2取代苯基24,5,6,7四氢噻吩并3,2C吡啶54H基N取代乙酰胺、其制备方法和用途.pdf

发明内容

本发明的一个目的在于，公开了一类2-(取代苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-取代-乙酰胺化合物及其药用盐。

本发明的另一个目的在于，公开了以一类2-(取代苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-取代-乙酰胺化合物及其药用盐为主要活性成分的药物组合物。

本发明的再一个目的在于，公开了一类2-(取代苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-取代-乙酰胺化合物及其药用盐的制备方法。

本发明还有一个目的在于，公开了一类2-(取代苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-取代-乙酰胺化合物及其药用盐，作为抗恶性肿瘤药物方面的应用，特别是在用于制备治疗肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌药物方面的用途。

本发明具体涉及通式I结构的化合物及其药学上可接受的盐：

其中：

R为氢，C₁-C₃直链或支链烷基；

R¹，R²为氢，C₁-C₃直链或支链烷基，卤素，卤代甲基，C₁-C₃烷氧基。

本发明所述的C₁-C₃直链或支链烷基具体代表甲基，乙基，丙基，异丙基；卤素代表氟，氯；卤代甲基代表三氟甲基；C₁-C₃烷氧基代表甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，等。

本发明涉及的具有式I结构的化合物，其中部分化合物为：

I-12-(2-氯苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-甲氧基乙酰胺；

I-22-(2-氟-4-甲基苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-乙氧基乙酰胺；

I-32-(2，3-二氯苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-羟基乙酰胺；

I-42-苯基-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-甲氧基乙酰胺；

I-52-(3-三氟甲基苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-乙氧基乙酰胺；

I-62-(4-甲基苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-羟基乙酰胺；

I-72-(4-甲氧基苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-甲氧基乙酰胺；

I-82-(2-氟-6-氯苯基)-2-(4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基)-N-乙氧基乙酰胺。

本发明中的具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐系指：本发明化合物与无机酸、有机酸所成的盐。其中特别优选的盐是：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐、葡萄糖酸盐、氨基酸盐，等等。

式I化合物的制备路线：

化合物(1)与烷氧基胺(2)在脂肪醇中，在碳酸钾/乙酸胺存在下，25℃～80℃反应制得I。其中脂肪醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等，反应时间30min～10h，以薄层层析法(TLC)检测反应终点。

将反应制得各种中间体或所得产物溶于乙醚、DMF、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯或DMSO中的一种，滴加无机酸或有机酸的溶液，制成药学上可接受的盐。

具体是将各种化合物溶于乙醚、DMF、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯或DMSO中的一种，于冰水浴下滴加盐酸乙醚溶液至pH＝2，制成盐酸盐；或将各种化合物溶于乙醚、DMF、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯或DMSO中的一种，加入等摩尔酒石酸，加热搅拌得其酒石酸盐；抑或将各种化合物溶于乙醚、DMF、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯或DMSO中的一种，于冰水浴下滴加浓硫酸溶液至pH＝3，制成硫酸盐，等等。

此类化合物对于治疗人类恶性肿瘤是有效的。尽管本发明的化合物可以不经任何配制直接给药，但所述的各种化合物优选以药物制剂的形式使用，给药途径可以是非肠道途径(如静脉、肌肉给药)及口服给药。

本发明化合物的药物组合物制备如下：使用标准和常规的技术，使本发明化合物与制剂学上可接受的固体或液体载体结合，以及使之任意地与制剂学上可接受的辅助剂和赋形剂结合制备成微粒或微球。固体剂型包括片剂、分散颗粒、胶囊、缓释片、缓释微丸等等。固体载体可以是至少一种物质，其可以充当稀释剂、香味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、崩解剂以及包裹剂。惰性固体载体包括磷酸镁、硬脂酸镁、滑粉糖、乳糖、果胶、丙二醇、聚山梨酯80、糊精、淀粉、明胶、纤维素类物质例如甲基纤维素、微晶纤维素、低熔点石蜡、聚乙二醇、甘露醇、可可脂等。液体剂型包括溶剂、悬浮液例如注射剂、粉剂等等。

药物组合物以及单元剂型中含有的活性成份(本发明化合物)的量可以根据患者的病情、医生诊断的情况特定地加以应用，所用的化合物的量或浓度在一个较宽的范围内调节。通常，活性化合物的量范围为组合物的0.5％～90％(重量)，另一优选的范围为0.5％～70％。

本发明的具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐，在体外、体内对肿瘤有明显的抑制作用。

体外的抗肿瘤作用

(1)实验方法：

采用经典的细胞毒活性体外检测法MTT法，检测发明化合物对体外培养的人肿瘤细胞的细胞增殖毒性。

(2)实验材料：

实验样品：发明化合物(由发明人自制提供)。实验时样品以DMSO助溶，无血清DMEM培养基稀释到所需浓度，部分样品溶液呈悬浮状。

主要试剂：MTT，Amresco公司分装，批号：04M0904。完全DMEM培养基，Gibco公司产品，批号：1290007。小牛血清，兰州民海生物，批号：20060509。胰蛋白酶，Amresco公司分装，批号：016B0604；氟尿嘧啶注射液，0.25g/10mL(支)，批号：0512022，天津金耀氨基酸有限公司。

实验仪器：超净工作台，苏州净化设备厂；CO₂培养箱，Thermo公司，型号：HERA Cell150；倒置显微镜，Carl Zeiss公司，型号：Axiovert 200；酶联免疫检测仪，TECAN公司，型号：Sunrise；离心机，Kerdro公司，型号：Heraeus。

细胞株：肺癌A-549细胞、肝癌SMMC-7721细胞、乳腺癌MCF-7细胞、胃腺癌SGC-7901细胞，均购自中国科学院上海细胞研究所。

(3)实验步骤：

细胞培养：肿瘤细胞接种在含10％小牛血清，100IU/mL青霉素G钠盐及100ug/mL硫酸链霉素的DMEM培养液中，置于37℃、100％相对湿度、含5％CO₂的培养箱中，传代3次后备用。

MTT法测定：取对数生长期的细胞，经0.25％胰蛋白酶消化后(悬浮细胞无须消化)，悬浮于含10％小牛血清的DMEM培养液中，用玻璃滴管轻轻吹打成单细胞悬液，显微镜下用血细胞记数板记数活细胞。96孔培养板每孔接种细胞悬液90μL(细胞浓度调整为6～10×10⁴个/mL)，在37℃、100％相对湿度、含5％C0₂、95％空气的培养箱培养24h后，每孔加10μL药液(终浓度设为：40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL和2.5μg/mL五个浓度)。另外，每个浓度设阴性对照(等浓度DMSO)及空白本底(不加细胞)，各组均设6个复孔。再连续培养24h，然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液10μL，继续培养4h后，仔细吸去上清液(悬浮细胞，需要先离心，再吸去上清)。每孔加入100μL DMSO，置微量振荡器震荡5min以使结晶完全溶解，酶标仪492nm单波长比色，测定0D值。以下述方法计算细胞生长抑制率作为评价指标。

抑制率(％)＝[1-(实验组0D均值-空白组0D均值)/(对照组0均值-空白组0D均值)]×100％。根据细胞生长抑制率，以直线回归方法计算IC₅₀值。

(4)实验结果见下表：

对体外培养的肿瘤细胞的IC₅₀(μg/mL)

(5)结论：

根据上述体外试验结果，我们可以看出具有式I结构的化合物对上述4种人类肿瘤细胞具有较强的抑制作用。

体内的抗肿瘤作用

(1)实验材料：

样品：I-1由发明人自制提供。

细胞株：肝癌H22细胞，购自中国科学院上海细胞研究所。

仪器：PB303-N型千分之一电子天平，梅特勒-托利多公司生产。

动物：昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，体重18-22g，购于中国医学科学院放射医学研究所，合格证号：SCXK(津)2005-0001。

(2)实验方法：

取腹腔接种瘤株9天，肿瘤生长良好，腹部膨隆明显的荷瘤小鼠，无菌操作下吸取腹水，按1∶3生理盐水稀释配成癌细胞混悬液，于所有实验小鼠右前肢腋部皮下接种(0.2mL/鼠)，所有操作在30min内完成。次日将接种瘤液小鼠按体重随机分组，即荷瘤对照组，I-1组(100mg/kg、50mg/kg)。各给药组均腹腔注射给药，每日一次，对照组给予同体积生理盐水。小鼠连续给药10天，末次给药24h后，脱颈椎处死，剥离肿瘤，称取瘤重，计算各组小鼠瘤重平均值及抑制率。

抑制率＝[(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重]×100％

(3)结果：

对H22荷瘤小鼠瘤重及抑制率的影响

(4)结论：

从上述动物体内试验结果可以看出，I-1对H22荷瘤小鼠的肿瘤生长具有一定的抑制作用。