缩液体积1～5倍的结晶剂，0℃～30℃静置3～5小时，过滤或离心收集固体，干燥得到高粱外种皮提取物。
本发明所述的浸提剂为水、乙醇、甲醇、丙酮中的一种或几种混合液；所述的无机盐为硫酸铵、氯化铵、硫酸钠、硫酸钾、氯化钠、氯化钙、硫酸钙、氯化钾、硝酸钠、硝酸钾、硝酸铵中的一种或几种混合物；所述的萃取剂为乙酸乙酯、正丁醇或两者的混合物；所述的结晶剂为乙醚、二氯甲烷、氯仿、石油醚中的一种或几种混合物。
本发明提供的高粱外种皮提取物，可与一种或多种药学上可接受的载体(辅料)配制成胶囊、含片、冲剂、饮料等剂型。
本发明提供的高粱外种皮提取物的提取方法，具有以下优点：原料容易获得，价格低廉；所用试剂均为常用试剂，且可在回收后再使用以降低生产成本，减少污染；操作条件比较简单，易于实现工业化生产；提取后的残渣还可用作优质饲料，具有显著的的商业优势。
经药效学试验表明，本发明提供的高粱外种皮提取物，可研制成系列对酒精性肝损伤具有保护作用的保健食品，具有价格便宜、药效显著、食用方便等特点，在辅助治疗及预防酒精性肝损伤方面具有重要意义。
下面结合具体实施方式及药效学试验对本发明作进一步说明。
【具体实施方式】
第一部分 高粱外种皮提取物的提取及应用
实施例1
将干燥的高粱外种皮原料1公斤粉碎至40目；加入10升50％的丙酮，在温度80℃回流搅拌3小时，过滤或离心除去残渣，减压浓缩；在浓缩液中加入硫酸铵，使其终浓度为20％，过滤或离心除去残渣，得上清液；加入3升乙酸乙酯，萃取2次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩，再加入无水硫酸钠，过滤收集滤液；再加入3升石油醚，30℃静置4小时，过滤或离心收集沉淀，再重结晶一次，最后干燥得到约30克高粱外种皮提取物，其中含有28.5克的原花青素及27.0克的低聚原花青素，分别占提取物总量的95％和90％。
实施例2
将高粱外种皮100公斤粉碎过40筛，加入1000升70％的甲醇溶液，50℃提取2小时，过滤去除残渣，减压浓缩；在剩余溶液中加入50公斤氯化钠，过滤收集上清液；加入600升乙酸乙酯萃取，分离得到乙酸乙酯，减压浓缩；再加入300升石油醚，4℃静置4小时，过滤收集沉淀；在重结晶一次，最后干燥得到3.2公斤高粱外种皮提取物，其中含有3.04公斤的原花青素及2.88公斤的低聚原花青素，分别占提取物总量的95％和90％。
实施例3
将本发明的高粱外种皮提取物与甘露醇或乳糖，按1∶4比例，混合均匀后，压成颗粒，经整粒包装制成具有护肝作用的高粱外种皮提取物冲剂。成人每日食用1～10克，对酒精性肝损伤具有良好的保护作用。
实施例4
将本发明的高粱外种皮提取物与葡萄糖或乳糖，按1∶3比例，混合均匀后，包装制成具有护肝作用的高粱外种皮提取物胶囊。成人每日食用1～3粒胶囊，对酒精性肝损伤具有良好的保护作用。
实施例5
将本发明的高粱外种皮提取物0.5克，乳糖1.0克，白砂糖粉0.5克，10％淀粉糖浆1.0克，按此配方将各种物质混合均匀，压片制成具有护肝作用的高粱外种皮提取物含片。成人每日食用1～3片含片，对酒精性肝损伤具有良好的保护作用。
实施例6
将本发明的高粱外种皮提取物100克，果汁50千克，维生素C 100克，白糖130千克，稳定剂100克，苯甲酸钠450克，水质香精1千克，加水至1000千克，混合均匀灭菌包装，制成具有护肝作用的高粱外种皮提取物饮料。
第二部分 药效学试验
本发明提供的高粱外种皮提取物及由高粱外种皮提取物制备而成的胶囊、含片、饮料、冲剂，对酒精性肝损伤具有良好的保护作用。已经过动物实验证明，药效实验报告如下：
1、样品：护肝作用的高粱外种皮提取物胶囊、含片、饮料、冲剂
2、实验动物：WISTER大鼠，体重150～250克，雌雄各半
3、试验方法：
(1)动物分组：50只大鼠随机分为5组，即模型组，对照组，给药大、中、小剂组，每组10只，雌雄各半。
(2)造模及给药：
对照组：每日给白开水，摄食饲料。
模型组：每日给42度白酒，摄食加有猪油和胆固醇的饲料。
大剂量组：每日给42度白酒，摄食加有猪油和胆固醇的饲料，每日喂高粱外种皮提取物量：0.20g/kg。
中剂量组：每日给42度白酒，摄食加有猪油和胆固醇的饲料，每日喂高粱外种皮提取物量：0.10g/kg。
小剂量组：每日给42度白酒，摄食加有猪油和胆固醇的饲料，每日喂高粱外种皮提取物量：0.05g/kg。
各组上述方法饲养30天，第30天取血测定肝功能及过氧化脂质。
(3)测试结果
表1：高粱外种皮提取物对酒精性肝损伤大鼠肝功能及过氧化脂质的影响(n＝10， X±S)
组别 喂药量(g/kg) 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 酸性磷酸酶 过氧化脂质
对照组 - 33.42±5.83 129.53±19.81 13.25±4.21 0.72±0.55
模型组 - 81.58±9.29a 301.19±32.39a 33.47±7.24a 10.12±0.38a
大剂量组 0.20 69.78±8.21c 239.46±29.38b 16.53±5.12b 1.96±0.62b
中剂量组 0.10 73.34±7.67c 251.26±36.22c 19.36±6.69b 4.14±0.73b
小剂量组 0.05 77.98±5.37 268.87±25.71d 22.93±3.72c 6.19±0.63b
备注：a与对照组比较P＜0.001；b，c，d与模型组比较P＜0.001，P＜0.01，P＜0.05试验结果表明：
(1)模型组与对照组比较，大鼠肝功能各项生化指标均有明显变化，说明此肝损伤模型成功。
(2)大剂量组、中剂量组、小剂量组同模型组比较，各项生化指标有不同程度的降低，说明高粱外种皮提取物对形成的肝损伤明显的保护作用。
(3)大剂量组、中剂量组、小剂量组同对照组比较，各项生化指标仍然偏高，说明在持续进行肝损伤时，以上剂量的高粱外种皮提取物仍无法完全恢复肝的正常功能。