B型肝炎病毒复制抑制剂 【技术领域】
本发明涉及在拉米夫定的长期给药过程中抑制拉米夫定耐药型B型肝炎病毒复制的药物，本发明的药物包含干扰素-β(IFN-β)作为活性成分。
背景技术
在长期使用拉米夫定治疗慢性B型肝炎时会有50％或更多的患者出现B型肝炎的复发或突发，这是由于B型肝炎病毒聚合酶基因在YMDD编码区发生突变而产生了耐药型病毒所致。目前常用的疗法是使用干扰素-α(IFN-α)、强力新(SNMC)或类似药物进行联合治疗，(MichioSada et al.：Lamivudine Therapy for Chronic Hepatitis B，Liver，Bile Duct and Pancreas，41(1)：101-107，2000)HisaichiTanigawa：Experience of Long-Term Dose of GG714(Lamivudine)for Chronic Hepatitis B，Liver，Bile Duct and Pancreas，41(1)：117-123，2000)。
然而，人们已经意识到这样的联合疗法的疗效欠佳，而且会发生拉米夫定耐药型B型肝炎病毒的复制。也就是说，目前已经清楚，长期使用拉米夫定时出现的B型肝炎病毒变种会引起肝炎复发，导致治疗失败，耐药型病毒的出现成了一个问题。目前还没有能够抑制耐药型病毒复制的有效治疗方案。
本发明的一个目的是提供一种药物，用于抑制由于长期使用拉米夫定而产生的拉米夫定耐药型B型肝炎病毒的复制。
【发明内容】
本发明提供一种治疗性药物，用于抑制拉米夫定耐药型乙型肝炎病毒的复制，该药物包含β-干扰素(IFN-β)作为活性成分。
【附图说明】
图1显示β-干扰素对慢性B型肝炎病例的治疗效果，该病例在长期使用拉米夫定的过程中导致病毒在YMDD编码区发生突变。
发明地最佳实施方式：
在本发明中，可以用天然的IFN-β，也可以用化学合成方法或基因操作技术制备的IFN-β，优选使用从人的二倍体纤维原细胞中制备的天然IFN-β。
天然IFN-β的特点是其制备方法中不使用致瘤性的细胞株和病毒。细胞通常被附着并培养在玻璃或塑料的表面，或者DEAE-葡聚糖、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯的微细颗粒的表面。
产生IFN-β的细胞在培养液中经过预处理(在IFN-β的生产中，先用少量的IFN-β对细胞进行预处理，同未进行预处理的情况相比，这样可以增加IFN-β的产量，这表明IFN自身和提高其产量的生产控制机制有关系。已经有报道表明预处理可以增加IFN-mRNA的数量并提高其转录速度)和超诱导(先用诱导剂Poly I：Poly C的合成的双链RNA刺激细胞，再用放线菌素D(AMD)和环己酰亚胺(CH)对细胞进行处理，后二者作为代谢抑制剂来增加IFN的产量，首先，CH抑制了从mRNA到蛋白质的翻译，造成IFN-mRNA在细胞中积聚，然后去除CH，以便合成IFN蛋白质，此时，加入AMD反向抑制阻遏物mRNA，从而调节抑制IFN合成的反馈系统。尽管阻遏物的存在还只是设想，控制系统的存在却已经得到了证实)后得以高效地繁殖。上述方法得到的产品溶液中通常含有较低浓度的IFN-β和很多来自细胞或添加剂的其它外来物质。作为浓缩和纯化IFN-β的方法，优选采用不溶性载体结合蓝色颜料的层析法和结合金属螯合基团的载体的层析法。也就是说，使含有粗IFN-β的溶液流经不溶性载体结合蓝色颜料的层析柱，从洗脱液中以溶液形式回收IFN-β；然后，再使回收的IFN-β溶液流经锌螯合柱或类似的金属螯合柱，从洗脱液中回收IFN-β，从而得到经过浓缩和纯化的IFN-β。
如果需要，本发明使用的IFN-β中还可以加入稳定剂，稳定剂的例子包括人血清白蛋白，公开号为58-92619的日本未审查专利申请中披露的多元醇，公开号为58-92621的日本未审查专利申请中披露的有机酸缓冲剂，和其它类似物质。此外，在制剂中，可以根据给药方法将常用的载体与IFN-β适当混合。作为制剂形式，各种剂型都可用于本发明，例如：注射剂，胶囊，鼻腔制剂，栓剂，口服制剂，软膏剂等等。尽管给药剂量要根据给药对象、给药方法和疾病症状来适当地确定，但是适宜的剂量范围是3,000,000到6,000,000单位/天。
在本发明中，慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定的剂量为100mg/片/天。当服用拉米夫定超过约8个月后，由于B型肝炎病毒YMDD突变种的出现而导致复发或突发时，将IFN-β与拉米夫定联合给药。
实施例
下面结合实施例对本发明作更详细的说明。
实施例1
IFN对慢性B型肝炎患者的疗效确认试验：
对一54岁男性慢性B型肝炎患者给药拉米夫定(第一次，100mg，52周)，然而，可以观察到血液中B型肝炎病毒数量增加和肝功能恶化(HBV-DNA和GPT的增加见图1)。此时继续给药拉米夫定(第二次，100mg，32周)，在服用拉米夫定期间，耐药型病毒出现(YMDD突变种YIDD+见图1)，血液中B型肝炎病毒数量也增加了。
随后，血液中B型肝炎病毒数量居高不下，停药约3个月后，肝功能急剧恶化(GPT 567)。因此，给药3,000,000单位的IFN-α共28天。
然而，给药结束后，血液中B型肝炎病毒数量仍然增加，肝功能进一步恶化。所以，再次给药拉米夫定(第三次，100mg，98周)。此次给药开始18周以后，就出现了耐药型病毒(YMDD突变种YIDD)，并且再次观察到血液中B型肝炎病毒数量的增加和肝功能的恶化，尽管将3,000,000单位的IFN-α与拉米夫定联合给药，肝功能仍然进一步恶化，因此，停止给药IFN-α。
随后，血液中B型肝炎病毒保持阳性，肝功能依然异常。因此，静脉给药3,000,000单位的IFN-β共30周。IFN-β给药结束时，血液中B型肝炎病毒呈阴性，肝功能转为正常(见图1)。此次给药结束后约4个月时，血液中B型肝炎病毒依然为阴性，肝功能仍然保持正常。
工业实用性
本发明的B型肝炎病毒复制抑制剂包含IFN-β作为活性成分，在拉米夫定的长期给药中，对拉米夫定耐药型B型肝炎病毒的复制显示了抑制作用，因此，可以作为有效的病毒复制抑制剂，用于抑制拉米夫定耐药型B型肝炎病毒的复制。