一种从皱瘤海鞘中分离1-氢-3-吲哚甲醛的方法技术领域
本发明属于药物分离工艺领域，具体地说，涉及一种从皱瘤海鞘中分离1-氢
-3-吲哚甲醛的方法。
背景技术
海鞘是尾索动物亚门海鞘纲的尾索动物，在自然界中已知有1500余种，主要
分布在热带及亚热带海域。我国海鞘资源丰富，已记录的中国沿海海鞘种类有100
余种，且有很多为我国所特有。据报道，海鞘中含有多种具有抗肿瘤、抗病毒、
抗菌、抗炎等活性的化合物，因此，近年来，海鞘的化学成分及其生物活性成为
了海洋天然产物研究的热门领域。
皱瘤海鞘(Styelaplicata)是海鞘中的一种，主要分布于我国中南沿海，
福建、广东和海南等，部分地区也有人工养殖。皱瘤海鞘经常在一些海产养殖过
程中一同生长起来，虽然皱瘤海鞘在部分地区有作为食物食用的习惯，但大部分
的皱瘤海鞘仍然是作为养殖过程中的副产物被丢弃掉，造成了大量的浪费。因此，
如果能将皱瘤海鞘进行有效的利用，不仅具有一定的经济价值，也可以解决浪费
问题。
1-氢-3-吲哚甲醛的化学结构式如下所示，其分子式为C9H7NO，相对分子量为
145.161。经报道，1-氢-3-吲哚甲醛具有一定的抗菌、抗炎和抗肿瘤的生物活性，
此外，1-氢-3-吲哚甲醛还是一种重要的医药和有机中间体，可以用于合成许多具
有生理和药理活性的化合物，例如吲哚乙酸、吲哚美辛等。1-氢-3-吲哚甲醛目前
的主要来源之一是化学合成，但化学合成过程比较复杂，涉及有毒有害试剂多，
且得率有限；另一途径是从天然的植物中提取，同样也存在提取过程繁琐，收率
不高的问题。目前，从皱瘤海鞘中提取分离1-氢-3-吲哚甲醛的方法还未见报道。
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发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种从皱瘤海鞘中分离
1-氢-3-吲哚甲醛的方法，方法简单，提取时间短，效率高，得到的1-氢-3-吲哚
甲醛纯度高。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种从皱瘤海鞘中分离1-氢-3-吲哚甲醛的方法，包括：
1)取皱瘤海鞘，用乙醇浸提得到乙醇粗提物；乙醇粗提物用甲醇溶解后过滤，
滤液浓缩得到粗提物溶液，按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:4～8的比例，用
100～200目的正相硅胶进行柱层析；以二氯甲烷-甲醇混合液作为洗脱液，且依
次按100％二氯甲烷→0.5～1.5％甲醇→8～12％甲醇→45～55％甲醇→100％甲醇进
行梯度洗脱，每一梯度洗脱1～7个柱体积，分别收集每个柱体积的洗脱液，浓缩
至干，进行TLC分离；所述TLC分离条件为：硅胶G254薄层板，展开剂为体积比
8～12:1的二氯甲烷-甲醇混合液；
2)取步骤1)TLC中Rf值为0.15～0.25的组分，合并后进行反相固相萃取
分离，采用BondElutC18固相萃取柱，真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇
-水混合液作为洗脱液，且依次按100％水→25～35％甲醇→65～75％甲醇→100％甲
醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱1～7个柱体积，收集各梯度的洗脱液，得到100％
水组分、25～35％甲醇组分、65～75％甲醇组分、100％甲醇组分；
3)取步骤2)中得到的25～35％甲醇组分，浓缩至干，得到粗品；
4)取步骤3)中得到的粗品，用甲醇配置成0.8～1.2mg/ml，采用HPLC进
行纯化；HPLC条件为：固定相：HPLC半制备柱ODS-A，20×250mm，柱内径5μ
m；流动相：45～55％甲醇；流速：6～10ml/min；进样量：0.95～1.05ml；检测
器：检测波长：210nm和254nm；收集12～18min大峰出现时的洗脱液，浓缩，
即得1-氢-3-吲哚甲醛。
一实施例中：所述步骤1)中，粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:5.5～6.5；
以二氯甲烷-甲醇混合液作为洗脱液，且依次按100％二氯甲烷→0.8～1.2％甲醇→
9.5～10.5％甲醇→49～51％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2～6个
柱体积，分别收集每个柱体积的洗脱液，浓缩至干，进行TLC分离；所述TLC分
离条件中，展开剂为体积比9～11:1的二氯甲烷-甲醇混合液。
一实施例中：所述步骤2)中，取步骤1)TLC中Rf值为0.18～0.22的组分；
反向固相萃取分离中，以甲醇-水混合液作为洗脱液，且依次按100％水→29～31％
甲醇→69～71％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2～6个柱体积，收
集各梯度的洗脱液，得到100％水组分、29～31％甲醇组分、69～71％甲醇组分、100％
甲醇组分。
一实施例中：所述步骤3)中，取步骤2)中得到的29～31％甲醇组分，浓缩
至干，得到粗品。
一实施例中：所述步骤4)中，取步骤3)中得到的粗品，用甲醇配置成0.9～
1.1mg/ml；HPLC条件中，流动相：49～51％甲醇；流速：7～9ml/min；溶液传
输单元：LC-6AD；进样器：SIL-10AP；进样量：0.95～1.05ml；检测器：光电二
极管阵列检测器SPD-M20A；收集14～16min大峰出现时的洗脱液，浓缩，即得
所述之1-氢-3-吲哚甲醛。
一实施例中：所述步骤1)中，用乙醇浸提得到乙醇粗提物的方法为：取皱
瘤海鞘，阴干，切碎，向切碎后皱瘤海鞘中加入1～1.5倍体积的乙醇，置均质机
中破碎后，浸提6～8d，浸提液取出备用；重新加入1～1.5倍体积的乙醇，浸
提2～4d后，浸提液取出备用；再次加入1～1.5倍体积的乙醇，浸提2～4d
后，浸提液取出备用；三次得到的的浸提液相互合并，回收溶剂，即得乙醇粗提
物。
一实施例中：所述浸提过程中，每天超声振动提取0.5～2h。
一实施例中：所述步骤1)中，正相硅胶型号为SY01。
一实施例中：所述步骤2)中，真空固相萃取装置为12管或24管真空固相
萃取装置。
一实施例中：所述步骤2)中，所述固相萃取柱为若干根固相萃取柱并联。
本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：
1.1-氢-3-吲哚甲醛的传统来源之一是从植物中提取，但植物提取方法比较繁
琐，其中具有叶绿素等色素，还有纤维素等，这些物质干扰性较强且不易除去，
且植物细胞具有细胞壁，相对提取效率较低；本发明提供了一种从皱瘤海鞘中分
离1-氢-3-吲哚甲醛的方法，皱瘤海鞘作为一种海洋动物，不具有细胞壁，而且
其中的成分较为单纯，含有的氨基酸、糖类的物质也相对容易去除，因此，从皱
瘤海鞘中提取1-氢-3-吲哚甲醛，比从植物中提取，方法更为简单，且提取效率
更高，纯度更高。
2.皱瘤海鞘经常在其他海产养殖中一并成长起来，以往都是作为副产物被丢
弃掉，造成了大量的浪费，本发明提供了从皱瘤海鞘中提取1-氢-3-吲哚甲醛的
方法，为皱瘤海鞘的再利用提供了思路，可以有效减少了浪费，实现节约资源的
目的。
3.本发明的从皱瘤海鞘中提取1-氢-3-吲哚甲醛的方法，采用了反相固相萃
取的方式，与传统的分子筛相比，所需时间大大缩短，能够缩短提取时间一倍以
上，提取效率更高，而且成本可比分子筛降低至少一倍；与反相液相色谱提取方
法相比，能够大大减少提取过程中样品损耗较大的问题。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1为本实施例1中得到的1-氢-3-吲哚甲醛在流动相为50％甲醇时的HPLC
分析谱图。
图2为本实施例1中得到的1-氢-3-吲哚甲醛的MS谱图。
图3为本实施例1中得到的1-氢-3-吲哚甲醛的1H谱谱图。
图4为本实施例1中得到的1-氢-3-吲哚甲醛的13C谱谱图。
具体实施方式
下面通过实施例具体说明本发明的内容：
实施例1
1)取湿重10kg的皱瘤海鞘，阴干，切碎，向切碎后皱瘤海鞘中加入1.25
倍体积的乙醇，置均质机中破碎后，置于5L烧杯中，浸提7d且浸提过程中每
天超声振动提取1h以加速提取，浸提液取出备用；重新加入1.25倍体积的乙醇，
浸提3d且浸提过程中每天超声振动提取1h以加速提取，浸提液取出备用；再
次加入1.25倍体积的乙醇，浸提3d且浸提过程中每天超声振动提取1h以加速
提取，浸提液取出备用；三次得到的的浸提液相互合并，以旋转蒸发仪蒸发回收
溶剂，即得乙醇粗提物120g；向乙醇粗提物中加入甲醇直至溶剂呈无色，过滤，
除去不溶性杂质如盐类等，滤液用旋转蒸发仪蒸发回收溶剂并浓缩至50ml，得到
粗提物溶液；按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:6的比例量取正相硅胶进行柱
层析；本实施例之中，所述正相硅胶为SY01，100～200目，用量为600g；以二
氯甲烷-甲醇混合液作为洗脱液，依次按100％二氯甲烷→1％甲醇→10％甲醇→50％
甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱3～5个柱体积，分别收集每个柱体
积的洗脱液，浓缩至干，进行TLC分离；所述TLC分离条件为：硅胶G254薄层板，
展开剂为体积比10:1的二氯甲烷-甲醇混合液；
2)取步骤1)TLC中Rf值为0.2的组分，合并共250mg，取230mg进行反
相固相萃取分离，采用3根瓦里安BondElutC18固相萃取柱(每根柱体积60ml)
相互并联，Mediwax12管或24管真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇-水混合
液作为洗脱液，依次按100％水→30％甲醇→70％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每
一梯度洗脱3～5个柱体积，收集各梯度的洗脱液，得到100％水组分、30％甲醇组
分、70％甲醇组分、100％甲醇组分；
3)取步骤2)中得到的30％甲醇组分用TLC鉴定：采用硅胶G254薄层板，体
积比为10:1的氯仿-甲醇混合液作为展开剂，紫外灯下观察有明显显色点，表明
30％甲醇组分中确实含有目标产物；将30％甲醇组分浓缩至干，得到粗品105mg；
4)取步骤3)中得到的粗品105mg，用甲醇配置成1mg/ml，采用HPLC进
行纯化；HPLC条件为：岛津高效液相色谱仪制备系统；固定相：HPLC半制备柱
YMCODS-A，20×250mm，柱内径5μm；流动相：50％甲醇；流速：8ml/min；
溶液传输单元：LC-6AD；进样器：SIL-10AP；进样量：1ml；检测器：光电二极
管阵列检测器SPD-M20A；检测波长：210nm和254nm；收集15min大峰出现时
的洗脱液，浓缩，即得所述之1-氢-3-吲哚甲醛20mg。
将得到的1-氢-3-吲哚甲醛用HPLC进行纯度分析：岛津NexeraX2高效液相
色谱系统；固定相：Shim-packXR-ODSⅢ，20×75mm，柱内径1.6μm；流动相：
50％甲醇；流速：0.2ml/min；柱温：40℃；进样量：0.5μl；检测器：光电二
极管阵列检测器SPD-M20A；检测波长：254nm。经检测，本实施例中得到的1-
氢-3-吲哚甲醛纯度为95％，HPLC分析谱图如图1所示。
本实施例中得到的1-氢-3-吲哚甲醛的MS数据：ESI源，分子离子峰为
145.1610，碎片峰为168.0411[M+Na]，如图2所示。
本实施例中得到的1-氢-3-吲哚甲醛的NMR数据：
1HNMR(600MHz,MeOD)δ12.34(broad,s,1H),9.89(s,1H),8.16-8.09(m,
2H),7.48-7.22(m,3H)。1H谱谱图如图3所示。
13CNMR(151MHz,MeOD)δ186.01,138.27,137.54,124.32,123.59,
122.20,120.98,118.73,111.72。13C谱谱图如图4所示。
实施例2
1)取湿重5kg的皱瘤海鞘，阴干，切碎，向切碎后皱瘤海鞘中加入1.25
倍体积的乙醇，置均质机中破碎后，置于5L烧杯中，浸提7d且浸提过程中每
天超声振动提取1h以加速提取，浸提液取出备用；重新加入1.25倍体积的乙醇，
浸提3d且浸提过程中每天超声振动提取1h以加速提取，浸提液取出备用；再
次加入1.25倍体积的乙醇，浸提3d且浸提过程中每天超声振动提取1h以加速
提取，浸提液取出备用；三次得到的的浸提液相互合并，以旋转蒸发仪蒸发回收
溶剂，即得乙醇粗提物58g；向乙醇粗提物中加入甲醇直至溶剂呈无色，过滤，
除去不溶性杂质如盐类等，滤液用旋转蒸发仪蒸发回收溶剂并浓缩至25ml，得
到粗提物溶液；按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:6的比例量取正相硅胶进行
柱层析；本实施例之中，所述正相硅胶为SY01，100～200目，用量为300g；以
二氯甲烷-甲醇混合液作为洗脱液，依次按100％二氯甲烷→1％甲醇→10％甲醇→
50％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱3～5个柱体积，分别收集每个
柱体积的洗脱液，浓缩至干，进行TLC分离；所述TLC分离条件为：硅胶G254
薄层板，展开剂为体积比10:1的二氯甲烷-甲醇混合液；
2)取步骤1)TLC中Rf值为0.2的组分，合并共118mg，进行反相固相萃取
分离，采用2根瓦里安BondElutC18固相萃取柱(每根柱体积60ml)相互并
联，Mediwax12管或24管真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇-水混合液作为
洗脱液，依次按100％水→30％甲醇→70％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度
洗脱3～5个柱体积，收集各梯度的洗脱液，得到100％水组分、30％甲醇组分、70％
甲醇组分、100％甲醇组分；
3)取步骤2)中得到的30％甲醇组分用TLC鉴定：采用硅胶G254薄层板，体
积比为10:1的氯仿-甲醇混合液作为展开剂，紫外灯下观察有明显显色点，表明
30％甲醇组分中确实含有目标产物；将30％甲醇组分浓缩至干，得到粗品48mg；
4)取步骤3)中得到的粗品48mg，用甲醇配置成1mg/ml，采用HPLC进行
纯化；HPLC条件为：岛津高效液相色谱仪制备系统；固定相：HPLC半制备柱YMC
ODS-A，20×250mm，柱内径5μm；流动相：50％甲醇；流速：8ml/min；溶液
传输单元：LC-6AD；进样器：SIL-10AP；进样量：1ml；检测器：光电二极管阵
列检测器SPD-M20A；检测波长：210nm和254nm；收集15min大峰出现时的洗
脱液，浓缩，即得所述之1-氢-3-吲哚甲醛9.5mg。
将得到的1-氢-3-吲哚甲醛用HPLC进行纯度分析，HPLC条件同实施例1；经
检测，本实施例中得到的1-氢-3-吲哚甲醛纯度为96％。
本实施例中得到的1-氢-3-吲哚甲醛的MS数据、NMR数据同实施例1。
实施例3
1)取湿重10kg的皱瘤海鞘，阴干，切碎，向切碎后皱瘤海鞘中加入1.25
倍体积的乙醇，置均质机中破碎后，置于5L烧杯中，浸提7d且浸提过程中每
天超声振动提取1h以加速提取，浸提液取出备用；重新加入1.25倍体积的乙醇，
浸提3d且浸提过程中每天超声振动提取1h以加速提取，浸提液取出备用；再
次加入1.25倍体积的乙醇，浸提3d且浸提过程中每天超声振动提取1h以加速
提取，浸提液取出备用；三次得到的的浸提液相互合并，以旋转蒸发仪蒸发回收
溶剂，即得乙醇粗提物125g；向乙醇粗提物中加入甲醇直至溶剂呈无色，过滤，
除去不溶性杂质如盐类等，滤液用旋转蒸发仪蒸发回收溶剂并浓缩至50ml，得
到粗提物溶液；按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:6的比例量取正相硅胶进行
柱层析；本实施例之中，所述正相硅胶为SY01，100～200目，用量为600g；以
二氯甲烷-甲醇混合液作为洗脱液，依次按100％二氯甲烷→1％甲醇→10％甲醇→
50％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱3～5个柱体积，分别收集每个
柱体积的洗脱液，浓缩至干，进行TLC分离；所述TLC分离条件为：硅胶G254
薄层板，展开剂为体积比10:1的二氯甲烷-甲醇混合液；
2)取步骤1)TLC中Rf值为0.2的组分，合并共258mg，取230mg进行反
相固相萃取分离，采用3根瓦里安BondElutC18固相萃取柱(每根柱体积60ml)
相互并联，Mediwax12管或24管真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇-水混合
液作为洗脱液，依次按100％水→30％甲醇→70％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每
一梯度洗脱3～5个柱体积，收集各梯度的洗脱液，得到100％水组分、30％甲醇组
分、70％甲醇组分、100％甲醇组分；
3)取步骤2)中得到的30％甲醇组分用TLC鉴定：采用硅胶G254薄层板，体
积比为10:1的氯仿-甲醇混合液作为展开剂，紫外灯下观察有明显显色点，表明
30％甲醇组分中确实含有目标产物；将30％甲醇组分浓缩至干，得到粗品109mg；
4)取步骤3)中得到的粗品109mg，用甲醇配置成1mg/ml，采用HPLC进
行纯化；HPLC条件为：岛津高效液相色谱仪制备系统；固定相：HPLC半制备柱
YMCODS-A，20×250mm，柱内径5μm；流动相：50％甲醇；流速：8ml/min；
溶液传输单元：LC-6AD；进样器：SIL-10AP；进样量：1ml；检测器：光电二极
管阵列检测器SPD-M20A；检测波长：210nm和254nm；收集15min大峰出现时
的洗脱液，浓缩，即得所述之1-氢-3-吲哚甲醛21mg。
将得到的1-氢-3-吲哚甲醛用HPLC进行纯度分析，HPLC条件同实施例1；经
检测，本实施例中得到的1-氢-3-吲哚甲醛纯度为95.5％。
本实施例中得到的1-氢-3-吲哚甲醛的MS数据、NMR数据同实施例1。
本领域普通技术人员可知，当本发明的技术参数在如下范围内变化时，可以
预期得到与上述实施例相同或相近的技术效果：
一种从皱瘤海鞘中分离1-氢-3-吲哚甲醛的方法，包括：
1)取皱瘤海鞘，用乙醇浸提得到乙醇粗提物；乙醇粗提物用甲醇溶解后过滤，
滤液浓缩得到粗提物溶液，按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:4～8的比例，用
100～200目的正相硅胶进行柱层析；以二氯甲烷-甲醇混合液作为洗脱液，且依
次按100％二氯甲烷→0.5～1.5％甲醇→8～12％甲醇→45～55％甲醇→100％甲醇进
行梯度洗脱，每一梯度洗脱1～7个柱体积，分别收集每个柱体积的洗脱液，浓缩
至干，进行TLC分离；所述TLC分离条件为：硅胶G254薄层板，展开剂为体积比
8～12:1的二氯甲烷-甲醇混合液；
2)取步骤1)TLC中Rf值为0.15～0.25的组分，合并后进行反相固相萃取
分离，采用BondElutC18固相萃取柱，真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇
-水混合液作为洗脱液，且依次按100％水→25～35％甲醇→65～75％甲醇→100％甲
醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱1～7个柱体积，收集各梯度的洗脱液，得到100％
水组分、25～35％甲醇组分、65～75％甲醇组分、100％甲醇组分；
3)取步骤2)中得到的25～35％甲醇组分，浓缩至干，得到粗品；
4)取步骤3)中得到的粗品，用甲醇配置成0.8～1.2mg/ml，采用HPLC进
行纯化；HPLC条件为：固定相：HPLC半制备柱ODS-A，20×250mm，柱内径5μ
m；流动相：45～55％甲醇；流速：6～10ml/min；进样量：0.95～1.05ml；检测
器：检测波长：210nm和254nm；收集12～18min大峰出现时的洗脱液，浓缩，
即得1-氢-3-吲哚甲醛。
所述步骤1)中，粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:5.5～6.5；以二氯甲烷-
甲醇混合液作为洗脱液，且依次按100％二氯甲烷→0.8～1.2％甲醇→9.5～10.5％
甲醇→49～51％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2～6个柱体积，分
别收集每个柱体积的洗脱液，浓缩至干，进行TLC分离；所述TLC分离条件中，
展开剂为体积比9～11:1的二氯甲烷-甲醇混合液。
所述步骤2)中，取步骤1)TLC中Rf值为0.18～0.22的组分；反向固相萃
取分离中，以甲醇-水混合液作为洗脱液，且依次按100％水→29～31％甲醇→69～
71％甲醇→100％甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱2～6个柱体积，收集各梯度的
洗脱液，得到100％水组分、29～31％甲醇组分、69～71％甲醇组分、100％甲醇组分。
所述步骤3)中，取步骤2)中得到的29～31％甲醇组分，浓缩至干，得到粗
品。
所述步骤4)中，取步骤3)中得到的粗品，用甲醇配置成0.9～1.1mg/ml；
HPLC条件中，流动相：49～51％甲醇；流速：7～9ml/min；溶液传输单元：LC-6AD；
进样器：SIL-10AP；进样量：0.95～1.05ml；检测器：光电二极管阵列检测器
SPD-M20A；收集14～16min大峰出现时的洗脱液，浓缩，即得所述之1-氢-3-吲
哚甲醛。
所述步骤1)中，用乙醇浸提得到乙醇粗提物的方法为：取皱瘤海鞘，阴干，
切碎，向切碎后皱瘤海鞘中加入1～1.5倍体积的乙醇，置均质机中破碎后，浸提
6～8d，浸提液取出备用；重新加入1～1.5倍体积的乙醇，浸提2～4d后，浸
提液取出备用；再次加入1～1.5倍体积的乙醇，浸提2～4d后，浸提液取出备
用；三次得到的的浸提液相互合并，回收溶剂，即得乙醇粗提物。
所述浸提过程中，每天超声振动提取0.5～2h。
所述步骤1)中，正相硅胶型号为SY01。
所述步骤2)中，真空固相萃取装置为12管或24管真空固相萃取装置。
所述步骤2)中，所述固相萃取柱为若干根固相萃取柱并联。
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，
即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖
的范围内。