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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510791691.6 (22)申请日 2015.11.17 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105330632 A (43)申请公布日 2016.02.17 (73)专利权人 浙江工业大学 地址 310014 浙江省杭州市下城区朝晖六 区潮王路18号 (72)发明人 童胜强鲁梦霞颜继忠 (74)专利代理机构 杭州天正专利事务所有限公 司 33201 代理人 黄美娟王晓普 (51)Int.Cl. C07D 307/88(2006.01) (56)对比文件 C。
2、N 103896892 A,2014.07.02,权利要求1. CN 104003963 A,2014.08.27,权利要求1. CN 104447648 A,2015.03.25,权利要求1. 刘雯 等.应用高速逆流一次性分离川芎中 的蛇床内酯A和Z-蒿本内酯. 中成药 .2010,第 32卷(第5期),764767. Chao Han 等.Enantioseparation of aromatic -hydroxycarboxylic acids: The application of a dinuclear Cu2()- cyclodextrin complex as a chiral 。
3、selector in high speed counter-current chromatography compared with native - cyclodextrin. Journal of Chromatography A .2014,第2015卷82-91. Genlin Sun 等.Separation of phenylsuccinic acid enantiomers using biphasic chiral recognition high-speed countercurrent chromatography. J. Sep. Sci. .2014,第37卷1736。
4、1741. 审查员 张书恩 (54)发明名称 一种从川芎挥发油中分离洋川芎内酯A的方 法 (57)摘要 本发明公开了一种从川芎挥发油中分离洋 川芎内酯A的方法： 将甲基-环糊精水溶液与 正己烷按体积比1： 0.52充分混合后静置、 分 液， 分别得到上相和下相， 下相作为高速逆流色 谱的固定相,上相为流动相； 称取川芎挥发油， 用 体积比1： 1的上相和下相溶解后进样， 高速逆流 色谱分离， 紫外检测器检测， 根据紫外检测器光 谱图的峰形收集对应流出液， 将含有洋川芎内酯 A的流出液浓缩干燥， 制得洋川芎内酯A纯品。 本 发明方法操作简便， 溶剂消耗少， 高效快捷， 目的 性强， 分离效果好。。
5、 权利要求书1页 说明书3页 附图3页 CN 105330632 B 2017.12.05 CN 105330632 B 1.一种从川芎挥发油中分离洋川芎内酯A的方法， 其特征在于所述方法为： 将甲基- - 环糊精水溶液与正己烷按体积比1： 0.52充分混合后静置、 分液， 分别得到上相和下相， 下 相作为高速逆流色谱的固定相,上相为流动相； 称取川芎挥发油， 用体积比1： 1的上相和下 相溶解后进样， 高速逆流色谱分离， 紫外检测器检测， 根据紫外检测器光谱图的峰形收集对 应流出液， 将含有洋川芎内酯A的流出液浓缩干燥， 制得洋川芎内酯A纯品。 2.如权利要求1所述的方法， 其特征在于所述的。
6、甲基- -环糊精水溶液的浓度为0.05 0.2mol/L。 3.如权利要求1所述的方法， 其特征在于所述甲基- -环糊精水溶液与正己烷的体积比 为1： 1。 4.如权利要求2所述的方法， 其特征在于所述的甲基- -环糊精水溶液的浓度为0.05 0.1mol/L。 5.如权利要求1所述的方法， 其特征在于所述的高速逆流色谱的柱温为1530。 6.如权利要求1所述的方法， 其特征在于所述方法按以下操作： 将0.050.2mol/L的甲 基- -环糊精水溶液与正己烷按体积比1： 0.52充分混合后静置、 分液， 分别得到上相和下 相， 下相作为高速逆流色谱的固定相,上相为流动相； 先将固定相充满高速。
7、逆流色谱仪的多 层线圈分离柱， 设定高速逆流色谱仪， 柱温1530， 在5001000r/min转速下， 以0.5 5ml/min的流速注入流动相， 以波长200300nm的紫外检测器检测， 当柱尾端明显有流动相 流出时， 称取川芎挥发油， 用体积比1： 1的上相和下相溶解后进样， 根据紫外检测器光谱图 的峰形收集对应流出液， 将含有洋川芎内酯A的流出液浓缩干燥， 制得洋川芎内酯A纯品。 7.如权利要求6所述的方法， 其特征在于方法按以下操作： 将0.050.1mol/L的甲基- -环糊精水溶液与正己烷按体积比1： 1充分混合后静置、 分液， 分别得到上相和下相， 下相 作为高速逆流色谱的固定。
8、相,上相为流动相； 先将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈 分离柱， 设定高速逆流色谱仪， 柱温20， 在8001000r/min转速下， 以2ml/min的流速注入 流动相， 以波长210280nm的紫外检测器检测， 当柱尾端明显有流动相流出时， 称取川芎挥 发油， 用体积比1： 1的上相和下相溶解后进样， 根据紫外检测器光谱图的峰形收集对应流出 液， 将含有洋川芎内酯A的流出液浓缩干燥， 制得洋川芎内酯A纯品。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105330632 B 2 一种从川芎挥发油中分离洋川芎内酯A的方法 (一)技术领域 0001 本发明属于中药制药领域， 涉及一种从富含洋川芎内酯。
9、A的川芎挥发油中分离洋 川芎内酯A的方法。 (二)背景技术 0002 洋川芎内酯A是存在于川芎挥发油中的一种苯酞类物质， 具有抗脑缺血并减轻脑 缺血损伤， 以及抗惊厥等作用。 洋川芎内酯A， 英文名senkyunolide A， 分子式C12H16O2， 分子 量192.25， 分子结构如下： 0003 0004 川芎具有活血祛瘀、 行气开郁、 祛风止痛的功效。 临床上主要用于治疗心血管疾 病、 妇科疾病等。 目前， 洋川芎内酯A的提取主要利用大孔吸附树脂法进行分离。 一般的逆流 色谱分离方法， 得到目标物洋川芎内酯A耗时长， 溶剂消耗大。 (三)发明内容 0005 本发明所要解决的技术问题就。
10、是提供一种快速分离洋川芎内酯A的方法， 本发明 利用环糊精与洋川芎内酯A的包结作用， 快速的将洋川芎内酯A从川芎挥发油中分离出来， 具有更强的目的性， 快捷高效。 0006 本发明的技术方案是： 0007 一种从川芎挥发油中分离洋川芎内酯A的方法， 所述方法为： 将甲基- -环糊精水 溶液与正己烷按体积比1： 0.52充分混合后静置、 分液， 分别得到上相和下相， 下相作为高 速逆流色谱的固定相,上相为流动相； 称取川芎挥发油， 用体积比1： 1的上相和下相溶解后 进样， 高速逆流色谱分离， 紫外检测器检测， 根据紫外检测器光谱图的峰形收集对应流出 液， 将含有洋川芎内酯A的流出液浓缩干燥， 。
11、制得洋川芎内酯A纯品。 0008 所述的甲基- -环糊精水溶液的浓度为0.05-0.2mol/L， 优选0.050.1mol/L。 0009 所述甲基- -环糊精水溶液与正己烷的体积比为1： 0.52， 优选1： 1。 0010 所述的高速逆流色谱的柱温为1530， 优选20。 0011 所述方法优选按以下操作： 将0.050.2mol/L的甲基- -环糊精水溶液与正己烷 按体积比1： 0.52充分混合后静置、 分液， 分别得到上相和下相， 下相作为高速逆流色谱的 固定相,上相为流动相； 先将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱， 设定高速逆流 色谱仪， 柱温1530(优选20)， 在50。
12、01000r/min转速(优选800r/min转速)下， 以 说明书 1/3 页 3 CN 105330632 B 3 0.55ml/min(优选2ml/min)的流速注入流动相， 以波长200-300nm(优选210280nm)的紫 外检测器检测， 当柱尾端明显有流动相流出时， 称取川芎挥发油， 用体积比1： 1的上相和下 相溶解后进样， 根据紫外检测器光谱图的峰形收集对应流出液， 将含有洋川芎内酯A的流出 液浓缩干燥， 制得洋川芎内酯A纯品。 0012 更进一步， 所述方法更优选按以下操作： 将0.050.1mol/L的甲基- -环糊精水溶 液与正己烷按体积比1： 1充分混合后静置、 分液。
13、， 分别得到上相和下相， 下相作为高速逆流 色谱的固定相,上相为流动相； 先将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱， 设定高 速逆流色谱仪， 柱温20， 在8001000r/min转速下， 以2ml/min的流速注入流动相， 以波长 210280nm(优选254nm)的紫外检测器检测， 当柱尾端明显有流动相流出时， 称取川芎挥发 油， 用体积比1： 1的上相和下相溶解后进样， 根据紫外检测器光谱图的峰形收集对应流出 液， 将含有洋川芎内酯A的流出液浓缩干燥， 制得洋川芎内酯A纯品。 0013 一般将100-1000mg的川芎挥发油用1020mL的体积比1： 1的上相和下相混合溶剂 溶解， 。
14、然后进样。 0014 与现有技术比较， 本发明具有的优势在于： 本发明操作简便， 高效快捷， 溶剂消耗 少； 甲基- -环糊精对洋川芎内酯A具有专属包结作用， 目的性强， 分离效果优秀。 (四)附图说明 0015 图1实施例1的高速逆流色谱(HSCCC)图。 0016 图2实施例2的高速逆流色谱(HSCCC)图。 0017 图3实施例3的高速逆流色谱(HSCCC)图。 0018 图4实施例1制备的洋川芎内酯A的GC-MS的液相图谱。 0019 图5实施例1制备的洋川芎内酯A的GC-MS的质谱图。 0020 图1图3中， 2号峰代表洋川芎内酯A。 (五)具体实施方式 0021 下面以具体实施例来。
15、对本发明的技术方案作进一步说明， 但本发明的保护范围不 限于此。 下述实施例中， 采用的高速逆流色谱型号为： HSCCC-TBE 200V 0022 实施例1： 0023 配制0.1mol/L甲基- -环糊精水溶液与正己烷按体积比1： 1在分液漏斗中混合， 充 分振荡， 静止， 临用前分层， 下相选为固定相,上相选为流动相； 柱温设定为20， 先用恒流 泵将溶剂体系的下相打入HSCCC的聚四氟乙烯螺旋管， 直至注满整个管子， 然后开启HSCCC， 转速为803.6prm， 同时将流动相以2.0ml/min流速从柱的首端泵入HSCCC分离柱； 等到柱尾 端流出流动相时， 表明HSCCC中两相已达。
16、到平衡， 通过六通阀将样品注入HSCCC(522mg川芎 挥发油样品溶解于18ml等体积混合的上下相溶剂中)； 以波长254nm的紫外检测器检测流出 液， 根据紫外检测器光谱图， 见图1， 图1中2号峰代表洋川芎内酯A， 自动收集洗脱液， 将2号 峰的洗脱液的溶剂挥干， 得洋川芎内酯A 37mg。 所得洋川芎内酯A产品的GC-MS图见图4和图 5， 图4为液相色谱图， 图5为质谱图。 0024 实施例2： 0025 配制0.1mol/L甲基- -环糊精水溶液与正己烷按体积比1： 1在分液漏斗中混合， 充 说明书 2/3 页 4 CN 105330632 B 4 分振荡， 静止， 临用前分层， 。
17、下相选为固定相,上相选为流动相； 柱温设定为20， 先用恒流 泵将溶剂体系的下相打入HSCCC的聚四氟乙烯螺旋管， 直至注满整个管子， 然后开启HSCCC， 转速为800.6prm， 同时将流动相以2.0ml/min流速从柱的首端泵入HSCCC分离柱； 等到柱尾 端流出流动相时， 表明HSCCC中两相已达到平衡， 通过六通阀将样品注入HSCCC(232mg川芎 挥发油样品溶解于18ml等体积混合的上下相溶剂中)； 以波长254nm的紫外检测器检测流出 液， 根据紫外检测器光谱图， 见图2， 图2中2号峰代表洋川芎内酯A， 自动收集洗脱液， 将2号 峰的洗脱液的溶剂挥干， 得洋川芎内酯A晶体17。
18、mg。 0026 实施例3： 0027 配制0.05mol/L甲基- -环糊精水溶液与正己烷按体积比1： 1在分液漏斗中混合， 充分振荡， 静止， 临用前分层， 下相选为固定相,上相选为流动相； 柱温设定为20， 先用恒 流泵将溶剂体系的下相打入HSCCC的聚四氟乙烯螺旋管， 直至注满整个管子， 然后开启 HSCCC， 转速为800.6prm， 同时将流动相以2.0ml/min流速从柱的首端泵入HSCCC分离柱； 等 到柱尾端流出流动相时， 表明HSCCC中两相已达到平衡， 通过六通阀将样品注入HSCCC (230mg川芎挥发油样品溶解于18ml等体积混合的上下相溶剂中)； 以波长254nm的紫外检测 器检测流出液， 根据紫外检测器光谱图， 见图3， 图3中2号峰代表洋川芎内酯A， 自动收集洗 脱液， 将对应峰的洗脱液的溶剂挥干， 得洋川芎内酯A 12mg。 说明书 3/3 页 5 CN 105330632 B 5 图1 图2 说明书附图 1/3 页 6 CN 105330632 B 6 图3 图4 说明书附图 2/3 页 7 CN 105330632 B 7 图5 说明书附图 3/3 页 8 CN 105330632 B 8 。