一种甜菊醇衍生物及制备方法和应用.pdf

本发明公开了一种如式(I)所示的甜菊醇衍生物及其制备与应用，所述制备方法为：所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃反应，在有机溶剂中，加入催化剂碘化钾，另加入缚酸剂，在20～50℃温度下连续反应8～12小时，反应液后处理得到式(I)所示的甜菊醇衍生物；本发明甜菊醇衍生物提供了一种新的、有明显抗肿瘤活性的抗肿瘤药物，为新药筛选提供研究基础，具有重大应用前景；本发明甜菊醇衍生物制备流程简单，利于产业化生产。

1.一种结构如式(I)所示的甜菊醇衍生物：式(I)中，R为H或乙酰基，当R为H时，R为异丙基、仲丁基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基；当R为乙酰基时，R为乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、苄基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基。 2.如权利要1所述的甜菊醇衍生物，其特征在于，所述的甜菊醇衍生物为下列之一： 3.一种制备如权利要求1所述的甜菊醇衍生物的方法，其特征在于所述的方法为，所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在有机溶剂中，加入催化剂碘化钾，另加入缚酸剂，在20～50℃温度下连续反应8～12小时，反应液后处理得到式(I)所示的甜菊醇衍生物，所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH；式(VIII)中R与式(I)中R相同，式(VII)中R与式(I)中R相同，式(I)中R为H或乙酰基，当R为H时，R为异丙基、仲丁基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基；当R为乙酰基时，R为乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、苄基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基； 4.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于所述的后处理为，反应液加水稀释，过滤，滤液再用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸镁干燥、过滤，取滤液浓缩至干，再用丙酮溶解，以体积比5～12∶1的石油醚、丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集洗脱液，浓缩，再用丙酮重结晶，制得式(I)所示的甜菊醇衍生物。 5.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂为二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，所述的有机溶剂的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为10～13.3ml/mmol。 6.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于所述的方法中，式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2～3，式(VIII)所示的化合物与催化剂物质的量比为1∶0.1～0.14；所述式(VIII)所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3～6。 7.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于所述的方法为：所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在二甲基甲酰胺中，加入催化剂碘化钾，另加入缚酸剂，在20～50℃温度下连续反应8～12小时，反应液加水稀释，过滤，滤液再用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸镁干燥、过滤，取滤液浓缩至干，再用丙酮溶解，以体积比5～12∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集洗脱液，浓缩，再用丙酮重结晶，得到式(I)所示的甜菊醇衍生物，所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH；所述的二甲基甲酰胺的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为13.3ml/mmol，所述式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2～3，所述式(VIII)所示的化合物和碘化钾、缚酸剂投料物质的量之比为1∶0.12∶3～6。 8.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于所述的方法按如下步骤进行：(1)在水中，将甜菊糖用高碘酸钠在室温下进行氧化反应16小时；然后加入氢氧化钾加热回流反应3小时，冷却后以冰醋酸调节pH至5.0，乙醚萃取，乙醚层用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干，得甜菊醇，所述的甜菊糖、高碘酸钠、氢氧化钾投料物质的量比为1∶5～6∶100～120，所述的水的体积用量以甜菊糖的质量计为40～45ml/g；(2)将甜菊醇溶于1，4-二氧六环和水以体积比为1∶1的混合溶剂，加入1，4-叔丁基过氧化氢的甲苯溶液，再加入二氧化硒，于60℃反应5小时，加入水稀释，以氯仿萃取，合并有机相并用无水硫酸镁干燥、过滤，滤液浓缩至干，得15-羟基甜菊醇，所述的甜菊醇、1，4-叔丁基过氧化氢、二氧化硒物质的量比为1∶2.5∶0.32，所述的混合溶剂体积用量以甜菊醇质量计为200ml/g，所述的甲苯体积用量以甜菊醇质量计为2ml/g；(3)将15-羟基甜菊醇溶于吡啶a，加入三氧化铬的体积比为8∶1的吡啶b、水混合溶剂，在室温下连续搅拌12小时后，加入水稀释，乙醚萃取，合并有机相用无水硫酸镁干燥、过滤，滤液浓缩至干，浓缩物用丙酮重结晶得ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸，所述的15-羟基甜菊醇与三氧化铬物质的量比为1∶3，所述的吡啶a体积用量以15-羟基甜菊醇质量计为70ml/g，所述的吡啶b、水混合溶剂的体积用量以15-羟基甜菊醇质量计为63ml/g；(4)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溶于吡啶c、和乙酸酐中，室温下搅拌反应四天，减压蒸去乙酸酐和吡啶c，得棕褐色油状物，硅胶柱色谱纯化，以体积比为1∶1的石油醚-丙酮洗脱，收集洗脱液得ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸，所述的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸与乙酸酐物质的量比1∶40，所述的吡啶c的体积用量以ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸计为27ml/g；(5)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(V)或ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(VI)溶于二甲基甲酰胺中，加入催化剂碘化钾、溴代烷烃和缚酸剂，在40～45℃温度下连续反应8～12小时，反应液加水稀释，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸镁干燥、过滤，取滤液浓缩至干，再用丙酮溶解，以体积比5∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集洗脱液，浓缩，再用丙酮重结晶，得式(I)所示化合物；所述二甲基甲酰胺的体积用量以化合物(V)或化合物(VI)摩尔质量计为13.3ml/mmol；所述式(V)或(VI)所示的化合物和碘化钾投料物质的量之比为1∶0.12，所述缚酸剂为无水碳酸钾时，所述的化合物(V)或化合物(VI)、碳酸钾、溴代烷烃的物质的量比为1∶4∶2，所述缚酸剂为氢氧化钾时，所述的化合物(V)或化合物(VI)、氢氧化钾、溴代烷烃的量比为1∶4∶3； 9.一种如权利要求1所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于所述的方法为：所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在二甲基亚砜中，加入缚酸剂，在20～50℃温度下连续反应8～12小时，反应液加水稀释，过滤，滤液再用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸镁干燥、过滤，取滤液浓缩至干，再用丙酮溶解，以体积比5～12∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集洗脱液，浓缩，再用丙酮重结晶，得到式(I)所示的甜菊醇衍生物，所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH；所述的二甲基亚砜的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为10ml/mmol，所述式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2～3，所述式(VIII)所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3～6。 10.如权利要求1所述的甜菊醇衍生物在制备制疗抗HepG2细胞株导致的肝癌、HeLa细胞株导致的子宫颈癌、k562细胞株导致的慢性粒细胞白血病药物中的应用。

(一)技术领域

本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的化合物——甜菊醇衍生物和该类化合物的制 备方法，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

(二)背景技术

恶性肿瘤是危害人们生命健康的重大疾病，据报道，全世界有4000多万人患恶 性肿瘤，其中每年新增患者900多万、死亡700多万，我国年均癌症发病人数约180 万～200万，死亡人数约140万～150万。目前恶性肿瘤发生与死亡还有日趋严重的 趋势，有些地区已经成为人口死亡的首要原因。因此，开发新颖的抗肿瘤药物具有重 要的意义。

甜菊醇衍生物是一种含对映-贝壳杉烯型骨架结构的二萜化合物。许多天然二萜 类化合物，如冬凌草甲素、冬凌草乙素均含有对映-贝壳杉烯型骨架结构，且具有良 好的生物活性，已发展为一类重要的药物。细胞毒活性筛选结果证明对映-贝壳杉烯 型二萜化合物都具有一定的抗肿瘤活性，化合物结构中的α，β-不饱和酮结构片断 是其活性中心，α-亚甲基环戊酮结构的存在，大大增强了该类化合物的抗肿瘤活性， 其作用机制可能是通过一个类似于迈克尔加成的反应，使活性中心与肿瘤细胞中的巯 基酶相结合而发生作用。甜菊醇是甜菊糖的苷元，具有抗高血压、降低血糖、抑制癌 细胞等生理活性，甜菊醇分子为具有贝壳杉骨架的四环二萜类化合物，通过对甜菊醇 分子的结构改造，向分子中引入α-亚甲基环戊酮活性基团，可增强其抗菌、抗肿瘤 活性，获得新的抗肿瘤化合物。因此对甜菊醇进行结构修饰，制备具有抗肿瘤活性的 二萜化合物新药，具有非常重大的意义。

(三)发明内容

本发明目的是提供一类新的具有抗肿瘤活性的化合物-甜菊醇衍生物和该类化 合物的制备方法，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

发明采用的技术方案是：

一种结构如式(I)所示的甜菊醇衍生物：

式(I)中，R1为H或乙酰基，当R1为H时，R2为异丙基、仲丁基、2-溴乙基、2 -溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基；当R1为乙酰基时，R2为乙基、丙基、异丙基、正 丁基、异丁基、苄基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基。

优选的，本发明所述的甜菊醇衍生物为下列之一：

本发明还提供了甜菊醇衍生物的制备方法，所述的方法为，所述化合物(VIII)与如 式(VII)所示的溴代烷烃溶解在有机溶剂中，加入催化剂碘化钾，另加入缚酸剂，在 20～50℃温度下连续反应8～12小时，反应液后处理得到式(I)所示的具有α-亚甲基 环戊酮活性结构的甜菊醇衍生物，所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH；式(VIII)中R1与 式(I)中R1相同，式(VII)中R2与式(I)中R2相同，式(I)中R1为H或乙酰基，当 R1为H时，R2为异丙基、仲丁基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基； 当R1为乙酰基时，R2为乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、苄基、2-溴乙基、 2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基；

优选的，本发明所述的后处理为，反应液加水稀释令固体析出，过滤，滤液再用 乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸镁干燥、过滤，取滤液 浓缩至干，再用丙酮溶解，以体积比5～12∶1的石油醚、丙酮混合液为洗脱剂进行硅 胶柱层析，收集洗脱液，浓缩，再用丙酮重结晶，制得式(I)所示的具有α-亚甲基环 戊酮活性结构的甜菊醇衍生物。

进一步，本发明所述的有机溶剂为二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)， 所述的有机溶剂的体积用量以式(VIII)所示化合物的物质的量计为10～13.3ml/mmol。

再进一步，本发明方法所述的方法中，式(VIII)所示化合物与如式(VII)所示的溴 代烷烃物质的量比为1∶2～3，式(VIII)所示的化合物与催化剂物质的量比为1∶0.1～0.14； 所述式(VIII)所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3～6。

进一步，所述的甜菊醇衍生物的制备方法为：所述的化合物(VIII)与如式(VII)所 示的溴代烷烃溶解在二甲基甲酰胺中，加入催化剂碘化钾，另加入缚酸剂，在20～50 ℃温度下连续反应8～12小时，反应液加水稀释，过滤，滤液再用乙酸乙酯萃取，取 乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸镁干燥、过滤，取滤液浓缩至干，再用 丙酮溶解，以体积比5～12∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集洗 脱液，浓缩，再用丙酮重结晶，得到式(I)所示的甜菊醇衍生物，所述缚酸剂为无水 碳酸钾或KOH；所述的二甲基甲酰胺的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为 13.3ml/mmol，所述式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶ 2～3，所述式(VIII)所示的化合物和碘化钾、缚酸剂投料物质的量之比为1∶0.12∶3～6。

更进一步，本发明所述的式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸推荐按 如下步骤制得：(1)以如式(II)所示的甜菊糖为原料，经NaIO4和KOH水解得到式(III) 所示的甜菊醇；(2)式(III)所示的甜菊醇经SeO2进行氧化反应得到式(IV)所示的 ent-13，15二羟基贝壳杉烯-19-酸，即15-羟基甜菊醇；(3)式(IV)所示的ent-13，15二 羟基贝壳杉烯-19-酸经CrO3进一步氧化得到式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉 烯-19-酸；具体推荐按以下步骤进行：(1)以如式(II)所示的甜菊糖为原料，甜菊糖 10g，高碘酸钠15g于1000ml圆底烧瓶中，并加入450ml水，在室温下搅拌约16小 时后，向反应体系中加入75g(1.34mol)氢氧化钾继续搅拌，并且油浴加热回流3小时， 冷却至室温，缓慢滴加冰醋酸，调节pH至5.0，然后用乙醚(150ml×3)萃取三次， 合并有机相水洗两次，再用无水硫酸镁干燥，最后抽滤，浓缩得白色固体，即为甜菊 醇粗品，用甲醇重结晶得式(III)所示的甜菊醇白色针状晶体1.97g；(2)称取500mg (1.57mmol)甜菊醇于250ml圆底烧瓶中，加入1，4-二氧六环和水的混合溶剂100ml (体积比1∶1)。加入新鲜配置的浓度为3.9mol/L的1，4-叔丁基过氧化氢的甲苯溶 液1ml，最后再加入55mg(0.5mmol)二氧化硒，油浴60度下反应5小时后，向体 系中加150ml水静置，用氯仿(90ml×3)萃取三次，合并有机相并用无水硫酸镁干燥， 最后抽滤，滤液浓缩得白色粉末状固体496mg，收率94.4％，即为15-羟基甜菊醇粗 品，用甲醇重结晶得白色针状晶体；(3)称取三氧化铬129mg(1.29mmol)溶于1ml 水中，并向此溶液缓慢滴加8ml吡啶，约10分钟滴加完毕，143mg(0.43mmol)化 合物(IV)溶于10ml吡啶，并缓慢滴加至上述反应体系中，约15分钟滴加完毕，在室 温下连续搅拌12小时后，向反应物中加20ml水，并用乙醚萃取3次，合并有机相用 无水硫酸镁干燥，最后抽滤，滤液浓缩得棕黄色油状物，用丙酮溶解重结晶得式(V) 所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸的白色针状晶体125mg，收率87.6％。

本发明所述的式(VI)所示的ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸推荐按如下 方法制得：式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸与乙酸酐(CH3CO)2O 反应，得到式(VI)所示的ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸；

具体的，本发明所述的甜菊醇衍生物的方法，按如下步骤进行：

(1)在水中，将甜菊糖用高碘酸钠在室温下进行氧化反应16小时；然后加入氢氧 化钾加热回流反应3小时，冷却后以冰醋酸调节pH至5.0，乙醚萃取，乙醚层用无水 硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干，得甜菊醇，所述的甜菊糖、高碘酸钠、氢氧化钾 投料物质的量比为1∶5～6∶100～120，所述的水的体积用量以甜菊糖的质量计为40～ 45ml/g；

(2)将甜菊醇溶于1，4-二氧六环和水体积比为1∶1的混合溶剂，加入1，4- 叔丁基过氧化氢的甲苯溶液，再加入二氧化硒，于60℃反应5小时，按照每克甜菊醇 用量加入300ml水稀释，以氯仿萃取，萃取液用无水硫酸镁干燥、过滤，滤液浓缩至 干，得15-羟基甜菊醇，所述的甜菊醇、1，4-叔丁基过氧化氢、二氧化硒物质的量 比为1∶2.5∶0.32，所述的混合溶剂体积用量以甜菊醇质量计为200ml/g，所述的甲 苯体积用量以甜菊醇质量计为2ml/g；

(3)将15-羟基甜菊醇溶于吡啶a，加入三氧化铬的体积比为8∶1的吡啶b、水混 合溶剂，在室温下连续搅拌12小时后，加入水稀释，乙醚萃取，合并有机相用无水 硫酸镁干燥、过滤，滤液浓缩至干，浓缩物用丙酮重结晶得ent-13-羟基-15-羰基贝壳 杉烯-19-酸，所述的15-羟基甜菊醇、三氧化铬物质的量比为1∶3，所述的吡啶a体 积用量以15-羟基甜菊醇质量计为70ml/g，所述的吡啶b、水混合溶剂的体积用量以 15-羟基甜菊醇质量计为63ml/g。

(4)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溶于吡啶c、和乙酸酐中，室温下搅拌 反应四天，减压蒸去乙酸酐和吡啶c，得棕褐色油状物，硅胶柱色谱纯化，以体积比 为1∶1的石油醚-丙酮洗脱，收集洗脱液得ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸， 所述的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸与乙酸酐物质的量比1∶40，所述的吡啶c 的体积用量以ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸质量计为27ml/g；

(5)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(V)或ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉 烯-19-酸(VI)溶于DMF或DMSO中，加入催化剂碘化钾、溴代烷烃和缚酸剂(无水 碳酸钾或氢氧化钾)，在20～50℃温度下(优选40～45℃)连续反应8～12小时，反 应液加水稀释，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥、过滤， 滤液浓缩至干，再用丙酮溶解，以体积比5∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅 胶柱层析，收集洗脱液，浓缩，再用丙酮重结晶，得式(I)所示化合物(ent-13-羟 基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸酯或ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸酯)；所述 DMF的体积用量以化合物(V)或化合物(VI)计为13.3ml/mmol，以DMF为有机溶剂 时所述式(VIII)所示的化合物和碘化钾投料物质的量之比为1∶0.12，所述溶剂DMSO 的用量以化合物(V)或化合物(VI)计为10ml/mmol，以DMSO为有机溶剂时不添加碘 化钾；当所用缚酸剂为碳酸钾时，所述的化合物(V)或化合物(VI)、碳酸钾、溴代烷 烃的量比为1∶4∶2；当所用缚酸剂为氢氧化钾时，所述的化合物(V)或化合物(VI)、 氢氧化钾、溴代烷烃的量比为1∶4∶3。

本发明提供另一种制备所述的甜菊醇衍生物的方法：所述的化合物(VIII)与如式 (VII)所示的溴代烷烃溶解在二甲基亚砜中，加入缚酸剂，在20～50℃温度下连续反 应8～12小时，反应液加水稀释，过滤，滤液再用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层用饱 和食盐水洗涤，再用无水硫酸镁干燥、过滤，取滤液浓缩至干，再用丙酮溶解，以体 积比5～12∶1的石油醚、丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集洗脱液，浓缩， 再用丙酮重结晶，得到式(I)所示的甜菊醇衍生物，所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH； 所述的二甲基亚砜的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为10ml/mmol，所述式 (VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2～3，所述式(VIII) 所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3～6。

本发明所述的甜菊醇衍生物在制备抗HepG2细胞株导致的肝癌、HeLa细胞株导 致的子宫颈癌、k562细胞株导致的慢性粒细胞白血病药物中的应用。

更具体的，下列之一的甜菊醇衍生物可应用于制备抗HepG2细胞株导致的肝癌：

I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12。

更具体的，下列之一的甜菊醇衍生物可应用于制备抗HeLa细胞株导致的子宫颈 癌：I-1、I-2、I-5、I-8、I-9、I-10、I-12。

更具体的，下列之一的甜菊醇衍生物可应用于制备抗k562细胞株导致的慢性粒 细胞白血病：化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、 I-14、I-15、I-16。

本发明所述的吡啶a、吡啶b和吡啶c均为吡啶，为便于不同步骤添加量不同而 命名，字母a、b、c没有含义。

本发明所述溴代烷烃优选下列之一：溴代异丙烷、2-溴代丁烷、1，2-二溴乙烷、 1，3-二溴丙烷、1，2-二溴丙烷、1，4-二溴丁烷、溴乙烷、1-溴丙烷、溴代正丁烷、 溴代异丁烷。

与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种甜菊醇衍生 物及其制备方法与应用，本发明甜菊醇衍生物提供了一种新的、有明显抗肿瘤活性的 抗肿瘤药物，为新药筛选提供研究基础，具有重大应用前景；本发明甜菊醇衍生物制 备流程简单，利于产业化生产。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此：

实施例1：ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(V)的制备

(1)甜菊糖10g(12.4mmol)，高碘酸钠15g(70mmol)于1000ml圆底烧瓶中， 并加入450ml水，在室温下搅拌约16小时后，向反应体系中加入75g(1.34mol)氢氧 化钾继续搅拌，并且油浴加热回流3小时，冷却至室温，缓慢滴加冰醋酸，调节pH 至5.0，然后用乙醚(150ml×3)萃取三次，合并有机相水洗两次，再用无水硫酸镁 干燥，最后抽滤，浓缩得白色固体，即为甜菊醇粗品，用甲醇重结晶得式(III)所示的 甜菊醇白色针状晶体1.97g；(2)称取500mg(1.57mmol)甜菊醇于250ml圆底烧瓶 中，加入1，4-二氧六环和水的混合溶剂100ml(体积比1∶1)，加入新鲜配置的浓 度为3.9mol/L的1，4-叔丁基过氧化氢的甲苯溶液1ml，最后再加入55mg(0.5mmol) 二氧化硒，油浴60度下反应5小时后，向反应体系中加150ml水静置，用氯仿(90ml×3) 萃取三次，合并有机相并用无水硫酸镁干燥，最后抽滤，滤液浓缩得白色粉末状固体 496mg，收率94.4％，即为15-羟基甜菊醇(IV)粗品，用甲醇重结晶得白色针状晶 体；(3)称取三氧化铬129mg(1.29mmol)溶于1ml水中，并向此溶液缓慢滴加8ml 吡啶，约10分钟滴加完毕，143mg(0.43mmol)化合物(IV)溶于10ml吡啶，并缓慢 滴加至上述反应体系中，约15分钟滴加完毕，在室温下连续搅拌12小时后，向反应 物中加20ml水，并用乙醚萃取3次，合并有机相用无水硫酸镁干燥，最后抽滤，滤 液浓缩得棕黄色油状物，用丙酮溶解重结晶得式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳 杉烯-19-酸的白色针状晶体125mg，收率87.6％。熔点：271-273℃.IR(KBr，cm-1)：3468， 3383，2944，1696，1474，1389，1262，1185，1105，1056.1H-NMR(500MHz，CD3OD)δppm： 5.26(s，1H，17-H)，5.22(s，1H，17-H)，3.76(s，1H，15-H)，2.15(d，1H，J＝15Hz，14-H)， 2.00(d，1H，J＝10Hz，5-H)，1.22(s，3H，18-CH3)，0.98(s，3H，20-CH3)，2.17-2.14(m，2H)， 1.93-1.87(m，4H)，1.78-1.73(m，5H)，1.51-1.49(m，4H)，1.10-1.01(m，2H)，0.96-0.94(m， 2H).13C-NMR(125MHz，CD3OD)δppm：180.47，158.17，103.28，80.15，57.35，54.63， 48.52，47.87，44.25，42.26，42.18，41.38，41.15，40.19，39.01，29.69，23.01，21.12，20.19， 16.27.

实施例2：ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(VI)的制备

称取实施例1方法制备的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸332mg(1mmol)， 溶于9ml无水吡啶和3.8ml乙酸酐中(过量)，室温下搅拌反应四天。减压蒸去乙酸 酐和吡啶，得棕褐色油状物(有吡啶残留)，油状物用丙酮溶解后拌硅胶干法上样， 进行硅胶柱色谱纯化，石油醚-丙酮(6∶1)洗脱，得白色固体286mg，即ent-13-乙酰 氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸，收率76.6％。熔点：205-209℃。IR(KBr，cm-1)：3178，2954， 1727，1651，1466，1368，1272，1230，1180，1152，1042.1H-NMR(500MHz，DMSO)δppm： 12.08(s，1H，-COOH)，5.94(s，1H，17-H)，5.42(s，1H，17-H)，2.94(d，1H，J＝10Hz，5-H)， 2.06(s，3H，COCH3)，1.13(s，3H，18-CH3)，0.96(s，3H，20-CH3)，2.44(m，1H)，2.02-2.02 (m，1H)，1.87-1.68(m，8H)，1.39-1.28(m，3H)，1.11-0.98(m，3H)，0.81-0.76(m，1H). ESI-MS：373[M-H]+

实施例3：制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸异丙酯(I-1)

称取250mg(0.75mmol)实施例1方法制备的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19- 酸溶于10mlDMF，加入无水碳酸钾430mg(3.1mmol)，用微量进样器向反应体系中 加入溴代异丙烷0.14ml(1.5mmol)，催化量碘化钾15mg(0.09mmol)，40℃下连续 反应8小时后停止搅拌。冷却至室温，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)三 次，合并乙酸乙酯层，用饱和食盐水洗涤两次，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液 浓缩至干得粗品。粗品用丙酮溶解后拌硅胶干法上样，进行硅胶柱色谱纯化，石油醚 -丙酮(体积比5∶1)洗脱，收集洗脱液，浓缩得白色固体，用丙酮重结晶得无色透明 针状晶体233mg，即为化合物(I-1)，收率83.1％。熔点：131-134℃，IR(KBr，cm-1)：3474， 2984，2955，2875，2853，1723，1693，1647，1446，1385，1317，1240，1172，1097， 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.05(s，1H，17-H)，5.44(s，1H，17-H)，5.04-4.97(m，1H， COOCH(CH3)2)，2.53(d，1H，J＝15Hz，14-H)，2.19(dd，1H，J＝5Hz，J＝5Hz，14-H)，1.26(dd， 6H，J＝10Hz，J＝5Hz，COOCH(CH3)2)，1.19(s，3H，18-CH3)，0.96(s，3H，20-CH3)， 1.96-1.78(m，9H)，1.48-1.45(m，4H)，1.22-1.15(m，2H)，1.03-1.00(m，1H)，0.87-0.81 (m，1H)，13C-NMR(125MHz，CDCl3)δppm：208.27，177.25，151.53，114.66，77.22， 65.88，56.12，55.16，50.29，44.72，43.85，40.08，39.94，39.17，37.89，32.90，28.77，21.91， 20.72，20.09，18.86，15.48，10.69.

实施例4：制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸仲丁酯(I-2)

以1.5mmol 2-溴代丁烷代替实施例3中的溴代异丙烷，其他操作同实施例3， 收率80.2％。熔点：105-106℃，IR(KBr，cm-1)：3481，2956，28712854，1724，1694，1647， 1446，1378，1319，1239，1172，1106，1084，1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.04(s，1H， 17-H)，5.44(s，1H，17-H)，4.86-4.81(m，1H，COOCHCH3CH2CH3)，2.53(d，1H， J＝10Hz，14-H)，2.20(dd，1H，J＝5Hz，J＝5Hz，14-H)，1.24-1.19(m，8H，18-CH3， COOCHCH3CH2CH3)，0.95-0.91(m，6H，COOCHCH3CH2CH3，20-CH3)，1.99-1.74(m，4H)， 1.85-1.77(m，5H)，1.67-1.62(m，2H)，1.50-1.47(m，1H)，1.48-1.42(m，4H)，0.86-0.81(m，1H)， 13C-NMR(125MHz，CDCl3).δppm：208.51，176.73，151.46，114.83，71.95，55.98，55.18， 50.23，44.70，43.98，40.19，39.09，37.83，32.94，32.91，29.07，28.89，28.70，20.72，20.05， 19.29，18.85，15.88，9.73。

实施例5：制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代乙酯(I-3)

称取230mg(4mmol)KOH于50ml圆底烧瓶，并加入10ml DMSO，搅拌约5 分钟至完全溶解，然后向反应体系中加入实施例1方法制备的ent-13-羟基-15-羰基贝 壳杉烯-19-酸332mg(1mmol)，搅拌约20分钟至全部溶解后，用移液管移取0.26ml (3mmol)1，2-二溴乙烷，升温至45℃，反应12小时，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取 (20ml×3)三次，合并乙酸乙酯层，用饱和食盐水洗涤两次，然后用无水硫酸镁干 燥，抽滤，滤液浓缩至干，得黄色粘稠状粗品，粗品用丙酮溶解结晶，得浅黄色固体。 浅黄色固体用丙酮溶解后拌硅胶干法上样，硅胶柱色谱纯化，石油醚-丙酮(5∶1)洗 脱，浓缩得白色固体即为化合物(I-3)，用丙酮重结晶得白色固体360mg，收率为 82.0％。熔点：143-146℃.IR(KBr，cm-1)：3482，2956，1724，1701，1647，1446，1386，1318， 1291，1257，1232，1159，1103，1041.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.04(s，1H，17-H)， 5.43(s，1H，17-H)，4.40-4.37(m，2H，COOCH2)，3.56(t，2H，J＝10Hz，CH2CH2)，1.23(s， 3H，18-CH3)，0.95(s，3H，20-CH3)，2.53(d，1H，J＝15Hz，14-H)，2.20(d，1H，J＝15Hz，5-H)， 2.05(s，1H)，1.99-1.95(m，3H)，1.94-1.82(m，4H)，1.60(s，1H)，1.49-1.43(m，3H)， 1.27-1.25(m，2H)，1.22-1.18(m，2H).13C-NMR(125MHz，CDCl3)δppm：208.39，176.99， 151.44，115.42，77.25，64.01，56.07，55.16，50.20，44.69，43.94，40.10，39.81，39.09，37.82， 32.84，29.00，28.78，20.73，20.09，18.76，15.51.

实施例6：制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代丙酯(I-4)

以3mmol 1，3-二溴丙烷代替实施例5中的1，2-二溴乙烷，其他操作同实施例5， 收率为81.6％。熔点：131-133℃.IR(KBr，cm-1)：3469，2951，2929，2849，1722，1692， 1644，1469，1384，1253，1236，1164，1103，1083.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.05 (s，1H，17-H)，5.44(s，1H，17-H)，4.29-4.13(m，2H，COOCH2)，3.51(t，2H，CH2CH2Br)， 2.53(d，1H，J＝15Hz，14-H)，1.89-1.81(m，2H，CH2CH2CH2Br)，1.22(s，3H，18-CH3)，0.93 (s，3H，20-CH3)，2.22-2.17(m，3H)，2.00-1.94(m，3H)，1.81-1.75(m，1H)，1.65(s，3H)， 1.50-1.45(m，4H)，1.26(s，1H)，1.20-1.17(m，1H)，1.07-1.01(m，1H)，0.88-0.82(m，1H). 13C-NMR(125MHz，CDCl3)δppm：208.36，177.07，151.44，114.92，76.78，61.89，56.08， 55.14，50.24，44.73，43.88，40.07，39.84，39.13，37.84，32.86，31.41，29.64，28.80，20.73， 20.12，18.87，15.50.ESI-MS：453[M]+.

实施例7：制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代异丙酯(I-5)

以3mmol 1，2-二溴丙烷代替实施例5中的1，2-二溴乙烷，其他操作同实施例5， 收率为83.9％。熔点：130-133℃.IR(KBr，cm-1)：3485，2954，2921，2853，1725，1701， 1645，1446，1384，1319，1254，1165，1102，1083.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.04(s， 1H，17-H)，5.44(s，1H，17-H)，4.32-4.13(m，2H，COOCH2)，2.57-2.52(m，1H， COOCH2CHBr)，2.20(dd，1H，J＝15Hz，J＝5Hz，14-H)，0.96(s，3H，20-CH3)，1.97-1.94(m， 3H)，1.89-1.84(m，4H)，1.83-1.74(m，4H)，1.50-1.46(m，4H)，1.38-1.34(m，1H)， 1.27-1.20(m，6H，CHBrCH3，18-CH3)，1.09-1.02(m，1H)，0.89-0.82(m，1H).13C-NMR (125MHz，CDCl3)δppm：208.41，176.93，151.48，114.88，69.33，56.13，55.19，50.24，46.01， 44.71，44.00，40.13，39.86，39.13，37.87，32.89，29.71，28.95，28.80，20.76，20.14，18.81， 15.59.

实施例8：制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代丁酯(I-6)

以3mmol 1，4-二溴丁烷代替实施例5中的1，2-二溴乙烷，其他操作同实施例5， 收率为83.6％。熔点：126-128℃.IR(KBr，cm-1)：3476，2954，2870，1726，1694，1645， 1446，1384，1320，1237，1165，1104，1083.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.04(s， 1H，17-H)，5.44(s，1H，17-H)，4.14-4.03(m，2H，COOCH2)，3.51(t，2H，CH2CH2Br)，2.53 (d，1H，J＝10Hz，14-H)，2.18(dd，1H，J＝5Hz，J＝5Hz，14-H)，1.21(s，3H，18-CH3)，0.92(s， 3H，20-CH3)，1.99-1.95(m，6H)，1.85-1.77(m，8H)，1.51-1.42(m，4H)，1.20-1.17(m，1H)， 1.06-1.00(m，1H)，0.87-0.81(m，1H).13C-NMR(125MHz，CDCl3)δppm：208.39，177.22， 151.40，114.91，78.97，63.24，56.02，55.12，50.21，44.71，43.83，40.04，39.83，39.09，37.82， 32.97，32.83，29.55，28.81，27.24，20.71，20.12，18.84，15.51..

实施例9：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸乙酯(I-7)

称取280mg(0.75mmol)实施例2方法制备的ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯 -19-酸溶于10mlDMF，加入无水碳酸钾430mg(3.1mmol)，用微量进样器向反应体 系中加入溴乙烷0.11ml(1.5mmol)，催化量碘化钾15mg(0.09mmol)，40℃下连续反 应8小时。冷却至室温，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)三次，合并乙酸 乙酯层，用饱和食盐水洗涤两次，然后用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液浓缩至干得黄 色油状物，黄色油状物用丙酮溶解后拌硅胶干法上样，石油醚-丙酮(12∶1)洗脱，浓 缩得浅黄色油状物242mg，收率80.1％。IR(KBr，cm-1)：3448，2929，1719，1637，1560， 1458，1384，1231，1155，1042.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.06(s，1H，17-H)，5.39 (s，1H，17-H)，4.16-4.06(m，2H，COOCH2)，3.12(d，1H，J＝10Hz，5-H)，2.57(t，3H， J＝15Hz，CH2CH3)，2.02(s，3H，COCH3)，1.43(s，3H，18-CH3)，0.98(s，3H，20-CH3)， 1.96-1.75(m，8H)，1.61(s，3H)，1.47-1.26(m，3H)，1.19-0.98(m，3H).13C-NMR(125MHz， CDCl3)δppm：207.00，177.15，169.75，147.92，115.77，84.46，60.08，56.06，54.96，50.32， 43.67，40.37，39.97，39.91，37.85，35.58，32.81，28.75，22.04，20.31，19.99，18.83，15.39， 14.13.

实施例10：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸丙酯(I-8)

以1.5mmol1-溴丙烷代替实施例9中的溴乙烷，其他操作同实施例9，收率82.4％。 IR(KBr，cm-1)：3418，2959，2874，1728，1650，1463，1383，1367，1334，1227，1158，1076， 1042.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.06(s，1H，17-H)，5.39(s，1H，17-H)，4.08-3.93 (m，2H，COOCH2)，3.11(d，1H，J＝10Hz，5-H)，2.56(dd，1H，J＝10Hz，J＝5Hz，14-H)，2.19 (d，1H，J＝15Hz，14-H)，2.08(s，3H，COCH3)，0.98(t，3H，J＝3.3Hz，CH2CH3)，1.70-1.65(m， 2H，CH2CH2)，1.20(s，3H，18-CH3)，0.96(s，3H，20-CH3)，1.94-1.78(m，5H)，1.59(s，4H)， 1.47-1.44(m，2H)，1.28-1.20(m，1H)，1.17-1.14(m，2H)，0.85-0.79(m，1H).13C-NMR (125MHz，CDCl3)δppm：207.01，177.27，169.74，147.91，115.78，84.45，65.91，56.07， 54.96，50.31，43.78，40.34，39.95，39.91，37.86，35.59，32.81，28.80，22.05，21.91，20.32， 20.00，18.84，15.34，10.72.

实施例11：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸异丙酯(I-9)

以1.5mmol溴代异丙烷代替实施例9中的溴乙烷，其他操作同实施例9，收率 80.8％。IR(KBr，cm-1)：2956，2873，1740，1716，1464，1383，1370，1234，1180，1161， 1108，1076，1042.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.06(s，1H，17-H)，5.38(s，1H， 17-H)，5.02-4.94(m，1H，COOCH)，3.10(d，1H，J＝15Hz，5-H)，2.54(dd，1H，J＝10Hz， J＝5Hz，14-H)，2.17(d，1H，J＝10Hz，14-H)，2.08(s，3H，COCH3)，1.18(s，3H，18-CH3)， 0.99(s，3H，20-CH3)，1.26(d，3H，J＝10Hz，CHCH3CH3)，1.23(d，3H，J＝5Hz，CHCH3CH3)， 1.97-1.91(m，2H)，1.87-1.82(m，3H)，1.80-1.76(m，3H)，1.62(s，2H)，1.47-1.44(m，3H)， 1.15-1.13(m，1H)，0.85-0.79(m，1H).13C-NMR(125MHz，CDCl3)δppm：207.02，176.54， 169.71，147.88，115.75，84.45，67.34，56.04，54.97，50.30，43.70，40.35，40.05，39.95，37.85， 35.64，32.86，30.90，22.04，21.85，21.59，20.31，20.01，18.85，15.64.

实施例12：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸丁酯(I-10)

以1.5mmol溴代正丁烷代替实施例9中的溴乙烷，其他操作同实施例9，收率 81.6％。IR(KBr，cm-1)：3443，2957，2872，1728，1650，1463，1384，1367，1334，1225，1157， 1128.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.07(s，1H，17-H)，5.39(s，1H，17-H)，4.13-3.96 (m，2H，COOCH2)，3.11(d，1H，J＝10Hz，5-H)，2.56(dd，1H，J＝10Hz，J＝5Hz，14-H)，2.18 (d，1H，J＝15Hz，14-H)，2.08(s，3H，COCH3)，1.19(s，3H，18-CH3)，0.97(t，3H，J＝6.0Hz， CH2CH3)，0.93(s，3H，20-CH3)，1.96-1.91(m，2H)，1.87-1.78(m，6H)，1.63-1.62(m，4H)， 1.49-1.40(m，4H)，1.18-1.14(m，2H)，1.01-0.98(m，1H).13C-NMR(125MHz，CDCl3) δppm：206.99，177.24，169.71，147.91，115.75，84.44，64.06，56.08，54.95，50.30，43.76， 40.33，39.93，37.84，35.59，32.80，30.54，28.79，22.03，20.31，19.98，19.37，18.84，15.33， 13.67.

实施例13：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸异丁酯(I-11)

以1.5mmol溴代异丁烷代替实施例9中的溴乙烷，其他操作同实施例9，收率 80.2％。IR(KBr，cm-1)：3434，2959，1728，1649，1468，1368，1226，1157，1043.1H-NMR (500MHz，CDCl3)δppm：6.07(s，1H，17-H)，5.39(s，1H，17-H)，3.92-3.74(m，2H， COOCH2)，3.11(d，1H，J＝10Hz，5-H)，2.55(dd，1H，J＝5Hz，J＝10Hz，14-H)，2.19(d，1H， J＝15Hz，14-H)，2.08(s，3H，COCH3)，1.21(s，3H，18-CH3)，0.98(s，3H，20-CH3)，0.96(d， 6H，J＝5.0Hz，CH(CH3)2)，1.97-1.94(m，3H)，1.86-1.79(m，5H)，1.63(s，2H)，1.49-1.44(m， 2H)，1.18-1.14(m，2H)，1.02-0.99(m，1H)，0.87-1.79(m，1H).13C-NMR(125MHz，CDCl3) δppm：207.00，177.26，169.71，147.90，115.76，84.44，70.58，56.10，54.96，50.29，43.86， 40.30，39.93，39.91，37.86，35.60，32.80，28.82，27.66，22.03，20.31，20.03，19.41，19.31， 18.84，15.30.

实施例14：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸苄酯(I-12)

以1.5mmol溴苄代替实施例9中的溴乙烷，其他操作同实施例9，收率82.7％。 IR  (KBr，cm-1)：3448，2955，2873，1725，1685，1656，1458，1384，1368，1247，1226，1147， 1042.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：7.42-7.28(m，5H)，6.07(s，1H，17-H)，5.40(s， 1H，17-H)，5.12(dd，2H，J＝10Hz，J＝10Hz，COOCH2)，4.52(s，1H)，3.07(d，1H，J＝10Hz， 5-H)，2.55(dd，1H，J＝5Hz，J＝5Hz，14-H)，2.22(d，1H，J＝15Hz，14-H)，2.10(s，3H， COCH3)，1.23(s，3H，18-CH3)，0.90(s，3H，20-CH3)，1.98-1.90(m，2H)，1.87-1.75(m，6H)， 1.50-1.43(m，3H)，1.19-1.16(m，1H)，1.07-1.00(m，1H)，0.85-0.79(m，1H).13C-NMR (125MHz，CDCl3)δppm：207.09，176.67，169.68，147.89，136.02，129.03，128.79，128.53， 128.21，128.11，115.80，84.39，66.06，56.14，54.92，50.24，43.83，40.27，39.93，39.03，37.82， 35.55，32.75，28.75，22.07，20.30，20.20，18.82，15.31.

实施例15：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-2’-溴代乙酯(I-13)

称取230mg(4mmol)KOH于50ml圆底烧瓶，并加入10ml DMSO，搅拌约5 分钟至完全溶解，然后向反应体系中加入实施例2方法制备的ent-13-乙酰氧基-15-羰 基贝壳杉烯-19-酸332mg(1mmol)，搅拌约20分钟至全部溶解后，用移液管移取0.26ml (3mmol)1，2-二溴乙烷，升温至45℃，反应12小时。加入30ml水中，用乙酸乙酯萃 取(20ml×3)三次，合并乙酸乙酯层，用饱和食盐水洗涤两次，然后用无水硫酸镁 干燥，抽滤，滤液浓缩至干得黄色粘稠状粗品，粗品用丙酮溶解结晶，得浅黄色固体。 浅黄色固体用丙酮溶解后拌硅胶干法上样，进行硅胶柱色谱纯化，石油醚-丙酮(12∶1) 洗脱，浓缩得白色固体391mg，收率为81.2％。熔点：115-116℃.IR(KBr，cm-1)：3444， 2954，2873，1733，1698，1650，1455，1384，1368，1333，1261，1232，1177，1157，1061， 1040.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.07(s，1H，17-H)，5.39(s，1H，17-H)，4.45-4.31 (m，2H，COOCH2)，3.55(t，2H，CH2CH2Br)，3.13(d，1H，J＝5Hz，J＝5Hz，5-H)，2.56(dd， 1H，J＝10Hz，J＝5Hz，14-H)，2.20(d，1H，J＝15Hz，14-H)，2.08(s，3H，COCH3)，1.23(s，3H， 18-CH3)，0.99(s，3H，20-CH3)，1.97-1.92(m，2H)，1.88-1.78(m，5H)，1.59(s，3H)， 1.51-1.45(m，3H)，1.07-1.01(m，1H)，0.85-0.82(m，1H).13C-NMR(125MHz，CDCl3) δppm：206.99，176.92，169.73，147.95，115.82，84.44，63.96，56.12，54.97，50.29，43.96， 40.38，40.02，39.88，37.84，35.60，32.82，28.96，28.82，22.07，20.37，20.06，18.81，15.46.

实施例16：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-3’-溴代丙酯(I-14)

以3mmol 1，3-二溴丙烷代替实施例15中的1，2-二溴乙烷，其他操作同实施例 15，收率为80％。熔点：108-110℃.IR(KBr，cm-1)：3434，2956，1726，1368，1228，1156， 1043.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.08(s，1H，17-H)，5.40(s，1H，17-H)，4.30-4.10 (m，2H，COOCH2)，3.51-3.48(m，2H，COOCH2CH2CH2)，3.12(d，1H，J＝10Hz，5-H)，2.5 (dd，1H，J＝5Hz，J＝10Hz，14-H)，2.09(s，3H，COCH3)，1.98-1，93(m，2H， COOCH2CH2CH2)，1.21(s，3H，18-CH3)，0.97(s，3H，20-CH3)，2.22-2.18(m，3H)， 1.88-1.82(m，3H)，1.81-1.76(m，2H)，1.64(s，2H)，1.50-1.46(m，2H)，1.26(s，1H)， 1.19-1.16(m，1H)，1.06-1.00(m，1H)，0.86-0.80(m，1H).13C-NMR(125MHz，CDCl3) δppm：206.93，177.00，169.73，147.87，115.87，84.40，61.93，56.06，54.92，50.28，43.83， 40.36，39.94，39.84，37.83，35.58，32.78，31.41，29.59，28.80，22.06，20.32，20.02，18.85， 15.37.

实施例17：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-2’-溴代丙酯(I-15)

以3mmol 1，2-二溴丙烷代替实施例15中的1，2-二溴乙烷，其他操作同实施例 15，收率为80.9％。熔点：105-106℃.IR(KBr，cm-1)：3436，2956，1726，1449，1368，1230， 1155，1042.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.08(s，1H，17-H)，5.40(s，1H，17-H)， 4.35-4.22(m，2H，COOCH2)，4.21-4.11(m，1H，COOCH2CHBr)，3.13(d，1H，J＝5Hz， J＝5Hz，5-H)，2.56(dd，1H，J＝5Hz，J＝10Hz，14-H)，2.20(d，1H，J＝15Hz，14-H)，2.09(s，3H， COCH3)，1.73(d，3H，CH2CHBrCH3)，1.24(s，3H，18-CH3)，0.99(s，3H，20-CH3)， 2.23-2.19(m，1H)，1.96-1.83(m，4H)，1.73-1.68(m，2H)，1.49-1.40(m，5H)，1.22-1.17 (m，2H)，0.94-0.89(m，1H).13C-NMR(125MHz，CDCl3)δppm：207.00，176.75，169.72， 147.89，115.82，84.40，69.25，56.07，54.94，50.23，44.92，43.93，40.30，39.96，39.83，37.80， 35.57，32.78，28.77，24.67，22.04，20.32，20.03，18.76，15.45.

实施例18：制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-4’-溴代丁酯(I-16)

以3mmol 1，4-二溴丁烷代替实施例15中的1，2-二溴乙烷，其他操作同实施例 15，收率为78.3％。熔点：98-100℃.IR(KBr，cm-1)：2955，1724，1447，1384，1367，1248， 1227，1156，1093，1076，1042.1H-NMR(500MHz，CDCl3)δppm：6.07(s，1H，17-H)，5.39 (s，1H，17-H)，4.15-4.00(m，2H，COOCH2)，3.45(t，2H，CH2CH2Br)，3.12(d，1H，J＝5Hz， 5-H)，2.56(dd，1H，J＝5Hz，J＝5Hz，14-H)，2.18(d，1H，J＝10Hz，14-H)，2.08(s，3H， COCH3)，1.20(s，3H，18-CH3)，0.95(s，3H，20-CH3)，1.98-1.94(m，3H)，1.85-1.75(m，8H)， 1.61(s，2H)，1.53-1.43(m，3H)，1.18-1.15(m，1H)，1.04-0.99(m，1H)，0.85-0.79(m，1H). 13C-NMR(125MHz，CDCl3)δppm：206.94，177.16，169.75，147.94，115.83，84.44，63.25， 56.07，54.95，50.30，43.84，40.40，39.96，39.89，37.86，35.57，32.97，32.80，29.58，28.82， 27.27，22.06，20.34，20.08，18.86，15.42.

实施例19：抗HepG2细胞肝癌活性测试

测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法：

A 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性噻唑蓝(MTT)还原为水不溶 性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中 的甲瓒，用酶联免疫检测仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

B 细胞：HepG2(上海细胞所)，人肝癌细胞株。

C 实验步骤

(1)样品的准备：将实施例3～18所制备的化合物(I-1)～(I-16)溶于DMSO配置 成40mg/ml母液，与RPMI1640在37℃热水浴中超声促溶解配成母液(1000μg/ml)， 取500μl母液(1000μg/ml)再加4.5ml的RPMI1640培养液配成5ml 100μg/ml的药 物稀释液，获得样品1～样品16，再用RPMI1640培养液将每个样品连续稀释至以下5 个浓度：80、40、20、10、5μg/ml进行试验，再根据试验结果，根据不同化合物的活 性进行浓度调整。

(2)细胞的培养

取对数生长期HepG2细胞一瓶，弃培养液，以PBS洗涤2次，每次4ml；加入 0.25％(w/v)Trypsin-0.53mM EDTA溶液1ml，于37℃培养箱消化约15s，立即弃胰 酶溶液，加入RPMI-1640完全培养液4.0ml，用5ml移液枪反复吹打，将细胞从瓶 壁上吹打下来，用10mL含质量分数为10％的新生牛血清的RPMI1640培养液配成单 细胞悬液。用细胞计数板计数后用RPMI-1640完全培养液稀释成2×105个/ml细胞悬 液，取96孔板，每孔加入上述细胞悬液100μL，于体积分数为5％的CO2培养箱中于 37℃培养24h，依次加入样品I-1～样品I-16的稀释液，每个样品5个浓度，每个浓度 4孔，以不加样品的空白作为对照，于体积分数为5％的CO2培养箱中于37℃继续培 养48h，培养终止前2h，每孔加入1mg/ml MTT 100μl，继续温育4h，吸去上清液， 每孔加入150μl DMSO，摇匀，用酶标仪(Biorad680，美国biorad伯乐公司)于570nm 处测定每个小孔中溶液的OD值，重复3次试验，求出IC50，抗肿瘤活性测试结果见 表1所示。

表1：化合物对HepG2的IC50(μg/ml)

按照抗肿瘤活性的评价标准(化合物IC50＜10μg/ml则判断样品在体外对肿 瘤细胞有杀伤作用)，化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、 I-12具有显著的抗HepG2肝癌细胞活性。

实施例20：抗HeLa细胞子宫颈癌活性测试

以HeLa人子宫颈癌细胞株(上海细胞所)代替实施例19中的HepG2肝癌细胞 株，进行抗肿瘤活性测试，其他操作同实施例19，试验结果如下：

表2：化合物对HeLa的IC50(μg/ml)

按照抗肿瘤活件的评价标准，化合物I-1、I-2、I-5、I-8、I-9、I-10、I-12具有显 著的抗HeLa子宫颈癌细胞活性，化合物I-14、I-15、I-16具有较好的抗HeLa子宫颈 癌细胞活性，化合物I-13具有一定的抗HeLa子宫颈癌细胞活性。

实施例21：抗k562慢性粒细胞白血病活性测试

以k562慢性粒细胞白血病细胞株(上海细胞所)代替实施例19中的HepG2肝癌 细胞株，进行抗肿瘤活性测试，其他操作同实施例19，试验结果如表3所示：

表3：化合物对k562的IC50(μg/ml)

按照抗肿瘤活件的评价标准，化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、 I-10、I-11、I-12、I-14、I-15、I-16具有显著的抗k562慢性粒细胞白血病活性，化合 物I-13具有较好的抗k562慢性粒细胞白血病活性。