二氢吲哚类衍生物及其在药物中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810747102.8 (22)申请日 2018.07.09 (71)申请人 湖南博隽生物医药有限公司 地址 410205 湖南省长沙市高新开发区麓 松路459号东方红小区延农综合楼7楼 463 (72)发明人 万迎春朱水寿邓生卫 (51)Int.Cl. C07D 209/08(2006.01) (54)发明名称 二氢吲哚类衍生物及其在药物中的应用 (57)摘要 本发明公开了一类二氢吲哚类衍生物， 其具 有以下通式()的化合物或其药学上可接受的等 价物， 其中， n为0-6。

2、的整数； R1为氢、 卤素、 硝基、 氰基、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代 C1-6烷基、 卤代C1-6烷氧基或C3-6环烷基、 任意取代 的苯基、 任意取代的萘基、 任意取代的C5-7环二烯 基或任意取代的单或稠环杂环基； R2为氢、 卤素、 硝基、 氰基、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代C1-6烷氧基或C3-6环烷基。 该类 化合物可应用于制备治疗中枢神经系统疾病或 自身免疫性疾病。 权利要求书2页 说明书9页 CN 108863893 A 2018.11.23 CN 108863893 A 1.具有以下通式( 。

3、)的化合物或其药学上可接受的等价物： 其中， n为0-6的整数； R1为氢、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代C1-6烷氧基、 C3-6环烷基、 任意取代的苯基、 任意取代的萘基或任意取代的单或稠环杂环基； R2为氢、 卤素、 硝基、 氰基、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代C1-6烷 氧基、 C3-6环烷基、 任意取代的苯基、 任意取代的萘基或任意取代的单或稠环杂环基。 2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的等价物， 其中， n为0-4的整数； R1为氢、 卤素、 C1-6烷基、 C1-6烷。

4、氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代C1-6烷氧基、 C3-6环 烷基、 任意取代的苯基、 任意取代的萘基或任意取代的单或稠环杂环基； R2为氢、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代C1-6烷氧基、 C3-6环烷基或 任意取代的苯基。 3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的等价物， 其中， n为0-2的整数； R1为氢、 卤素、 C1-3烷基、 C1-3烷氧基、 C1-3烷基氨基、 C3-6环烷基或单取代的苯基； R2为氢、 C1-3烷基、 卤代C1-3烷基、 C3-6环烷基或单取代的苯基。 4.根据权利要求1-3中任一项所。

5、述的化合物或其药学上可接受的等价物， 其中化合物 选自： 5.一种药物组合物， 其含有药物有效剂量的如权利要求1-4中任何一项所述的化合物 或其药学上可接受的等价物， 和药学上可接受的载体或稀释剂。 6.权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的等价物在制备针对哺乳动 权利要求书 1/2 页 2 CN 108863893 A 2 物特别是人的中枢神经系统疾病或自身免疫性疾病药物方面的用途。 7.根据权利要求6所述的用途， 其中权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可 接受的等价物在制备治疗对离子通道离子流增加敏感的疾病， 特别是在制备治疗中枢神经 系统疾病药物方面的应用。 8.。

6、根据权利要求7所述的用途， 其中所述疾病选自癫痫、 偏头痛、 神经变性疾病、 脑卒 中、 可卡因滥用、 尼古丁戒断、 酒精戒断或耳鸣。 9.根据权利要求6所述的用途， 其中权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可 接受的等价物， 能与其联合使用的药物至少包括： 卡马西平、 丙戊酸钠、 苯巴比妥、 苯妥英 钠、 非氨酯、 加巴喷丁、 拉莫三嗪、 托吡酯、 乙琥胺、 替加滨、 奥卡西平、 氯硝西泮、 左乙拉西 坦、 氨己烯酸、 唑尼沙胺。 10.根据权利要求6所述的用途， 其中权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上 可接受的等价物， 使用剂量在0.001200mg/kg范围内。 权利要。

7、求书 2/2 页 3 CN 108863893 A 3 二氢吲哚类衍生物及其在药物中的应用 技术领域 0001 本发明领域属于药物合成领域， 具体涉及一类新型的二氢吲哚类衍生物及其在药 物中的应用。 背景技术 0002 中枢神经系统疾病的治疗一直是医学领域的难题。 传统药物无法防治急慢性中枢 神经系统损伤、 阿尔采末病、 帕金森病、 癫痫等中枢神经系统疾病。 而自身免疫性疾病是机 体免疫系统对自身组织细胞发生免疫应答而造成细胞的破坏或组织的损伤所造成的。 自身 免疫反应导致中枢神经系统(脑和脊髓)损害为主的一组疾病， 被称为中枢神经系统自身免 疫性疾病。 目前发现的自身免疫性疾病有30多种， 。

8、大多数为原发性， 少数为继发性。 中枢神 经系统疾病和自身免疫性疾病的发病机制十分复杂， 其发病机制尚未完全阐明。 医学界一 直在致力于寻找治疗中枢神经系统疾病和自身免疫性疾病的新药。 0003 细胞所处的化学环境跟细胞膜上的离子通道息息相关， 离子通道是调节神经元兴 奋性的关键， 因此离子通道成为治疗中枢神经系统疾病的最直接的靶点。 已知大约超过 10的钾离子通道亚型与人类的中枢神经系统疾病和自身免疫性疾病相关， 体现在许多不 同方面， 例如从直接控制神经元兴奋性和离子环境的体内平衡到通过代谢的间接作用。 0004 钾离子通道的结构由四条蛋白质次单位聚集而成， 产生一个四折叠的对称复合 物，。

9、 其中心有一个离子引导孔洞的开合。 四个相似的蛋白 质次单位聚集产生一个 heterotetrametic复合物。 钾离子通道的次单位在孔洞的顶端都绕成一个明显的孔洞结 构， 用来负责钾离子的选择性通透。 有超过80个哺乳动物基因用来制钾离子通道的次单位。 细菌中， 钾离子通道在分子结构中是最被人类所了解的离子通道。 利用X光晶体衍射可以了 解钾离子如何经钾离子通道通过细胞膜， 以及为何钠离子无法通过。 因为钠离子有较强电 荷密度， 因此周围被水分子围绕而变得较巨大， 导致其无法通过。 2003年诺贝尔化学奖颁给 在这个领域的先锋Rod MacKinnon。 0005 KCNQ钾通道为钾离子通。

10、道超家族的重要分支， 目前共发现KCNQ15五种类型， 其 基因突变与许多遗传性疾病有关(Jentsch,Nature Reviews Neuroscience,2000,1,21- 30)。 其中， KCNQ1(KvLQT)主要分布于心肌， 50的遗传性LQT综合征与KCNQ1突变有关。 KCNQ2-5主要分布于中枢神经系统、 内耳(KCNQ4)和肌肉组织(KCNQ5)。 KCNQ2和KCNQ3是构成 神经细胞M型钾离子通道的分子基础， 良性家族性新生儿惊厥症(BFNC)与KCNQ2、 KCNQ3基因 突变后引起的M电流下调有关。 KCNQ4多表达于与听觉有关的神经传导通路、 神经核团及内 。

11、耳毛细胞， 遗传性耳聋症(DFNA)与KCNQ4基因突变有关。 0006 瑞替加滨化学结构为N-2-氨基-4-(4-氟苯甲基)-氨基甲酸乙酯， 对顽固性癫痫的 部分性发作具有显著效果， 于2011年6月被美国FDA批准上市， 作为辅助用药治疗成人癫痫 部分性发作。 瑞替加滨对KCNQ钾通道具有开放作用， 能够有效激活M型钾电流， 降低神经元 的兴奋性， 具有广谱和有效的抗惊厥作用， 在遗传性癫痫和不同的点燃模型中均有效， 对最 大电惊厥(MES)、 由戊四唑(PTZ)、 N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、 印防己毒素、 红藻氨酸盐、 青 说明书 1/9 页 4 CN 108863893 A 。

12、4 霉素、 钾盐镁矾、 音原性刺激诱发的啮齿类动物的发作均表现出抗惊厥活性(Luszczki J.J.Pharmacol Rep,2009,61,197-216)。 瑞替加滨的成功上市和体内体外的优异表现证明 KCNQ钾通道作为药物靶点具有重要意义。 KCNQ钾通道开放剂成为抗癫痫药物研究的新方 向， 同时， 由于KCNQ钾通道生理功能广泛， 其开放剂在众多疾病的治疗领域也具有十分广阔 的应用前景。 0007 0008 作为首个上市的KCNQ钾通道开放剂， 瑞替加滨(Retigabine)对难治性癫痫很有效 果， 但据临床治疗后反应有眩晕、 恶心、 嗜睡、 共济失调、 尿潴留等副作用， 并且口。

13、服生物利 用度约60。 此外， 瑞替加滨(Retigabine)还可导致视网膜色素变化， 目前并不了解这些视 网膜色素变化是否可逆。 同时药品价格高昂， 难以满足国内庞大的医疗需求。 为了解决上述 问题， 提高难治性癫痫的效果和口服生物利用度， 并降低临场的负作用和制备成本， 有必要 研制一类新型的二氢吲哚类衍生物或其药学上可接受的等价物。 发明内容 0009 为了解决上述问题， 本发明的目的是提供一类二氢吲哚类衍生物或其药学上可接 受的等价物。 0010 本发明的另一目的在于提供该类二氢吲哚类衍生物或其药学上可接受的等价物 单独使用或和其他药物联合使用在治疗中枢神经系统疾病或自身免疫性疾病药。

14、物方面的 应用。 0011 本发明的目的可以通过以下措施达到： 0012 一类具有以下通式( )的化合物或其药学上可接受的等价物： 0013 0014 其中， 0015 n为0-6的整数； 0016 R1为氢、 卤素、 硝基、 氰基、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代 C1-6烷氧基、 C3-6环烷基、 任意取代的苯基、 任意取代的萘基或任意取代的单或稠环杂环基； 0017 R2为氢、 卤素、 硝基、 氰基、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代 C1-6烷氧基、 C3-6环烷基、 任意取代的苯基、 任意取。

15、代的萘基或任意取代的单或稠环杂环基。 0018 在本发明中， 一种优选方案为： 0019 n优选为0-4的整数， 进一步优选为0-2的整数； 说明书 2/9 页 5 CN 108863893 A 5 0020 R1优选为氢、 卤素、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨基、 卤代C1-6烷基、 卤代C1-6烷氧 基、 C3-6环烷基、 任意取代的苯基、 任意取代的萘基或任意取代的单或稠环杂环基， 进一步优 选为氢、 卤素、 C1-3烷基、 C1-3烷氧基、 C1-3烷基氨基、 C3-6环烷基或单取代的苯基； 0021 R2优选为氢、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 C1-6烷基氨。

16、基、 卤代C1-6烷基、 卤代C1-6烷氧基、 C3-6环烷基或任意取代的苯基， 进一步优选为氢、 C1-3烷基、 卤代C1-3烷基、 C3-6环烷基或单取 代的苯基。 0022 本发明提供下述优选的通式( )的化合物， 具体为： 0023 0024 “卤素” 表示氟、 氯、 溴或碘。 0025 “C1-6烷基” 表示具有1-6个碳原子的支链或直连烷基， 包括但不限于甲基、 乙基、 丙-1-基、 丙-2-基、 2-甲基-丙-1-基、 2-甲基-丙-2-基、 2,2-二甲基-丙-1-基、 丁-1-基、 丁- 2-基、 3-甲基-丁-1-基、 3-甲基-丁-2-基、 戊-1-基、 戊-2-基、 戊。

17、-3-基、 己-1-基、 己-2-基、 己-3-基。 0026 “C1-3烷基” 表示具有1-3个碳原子的支链或直连烷基， 包括但不限于甲基、 乙基、 丙-1-基、 丙-2-基。 0027 “卤代C1-6烷基” 表示被一个或多个卤素原子取代的C1-6烷基， 包括但不限于三氟甲 基和3,3,3-三氟-1-丙基。 0028 “C3-6环烷基” 表示具有3-6个碳原子的单环烷基， 并且该环不具有完全连接的 电 子系统， 包括但不限于环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环戊烯基、 环己烯基。 0029 “C1-6烷氧基” 表示-O-(未取代的C1-6烷基)和-O-(未取代的C3-6环烷基)， 包括。

18、但不 限于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 丁氧基、 环丙氧基、 环丁氧基、 环戊氧基、 环己氧基。 0030 “卤代C1-6烷氧基” 表示被一个或多个卤素原子取代的C1-6烷氧基， 包括但不限于三 氟甲氧基和3,3,3-三氟-1-丙氧基。 0031 “C1-6烷基氨基” 表示-NH-(未取代的C1-6烷基)和-NH-(未取代的C3-6环烷基)， 包括 但不限于甲基氨基、 乙基氨基、 丙基氨基、 丁基氨基、 环丙基氨基、 环丁基氨基、 环戊基氨基、 环己基氨基。 0032 “任意取代的单或稠环杂环基” 表示杂环具有芳香性， 含有5至12个环原子并且在 说明书 3/9 页 6 CN 10886389。

19、3 A 6 该环或每一环中含有至多四个选自S、 O和N的杂原子。 0033 “任意取代的苯基” 表示苯环上的取代基可以有一个或多个， 包括所组成的空间上 的相对关系。 0034 “药学上可接受的等价物” 包括但不限于药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物、 代 谢物、 前药。 许多药学上可接受的等价物具有与本发明化合物相同或相似的体外或体内活 性。 0035 “药学上可接受的盐” 指的是本发明化合物的酸式盐或碱式盐， 所述盐具有所期望 的药学活性并且在生物学上和在其它方面均没有不合要求之处。 酸式盐包括无机酸盐和有 机酸盐。 无机酸包括但不限于盐酸、 硫酸、 磷酸、 甲磺酸、 醋酸， 有机酸包。

20、括但不限于乙酸、 对 甲苯磺酸、 三氯乙酸、 丙酸、 丁酸、 苹果酸、 樟脑酸、 二葡糖酸、 天冬氨酸、 丙二酸、 肉桂酸、 马 来酸、 柠檬酸、 富马酸、 酒石酸。 0036 “前药” 指的是本发明化合物的衍生物， 其在表现其药理学效用之前经过生物转 化， 如代谢。 前药由改善化学稳定性、 改善患者接受和依从度、 改善生物利用度、 延长作用时 间、 改善器官选择性、 改善制剂(如增强水溶性)， 和/或减少副作用(如毒性)的物质配制而 成。 0037 本发明还提供一种药物组合物， 它以本发明上述保护的任意一种化合物或其药学 上可接受的等价物为活性成分， 同时含有一种或多种药学上可以接受的载体或。

21、稀释剂。 0038 本发明所指 “药学上可以接受的载体或稀释剂” 选自药物制剂中常用的赋形剂、 辅 料或溶剂， 包括但不限于乳糖、 蔗糖、 滑石粉、 树胶、 脂肪酸胺、 脂肪酸、 单硬脂酸甘油或二硬 脂酸甘油脂果胶、 琼脂、 阿拉伯树胶、 明胶、 硬脂酸镁、 硬脂酸、 磷脂、 橄榄油、 花生油、 糖浆、 纤维素的低级烷基醚、 玉米淀粉、 马铃薯淀粉、 着色剂、 矫味剂、 防腐剂、 水、 乙醇、 丙醇、 生理 盐水、 葡萄糖溶液。 0039 本发明化合物的使用剂量以实际效果为准， 其一般在0.001200mg/kg范围内。 0040 本发明还提供上述各化合物或其药学上可接受的等价物在制备增加哺乳。

22、动物如 人的钾通道中离子流量药物方面的用途， 特别是在制备KCNQ钾通道开放剂中的应用， 尤其 是在制备治疗对钾通道离子流增加敏感的疾病， 更特别地是在制备治疗中枢神经系统疾病 药物方面。 所述的 “中枢神经系统疾病” 包括但不限于癫痫、 疼痛、 偏头痛、 神经变性疾病、 脑 卒中、 可卡因滥用、 尼古丁戒断、 酒精戒断或耳鸣。 0041 换言之， 本发明提供二氢吲哚类衍生物或其药学上的等价物单独使用或与其他药 物联用在治疗中枢神经系统疾病中的应用。 能与本发明所述化合物或其药学上可接受的等 价物联合使用的药物包括但不限于至少一种： 卡马西平、 丙戊酸钠、 苯巴比妥、 苯妥英钠、 非 氨酯、 。

23、加巴喷丁、 拉莫三嗪、 托吡酯、 乙琥胺、 替加滨、 奥卡西平、 氯硝西泮、 左乙拉西坦、 氨己 烯酸、 唑尼沙胺。 0042 本发明中所述化合物或其药学上可接受的盐可以通过电生理实验、 原子吸收Rb+ 流出高通量测定实验等方法检测其药理活性。 0043 电生理膜片钳技术是离子通道功能学研究最重要的技术。 电生理膜片钳技术使用 微玻管电极接触细胞膜， 以千兆欧姆以上的阻抗使之对接， 使与电极尖开口处相接的细胞 膜小片区域(膜片)与其周围在电学上分隔， 在此基础上固定电位， 对此膜片上的离子通道 的离子电流进行检测记录。 运用膜片钳技术对KCNQ钾通道调节剂进行功能学验证。 说明书 4/9 页 。

24、7 CN 108863893 A 7 0044 原子吸收Rb+流出测定技术在钾离子通道调节剂的高通量筛选中可以更加快速、 可靠， 并且具有直接反映离子通道活性及调节剂调节作用的特点。 Rb+与K+有相近的原子大 小， 而且钾离子通道对于Rb+具有通透性， 可以通过检测Rb+流出的浓度来测定钾离子通道的 开放或关闭。 另外， Rb+在780nm有特异的原子吸收， 可以通过原子吸收的方法检测Rb+浓度。 故可以采用原子吸收光谱测定法通过测定Rb+流出的高通量测定技术用于筛选钾离子通道 的开放剂或阻断剂。 具体实施方式 0045 为了更详细说明本发明， 给出下述制备实例， 但本发明的范围并非限定于此。

25、。 0046 实施例一 0047 N-(1-(4-氟苯基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺的制备 0048 0049 (1)1-(4-氟苄基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚 0050 将5-甲基-6-硝基二氢吲哚(340mg)与对氟苄溴(260mg)溶于二氯甲烷中， 加入碳 酸钾(2.8g)后于室温条件下反应3h。 反应结束加入50mL乙酸乙酯稀释， 水洗， 有机相用无水 硫酸镁干燥。 过滤除去固体不溶物， 滤液减压浓缩后得产物(560mg,94产率)。 MS:309.34 M+Na+。 0051 (2)1-(4-氟苄基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚 0052 将1-(4-氟。

26、苄基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚(1 .73mmol)和保险粉(3 .00g , 17.3mmol)溶于甲醇(26mL)和水(2.6mL)的混合溶剂中。 封管加热到90反应4小时。 冷却至 室温， 过滤， 滤液浓缩得产物1-(4-氟苄基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚， 粗产品直接投入下一 步反应。 0053 (3)N-(1-(4-氟苄基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺 0054 向1-(4-氟苄基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚(1.73mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中 加入碳酸钾(720mg,3eq)和叔丁基乙酰氯(0.24mL,1.0eq)， 在室温下反应4小时。

27、。 加入水淬 灭反应， 乙酸乙酯萃取(330mL)， 合并有机相， 用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 旋干柱层析得到产物(280mg,收率45)。 0055 MS:355.46M+H+。 1H NMR(400MHz,CDCl3) :7.42(m,2H)7.11-7.02(m,4H),4.92 (s,2H),3.65(m,2H),2.91(m,2H),2.15(s,2H),2.02(s,3H)1.07(s,9H)。 13C-NMR(CDCl3, 100MHz) :170.42,151.26,150.16,136.20,129.17,126.65,120.06,116.36,116.1。

28、2, 50.50,49.53,49.43,31.08,29.99,19.25. 0056 实施例二 0057 N-(1-(4-氟苯乙基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺的制备 说明书 5/9 页 8 CN 108863893 A 8 0058 0059 (1)1-(4-氟苯乙基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚 0060 将5-甲基-6-硝基二氢吲哚(340mg)与1-(2-溴乙基)-4-氟苯(275mg)溶于二氯甲 烷中， 加入碳酸钾(2.8g)后于室温条件下反应3h。 反应结束加入50mL乙酸乙酯稀释， 水洗， 有机相用无水硫酸镁干燥。 过滤除去固体不溶物， 滤液减压浓缩后。

29、得产物(380mg,67产 率)。 MS:323.30M+Na+。 0061 (2)1-(4-氟苯乙基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚 0062 将1-(4-氟苯乙基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚(1.90mmol)和保险粉(3.20g)溶于甲 醇(30mL)和水(3mL)的混合溶剂中。 封管加热到90反应4小时。 冷却至室温， 过滤， 滤液浓 缩得产物1-(4-氟苯乙基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚， 粗产品直接投入下一步反应。 0063 (3)N-(1-(4-氟苯乙基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺 0064 向1-(4-氟苯乙基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚(1.65。

30、mmol)的四氢呋喃(13mL)溶液 中加入碳酸钾(700mg)和叔丁基乙酰氯(0.21mL)， 在室温下反应4小时。 加入水淬灭反应， 乙 酸乙酯萃取(330mL)， 合并有机相， 用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 旋干柱层 析得到产物(275mg,收率49)。 0065 MS:369.56M+H+。 1H NMR(DMSO-d6,400MHz) :7.44(m,2H)7.14-7.05(m,4H),4.98 (s,2H),3.78(m,2H),3.57(m,2H),2.84(m,2H),2.16(s,2H),2.03(s,3H)1.08(s,9H)。 13C- NMR(DMSO。

31、-d6,100MHz) :170.12,149.63,135.86,127.38,115.44,62.25,50.19,49.13, 30.99,30.30,27.78,26.48,25.00,19.28. 0066 实施例三 0067 N-(1-(3-氟苄基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺的制备 0068 0069 (1)1-(3-氟苄基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚 0070 本品由5-甲基-6-硝基二氢吲哚与3-氟苄溴， 按照实施例一中1-(4-氟苯基)-5-甲 基-6-硝基二氢吲哚的制备方法合成， 粗产品直接投入下一步反应。 0071 (2)1-(3-氟苄基)-5。

32、-甲基-6-胺基二氢吲哚 0072 本品由1-(3-氟苄基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚和保险粉， 按照实施例一中1-(4- 氟苄基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚的制备方法合成， 粗产品直接投入下一步反应。 说明书 6/9 页 9 CN 108863893 A 9 0073 (3)N-(1-(3-氟苄基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺 0074 本品由1-(3-氟苄基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚和叔丁基乙酰氯， 按照实施例一中 N-(1-(4-氟苄基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺的制备方法合成， 产率 32。 0075 MS:355.42M+H+。

33、。 1H NMR(400MHz,CDCl3) :7.39(m,1H)7.13-7.00(m,4H),6.87 (s,1H),4.84(s,2H),3.68(m,2H),2.89(m,2H),2.15(s,2H),2.05(s,3H)1.04(s,9H)。 13C- NMR(100MHz,CDCl3) :172.53,150.21,135.87,126.82,116.09,66.47,62.03,49.64, 49.20,48.96,30.45,29.06,27.63,17.83. 0076 实施例四 0077 N-(1-(3-氟苯基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺的制备 。

34、0078 0079 (1)1-(3-氟苯基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚 0080 称取324.6mg(0.354mmol)三(二亚苄基丙酮)二钯， 307.4mg(0.645mmol)2-二环己 基磷-2,4,6-三异丙基联苯， 量取40mL甲苯， 共同加入100mL单口瓶中， 常温搅拌15min， 然后 加入548mg(3.36mmol)5-甲基-6-硝基二氢吲哚， 1000mg(3.35mmol)1-碘-3-氟基苯， 815mg (7.26mmol)叔丁醇钾， N2置换三次， 加热， 设置外温温度120， 反应12h后关闭加热， 自然降 至室温， 抽滤， 旋蒸。 采用流动相石油醚： 乙酸。

35、乙酯3:1(v/v)过硅胶柱， 收集相应组分得淡 黄色固体， 然后加入5mL乙酸乙酯， 在外温温度70条件下重结晶， 抽滤， 置60真空干燥箱 中干燥得白色固体122mg。 0081 (2)1-(3-氟苯基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚 0082 本品由1-(3-氟苯基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚和保险粉， 按照实施例一中1-(4- 氟苄基)-5-甲基-6-胺基二氢吲哚的制备方法合成， 粗产品直接投入下一步反应。 0083 (3)N-(1-(3-氟苯基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺 0084 本品由1-(3-氟苯基)-5-甲基-6-硝基二氢吲哚和叔丁基乙酰氯， 按照实。

36、施例一中 N-(1-(4-氟苄基)-5-甲基二氢吲哚-6-基)-3,3-二甲基叔丁酰胺的制备方法合成， 产率 32。 0085 MS:341.6M+H+. 1H NMR(400MHz,CDCl3) :7.28(m,2H)7.13-7.00(m,3H),6.74(s, 1H) ,4.21(t,2H) ,2.91(m,2H) ,2.09(s,2H) ,2.15(s,3H) ,1.02(s,9H)； 13C-NMR(CDCl3, 100MHz) :173.0,163.8,150.7,139.8,131.2,130.7,128.8,123.7,135.4,110.6,110.0, 107.6,114.。

37、7,54.2,53.7,31.6,28.8,28.0,17.6. 0086 本发明所有化合物在以下至少一个实验中显示出具有生理及药理活性作用。 以下 实施例仅用于详述本发明的活性， 并非是对未明示的本发明化合物的限定。 0087 实验例一原子吸收Rb+流出高通量测定 说明书 7/9 页 10 CN 108863893 A 10 0088 (1)测试方法： 将处于对数生长期的稳转KCNQ2/Q3通道的CHO细胞以2104个/孔 的密度接种于96孔培养板。 每个浓度设三复孔， 并设相应浓度的溶媒对照孔。 贴壁生长过夜 后， 弃培养液， 加入200 L含RbCl的装载缓冲液， 在37、 5CO2条件。

38、下培养3小时。 然后弃去 装载缓冲液， 用洗涤缓冲液洗涤3遍。 若筛选通道开放剂， 在去极化缓冲液中稀释待测化合 物， 并将200 L上述溶液加入细胞中， 反应10分钟。 孵育10分钟后， 小心吸取200 L上清到另 一块96孔板中， 用ICR8000自动高通量原子吸收测定仪测定780nm处的Rb+原子吸收， 计算相 对流出量。 0089 (2)测定结果： 详见表1， 其中EC50越小， 表示相应化合物的活性越高。 0090 实验例二电生理膜片钳测定 0091 (1)测试方法： CHO细胞瞬时转染KCNQ2通道， 在室温条件记录电流。 记录期间， 细胞 用细胞外液(140mMNaCl,5mM 。

39、KCl,2mM CaCl2,1.5mM MgCl2,10mM HEPES and 10mM Glucose,pH 7.4)灌流。 电极(阻抗3-5兆欧)用高硼硅玻璃吸管拉制(Sutter instrument BF150-86-10)， 并充满细胞內液(145mM， KCl,1mM MgCl2,5EGTA,10mM HEPES and 5mM Mg2+- ATP,pH 7.3)。 数据用Axopatch 200B放大器(Molecular Device)采集， 信号经过频率1kHz 过滤并用软件pClamp10交互界面DigiData 1440AD频率10kHz采样。 系列阻抗经过60-80 的代偿。 在-80mV钳制细胞， 每10mV为一步长， 电压从-80mV升到+50mV刺激2秒， 记录信号。 化 合物对KCNQ2通道的作用包括整体电导增加和V1/2(半数最大激活电压)左移。 通过标准的指 数方程获得电压激活曲线(G-V曲线)， 并计算V1/2。 0092 (2)测定结果： 详见表1， 其中I/I0越大， 表示相应化合物的活性越高。 0093 表1本发明所述的部分化合物以及Rb+流出测试和 0094 电生理膜片钳测定结果 说明书 8/9 页 11 CN 108863893 A 11 0095 0096 说明书 9/9 页 12 CN 108863893 A 12 。