制备取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷的方法 发明领域 本发明涉及制备取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷 (1， 3-oxathiolane) 的方法。本发明 具体涉及制备拉米夫定 (lamivudine) 的方法。
发明背景
通式 I 的取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷及其立体异构体
( 式中 R1 是氢、 烷基或芳基， R2 是取代或未取代的嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物 或衍生物 ) 是重要的一类治疗剂， 它们对于抵抗反转录病毒如人免疫缺陷病毒 (HIV)、 乙肝 病毒 (HBV) 和人 T 淋巴细胞病毒 (HTLV) 表现出抗病毒活性。拉米夫定是取代的 1， 3- 氧 硫杂环戊烷， 目前该药物可作为抗反转录病毒剂从市场上购得。拉米夫定是顺 -(-)- 异构 体， 其化学名称为 (2R， 顺 )-4- 氨基 -1-(2- 羟甲基 -1， 3- 氧硫杂环戊烷 -5- 基 )-(1H)- 嘧 啶 -2- 酮， 具有通式 I(A) 所示的结构。
目前取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷的制备可采用利用特定的离去基团和路易斯酸催 化剂的两种不同的途径。
第一种途径包括将通式 II 的中间体或其立体异构体
( 式中 P1 是保护基团， L1 是 OCH3、 OC2H5 或 OCOCH3) 与甲硅烷基和 / 或乙酰基保护 的嘧啶碱或嘌呤碱缩合。最后缩合产物脱保护， 得到所需的取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷。美 国专利第 5,047,407 和 5,905,082 号， J.Org.Chem.， (1992)， 57 ： 2217-2219， J.Med.Chem.， (1993)， 36 ： 181-195 和 J.Org.Chem.， (1991)， 56 ： 6503-6505 中描述了该途径。这些现有技
术的参考文献描述的方法中， 缩合反应在甲硅烷基路易斯酸如三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸 酯存在下进行。但是， 该途径不能提供光学纯的 1， 3- 氧硫杂环戊烷， 通过该方法制备拉米 夫定会得到以下异构体中至少两种的混合物。
上述现有技术的参考文献使用手性色谱或酶拆分来从所述混合物中分离通式 I(A) 的拉米夫定。Synthetic Communications， (2002)， 32 ： 2355-2359 提供一种使用手 性助剂从拉米夫定与通式 I(B) 的化合物的混合物中分离拉米夫定的方法。美国专利第 5,204,466 号在通式 II 的中间体与甲硅烷基化的胞嘧啶的缩合反应中使用氯化锡而不是 甲硅烷基路易斯酸。但是， J.Org.Chem.， (1992)， 57 ： 2217-2219 描述到使用氯化锡作为催 化剂也会得到外消旋混合物 ( 基于所得产物的旋光性和手性 HPLC 分析 )。
第二种途径包括将通式 III 的中间体或其立体异构体
( 式中 P1 是保护基团， L2 是 OCOCH3， L3 是卤素 ) 与甲硅烷基和 / 或乙酰基保护的嘧 啶碱或嘌呤碱缩合。最终缩合产物还原并脱保护， 得到所需的取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷。 美国专利第 5,663,320 号提供一种在甲硅烷基路易斯酸如碘代三甲基硅烷存在下进行缩 合反应的方法。美国专利第 5,663,320 号使用在 5 位 (L2) 具有 OCOCH3 基团的通式 III 的 化合物作为中间体。美国专利第 5,663,320 号还提及甲硅烷基路易斯酸的选择是上述方法
的关键所在。但是， TetrahedronLetters， (2005)， 46 ： 8535-8538 描述到所述涉及碘代三甲 基硅烷的方法被证实产率低， 因而不能有效地制备拉米夫定， 并且需要中间体选择性结晶 以获得所需的光学纯度， 并由此造成低产率。为了克服与路易斯酸催化剂有关的纯度和产 率方面的问题， Tetrahedron Letters， (2005)， 46 ： 8535-8538 和美国专利第 6,329,522 号 提供一种在无任何路易斯酸催化剂存在下进行所述缩合反应的方法， 该方法是通过选择性 地使用在 5 位 (L3) 具有卤素基团的通式 III 的化合物作为中间体来实现。但是， 该方法需 要立体选择性合成在 5 位具有卤素基团的通式 III 的化合物， 并且缩合步骤需要在甲苯之 类的高沸点溶剂中高回流温度的条件。
美国专利第 6,329,522 号还提供了通过制备拉米夫定的水杨酸盐来纯化拉米夫 定的方法。该方法包括 ： 通过在 71℃加热而将拉米夫定与过量水杨酸的混合物溶解在水 中， 冷却到 58℃， 用标准拉米夫定水杨酸盐引晶。 将用可信拉米夫定水杨酸盐引晶的拉米夫 定水杨酸盐溶液冷却到 5° -10℃， 在该温度搅拌 4 小时， 得到固体拉米夫定水杨酸盐。 通过 过滤分离该拉米夫定水杨酸盐， 在工业用甲醇变性酒精 (industrial methylated spirit) 存在下用三乙胺处理。溶液浓缩， 对浓缩的溶液进行引晶。经过引晶的混合物用乙酸异丙 酯进行处理， 得到拉米夫定。但是， 该方法需要将反应混合物加热到 70℃ -75℃， 同时用三 乙胺处理， 并同时进行引晶。而且， 美国专利第 6,329,522 号中没有揭示或暗示任何方法来 得到拉米夫定水杨酸盐或拉米夫定碱的晶种。美国专利第 6,329,522 号也没有揭示该方法 中所用的晶种的量。此外， 美国专利第 6,329,522 号没有提供任何方法用于有效地除去拉 米夫定中残余的水杨酸。
发明概述
我们已经惊奇地发现， 取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷例如拉米夫定可通过在缩合步 骤中使用非甲硅烷基路易斯酸以高光学纯度和化学纯度制得。 该方法还提供了以更好的产 率获得取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷的途径。在实施该方法中可能必需使用手性助剂， 但是不 需要在缩合步骤中使用光学纯中间体和高温条件。 本发明方法可在约等于或低于 50℃的温 度下进行。我们还开发了一种纯化拉米夫定的有利方法， 该方法通过在任何阶段无引晶过 程的情况下制备拉米夫定水杨酸盐来实现。此外， 本发明的盐纯化步骤可在约等于或低于 55℃的温度条件下进行。本发明报导的方法还提供基本不含水杨酸的纯拉米夫定。本发明 方法还适用于以工业规模制备拉米夫定。
在本发明中， 术语 “嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物或衍生物” 指可在天然核苷中找 到的嘌呤碱或嘧啶碱， 或者在结构上模拟这些碱或由这些碱得到的合成类似物或衍生物， 它们可比天然碱具有某些更多的功能性质或者比天然碱缺乏某些功能性质。 类似物或衍生 物包括但不限于通过用氮原子替换 CH2 部分和 / 或用 CH2 部分替换氮原子得到的化合物， 或 者引入环取代基、 除去环取代基、 或用本领域中已知的常规取代基改性环取代基的其他化 合物。还可以用羟基、 氨基或羧基保护基团保护嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物或衍生物的 官能团。
在本发明中， 术语 “保护基团” 指本领域中已知并使用的封闭羧基、 氨基或羟基而 使反应在分子的其它部位进行的基团。羧基保护基团的例子包括但不限于 ： 取代或未取代 的烷基、 取代或未取代的烯基、 取代或未取代的芳烷基、 取代或未取代的芳基、 取代或未取 代的氨基、 碳酸氢盐化的甲硅烷基、 碳酸氢盐化的甲锡烷基和药学活性酯形成基团。 羟基和氨基保护基团的例子包括但不限于 ： 低级烷基甲硅烷基、 低级烷氧基甲基、 芳烷基、 酰基、 低 级烷氧基羰基、 烯氧基羰基和芳烷氧基羰基。 氨基保护基团的例子包括但不限于 ： 被任选保 护的羟基取代的亚烷基。羟基或羧基保护基团还可以是手性辅助基团， 可具有一个或多个 手性中心。
在本发明中， 术语 “离去基团” 指与嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物或衍生物反应 时可被置换的原子或基团。离去基团的例子包括但不限于 ： 取代或未取代的饱和或不饱 和的酰氧基、 烷氧基、 烷氧基羰基、 卤素、 酰氨基、 叠氮基、 氰基、 异氰酸酯基、 取代或未取代 的饱和或不饱和的硫醇盐， 和取代或未取代的硒基、 亚硒酰基或硒酰基。离去基团的例子 还包括但不限于 -OX， 其中 X 是取代或未取代的芳基、 杂芳基、 膦酸盐、 亚硫酰基或磺酰基 (sulfonoyl group)。
发明详述
本发明的第一方面提供一种制备通式 I 的取代的 1， 3- 氧硫杂环戊烷或其立体异 构体以及其盐的方法，
式中 R1 是氢、 烷基或芳基， R2 是取代或未取代的嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物或衍生物， 该方法包括以下步骤 ：
a) 通式 III 的化合物或其立体异构体与取代或未取代的嘌呤碱或嘧啶碱或者其 类似物或衍生物在路易斯酸存在下反应， 前提是路易斯酸不含任何甲硅烷基， 得到通式 IV 的化合物或其立体异构体，
式中 P1 是氢或保护基团， L 是离去基团，
式中 P1 是氢或保护基团， R2 是取代或未取代的嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物或衍 b) 通式 IV 的化合物或其立体异构体还原， 得到通式 I 的化合物或其立体异构体 ；10生物 ；
CN 101918394 A说明书5/12 页和 c) 从反应混合物中分离通式 I 的化合物或其立体异构体以及其盐。
通 式 III 的 化 合 物 或 其 立 体 异 构 体 可 按 照 美 国 专 利 第 5,663,320 号 或 Tetrahedron Letters， (2005)， 46 ： 8535-8538 所述的方法制备。通式 III 的化合物可作为 单独一种异构体或者两种或更多种异构体的混合物使用。通式 III 的化合物的离去基团 L 优选自下组 ： 酰氧基、 烷氧基和烷氧基羰基。离去基团更优选是乙酰氧基。通式 III 的化合 物与取代或未取代的嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物或衍生物在路易斯酸存在下进行反应， 前提是所述路易斯酸不含任何甲硅烷基。 嘌呤碱或嘧啶碱或者其类似物或衍生物优选自下 组：
式中 P1 是保护基团， R3 和 R4 独立地选自下组 ： 氢、 羟基、 氨基， 和取代或未取代的 C1-6 烷基、 C1-6 烯基、 C1-6 炔基、 C1-6 酰基或芳酰基 ； R5 和 R6 独立地选自下组 ： 氢、 卤素、 羟基、 氨基、 氰基、 羧基、 氨基甲酰基、 烷氧基羰基、 羟基甲基、 三氟甲基、 硫代芳基， 和取代或未取 代的 C1-6 烷基、 C1-6 烯基、 C1-6 炔基或 C1-10 酰氧基 ； R7 是 C1-6 烷基、 C1-6 烯基或 C1-6 炔基 ； R8 选 自下组 ： 氢、 羟基、 烷氧基、 巯基、 硫代烷基、 取代或未取代的氨基、 卤素、 氰基、 羧基、 烷氧基 羰基、 氨基甲酰基， 和取代或未取代的 C1-6 烷基、 C1-6 烯基、 C1-6 炔基或 C1-10 酰氧基 ； R9 和 R10 选自下组 ： 氢、 羟基、 烷氧基、 取代或未取代的氨基、 卤素、 叠氮基， 和取代或未取代的 C1-6 烷 基、 C1-6 烯基、 C1-6 炔基或 C1-10 酰氧基。
路易斯酸优选是氯化锡或四氯化钛。相对于通式 III 的化合物的量， 路易斯酸的 用量约为 0.5-1.5 摩尔当量。路易斯酸的用量优选为约 0.8-1.1 摩尔当量。反应在选自下 组的有机溶剂存在下进行 ： 脂族烃、 芳族烃、 卤代烃、 腈、 酰胺、 酯和酮。 反应优选在等于或低 于约 50℃的温度下进行。反应进行约 10 分钟到约 100 小时。通式 IV 的化合物或其立体异 构体可从反应混合物中分离， 或者不分离而直接用于之后的步骤。优选将通式 IV 的化合物 或其立体异构体从反应混合物中分离。可对通式 IV 的化合物或其立体异构体进行纯化， 以 除去化学杂质和 / 或不利的异构体。如果通式 IV 的化合物中存在保护基团， 则除去保护基 团， 脱保护的化合物进行还原， 得到通式 I 的化合物或其立体异构体。使用还原剂进行还原
反应。还原剂可以是例如硼氢化钠、 氢化铝锂或硼氢化锂。通式 I 的化合物或其立体异构 体可通过成盐、 结晶、 异构体分离或色谱方法或它们的组合方法进一步纯化。
本发明的第二方面提供一种制备通式 I(A) 的拉米夫定或通式 I(C) 的化合物或它 们的混合物的方法 ：
该方法包括以下步骤 ：
a) 通式 III(A) 或通式 III(B) 的化合物或它们的混合物与其中氨基和 / 或羟基 任选地被保护基团保护的胞嘧啶在路易斯酸存在下反应， 前提是路易斯酸不含任何甲硅烷 基， 得到通式 IV(A) 或通式 IV(B) 的化合物或它们的混合物，
式中 P1 是手性辅助基团， L 是离去基团，式中 P1 是手性辅助基团， R2 是胞嘧啶， 所述胞嘧啶的氨基和 / 或羟基任选地被保 护基团保护 ；
b) 还原通式 IV(A) 或通式 IV(B) 的化合物或它们的混合物， 得到通式 I(A) 的拉米 夫定或通式 I(C) 的化合物或它们的混合物 ；
c) 从反应混合物中分离通式 I(A) 的拉米夫定或通式 I(C) 的化合物或它们的混合 物。
通 式 III(A) 或 通 式 (IIIB) 的 化 合 物 或 它 们 的 混 合 物 可 按 照 美 国 专 利 第 5,663,320 号 或 Tetrahedron Letters， (2005)， 46 ： 8535-8538 所 述 的 方 法 制 备。 通 式 III(A) 或通式 (IIIB) 的化合物或它们的混合物中的离去基团 L 优选自酰氧基、 烷氧基和烷
氧基羰基。离去基团更优选是乙酰氧基。通式 III(A) 或通式 III(B) 的化合物或它们的混 合物的手性辅助基团 P1 优选是 L- 薄荷基。通式 III(A) 或通式 III(B) 的化合物或它们的 混合物与胞嘧啶反应， 所述胞嘧啶的氨基和 / 或羟基任选地被保护基团保护。胞嘧啶优选 被乙酰基和 / 或甲硅烷基保护基团保护。该反应在路易斯酸存在下进行， 前提是路易斯酸 不含任何甲硅烷基。路易斯酸优选是氯化锡或四氯化钛。相对于通式 III 的化合物的量， 路易斯酸的用量约为 0.5-1.5 摩尔当量。路易斯酸的用量优选为约 0.8-1.1 摩尔当量。反 应在选自下组的有机溶剂存在下进行 ： 脂族烃、 芳族烃、 卤代烃、 腈、 酰胺、 酯和酮。 反应优选 在等于或低于约 50℃的温度下进行。反应进行约 10 分钟到约 100 小时。
通式 IV(A) 或通式 IV(B) 的化合物或它们的混合物可从反应混合物中分离， 或者 不进行分离而直接用于之后的步骤中。优选将通式 IV(A) 或通式 IV(B) 的化合物或它们的 混合物从反应混合物中分离。如果通式 IV(A) 或通式 IV(B) 的化合物或它们的混合物的 R2 中存在任何保护基团， 则进行脱保护步骤以除去保护基团。 可对通式 IV(A) 或通式 IV(B) 的 化合物或它们的混合物进行纯化， 以除去化学杂质和 / 或不利的异构体。 对通式 IV(A) 或通 式 IV(B) 的化合物或它们的混合物进行还原， 得到通式 I(A) 的拉米夫定或通式 I(C) 的化 合物或它们的混合物。还原反应用还原剂进行。还原剂可以是例如硼氢化钠、 氢化铝锂、 硼 氢化锂、 三乙基硼氢化锂或三仲丁基硼氢化锂。通式 I(A) 的拉米夫定或通式 I(C) 的化合 物或它们的混合物可通过成盐、 结晶、 异构体分离或色谱法或它们的组合方法进一步纯化。
本发明的第三方面提供制备通式 I(A) 的拉米夫定的方法，
该方法包括以下步骤 ：
a) 通式 III(C) 的化合物与其中氨基和 / 或羟基任选地被保护基团保护的胞嘧啶 在路易斯酸存在下反应， 前提是路易斯酸不含任何甲硅烷基， 得到通式 IV(C) 的化合物，
式中 P1 是手性辅助基团， L 是离去基团，式中 P1 是手性辅助基团， R2 是胞嘧啶， 所述胞嘧啶的氨基和 / 或羟基任选地被保 护基团保护，
b) 从反应混合物中分离通式 IV(A) 的化合物，
式中 P1 是手性辅助基团， R2 是胞嘧啶， 所述胞嘧啶的氨基或羟基任选地被保护基 团保护 ；
c) 对通式 IV(A) 的化合物进行还原 ； 和
d) 从反应混合物中分离通式 I(A) 的拉米夫定。
通式 III(C) 的化合物可按照美国专利第 5,663,320 号或 Tetrahedron Letters， (2005)， 46 ： 8535-8538 所述的方法制备。通式 III(C) 的化合物的离去基团 L 优选自酰氧 基、 烷氧基和烷氧基羰基。离去基团更优选是乙酰氧基。通式 III(C) 的化合物的手性辅助 基团 P1 优选是 L- 薄荷基。通式 III(C) 的化合物与胞嘧啶反应， 所述胞嘧啶的氨基和 / 或 羟基任选地被保护基团保护。胞嘧啶优选被乙酰基和 / 或甲硅烷基保护基团保护。该反应 在路易斯酸存在下进行， 前提是路易斯酸不含任何甲硅烷基。路易斯酸优选是氯化锡或四 氯化钛。相对于通式 III 的化合物的量， 路易斯酸的用量约为 0.5-1.5 摩尔当量。路易斯 酸的用量优选为约 0.8-1.1 摩尔当量。 反应在选自下组的有机溶剂存在下进行 ： 脂族烃、 芳 族烃、 卤代烃、 腈、 酰胺、 酯和酮。 反应优选在等于或低于约 50℃的温度下进行。 反应进行约 10 分钟到约 100 小时。
如果胞嘧啶基团中存在任何甲硅烷基保护基团， 则对得到的通式 IV(C) 的化合物 进行脱保护， 以除去甲硅烷基保护基团。通过浓缩反应混合物而将通式 IV(C) 的化合物从 反应混合物中分离。通过选择性结晶法、 手性色谱法或手性成盐或它们的组合方法将通式 IV(A) 的化合物与通式 IV(C) 的化合物分离。优选通过用溶剂处理通式 IV(C) 的化合物来 分离通式 IV(A) 的化合物， 所述溶剂选择性地溶解不利的异构体， 而通式 IV(A) 的化合物部 分或完全不溶于所述溶剂。溶剂处理可进行一次或多次， 以得到所需的光学纯度。溶剂优 选是 C1-3 烷醇或脂族酯或它们的混合物， 更优选是甲醇或乙酸异丙酯或它们的混合物。在 用溶剂处理后通过过滤从反应混合物中分离通式 IV(A) 的化合物。
如果通式 IV(A) 的化合物的 R2 中存在任何乙酰基保护基团， 则对通式 IV(A) 的化 合物进行脱保护， 以除去乙酰基保护基团， 进行还原， 得到通式 I(A) 的拉米夫定。还原反应 使用还原剂进行。还原剂可以是例如硼氢化钠、 氢化铝锂、 硼氢化锂、 三乙基硼氢化锂或三
仲丁基硼氢化锂。 还原剂优选是硼氢化钠。 还原反应在磷酸盐或硼酸盐缓冲剂存在下进行。 缓冲剂优选是磷酸氢二钾。通式 I(A) 的拉米夫定可通过成盐、 结晶或色谱法或它们的组合 方法进一步纯化。
本发明的第四方面提供一种分离拉米夫定的方法， 该方法包括 ：
a) 在水或有机溶剂或它们的混合物存在下还原通式 IV(A) 的化合物， 得到拉米夫 定，
式中， P1 是手性辅助基团， R2 是胞嘧啶 ； b) 在水或有机溶剂或它们的混合物存在下用水杨酸处理拉米夫定 ； c) 在无拉米夫定水杨酸盐引晶的情况下， 从反应混合物中分离拉米夫定水杨酸 d) 在水或有机溶剂或它们的混合物存在下， 用碱处理拉米夫定水杨酸盐 ； 和 e) 从反应混合物中分离拉米夫定。 本发明的第五方面提供一种分离拉米夫定的方法， 该方法包括 ： a) 在水或有机溶剂或它们的混合物存在下还原通式 IV(A) 的化合物， 得到拉米夫盐；
定，
式中， P1 是手性辅助基团， R2 是胞嘧啶 ；
b) 在水或有机溶剂或它们的混合物存在下用水杨酸处理拉米夫定 ；
c) 从反应混合物中分离拉米夫定水杨酸盐 ；
d) 在有机溶剂或水与有机溶剂的混合物存在下， 用碱处理拉米夫定水杨酸盐 ； 和
e) 在无拉米夫定引晶的情况下从反应混合物中分离拉米夫定。
用作原料的通式 IV(A) 的化合物可按照美国专利第 5,663,320 号或 Tetrahedron Letters， (2005)， 46 ： 8535-8538 提供的方法或本发明上述方面中揭示的方法制得。通式 IV(A) 的化合物在水或有机溶剂或它们的混合物存在下还原， 得到拉米夫定。有机溶剂优
选自烷醇、 醚和酯。有机溶剂更优选自甲醇、 乙醇、 四氢呋喃、 二烷、 乙酸异丙酯和乙酸乙酯。还原反应使用还原剂进行。还原剂优选是硼氢化钠、 氢化铝锂、 硼氢化锂、 三乙基硼氢 化锂或三仲丁基硼氢化锂。还原剂更优选是硼氢化钠。还原反应优选在磷酸盐或硼酸盐缓 冲剂存在下进行。缓冲剂优选是磷酸氢二钾。这样得到的拉米夫定不需要从反应混合物中分离， 用水杨酸处理该拉米夫定。 在不加入拉米夫定水杨酸盐晶种的情况下， 从反应混合物 中分离拉米夫定水杨酸盐。通过在约 10-25℃的温度下搅拌反应混合物来进行拉米夫定水 杨酸盐的分离。搅拌优选首先在约 25-30℃进行， 然后在约 10-15℃进行。搅拌可进行约 10 分钟到 100 小时。在有机溶剂或水与有机溶剂的混合物存在下， 用碱处理得到的拉米夫定 水杨酸盐。 较佳地， 在用碱处理拉米夫定水杨酸盐的同时， 用水和有机溶剂的混合物作为溶 剂介质。有机溶剂优选自烷醇、 醚和酯。有机溶剂更优选自甲醇、 乙醇、 四氢呋喃、 二 烷、 乙酸异丙酯和乙酸乙酯。碱优选是胺， 更优选是叔胺。用碱处理拉米夫定水杨酸盐在等于 或低于约 55℃、 优选约 40-50℃的温度下进行。边搅拌边进行上述过程， 以促进拉米夫定 作为游离碱释放。在不加入任何晶种的情况下， 从反应混合物中分离拉米夫定。通过在约 0-35℃、 优选约 15-30℃的温度搅拌该反应混合物， 然后过滤、 蒸馏和 / 或浓缩来进行该分 离过程。在分离后， 任选用有机溶剂洗涤拉米夫定。
这样得到的拉米夫定可进一步纯化， 以除去任何杂质， 包括任何残余的水杨酸。 该 纯化过程可这样进行 ： 在回流温度下将拉米夫定溶解在 C1-3 烷醇中， 用活性炭处理该溶液。 通过将溶液在约 0-15℃搅拌并且通过过滤分离固体， 在除去活性炭后得到作为固体的拉米 夫定。这样得到的拉米夫定是纯产物， 基本不含水杨酸。这样得到的拉米夫定的水杨酸含 量等于或小于约 0.1％ w/w， 优选等于或小于约 0.05％ w/w， 更优选等于或小于约 0.01％ w/ w。这样得到的拉米夫定的化学纯度等于或高于约 99％， 手性纯度等于或高于约 99.5％， 优 选等于或高于约 99.8％。
本发明的第六方面提供一种药物组合物， 该组合物包含基本不含水杨酸的拉米夫 定和赋形剂 / 载体。基本不含水杨酸的拉米夫定的水杨酸含量等于或小于约 0.1％ w/w， 优 选等于或小于约 0.05％ w/w， 更优选等于或小于约 0.01％ w/w。
本发明的第七方面提供一种药物组合物， 该组合物包含化学纯度等于或高于约 99％且手性纯度等于或高于约 99.5％、 优选等于或高于约 99.8％的拉米夫定和赋形剂 / 载 体。
虽然已经就具体的实施方式描述了本发明， 但是某些改变和等同对于本领域普通 技术人员而言是显而易见的， 它们包括在本发明的范围内。 实施例 实施例 1 ： 制备 (2R， 5S)-5-[4-( 乙酰基氨基 )-2- 氧代嘧啶 -1(2H)- 基 ]-1， 3- 氧 硫杂环戊烷 -2- 羧酸 (1R， 2S， 5R)-2- 异丙基 -5- 甲基环己基酯
将 N- 乙酰基胞嘧啶 (100 克 ) 加入二甲苯 (200 毫升 ) 中， 然后添加六甲基二硅氮 烷 (200 毫升 ) 和三甲基氯硅烷 (5.0 毫升 )。将该反应混合物在 140° -145℃加热 3-4 小 时。将该反应混合物冷却到 100℃， 将二甲苯 (200 毫升 ) 加入到反应混合物中。该反应混 合物在真空下于 120° -130℃蒸馏。向反应混合物中加入二甲苯 (200 毫升 )， 在真空下回 收， 得到残余物。向残余物中加入二氯乙烷 (2 升 )， 然后添加 (2R)-5-( 乙酰氧基 )-1， 3- 氧 硫杂环戊烷 -2- 羧酸 (2S， 5R)-2- 异丙基 -5- 甲基环己基酯 (194 克 )。在 40° -45℃， 向反 应混合物中滴加氯化锡 (152 克 )， 并在 40° -45℃搅拌 5 小时。 将反应混合物冷却到 25℃， 然后加入甲醇 (1 升 ) 和水 (1 升 ) 的混合物。将反应混合物静置， 将有机层加入到水 (1 升 ) 和甲醇 (1 升 ) 的混合物中。将反应混合物搅拌 5-10 分钟， 静置。有机层在真空下于
40° -50℃浓缩。向所得物质中加入乙酸异丙酯 (1.5 升 )， 在约 25℃搅拌过夜。反应混合 物过滤， 用乙酸异丙酯 (2X100 毫升 ) 洗涤， 在 45° -50℃干燥 5 小时。将这样得到的固体 在约 25℃悬浮在甲醇 (500 毫升 ) 中， 在相同温度下搅拌 3 小时。混合物过滤， 用甲醇 (100 毫升 ) 洗涤， 在 45° -50℃干燥 5 小时， 得到标题化合物。
产量 ： 28 克
实施例 2 ： 制备 (2R， 5S)-5-(4- 氨基 -2- 氧代嘧啶 -1(2H)- 基 )-1， 3- 氧硫杂环戊 烷 -2- 羧酸 (1R， 2S， 5R)-2- 异丙基 -5- 甲基环己基酯
在 约 25 ℃， 将 实 施 例 1 中 得 到 的 (2R， 5S)-5-[4-( 乙 酰 基 氨 基 )-2- 氧 代 嘧 啶 -1(2H)- 基 ]-1， 3- 氧硫杂环戊烷 -2- 羧酸 (1R， 2S， 5R)-2- 异丙基 -5- 甲基环己基酯 (100 克 ) 悬浮在甲醇 (600 毫升 ) 中。在 25° -30℃， 在 15-20 分钟内， 向该悬浮液中滴加甲磺 酸 (29.4 克 )， 在约 25℃搅拌 4 小时。将该反应混合物缓慢加入二氯甲烷 (1 升 ) 和碳酸氢 钠水溶液 (28 克碳酸氢钠溶解在 1.2 升水中 ) 的混合物中。将该反应混合物搅拌 5-10 分 钟， 静置。各层分离， 用二氯甲烷 (250 毫升 ) 反萃取水层。将有机层合并， 浓缩， 然后加入 己烷 (500 毫升 )。将反应混合物搅拌约 2 小时， 过滤。先用己烷 (100 毫升 ) 后用乙酸异丙 酯 (200 毫升 ) 洗涤固体， 在 45° -50℃干燥， 得到标题化合物。
产量 ： 82 克
实施例 3 ： 制备拉米夫定水杨酸盐
将正磷酸氢二钾 (205.5 克 ) 加入去离子水 (423 毫升 ) 中， 在 25° -30℃搅拌， 得 到溶液。该溶液冷却到 17° -22℃， 然后在相同温度下加入变性酒精 (900 毫升 )， 搅拌 5 分钟。在 17° -22℃， 向混合物中加入实施例 2 中得到的 (2R， 5S)-5-(4- 氨基 -2- 氧代嘧 啶 -1(2H)- 基 )-1， 3- 氧硫杂环戊烷 -2- 羧酸 (1R， 2S， 5R)-2- 异丙基 -5- 甲基环己基酯 (150 克 )， 在 18° -20℃搅拌 30 分钟。在 18° -20℃， 在 2-3 小时内向反应混合物中缓慢加入硼 氢化钠溶液。( 硼氢化钠溶液的制备 ： 将氢氧化钠 (0.75 克 ) 溶解在去离子水 (143 毫升 ) 中。在 20° -35℃向该溶液中加入硼氢化钠 (30 克 )， 在 20° -35℃搅拌， 得到溶液， 冷却到 17° -22℃ )。将该反应混合物在 18° -22℃搅拌 6 小时， 将该反应混合物在 18° -25℃静 置。 分离有机层， 在 18° -25℃向水层中加入变性酒精 (150 毫升 )。 将该反应混合物在相同 温度下搅拌 15 分钟， 静置。分离有机层， 与之前得到的有机层合并。在 18° -25℃， 用稀盐 酸 (20 毫升 ； 通过混合 10 毫升浓盐酸与 10 毫升去离子水制得 ) 将合并的有机层的 pH 调节 到 6.0-6.5， 然后在相同温度下搅拌 10 分钟。 在 18° -25℃， 用氢氧化钠水溶液 (28 毫升 ； 通 过将 2.1 克氢氧化钠溶解在 27 毫升去离子水中制得 ) 将反应混合物的 pH 调节到 8.0-8.5。 将该反应混合物在约 55℃的真空下浓缩， 直到残余物体积约为 375 毫升。在 25° -30℃， 向该浓缩的反应混合物中加入去离子水 (300 毫升 )， 搅拌 10 分钟。在 25° -30℃， 用甲苯 (2X 150 毫升 ) 洗涤反应混合物， 在 25° -30℃， 用去离子水 (150 毫升 ) 萃取甲苯层。将水 层合并， 在 25° -30℃添加水杨酸 (57 克 )。向该反应混合物中加入去离子水 (150 毫升 )， 加热到 78° -82℃， 得到澄清溶液。将该反应混合物在 2 小时内冷却到 25° -30℃， 在相同 温度下搅拌 4 小时。将反应混合物进一步冷却到 10° -15℃， 在 10° -15℃搅拌 2 小时。过 滤固体， 用去离子水 (150 毫升 ) 洗涤， 通过抽吸干燥。得到的固体用甲醇 (90 毫升， 预冷至 5° -10℃ ) 洗涤， 在热空气烘箱中于 45° -50℃干燥， 得到标题化合物。
产量 ： 132 克实施例 4 ： 制备拉米夫定
在 25° -35 ℃， 将实施例 3 中得到的拉米夫定水杨酸盐 (120 克 ) 加入到乙酸乙 酯 (720 毫升 ) 和水 (6 毫升 ) 的混合物中。将该反应混合物加热到 45° -50 ℃， 然后在 45° -50℃， 在 30 分钟内添加三乙胺 (104.76 克 )。将该反应混合物在相同温度搅拌 4 小 时， 冷却到 25° -30℃。将该反应混合物在 25° -30℃再搅拌 30 分钟， 过滤， 通过抽吸干 燥。用乙酸乙酯洗涤得到的固体。向经过洗涤的固体中加入乙酸乙酯 (600 毫升 )， 加热到 50° -55℃。将该混合物在 50° -55℃搅拌 15 分钟， 冷却到 25° -30℃， 再搅拌 30 分钟。 在 25° -30℃过滤固体， 用乙酸乙酯 (60 毫升 ) 洗涤， 在真空下于 45° -50℃干燥， 得到标 题化合物。
产量 ： 68.5 克
实施例 6 ： 拉米夫定的纯化
在 25° -35℃， 将实施例 4 中得到的拉米夫定 (60 克 ) 加入无水乙醇 (1.2 升 ) 中。 将该反应混合物加热到 75° -78℃， 搅拌， 得到溶液。在 75° -78℃， 向该得到的溶液中加 入活性炭 (6 克 )， 在相同温度下搅拌 30 分钟， 在相同温度下通过 C 盐 (Celite) 床过滤。用 无水乙醇 (60 毫升 ； 预热到 75° -76℃ ) 洗涤该碳床， 将该反应混合物在真空下浓缩， 使体 积达到约 300 毫升。将浓缩的反应混合物加热到 74° -76℃， 搅拌 15 分钟， 在 1 小时内冷 却到 20° -25℃。在 1 小时内将反应混合物进一步冷却到 5° -10℃， 搅拌 30 分钟。过滤 固体， 用无水乙醇 (30 毫升， 预冷却到 5° -10℃ ) 洗涤， 在真空下于 50° -55℃干燥， 得到 标题化合物。
产量 ： 53 克
HPLC 纯度 ： 99.0％
手性纯度 ： 99.8％
水杨酸含量 (HPLC) ： 未检测到18