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一种分离加兰他敏的方法
    ( 一 ) 技术领域
     本发明涉及一种分离加兰他敏的方法， 尤其是从含石蒜科生物碱的植物提取物 中， 将加兰他敏与其它众多生物碱分离的方法。 ( 二 ) 背景技术
     加兰他敏 (Galantamine)， 又称雪花莲胺碱 (Galanthamine)， 为带有叔胺的四环 生物碱， 是一种具有可逆作用的胆碱酯酶抑制剂， 可广泛用于老年性痴呆 (AD)、 重症肌无 力、 肠麻痹和骨髓灰质炎后遗症等的治疗。加兰他敏常以氢溴酸盐的形式用于临床， 并于 2003 年上市。 随着全球老年人口增多， 老年痴呆症造成的疾病负担日益增加， 加兰他敏作为 一种效果温和且不良反应轻微的中枢胆碱酯酶抑制剂， 因而重新受到重视。
     最初从夏雪片莲的干球茎中提取加兰他敏， 后来在天山雪莲及同科的水仙属、 石 蒜属植物中也有发现。野生资源中以忽地笑 ( 又名黄花石蒜、 铁色箭 )、 换锦花及鹿葱等品 种中加兰他敏含量较高， 其中又以忽地笑球茎的含量最高。但近年因无计划的采挖及栽培 技术落后、 种球繁殖数低等原因致使石蒜的野生资源逐渐减少。
     目前已有多种得到加兰他敏的方法， 石蒜中含加兰他敏约 0.1‰， 我国技术人员通 过大量实验， 小试、 中试， 成功地从石蒜中提取单体加兰他敏， 然后加入氢溴酸合成加兰他 敏氢溴酸盐， 最后用无水乙醇重结晶得到精品的氢溴酸加兰他敏， 所以从植物材料分离加 兰他敏仍是其大规模制造的有效替代途径， 但传统的分离纯化方法操作复杂， 成本高。
     专利 200910027243.3 描述的从石蒜鳞茎粗粉加入到 CO2 超临界萃取器中， 用 HCl-CHCl3 萃取， 再通过氧化铝色谱柱分离， 洗脱， 收集， 浓缩， 重结晶， 洗涤， 干燥。专利 200910232806.2 提供了对这个方法的改进， 以萃取物调 pH9-10， 加入乙酸乙酯萃取， 无水 硫酸钠脱水， 滤过， 析晶来代替色谱柱分离， 尽管如此， 但超临界流体 CO2 萃取法只是减少粗 提中的杂质， 并不能细分各石蒜生物碱成分， 如果用超临界分离纯化， 工序繁琐， 所用的设 备仪器， 使得成本更高。
     专利 03142010.9 描述了用高速逆流色谱法分离石蒜粗提物， 虽可避免被载体吸 附、 损耗和变性等问题， 但只适用于实验室少量分离。
     化 学 合 成 法 ( 例 如 Kametani al.， J.Chem.Soc.C， 1971， 6， 1043-1047 ； Shimizu al.， Heterocycles， 1977， 8， 277-282 ； ZL200810020491.0 ； CN201010129674.3) 虽然可以不 依靠植物资源来得到加兰他敏， 但该法合成路线长， 同时耗费大量的有机试剂， 对环境造成 污染， 得到的只是外消旋体， 并且还须拆分来得到左旋对映体， 耗时， 耗成本。 氧化铝层析或 硅酸盐层析法， 程序繁琐， 耗时长， 溶剂消耗大， 成本高， 且载体会吸附一部分有效成分 ； 碱 耗时长， 溶剂消耗大， 成本高 ； 液 - 液萃取法， 纯度虽高， 但耗时长， 浓度梯度法， 程序繁琐， 溶剂消耗大， 程序繁琐。
     制约加兰他敏进一步开发利用的关键在于从总提取物中分离单一的有效成 份。目前， 已报道的鳞茎含总生物碱 0.21 ％， 其中石蒜碱 (lycorine) 占 0.1 ％， 其次有 高 石 蒜 碱 (homolycorine)、 ( 多 花 ) 水 仙 碱 (tazettine)， 加 兰 他 敏 占 0.035 ％， 石蒜胺 碱 (lycoramine)、 石 蒜 宁 碱 (lycorenine)、 伪 石 蒜 碱 (pseudolycorine) 和 小 星 蒜 碱 (hippeastrine)， 茎的髓部含加兰他敏、 多花水仙碱和微量石蒜胺碱。采用传统的分离工 艺， 去除类似生物碱杂质困难， 不适应目前世界各国对加兰他敏的高质量要求， 因此高效 率、 高纯度、 低成本来分离纯化加兰他敏的生产工艺具有深远的意义。 ( 三 ) 发明内容
     本发明的目的是针对现有技术的不足， 提供一种利用包结法对石蒜科总生物碱提 取物进行分离的方法。
     本发明的研究思路为 ： 由于加兰他敏具有高位阻 ( 不共面的苯基 )、 以及易形成氢 键基团 ( 羟基、 氨基 )， 因而存在着很多特有分子能够识别加兰他敏。 加兰他敏显碱性， 可与 + + L-(-)- 二苯甲酰酒石酸结合成盐， 氨基与羧基对接， 形成 N -H---O 、 O -H---N 这样的氢键 形式。此处 L-(-)- 二苯甲酰酒石酸与加兰他敏的分子对接是关键， 然后进行重新排序， 形 成紧密堆积而从溶液中结晶析出。把酒石酸酯化成 L-(-)- 二苯甲酰酒石酸， 来增大其空间 位阻， 从而增强主体分子对客体分子的选择性。
     为解决本发明技术问题， 本发明采用如下技术方案 ： 一种分离加兰他敏的方法， 所述方法以含有加兰他敏的石蒜总生物碱浸膏为原 料， 所述的石蒜总生物碱浸膏是由石蒜鳞茎以酸为提取剂经浸漉法提取得到的浸膏， 所述 的方法为 ： 检测石蒜总生物碱浸膏中加兰他敏的含量， 将石蒜总生物碱浸膏与 L-(-)- 二苯 甲酰酒石酸混合， 用 75 ～ 95％的乙醇作溶剂， 在 70 ～ 100℃下充分反应， 得澄清溶液， 然后 冷却至 -10 ～ 25℃， 静置至析出结晶， 过滤得到滤饼和滤液， 滤饼用重结晶溶剂 A 重结晶后， 得到的晶体粗品加碱水溶液， 调 pH 值为 7 ～ 9 进行分解， 再加入 CHCl3 萃取， 取有机层蒸除 溶剂得到加兰他敏粗品 ； 将加兰他敏粗品用丙酮溶解， 并加入 HBr 水溶液， 过滤得到加兰他 敏氢溴酸盐， 用重结晶溶剂 B 重结晶， 得到加兰他敏纯品 ； 所述重结晶溶剂 A 或 B 各自独立 为乙醇水溶液、 甲醇、 无水乙醇或丙酮 ；
     所述石蒜总生物碱浸膏中含有的加兰他敏与 L-(-)- 二苯甲酰酒石酸、 HBr 水溶液 中 HBr 的物质的量比为 1 ∶ 1 ～ 4 ∶ 1 ～ 2。
     进一步， 所述的方法优选为 ： 检测石蒜总生物碱浸膏中加兰他敏的含量， 将石蒜总 生物碱浸膏与 L-(-)- 二苯甲酰酒石酸混合， 用 75％的乙醇作溶剂， 在 80℃下充分反应， 得 澄清溶液， 然后冷却至室温， 静置至析出结晶， 过滤得到滤饼和滤液， 滤饼用 85％的乙醇重 结晶后， 得到的晶体粗品加 10％ NaOH 水溶液， 调 pH 值为 8 进行分解， 再加入 CHCl3 萃取， 取 有机层蒸除溶剂得到加兰他敏粗品 ； 将加兰他敏粗品用丙酮溶解， 并加入 HBr 水溶液， 过滤 得到的加兰他敏氢溴酸盐用 50％乙醇重结晶， 得到加兰他敏纯品。
     所述方法中， 所述石蒜总生物碱浸膏中含有的加兰他敏与 75 ～ 95％的乙醇溶剂 的质量之比为 1 ∶ 10 ～ 30。
     所述碱水溶液为 NaOH 溶液、 KOH 溶液、 碳酸钠溶液、 碳酸钾溶液、 碳酸氢钠溶液或 碳酸氢钾溶液， 优选 10％ NaOH 溶液。
     所述重结晶溶剂 A 优选 50 ～ 85％的乙醇， 所述重结晶溶剂 B 优选 35 ～ 65％的乙 醇。
     本发明所述的石蒜总生物碱浸膏为市售或由石蒜鳞茎以酸为提取剂经浸漉法提
     取得到， 通常按照以下方法制得 ： 取石蒜鳞茎， 不加筛粉碎， 装入渗漉筒中， 加入 2‰盐酸， 完全浸没石蒜鳞茎， 随时添加盐酸溶液以保证石蒜鳞茎充分浸泡， 浸泡 8 ～ 12 小时后开始 收集渗漉液， 并不断补充盐酸溶液以保证石蒜鳞茎充分浸泡， 至渗漉液由黄褐色转为暗绿 色， 停止渗漉。合并所有渗漉液， 调 pH 至 6 ～ 7， 过滤得到沉淀， 即得到石蒜总生物碱浸膏。
     本发明所述在 70 ～ 100℃温度的条件下充分反应， 反应时间一般在 30 分钟～ 1 小 时， 得到澄清溶液 ； 然后冷却至 -10 ～ 25℃， 静置至析出结晶， 析晶时间一般在 6-8 小时。
     与现有技术相比， 本方法基于超分子组装的基本原理， 利用主体分子与客体分子 之间拓扑学上的相匹配， 使得显碱性的加兰他敏在总生物碱液中选择性地与 L-(-)- 二苯 甲酰酒石酸形成稳定的分子晶体， 从而实现高效、 迅速的分离作用， 其优点主要在于 ：
     a) 拆分的效率比较高。 由于分子识别的高度选择性， 只需要一次结晶， 加兰他敏的 收率可在 80％ -90％之间， 纯度在 90％ -99％之间。
     b) 操作简单， 重复性好， 实施成本低， 污染少， 利于工业放大。 ( 四 ) 具体实施方式
     下面以具体实施例来进一步说明本发明的技术方案， 但本发明的保护范围不限于 此。
     石蒜总生物碱浸膏的制备 ： 取石蒜鳞茎 8kg， 不加筛粉碎， 用 2‰ HCl 润湿， 装入预 先垫有脱脂棉的渗漉筒中， 边装边倒盐酸， 待石蒜鳞茎装到渗漉筒的一半时， 即停止装筒。 继续加入 2‰ HCl， 直到石蒜鳞茎完全浸没， 反复振摇， 随时添加盐酸溶液以保证石蒜鳞茎 充分浸泡， 浸泡过夜。第 2 天开始收集渗漉液， 并不断补充盐酸溶液， 至渗漉液由黄褐色转 为暗绿色， 停止渗漉。 合并所有渗漉液， 调 pH 至 7， 过滤得到沉淀， 即得到石蒜总生物碱浸膏 1.2kg。
     实施例 1
     将石蒜总生物碱浸膏 ( 含加兰他敏 10 ％， 其他生物碱 20 ％， HPLC 测定 )5.0g 与 0.6g L-(-)- 二苯甲酰酒石酸 ( 购于济南比优特化工有限公司 ) 混合， 用 15.0ml 75％的 乙醇作溶剂， 加热至 80℃， 加热 30min 得澄清溶液。然后将其冷却至 25℃， 析出结晶 [ 结 -1 晶 I： IR(KBr， cm )3418， 3068， 3056， 2960， 1731， 1635， 1602， 1586， 1335， 1318， 1266， 1179， 1 1026， 1003， 937， 890， 710， 684， 650， 617。 H NMR(DMSO-d6)δ8.046(d， 1H)， 7.742(d， 1H)， 7.619(d， 1H)， 6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 5.922(d， 1H)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J ＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)]。过滤， 同时回收溶剂及识别试剂、 副产 混生物碱滤液。晶体 I 0.46g 再加入 15.0ml85％的乙醇重结晶， 再过滤， 同时回收乙醇溶 剂， 然后滴加 10％的 NaOH 调 pH 至 8 进行分解， 加入 100mLCHCl3 萃取， 取有机层蒸除溶剂， 最终得到加兰他敏粗品 0.44g。将粗品加入 15.0ml 丙酮溶解， 并加入 0.7ml40 ％的 HBr 溶液， 过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐， 用 10.0ml 50％乙醇重结晶， 最后干燥， 得到其成品 -1 0.43g ： IR(KBr， cm )3520， 2582， 2522， 1618， 1510， 1418， 1286， 1048， 1020， 810， 719， 613， 1 428。 HNMR(DMSO-d6)δ6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H，J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J ＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)。采用 HPLC 测定加兰他敏的含量。色谱条件 ： 色谱柱 ZorbaxC18(250mm×0.46mm， 0.5μm) ； 流动相 V( 水 ) ∶ V( 甲醇 ) ∶ V( 冰乙酸 ) ＝ -1 91 ∶ 8 ∶ 1 ； 流速 1mL·min ； 柱温 30℃ ； 压力 126bar ； 进样量 1μL ； 检测波长 280nm。纯 度 98.3％， 收率 86.0％。
     实施例 2
     将总生物碱 ( 含加兰他敏 13％， 其他生物碱 18％ )6.4g 与 3.0gL-(-)- 二苯甲酰酒 石酸混合， 用 19.2ml 85％的乙醇作溶剂， 加热至 100℃， 加热 1h 得澄清溶液。然后将其冷 -1 却至 10℃， 析出结晶 [ 结晶 I ： IR(KBr， cm )3418， 3068， 3056， 2960， 1731， 1635， 1602， 1586， 1 1335， 1318， 1266， 1179， 1026， 1003， 937， 890， 710， 684， 650， 617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d， 1H)， 7.742(d， 1H)， 7.619(d， 1H)， 6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 5.922(d， 1H)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J ＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)]。 过 滤， 同时回收 溶剂及识别试剂、 副产混生物碱滤液。晶体 I 0.78g 再加入 19.2ml 75％的乙醇重结晶， 再 过滤， 同时回收乙醇溶剂， 然后滴加 10 ％的 NaOH 调 pH 至 7.5 进行分解， 加入 100mLCHCl3 萃取， 取有机层蒸除溶剂， 最终得到加兰他敏粗品 0.73g。将粗品加入 19.2ml 丙酮溶解， 并加入 0.6ml 40％的 HBr 溶液， 过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐， 用 12.8ml 65％乙醇重结 -1 晶， 最 后 干 燥， 得 到 其 成 品 0.69g ： IR(KBr， cm )3520， 2582， 2522， 1618， 1510， 1418， 1286， 1 1048， 1020， 810， 719， 613， 428。 H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)。采用 HPLC 测定加兰他 敏的含量。色谱条件 ： 色谱柱 ZorbaxC18(250mm×0.46mm， 0.5μm) ； 流动相 V( 水 ) ∶ V( 甲 -1 醇 ) ∶ V( 冰乙酸 ) ＝ 91 ∶ 8 ∶ 1 ； 流速 1mL· min ； 柱温 30℃； 压力 126bar ； 进样量 1μL ； 检测波长 280nm。纯度 98.8％， 收率 82.9％。
     实施例 3
     将总生物碱 ( 含加兰他敏 8％， 其他生物碱 19％ )7.3g 与 0.8g L-(-)- 二苯甲酰酒 石酸混合， 用 17ml 95％的乙醇作溶剂， 加热至 70℃， 加热 50min 得澄清溶液。然后将其冷 -1 却至 -10℃， 析出结晶 [ 结晶 I ： IR(KBr， cm )3418， 3068， 3056， 2960， 1731， 1635， 1602， 1586， 1 1335， 1318， 1266， 1179， 1026， 1003， 937， 890， 710， 684， 650， 617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d， 1H)， 7.742(d， 1H)， 7.619(d， 1H)， 6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 5.922(d， 1H)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J ＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)]。过滤， 同时回收溶 剂及识别试剂、 副产混生物碱滤液。晶体 I 0.48g 再加入 21.9ml 55％的乙醇重结晶， 再过 滤， 同时回收乙醇溶剂， 然后滴加 10％的 NaOH 调 pH 至 7 进行分解， 加入 100mLCHCl3 萃取， 取有机层蒸除溶剂， 最终得到加兰他敏粗品 0.45g。将粗品加入 21.9ml 丙酮溶解， 并加入 0.6ml40％的 HBr 溶液， 过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐， 用 14.6ml 35％乙醇重结晶， 最后干燥， 得 到 其 成 品 0.44g ： IR(KBr， cm-1)3520， 2582， 2522， 1618， 1510， 1418， 1286， 1048， 1020， 1 810， 719， 613， 428。 H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J ＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)。 采用 HPLC 测定加兰他敏的含量。 色谱条件 ： 色谱柱 ZorbaxC 18(250mm×0.46mm， 0.5μm) ； 流动相 V( 水 ) ∶ V( 甲醇 ) ∶ V( 冰 -1 乙酸 ) ＝ 91 ∶ 8 ∶ 1 ； 流速 1mL·min ； 柱温 30 ℃ ； 压力 126bar ； 进样量 1μL ； 检测波长 280nm。纯度 99.3％， 收率 75.3％。
     实施例 4
     将总生物碱 ( 含加兰他敏 15％， 其他生物碱 22 ％ )8.2g 与 4.9g L-(-)- 二苯甲 酰酒石酸混合， 用 24.6ml90 ％的乙醇作溶剂， 加热至 80 ℃， 加热 45min 得澄清溶液。然 -1 后 将 其 冷 却 至 0 ℃， 析出结晶 [ 结晶 I ： IR(KBr， cm )3418， 3068， 3056， 2960， 1731， 1635， 1 1602， 1586， 1335， 1318， 1266， 1179， 1026， 1003， 937， 890， 710， 684， 650， 617。HNMR(DMSO-d6) δ8.046(d， 1H)， 7.742(d， 1H)， 7.619(d， 1H)， 6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 5.922(d， 1H)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J ＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)]。 过 滤， 同时回收溶剂及识别试剂、 副产混生物碱滤液。晶体 I1.12g 再加入 24.6ml 85％的乙 醇重结晶， 再过滤， 同时回收乙醇溶剂， 然后滴加 10 ％的 NaOH 调 pH 至 9 进行分解， 加入 100mLCHCl3 萃取， 取有机层蒸除溶剂， 最终得到加兰他敏粗品 1.05g。 将粗品加入 24.6ml 丙 酮溶解， 并加入 1.5ml 40％的 HBr 溶液， 过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐， 用 16.4ml 50％乙 -1 醇重结晶， 最后干燥， 得到其成品 0.97g ： IR(KBr， cm )3520， 2582， 2522， 1618， 1510， 1418， 1 1286， 1048， 1020， 810， 719， 613， 428。 H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)。采用 HPLC 测定加兰他 敏的含量。色谱条件 ： 色谱柱 ZorbaxC18(250mm×0.46mm， 0.5μm) ； 流动相 V( 水 ) ∶ V( 甲 -1 醇 ) ∶ V( 冰乙酸 ) ＝ 91 ∶ 8 ∶ 1 ； 流速 1mL· min ； 柱温 30℃； 压力 126bar ； 进样量 1μL ； 检测波长 280nm。纯度 99.1％， 收率 78.9％。
     实施例 5
     将总生物碱 ( 含加兰他敏 12％， 其他生物碱 20 ％ )9.1g 与 3.0g L-(-)- 二苯甲 酰酒石酸混合， 用 27.3ml 75 ％的乙醇作溶剂， 加热至 90 ℃， 加热 70min 得澄清溶液。然 -1 后将其冷却至 15 ℃， 析出结晶 [ 结晶 I ： IR(KBr， cm )3418， 3068， 3056， 2960， 1731， 1635， 1 1602， 1586， 1335， 1318， 1266， 1179， 1026， 1003， 937， 890， 710， 684， 650， 617。HNMR(DMSO-d6) δ8.046(d， 1H)， 7.742(d， 1H)， 7.619(d， 1H)， 6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 5.922(d， 1H)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J ＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)]。 过 滤， 同时回收溶剂及识别试剂、 副产混生物碱滤液。晶体 I 1.04 再加入 27.3ml 50％的乙醇重结晶， 再过滤， 同时回收乙醇溶剂， 然后滴加 10％的 NaOH 调 pH 至 8.5 进行分解， 加入 100mLCHCl3 萃取， 取有机层蒸除溶剂， 最终得到加兰他敏粗品 0.98g。将粗品加入 27.3ml 丙酮溶解， 并加入 1.5ml40％的 HBr 溶液， 过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐， 用 18.2ml 45％乙 -1 醇重结晶， 最后干燥， 得到其成品 0.91g ： IR(KBr， cm )3520， 2582， 2522， 1618， 1510， 1418， 1 1286， 1048， 1020， 810， 719， 613， 428。 H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB， 2H， J ＝ 9.6Hz)， 6.15(d， 1H， J ＝ 7.9Hz)， 5.95(dd， 1H， J ＝ 7.9Hz， J ＝ 3.2Hz)， 4.85(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.60(s， 1H)， 4.47(bs， 1H)， 4.35(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)， 4.10(bs， 1H)， 3.70-3.90(s+m， 4H)， 3.50(d， 1H， J＝ 12.8Hz)， 2.85(bs， 3H)， 2.40-2.00(m， 3H)， 1.90(d， 1H， J ＝ 16.0Hz)。采用 HPLC 测定加兰他 敏的含量。色谱条件 ： 色谱柱 ZorbaxC18(250mm×0.46mm， 0.5μm) ； 流动相 V( 水 ) ∶ V( 甲 -1 醇 ) ∶ V( 冰乙酸 ) ＝ 91 ∶ 8 ∶ 1 ； 流速 1mL· min ； 柱温 30℃； 压力 126bar ； 进样量 1μL ； 检测波长 280nm。纯度 98.9％， 收率 83.3％。8