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1、10申请公布号CN102112863A43申请公布日20110629CN102112863ACN102112863A21申请号200980130613422申请日2009072008161667420080801EPG01N21/29200601C11D3/38620060171申请人荷兰联合利华有限公司地址荷兰鹿特丹72发明人I豪厄尔P科特萨基斯74专利代理机构中国专利代理香港有限公司72001代理人万雪松李连涛54发明名称与洗涤剂分析有关的改进57摘要具有025M2至4106M2面积的织物样品，所述样品在一个或多个在其表面的至少01上的斑点PATCH中被包含叶绿体材料的碎片污染，其中存在于。
2、斑点中的至少80WT的叶绿体材料来自单一物种的绿色植物，其选自下面的属冰草属AGROPYRON、剪股颖属AGROSTIS、拟南芥属ARADOPSIS、燕麦草属ARRHENATHERUM、地毯草属AXONOPUS、雏菊属BELLISS、孔颖草属BOTHRIOCHLOA、格兰马草属BOUTELOUA、青藓属BRACHYTHECIUM、果香菊属CHAMAEMELUM、龙爪茅属DACTYLOCTENIUM、卷耳属CERASTIUM、金须茅属CHRYSOPOGON、还阳参属CREPIS、狗牙根属CYNODON、洋狗尾草属CYNOSURUS、鸭茅属DACTYLIS、发草属DESCHAMPSIA、山蚂蝗属D。
3、ESMODIUM、双花草属DICHANTHIUM、马蹄金属DICHONDRA、马唐属DIGITARIA、盐草属DISTICHLIS、披碱草属ELYMUS、偃麦草属ELYTRIGIA、画眉草属ERAGROSTIS、蜈蚣草属EREMOCHLOA、美喙藓属EURHYNCHIUM、羊茅属FESCUE、海氏草属HILARIA、绒毛草属HOLCUS、天胡荽属HYDROCOTYLE、猫儿菊属HYPOCHAERIS、鸭嘴草属ISCHAEMUM、洽草属KOELERIA、LEPTINELLA、黑麦草属LOLIUM、地杨梅属LUZULA、MICROLAENA、雀稗属PASPALUM、狼尾草属PENNISETUM、梯。
4、牧草属PHLEUM、过江藤属PHYLA、车前属PLANTAGO、早熟禾属POA、单序草属POLYTRIAS、铜锤玉带属PRATIA、夏枯草属PRUNELLA、碱茅属PUCCINELLIA、毛茛属RANUNCULUS、酸模属RUMEX、千里光属SENECIO、钝叶草属STENOTAPHRUM、蒲公英属TARAXACUM、三叶草属TRIFOLIUM、三毛草属TRISETUM、尾稃草属UROCHLOA和/或结缕草属ZOYSIA。这些样品具有研究用于洗衣过程的洗涤剂组合物特别是包含酶的组合物的用途。30优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2011013186PCT申请的申请数据PCT/EP2009/。
5、0593072009072087PCT申请的公布数据WO2010/012624EN2010020451INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书10页CN102112867A1/1页21具有025M2至4106M2面积的织物样品，所述样品在一个或多个在其表面的至少01上的斑点中被包含叶绿体材料的碎片污染，其中存在于斑点中的至少80WT的该叶绿体材料来自单一物种的绿色植物，该绿色植物选自下面的属冰草属AGROPYRON、剪股颖属AGROSTIS、拟南芥属ARADOPSIS、燕麦草属ARRHENATHERUM地毯草属AXONOPUS、雏菊属BELLISS、孔颖草。
6、属BOTHRIOCHLOA、格兰马草属BOUTELOUA、青藓属BRACHYTHECIUM、果香菊属CHAMAEMELUM、龙爪茅属DACTYLOCTENIUM、卷耳属CERASTIUM、金须茅属CHRYSOPOGON、还阳参属CREPIS、狗牙根属CYNODON洋狗尾草属CYNOSURUS、鸭茅属DACTYLIS、发草属DESCHAMPSIA、山蚂蝗属DESMODIUM、双花草属DICHANTHIUM、马蹄金属DICHONDRA、马唐属DIGITARIA、盐草属DISTICHLIS、披碱草属ELYMUS、偃麦草属ELYTRIGIA、画眉草属ERAGROSTIS、蜈蚣草属EREMOCHLOA、。
7、美喙藓属EURHYNCHIUM、羊茅属FESCUE、海氏草属HILARIA、绒毛草属HOLCUS、天胡荽属HYDROCOTYLE、猫儿菊属HYPOCHAERIS、鸭嘴草属ISCHAEMUM、洽草属KOELERIA、LEPTINELLA、黑麦草属LOLIUM、地杨梅属LUZULA、MICROLAENA、雀稗属PASPALUM、狼尾草属PENNISETUM、梯牧草属PHLEUM、过江藤属PHYLA、车前属PLANTAGO、早熟禾属POA、单序草属POLYTRIAS、铜锤玉带属PRATIA、夏枯草属PRUNELLA、碱茅属PUCCINELLIA、毛茛属RANUNCULUS、酸模属RUMEX、千里光属。
8、SENECIO、钝叶草属STENOTAPHRUM、蒲公英属TARAXACUM、三叶草属TRIFOLIUM、三毛草属TRISETUM、尾稃草属UROCHLOA和/或结缕草属ZOYSIA。2根据权利要求1的样品，其中所述织物为纤维质的、聚酯或其混合物。3根据前述权利要求任一项的样品，其中剩余20WT的碎片来自不超过五种，优选三种，优选一种其它的物种。4根据前述权利要求任一项的样品，其中至少一个斑点衍生自单一物种。5根据前述权利要求任一项的样品，其中所述碎片来自以下物种中的一种或多种普通剪股颖AGROSTISCANINA、细弱剪股颖AGROSTISCAPILLARIS、华北剪股颖AGROSTISCL。
9、AVATA、AGROSTISCURTISII、巨序剪股颖AGROSTISGIGANTEA、旱地翦股颖AGROSTISCASTELLANA、AGROSTISMERTENSII、AGROSTISSCABRA、匍匐剪股颖AGROSTISSTOLONIFERA、AGROSTISTENUIS、AGROSTISPALUSTRIS、AGROSTISVINEALE、紫羊茅FESTUCARUBRA、多年生黑麦草LOLIUMPERENNE、白三叶草TRIFOLIUMREPENS、雏菊BELLISPERENNIS、西洋蒲公英TARAXACUMOFFICINALE、EURHYNCHIUMPRAELONGUM、卵叶青藓。
10、BRACHYTHECIUMRUTABULUM、匐枝毛茛RANUNCULUSREPENS、绒毛草HOLCUSLANATUS、普通早熟禾POATRIVIALIS、草地早熟禾POAPRATENSIS和一年生早熟禾POAANNUA。6制备根据权利要求15中任一项的样品的方法，其包括用含叶绿体的绿色植物碎片接触片状形式的具有大于4106M2的面积的织物基底的步骤，其中至少80的碎片来自单一物种的不是茶或者菠菜的绿色植物。7测定洗衣组合物效力的方法，其包括用该洗衣组合物处理根据权利要求15中任一项的样品的步骤。8根据权利要求7的方法，其中所述洗衣组合物包含至少一种酶。9根据权利要求7的方法，其中所述洗衣组。
11、合物包含多种酶。权利要求书CN102112863ACN102112867A1/10页3与洗涤剂分析有关的改进技术领域0001本发明涉及与洗涤剂分析有关的改进，以及特别是与用于这样分析的所谓“样品”的制备有关的改进。0002发明背景0003在洗衣洗涤剂制剂领域中，“样品”是一块大致柔软的材料，例如有对其施用的污迹的织物。该材料可以是例如由棉、聚酯或者天然和合成纤维的各种各样的混合物制成的织物。该样品可以是非纺织的例如滤纸或者硝化纤维素或者甚至是一块硬材料，例如陶器。污迹可以包括血、牛奶、墨水、草、茶、酒、菠菜、肉汁、巧克力、鸡蛋、乳酪、粘土、颜料、油或者这些成分的混合物。0004样品通常用于对洗。
12、衣洗涤剂组合物的评估。在传统的“模型清洗”分析里，因为它们是清洗负荷的小部分，负荷主体由“压载物”“BALLAST”构成，其包括多张的布。一种或多种样品也称为“探测器”和大量的“压载物”在已知的条件下被清洗以便可确定污迹去除的程度。0005美国专利7122334公开了一种更先进的洗涤剂组合物分析技术。在这里，“较小的样品”块样品在把污迹固定在样品之前或之后其已经被切割或者以其它方式从样品的材料中去除被置于24、48或者96孔微量滴定板的孔中。“较小的样品”也可以通过将污迹施用于小块的材料来制成。通常这些“较小的样品”的直径约为5MM。在本发明的上下文中，“样品”包括较大和较小的样品。0006在。
13、各物种型的材料上具有已知“强度”污迹的样品是可商业得到的来自EMPA，STGALLEN，SWITZERLAND；WFKTESTGEWEBEGMBH，KREFELDGERMANY；或CENTERFORTESTMATERIALS，VLAARDINGENTHENETHERLANDS和/或可以通过本领域普通技术人员来制备例如描述在MORRIS和PRATO，TEXTILERESEARCHJOURNAL5242802861982中。0007在美国专利7122334中已经表明使用茶CAMELLIASINENSIS和菠菜SPINACIAOLERACEA作为污迹的来源，例如获自食品和饮料溢出物的那些。0008机。
14、械产生的植物污迹是洗衣污迹的常见来源，并且一般被称为“草”污迹。“草”是非常一般性的术语，并且在常见用法中，其经常用来指禾本科POACEAE也称为禾本科GRAMINEAE的单子叶绿色植物。如应是明显的，在衣物和其他织物物品上的菠菜和茶污迹比“草污迹”更不可能通过户外活动发生，以及更可能起因于食物或饮料的溢出物，而“草污迹”更多地是关于运动/户外衣物和/或儿童衣物的问题。0009草污迹的实验室用途的一个主要问题是结果显示出较差的再现性。因此最优化洗衣洗涤剂组合物有效和高效地去除“草”污迹是困难的。已经进行了许多努力来如何准确地在样品上形成“草”污迹，且已建议用各种复杂的设备来解决这一问题。001。
15、0发明简述0011我们已经确定，如果存在的主要绿色植物材料是大部分或全部来自单一物种的绿色植物，那么可以制备改进的“草”污迹样品。0012依照本发明，提供了具有025M2至4106M2面积的织物样品，所述样品在一个说明书CN102112863ACN102112867A2/10页4或多个在其表面的至少01上的斑点PATCH中被包含叶绿体材料的碎片污染，其中存在于斑点中的至少80WT的该叶绿体材料来自单一物种的绿色植物，该绿色植物选自下面的属冰草属AGROPYRON、剪股颖属AGROSTIS、拟南芥属ARADOPSIS、燕麦草属ARRHENATHERUM地毯草属AXONOPUS、雏菊属BELLIS。
16、S、孔颖草属BOTHRIOCHLOA、格兰马草属BOUTELOUA、青藓属BRACHYTHECIUM、果香菊属CHAMAEMELUM、龙爪茅属DACTYLOCTENIUM、卷耳属CERASTIUM、金须茅属CHRYSOPOGON、还阳参属CREPIS、狗牙根属CYNODON洋狗尾草属CYNOSURUS、鸭茅属DACTYLIS、发草属DESCHAMPSIA、山蚂蝗属DESMODIUM、双花草属DICHANTHIUM、马蹄金属DICHONDRA、马唐属DIGITARIA、盐草属DISTICHLIS、披碱草属ELYMUS、偃麦草属ELYTRIGIA、画眉草属ERAGROSTIS、蜈蚣草属EREMOC。
17、HLOA、美喙藓属EURHYNCHIUM、羊茅属FESCUE、海氏草属HILARIA、绒毛草属HOLCUS、天胡荽属HYDROCOTYLE、猫儿菊属HYPOCHAERIS、鸭嘴草属ISCHAEMUM、洽草属KOELERIA、LEPTINELLA、黑麦草属LOLIUM、地杨梅属LUZULA、MICROLAENA、雀稗属PASPALUM、狼尾草属PENNISETUM、梯牧草属PHLEUM、过江藤属PHYLA、车前属PLANTAGO、早熟禾属POA、单序草属POLYTRIAS、铜锤玉带属PRATIA、夏枯草属PRUNELLA、碱茅属PUCCINELLIA、毛茛属RANUNCULUS、酸模属RUMEX。
18、、千里光属SENECIO、钝叶草属STENOTAPHRUM、蒲公英属TARAXACUM、三叶草属TRIFOLIUM、三毛草属TRISETUM尾稃草属UROCHLOA和/或结缕草属ZOYSIA。0013织物优选为纤维质的、聚酯或其混合物。0014优选的，剩余20WT的碎片为来自不超过五种，优选三种，优选一种其它的物种。在优选的实施方案中，污迹来自单一物种。0015通过保证使用小的和已知数量物种的绿色植物，可获得可再现的“草污迹”，对于它们的去除，其具有一致水平的困难。0016优选地，碎片为来自以下物种中的一种或多种普通剪股颖AGROSTISCANINA、细弱剪股颖AGROSTISCAPILLAR。
19、IS、华北剪股颖AGROSTISCLAVATA、AGROSTISCURTISII、巨序剪股颖AGROSTISGIGANTEA、旱地翦股颖AGROSTISCASTELLANA、AGROSTISMERTENSII、AGROSTISSCABRA、匍匐剪股颖AGROSTISSTOLONIFERA、AGROSTISTENUIS、AGROSTISPALUSTRIS、AGROSTISVINEALE、紫羊茅FESTUCARUBRA、多年生黑麦草LOLIUMPERENNE、白三叶草TRIFOLIUMREPENS、雏菊BELLISPERENNIS、西洋蒲公英TARAXACUMOFFICINALE、EURHYNCH。
20、IUMPRAELONGUM、卵叶青藓BRACHYTHECIUMRUTABULUM、匐枝毛茛RANUNCULUSREPENS、绒毛草HOLCUSLANATUS、如臭狗舌草SENECIOJACOBAEA和大车前PLANTAGOMAJOR、普通早熟禾POATRIVIALIS、草地早熟禾POAPRATENSIS和一年生早熟禾POAANNUA。0017优选的，碎片来自一种或多种的毛茛目RANUNCULALES和菊科ASTERACEAE。0018许多这些植物为更常见的下面的通用名剪股颖属为弯草BENTGRASS匍匐剪股颖“爬行弯曲”“CREEPINGBENT”通常用于高尔夫球场绿色植被，并且广泛地用于草坪。
21、。羊茅属包括簇绒草用于滚球场草地上和用于饲料，黑麦草属LOLIUM为黑麦草RYEGRASS，早熟禾属包括欧洲牧场草、蓝草BLUEGRASS和草丛，而绒毛草属也是草。然而，许多优选植物在非科学通用术语用法中并不是“草”。例如，三叶草属TRIFOLIUM包括苜蓿CLOVER、雏菊属包括雏菊、蒲公英属包括西洋蒲公英、毛茛属植物包括金风花。美说明书CN102112863ACN102112867A3/10页5喙藓属EURHYNCHIUM是一种苔藓属，如青藓属BRACHYTHECIACEAE。0019特别优选的污迹包含一种或多种选自下列的植物黑麦草属，优选多年生黑麦草APERENNIALRYEGRASS；。
22、羊茅属，优选FESTUCAPRATENSIS一种牧场羊茅草。三叶草属，优选红三叶草一种红苜蓿。其它适合的污迹可以包含剪股颖属弯草、白三叶草白苜蓿和/或西洋蒲公英蒲公英。0020样品可以包含两种或更多种污迹，其是相同物种的不同品种或变种。因此，在样品包括衍生自白三叶草白苜蓿的污迹的情况下，可存在各自衍生自ABERDAI品种和ABERACE品种的污迹。0021优选存在至少一种非草物种，特别优选的是其选自非脉管植物苔藓类植物，非被子植物的脉管植物或者选自被子植物科菊科ASTERACEAE、茜草科RUBIACEAE或者豆科FABACEAE。可以制备这样的样品，其中来源于真实的草禾本科POACEAE的碎。
23、片为少于存在的材料的50WT，优选少于25WT。可以制备这样的样品，其中存在的材料都不来源于草。0022超过一种物种特定的污迹可存在于每一个样品上。优选在较大的样品上有130个污染的斑点，每一个覆盖至少01的样品面积。特别优选410个斑点。0023更小的样品可以被均匀污迹或者从较大的样品来切割。0024本发明的第二方面涉及制备样品的方法，其包括用含叶绿体的绿色植物材料接触片状形式的具有大于4106M2的面积大于4MM2的织物基底的步骤，其中至少80的碎片来自单一物种的不是茶或者菠菜的绿色植物。0025在本发明的该第二方面，优选的属和种是上面所提及的以及该过程可以被重复以提供具有多种污迹的样品。。
24、0026本发明的第三方面提供用于测定洗衣组合物效力的方法，其包括用洗衣组合物处理依据本发明的样品的步骤。在本发明的一个特别优选实施方案中，洗衣组合物包括至少一种酶。0027因为叶绿体包含DNA，确定在具体样品上表现的属和种的数目和类型是相对容易的。0028发明详述0029样品的制备方法很明显地由下面的实例给出。通常，样品可用于设计为区分洗衣洗涤剂组合物的实验，所述洗衣洗涤剂组合物含有不同浓度和类型的酶，从而可优化草污迹的移除。表面活性剂、聚合物、金属螯合剂以及漂白剂也可有助于草污迹去除或脱色以及也发现本发明的样品在检测这些成分的活性上的用途。0030酶0031如上所述，在本发明特别优选的实施方。
25、案中，测试的洗衣组合物包含至少一种酶。特别预期的酶包括蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、过氧化物酶/氧化酶、果胶酸裂合酶和甘露聚糖酶或者其混合物。0032适合的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的那些。优选微生物来源的。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶或者金属蛋白酶，优选碱性微生物蛋白酶或者胰岛素样蛋白酶。碱性蛋白酶的例子是枯草杆菌蛋白酶，特别是那些来源于芽孢杆菌属BACILLUS的，例如枯草杆菌蛋白酶NOVO、枯草杆菌蛋白酶CARLSBERG、说明书CN102112863ACN102112867A4/10页6枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白。
26、酶168描述在WO89/06279中。胰岛素样蛋白酶的实例是胰岛素例如猪或者牛来源的和在WO89/06270和WO94/25583中描述的镰刀菌属FUSARIUM的蛋白酶。0033有用的蛋白酶的实例是描述在WO92/19729、WO98/20115、WO98/20116以及WO98/34946中的变体，尤其是具有一个或多个下列位置置换的变体27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235和274。优选的商业上可得的蛋白酶包括ALCALASETM、SAVINASETM、PRIMASETM、DURALASETM、DY。
27、RAZYMTM、ESPERASETM、EVERLASETM、POLARZYMETM以及KANNASETMNOVOZYMESA/S、MAXATASETM、MAXACALTM、MAXAPEMTM、PROPERASETM、PURAFECTTM、PURAFECTOXPTM、FN2TM以及FN3TMGENENCORINTERNATIONALINC。0034合适的脂肪酶包括细菌或者真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的脂肪酶的实例包括来自腐质霉属HUMICOLA同义词THERMOMYCES的脂肪酶，例如来自描述在EP258068和EP305216中的HLANUGINOSATLANUG。
28、INOSUS或来自描述在WO96/13580中的特异腐质霉HINSOLENS，假单胞菌属PSEUDOMAS的脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌PALCALIGENES或者类产碱假单胞菌PPSEUDOALCALIGENESEP218272、洋葱假单胞菌PCEPACIAEP331376、施氏假单胞菌PSTUTZERIGB1,372,034、荧光假单胞菌PFLUORESCENS、假单胞菌属的种的SD705株WO95/06720和WO96/27002、威斯康星假单胞菌PWISCONSINENSISWO96/12012，芽孢杆菌属的脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌BSUBTILISDARTOIS等1993，BIO。
29、CHEMICAETBIOPHYSICAACTA，1131，253360，嗜热脂肪芽孢杆菌BSTEAROTHERMOPHILUSJP64/744992或者短小芽孢杆菌BPUMILUSWO91/16422。0035其他的实例是脂肪酶变体，例如描述在WO92/05249、WO94/01541、EP407225、EP260105、WO95/35381、WO96/00292、WO95/30744、WO94/25578、WO95/14783、WO95/22615、WO97/04079和WO97/07202中的那些。0036优选的商业上可得的脂肪酶包括LIPOLASETM和LIPOLASEULTRATM、L。
30、IPEXTMNOVOZYMESA/S。0037本发明的方法可在角质酶CUTINASE，分类为EC31174，存在的情况下进行。根据本发明使用的角质酶可以是任何来源的。优选微生物来源的角质酶，特别是细菌、真菌或者酵母来源的。0038角质酶是能降解角质的酶。在一个优选实施方案中，角质酶衍生自曲霉属ASPERGILLUS的株，特别是米曲霉ASPERGILLUSORYZAE、链格孢属ALTERNARIA的株，特别是甘蓝链格孢ALTERNARIABRASSICIOLA、镰孢菌属FUSARIUM的株，特别是茄病镰孢菌FUSARIUMSOLANI、FUSARIUMSOLANIPISI、玫瑰色大刀镰刀菌FUS。
31、ARIUMROSEUMCULMORUM或者玫瑰色接骨木镰孢菌FUSARIUMROSEUMSAMBUCIUM、长孺孢属HELMINTHOSPORUM的株，特别是蒜头长孺孢HELMINTHOSPORUMSATIVUM、腐质霉属HUMICOLA的株，特别是特异腐质霉HUMICOLAINSOLENS、假单胞菌属PSEUDOMONAS的株，特别是门多萨假单胞菌PSEUDOMONASMENDOCINA或者恶臭假单胞菌PSEUDOMONASPUTIDA、丝核菌属RHIZOCTONIA的株，特别是茄属丝核菌RHIZOCTONIASOLANI、链霉菌属STREPTOMYCES的株，特别是疮痂链霉菌STREPTO。
32、MYCESSCABIES或者细基格孢说明书CN102112863ACN102112867A5/10页7属ULOCLADIUM的株，特别是群生细基格孢ULOCLADIUMCONSORTIALE。在一个最优选的实施方案中，角质酶来源于特异腐质霉的株，尤其是特异腐质霉DSM1800株。特异腐质霉的角质酶描述在WO96/13580中，其在此引入作为参考。角质酶可以是变体，例如在WO00/34450和WO01/92502中公开的变体中的一种，其在此引入作为参考。优选的角质酶变体包括列在WO01/92502的实施例2中的变体，其特别地在此引入作为参考。0039优选的商业可用的角质酶包括NOVOZYMTM5。
33、1032可获自NOVOZYMESA/S，DENMARK。0040本发明的方法可在磷脂酶分类为EC3114和/或EC31132存在的情况下进行。如本文所用的，术语磷脂酶为对磷脂具有活性的酶。磷脂，例如卵磷脂或者磷脂酰胆碱，由在外部SN1和中间SN2位置用两个脂肪酸酯化以及在第三位置用磷酸酯化的甘油组成；进而，磷酸可以被酯化成氨基醇。磷脂酶是参与磷脂水解作用的酶。几类的磷脂酶活性可以被区分，包括磷脂酶A1和A2，其水解一个脂肪酰基分别在SN1和SN2位置，形成溶血磷脂；以及溶血磷脂酶或者磷脂酶B，其能够水解溶血磷脂中其余的脂肪酰基。磷脂酶C和磷脂酶D磷酸二酯酶分别释放二酰基甘油或者磷脂酸。0041。
34、术语磷脂酶包括具有磷脂酶活性的酶，例如磷脂酶AA1或A2、磷脂酶B活性、磷脂酶C活性或磷脂酶D活性。在这里使用的与本发明的酶有关的术语“磷脂酶A”包含具有磷脂酶A1和/或磷脂酶A2活性的酶。磷脂酶活性可以通过还具有其他活性的酶来提供，例如举例来说具有磷脂酶活性的脂肪酶。磷脂酶活性可以例如来自具有磷脂酶副活性的脂肪酶。在本发明的另一个实施方案中，磷脂酶活性通过基本上仅具有磷脂酶活性的酶提供，以及其中磷脂酶酶活性不是副活性。0042磷脂酶可以是任何来源的，例如，动物来源的例如，举例来说，哺乳动物，例如来自胰脏例如，牛或者猪的胰脏，或者蛇毒或者蜜蜂毒。磷脂酶可以优选微生物来源的，例如丝状真菌、酵母或。
35、者细菌，例如以下的属或者种曲霉属，例如黑曲霉ANIGER；盘基网柄菌属DICTYOSTELIUM，例如DDISCOIDEUM；毛霉属MUCOR，例如爪哇毛霉MJAVANICUS、大毛霉MMUCEDO、细胞毛霉MSUBTILISSIMUS；脉胞菌属NEUROSPORA，例如粗糙脉胞菌NCRASSA；根毛霉属RHIZOMUCOR，例如RPUSILLUS；根霉菌属RHIZOPUS，例如无根根霉RARRHIZUS、日本根霉RJAPONICUS、葡枝根霉RSTOLONIFER；核盘菌属SCLEROTINIA，例如大豆核盘菌SLIBERTIANA；发癣菌属TRICHOPHYTON，例如深红色发癣菌TRUB。
36、RUM；维氏核盘菌属WHETZELINIA，例如WSCLEROTIORUM；芽孢杆菌属，例如巨大芽孢杆菌BMEGATERIUM、枯草芽孢杆菌；柠檬杆菌属CITROBACTER，例如弗劳地氏柠檬杆菌CFREUNDII；肠杆菌属ENTEROBACTER，例如产气肠杆菌EAEROGENES、阴沟肠杆菌ECLOACAE，爱德华氏菌属EDWARDSIELLA，迟钝爱德华氏菌ETARDA；欧文氏杆菌属ERWINIA，例如草生欧文氏杆菌EHERBICOLA；埃希氏菌属ESCHERICHIA，例如大肠埃希氏菌ECOLI；克雷伯氏菌属KLEBSIELLA，例如肺炎克雷伯氏菌KPNEUMONIAE；变形杆菌属PR。
37、OTEUS，例如，普通变形杆菌PVULGARIS；普罗威登斯菌属PROVIDENCIA，例如斯氏普罗威登斯菌PSTUARTII；沙门氏菌属SALMONELLA，例如鼠伤寒沙门氏菌STYPHIMURIUM；沙雷氏菌属SERRATIA，例如解凝沙雷氏菌SLIQUEFASCIENS、粘质沙雷氏菌SMARCESCENS；志贺氏菌属SHIGELLA，例如弗氏志贺氏菌SFLEXNERI；链霉菌属，例如，紫红链说明书CN102112863ACN102112867A6/10页8霉菌SVIOLECEORUBER；耶尔森氏菌属YERSINIA，例如小肠结肠炎耶尔森氏菌YENTEROCOLITICA。因此，磷脂酶可。
38、以是真菌的，例如，来自核菌纲PYRENOMYCETES，例如镰孢菌属，例如大刀镰孢菌FCULMORUM、异孢镰孢菌FHETEROSPORUM、茄病镰孢菌的株或者尖孢镰孢菌FOXYSPORUM株。磷脂酶也可以是来自曲霉属内的丝状真菌株，例如泡盛曲霉ASPERGILLUSAWAMORI、臭曲霉ASPERGILLUSFOETIDUS、日本曲霉ASPERGILLUSJAPONICUS、黑曲霉ASPERGILLUSNIGER或米曲霉ASPERGILLUSORYZAE的株。0043优选的磷脂酶衍生自腐质霉属HUMICOLA的变体，尤其是绵毛状腐质霉HUMICOLALANUGINOSA。磷脂酶可以是变体，例。
39、如公开在WO00/32758中的变体中的一种，其在此引入作为参考。优选的磷脂酶变体包括列在WO00/32758的实施例5中的变体，其特别地在此引入作为参考。在另一个优选的实施方案中，磷脂酶为描述在WO04/111216中的一种，尤其是列在实施例1表中的变体。0044在另一个优选的实施方案中，磷脂酶衍生自镰孢菌株，尤其是尖孢镰孢菌。磷脂酶可以是与WO98/026057中提及的衍生自尖孢镰孢菌DSM2672或其变体中的一种。0045在本发明的一个优选的实施方案中，磷脂酶为磷脂酶A1EC31132。在另一个优选的实施方案中，磷脂酶为磷脂酶A2EC3114。0046商业上的磷脂酶的实例包括LECITA。
40、SETM和LECITASETMULTRA、YIELSMAX或LIPOPANF可得自NOVOZYMESA/S，DENMARK。0047合适的淀粉酶和/或包括细菌或者真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如获自芽孢杆菌属的淀粉酶，例如地衣形芽孢杆菌BLICHENIFORMIS的特殊株，更详细地描述在GB1,296,839中，或者公开在WO95/026397或者WO00/060060中的芽孢杆菌属的株。0048有用的淀粉酶的实例为描述在WO94/02597、WO94/18314、WO96/23873、WO97/43424、WO01/066712、WO02/010355、W。
41、O02/031124和PCT/DK2005/000469中的变体所有参考引入作为参考。0049商业上可得的淀粉酶为DURAMYLTM、TERMAMYLTM、TERMAMYLULTRATM、NATALASETM、STAINZYMETM、FUNGAMYLTM和BANTMNOVOZYMESA/S、RAPIDASETM和PURASTARTM来自GENENCORINTERNATIONALINC。0050适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。适合的纤维素酶包括来自以下的纤维素酶杆状菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢菌属、草根霉属THIELAVIA、支顶孢属ACREMONI。
42、UM，例如产生自HUMICOLAINSOLENS、THIELAVIATERRESTRIS、嗜热毁丝霉MYCELIOPHTHORATHERMOPHILA和尖孢镰孢菌的真菌纤维素酶，公开在US4,435,307、US5,648,263、US5,691,178、US5,776,757、WO89/09259、WO96/029397和WO98/012307中。0051特别合适的纤维素酶是碱性或者中性的具有颜色护理益处的纤维素酶。这样的纤维素酶的实例为描述在EP0495257、EP0531372、WO96/11262、WO96/29397、WO98/08940中的纤维素酶。其他的实例为纤维素酶的变体，例如。
43、描述在WO94/07998、EP0531315、US5,457,046、US5,686,593、US5,763,254、WO95/24471、WO98/12307和PCT/DK98/00299中的那些。说明书CN102112863ACN102112867A7/10页90052商业上可得的纤维素酶包括CELLUZYMETM、CAREZYMETM、ENDOLASETM、RENOZYMETMNOVOZYMESA/S、CLAZINASETM和PURADAXHATMGENENCORINTERNATIONALINC和KAC500BTMKAOCORPORATION。0053适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、。
44、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属COPRINUS例如灰盖鬼伞CCINEREUS的过氧化物酶及其变体，如描述在WO93/24618、WO95/10602和WO98/15257中的那些。商业上可得的过氧化物酶包括GUARDZYMETM和NOVOZYMTM51004NOVOZYMESA/S。0054果胶酸裂合酶的实例包括已从不同细菌属克隆的果胶酸裂合酶，例如欧文氏杆菌属、假单胞菌属、克雷伯氏菌属和黄单胞杆菌属XANTHOMONAS，也来自枯草芽孢杆菌NASSER等人1993FEBSLETTS335319326和芽孢杆菌属的种YA14KI。
45、M等人1994BIOSCIBIOTECHBIOCHEM58947949。也已经描述了短小芽孢杆菌DAVE和VAUGHN1971JBACTERID108166174、多粘芽孢杆菌BPOLYMYXANAGEL和VAUGHN1961ARCHBIOCHEMBIOPHYS93344352、嗜热脂肪芽孢杆菌KARBASSI和VAUGHN1980CANJMICROBIOL26377384、芽孢杆菌属的种HASEGAWA和NAGEL1966JFOODSCI31838845以及芽孢杆菌属的种RK9KELLY和FOGARTY1978CANJMICROBIOL2411641172产生的在PH810范围具有最大活性的。
46、果胶酸裂合酶的纯化。任何上述的，以及二价阳离子独立的和/或热稳定的果胶酸裂合酶也可在本发明的实践中使用。在优选的实施方案中，果胶酸裂合酶包含在HEFFRON等人，1995MOIPLANTMICROBEINTERACT8331334和HENRISSAT等人，1995PLANTPHYSIOL107963976中公开的果胶酸裂合酶的氨基酸序列。特别预期的果胶酸裂合酶公开在WO99/27083和WO99/27084中。其他特别预期的果胶酸裂合酶来源于公开在美国专利号6,284,524其文献在此引入作为参考中的地衣形芽孢杆菌。特别预期的果胶酸裂合酶变体公开在WO02/006442中，尤其是公开在WO02。
47、/006442实施例中的变体其文献在此引入作为参考。0055商业上可得的碱性果胶酸裂合酶的实例包括来自NOVOZYMESA/S，DENMARK的BIOPREPTM和SCOURZYMETML。0056甘露聚糖酶EC32178的实例包括细菌和真菌来源的甘露聚糖酶。在一个具体的实施方案中，甘露聚糖酶衍生自丝状真菌曲霉菌属的株，优选黑曲霉或棘孢曲霉ASPERGILLUSACULEATUSWO94/25576。WO93/24622公开了从里氏木霉TRICHODERMAREESEI分离的甘露聚糖酶。甘露聚糖酶也已经从几种细菌中分离，包括芽孢杆菌生物体。例如，TALBOT等人，APPLENVIRONMICR。
48、OBIOL，VOL56，NO11，PP350535101990描述了衍生自嗜热脂肪芽孢杆菌的甘露聚糖酶。MENDOZA等人，WORLDJMICROBIOLBIOTECH，VOL10，NO5，PP5515551994描述了衍生自枯草芽孢杆菌的甘露聚糖酶。JPA03047076公开了衍生自芽孢杆菌属的种的甘露聚糖酶。JPA63056289描述了碱性热稳定甘露聚糖酶的产生。JPA63036775涉及芽孢杆菌微生物FERMP8856，其产生甘露聚糖酶和甘露糖苷酶。JPA08051975公开了来自碱性芽孢杆菌属的种AM001的碱性甘露聚糖酶。来自解淀粉芽孢杆菌BACILLUSAMYLOLIQUEFACI。
49、ENS的纯化的甘露聚糖酶公开在WO97/11164中。WO91/18974描述了半纤维素酶，例如葡聚说明书CN102112863ACN102112867A8/10页10糖酶、木聚糖酶或甘露聚糖酶活性的。预期的是在WO99/64619中公开的衍生自解琼脂芽孢杆菌BACILLUSAGARADHAERENS、地衣形芽孢杆菌、耐盐嗜碱芽孢杆菌BACILLUSHALODURANS、克劳氏芽孢杆菌BACILLUSCLAUSII、芽孢杆菌属的种和特异腐质霉的甘露聚糖酶碱性家族5和26。尤其预期的是WO99/64619中实施例中提及的芽孢杆菌属的种的甘露聚糖酶，此文献在此引入作为参考。0057商业上可得的甘露聚糖酶的实例包括得自NOVOZYMESA/S，DENMARK的MANNAWAYTM。0058任何存在于组合物中的酶可以使用传统的稳定剂来稳定，例如多元醇，如丙二醇或甘油，糖或者糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如，芳香族硼酸酯或者苯基硼酸衍生物，例如4甲酰基苯基硼酸，并且组合物可如在例如WO92/19709和WO92/19708中描述的配制。0059为了进一步理解和实践本发明，参考如下非限制实施例来进一步描述。实施例0060实施例1样品的制备0061下列物种用于形成“单一物种”的样品0062多年生黑麦草LOLIUMPERENNE多年生黑麦草低石碳酸。