用作法呢基蛋白转移酶抑制剂的 取代的苯并芳庚并吡啶衍生物 背景
WO95/10516(1995年4月20日公开)公开用于抑制法呢基蛋白转移酶的三环化合物。
鉴于法呢基蛋白转移酶抑制剂的现实重要性，对本领域的一个宝贵的贡献将是用作法呢基蛋白转移酶抑制剂的一些化合物。本发明即提供了此种贡献。
本发明概述
本发明提供用于抑制法呢基蛋白转移酶(FPT)的化合物。本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以用下式代表：其中：a、b、c和d之一代表N或NR9，其中R9为O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n是1-3，而其余的a、b、c和d基团代表CR1或CR2；或a、b、c和d各自独立选自CR1或CR2；每个R1和每个R2独立选自H、卤代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t是0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R75)2其中每个R75独立选自H和-C(O)OR11(如-S(CH2)2NHC(O)O-叔丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫代或取代的四唑-5-基硫代(如烷基取代的四唑-5-基硫代，像1-甲基-四唑-5-基硫代)、链炔基、链烯基或烷基，所述烷基或链烯基任选被卤代、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4是相同的或不同的，且各自独立代表H、R1和R2的任何一个取代基或者R3和R4一起代表与苯环(环Ⅲ)稠合的饱和或不饱和C5-C7环；R5、R6、R7和R8各自独立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任选被下列基团取代：-OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、-OPO3R10，或R5与R6结合代表=O或=S，和/或R7与R8结合代表=O或=S；R10代表H、烷基、芳基或芳烷基(如苄基)；R11代表烷基或芳基；X代表N、CH或C，其中C可含有任选与碳原子11的双键(由虚线表示)；碳原子5和6之间的虚线表示任选地双键，如此当存在双键时，A和B独立代表-R10、卤代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，当碳原子5和6之间无双键存在时，A和B各自独立代表H2、-(OR11)2、H和卤代、二卤代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、=O、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)P-O-，其中P是2、3或4；和W代表选自-SO2R12或-P(O)R13R14的基团；R12选自：(1)烷基，如甲基、乙基和丙基(像正丙基和异丙基)；(2)芳烷基，如苄基；(3)环烷基；(4)芳基，如苯基；(5)杂芳基，如吡啶基、噻吩基和咪唑基(像4-或5-咪唑基)；(6)取代的杂芳基，其中所述杂芳基与上述定义相同，所述取代基选自：(a)杂芳基(如吡啶基和咪唑基)，(b)烷基(如甲基)，(c)芳基(如苯基)，(d)芳烷基(如苄基)，(e)-OR10，和(f)N(R10)2；(7)樟脑，如 或 ；和(8)-NR15R16，其中R15和R16独立选自：(a)H,(b)烷基(如甲基)，(c)芳基(如苯基)，(d)芳烷基(如苄基)，(e)杂芳基(如吡啶基)，和(f)杂环烷基(如哌啶基)，并优选R15和R16相同；且R13和R14独立选自：(1)H；(2)烷基，如甲基；(3)芳基，如苯基；(4)芳烷基，如苄基；和(5)OR13，其中R13与上述定义相同；优选R13和R14相同。
本发明的化合物：(ⅰ)在体外有效抑制法呢基蛋白转移酶，但不抑制香叶基香叶基蛋白转移酶I；(ⅱ)阻断为法呢基受体的转化Ras形式诱导的表型改变，但不阻断改造的为香叶基香叶基受体的转化Ras形式诱导的表型改变；(ⅲ)阻断为法呢基受体的细胞内Ras加工，但不阻断改造的为香叶基香叶基受体的细胞内Ras加工；及(ⅳ)阻断由转化Ras诱导的在培养物中的细胞异常生长。
本发明的化合物可以抑制法呢基蛋白转移酶并因此抑制癌基因蛋白Ras的法呢基化。因此，本发明进一步提供通过给予有效量的上述的三环类化合物从而抑制哺乳动物(特别是人)ras法呢基蛋白转移酶(如ras法呢基蛋白转移酶)的方法。给予病人本发明的抑制法呢基蛋白转移酶的化合物可以用于治疗下述的癌症。
本发明提供通过给予有效量的本发明化合物抑制或治疗细胞(包括转化的细胞)异常生长的方法。细胞的异常生长指不依赖于正常调节机制(如接触抑制的丧失)的细胞生长。这包括下列的异常生长：(1)表达激活的Ras癌基因的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)其中Ras蛋白因为另一种基因的致癌突变而被激活的肿瘤细胞；及(3)其中出现异常的Ras激活的其它增生性疾病的良性和恶性细胞。
本发明也提供通过给予需要此治疗的哺乳动物(如人)有效量的三环化合物抑制或治疗肿瘤生长的方法。具体地讲，本发明提供通过给予有效量的上述化合物来抑制或治疗表达激活的Ras癌基因的肿瘤生长的方法。可被抑制或治疗的肿瘤的例子包括(但不限于)肺癌(如肺腺癌)、胰癌(如胰腺癌像外分泌性的胰腺癌)、结肠癌(如结肠直肠癌像结肠腺癌和结肠腺瘤)、骨髓性白血病(如急性骨髓性白血病(AML)、甲状腺滤泡癌、脊髓发育不良综合征(MDS)、膀胱癌、表皮癌、乳腺癌和前列腺癌。
相信本发明也提供通过给予需要此治疗的哺乳动物(如人)本文所述的有效量的三环化合物抑制或治疗某些良性和恶性增生性疾病的方法，在这些增生性疾病中，Ras蛋白因为其它基因的致癌突变而被异常激活，即所述Ras基因本身不被突变所激活为致癌基因形式。例如，通过本文所述的三环化合物可以抑制或治疗良性增生性紊乱神经纤维瘤病或其中Ras因酪氨酸激酶癌基因(如neu、src、abl、lck和fyn)突变或过量表达而被激活的肿瘤。
本发明方法中使用的三环化合物可以抑制或治疗细胞的异常生长。不希望受到理论的束缚，相信这些化合物可以通过阻断G-蛋白异戊二烯化而抑制G-蛋白(如ras p21)的功能而起作用，从而使它们用于治疗增生性疾病如肿瘤生长和癌症。不希望受到理论的束缚，相信这些化合物可以抑制ras法呢基蛋白转移酶，从而显示针对ras转化细胞的抗增生活性。
本发明详述
如在此所用，除特别指明外，下列术语定义为：
MH+-代表质谱中分子的分子离子加氢；
苯并三唑-1-基氧基代表1-甲基-四唑-5-基硫代代表
链烯基-代表具有至少一个碳-碳双键且含有2-12个碳原子(优选2-6个碳原子，并最优选3-6个碳原子)的直链和支链碳链；
链炔基-代表具有至少一个碳-碳三键且含有2-12个碳原子(优选2-6个碳原子)的直链和支链碳链；
烷基-(包括烷氧基、芳烷基和杂芳烷基的烷基部分)-代表直链和支链碳链并含有1-20个碳原子，优选1-6个碳原子；
芳烷基-代表与上述定义的烷基连接的如下定义的芳基，优选其中所述烷基为-CH2-(如苄基)；
芳基(包括芳烷基的芳基部分)-代表含有6-15个碳原子并具有至少一个芳环的碳环基(如芳基是苯基)，所述碳环基的所有可取代的碳原子可以作为可能的连接点，所述碳环任选被下列基团一次或多次取代(如1-3)：卤代、烷基、羟基、烷氧基、苯氧基、CF3、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、-COOR10或-NO2；
-CH2-咪唑基代表通过咪唑环上任何可取代的碳与-CH2-连接的咪唑基，即：如-CH2-(2-、4-或5-)咪唑基，像
环烷基-代表3-20个碳原子，优选3-7个碳原子的支链或非支链的饱和碳环；
卤代-代表氟代、氯代、溴代和碘代；
杂芳基-代表具有至少一个选自氧、硫或氮的杂原子的环基(任选被R3和R4取代)，所述杂原子间断碳环结构且具有足够的离域pi电子数以提供芳族特性，所述芳族杂环基优选含有2-14个碳原子，如噻吩基、(2-、4-或5-)咪唑基、三唑基、2-、3-或4-吡啶基或吡啶基N-氧化物(任选被R3和R4取代)，其中吡啶基N-氧化物可用下式表示： 或
杂芳烷基-代表连接有上述定义的烷基的如上定义的杂芳基，优选所述烷基为-CH2-(如-CH2-(4-或5-)咪唑基)；
杂环烷基-代表含有3-15个碳原子、优选4-6个碳原子的饱和、支链或非支链碳环，所述碳环被1-3个选自-O-、-S-或-NR10-的杂基团间断，适当的杂环烷基包括：(1)2-或3-四氢呋喃基，(2)2-或3-四氢噻吩基，(3)2-、3-或4-哌啶基，(4)2-或3-吡咯烷基，(5)2-或3-哌嗪基，(6)2-或4-二氧六环基，(7)四氢吡喃基，和(8)取代的四氢吡喃基，其中所述取代基选自羟基和羟基烷基(如羟甲基)，如D-半乳糖基，即：
下列溶剂和试剂用缩写表示：乙醇(EtOH)；甲醇(MeOH)；乙酸(HOAc或AcOH)；乙酸乙酯(EtOAc)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；三氟乙酸(TFA)；三氟乙酸酐(TFAA)；1-羟基苯并三唑(HOBT)；1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(DEC)；二异丁基氢化铝(DIBAL)；和4-甲基吗啉(NMM)。
所述取代基R1、R2、R3及R4的位置基于下面的编号环结构：本领域技术人员也可以理解C-11键的S和R立体化学构型为：
式1.0化合物包括其中下面的哌啶基为4-或3-哌啶基的化合物，即： 或
式1.0化合物包括其中R2和R4为H,R1和R3为卤代(优选独立选自溴代或氯代)的化合物。例如，R1为溴，R3为氯。这些化合物包括其中R1在3位，R3在8位，如3-Br和8-Cl的化合物。式1.0化合物也包括其中R2为H,R1、R3和R4为卤代(优选独立选自溴或氯)的化合物。
优选式1.0化合物由下式1.1代表：其中所有的取代基与式1.0中定义相同。
优选，R2为H,R1、R3和R4为卤代；a为N,b、c和d为碳；A和B各自代表H2且C5和C6之间不存在任选的双键；X为CH；且R5、R6、R7和R8为H。更优选R1、R3和R4独立选自Br或Cl。最优选，R1为Br,R3和R4独立选自Cl和Br。
更优选式1.0化合物由式1.2和式1.3的化合物代表：，最优选式1.4和1.5的化合物：其中R1、R3和R4各自独立选自卤代，优选Br或Cl；且A、B、X和W与式1.0中定义相同。更优选，A和B各自为H2；且C5和C6之间不存在任选的键；X为CH。最优选，R1为Br；R3和R4独立为Br或Cl，还更优选R3为Cl,R4为Br；A和B各自为H2；且C5和C6之间不存在任选的键；X为CH；R5、R6、R7和R8为H。
当W代表-SO2R12时，R12优选选自：(1)烷基，如甲基、乙基、正丙基或异丙基；(2)芳基，如苯基；(3)杂芳基，如噻吩基；(4)取代的杂芳基，如即2-(吡啶-2-基)噻吩-5-基，或N-甲基咪唑-4-基即(5)芳烷基如苄基，(6)樟脑，如 或 ；和(7)-NR15R16，其中R15和R16独立选自H或烷基如甲基。
更优选，R12选自甲基、乙基、丙基、异丙基、N-甲基咪唑-4-基、-NH2或-N(CH3)2。
优选当W代表-P(O)R13R14时，R13和R14独立为烷基(如每个均相同和每个均为甲基)。
优选式1.2A和1.3A化合物：其中X为CH或N,R1、R3和R4为卤代。
本发明优选的化合物为由下式代表的化合物：其中R1、R3和R4为卤代，其余的取代基与上述定义相同，更优选式1.5A的化合物。
其中W为-SO2R12的式1.0的代表性化合物包括：其中W为-SO2R12的式1.0的代表性化合物也包括：和其中W为-P(O)R13R14的式1.0的代表性化合物包括：
本发明的化合物也包括1-N-氧化物，即如下式的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：其中代表化合物的其余部分。
化合物的旋光度((+)-或(-)-)是于25℃在甲醇或乙醇中测定的。
本发明包括无定形状态或结晶状态的上述化合物。
引入环系的线表示所指定的键可以连接于任何可取代的环碳原子上。
部分本发明的化合物可以存在不同的异构体(如对映体或非对映体)，包括阻转异构体(即其中7元环为固定的构象，使得由于10-溴代取代基的存在导致11-位碳原子位于稠合的苯环平面的上方或下方)。本发明意欲包括所有此类纯形式和混合物的异构体，包括外消旋混合物。也包括烯醇形式。
某些三环化合物具有酸性，例如那些具有羧基或酚羟基的三环化合物。这些化合物可以形成药学上可接受的盐。此类盐的实例可包括钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、金盐和银盐。也包括与药学上可接受的胺如氨、烷基胺、羟基烷基胺、N-甲基葡糖胺等形成的盐。
某些碱性的三环化合物也可形成药学上可接受的盐，如酸加成盐。例如，吡啶氮原子可与强酸形成盐，而具有碱性取代基如氨基的化合物也可与弱酸形成盐。适合形成盐的酸的例子为盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸和其它本领域熟知的无机酸和羧酸。以常规的方法，使游离碱形式与足量的所需酸接触产生盐来制备所述盐。通过用适当的稀碱水溶液，如稀氢氧化钠、碳酸钾、氨和碳酸氢钠水溶液处理所述盐可以再生成所述游离碱形式。这些游离碱的形式在某些物理性质，如在极性溶剂中的溶解度方面与它们各自的盐形式有些不同，但对于本发明的目的而言，所述酸和碱的盐与它们各自的游离碱形式却是等同的。
所有这些酸和碱的盐可用作本发明范围内的药学上可接受的盐，且对于本发明而言，认为所有的酸和碱的盐与相应化合物的游离形式是等同的。
可以根据WO95/10516(1995年4月20日公开)、申请系列号08/410187(1995年3月24日递交)、申请系列08/577951号(1995年12月22日递交，目前已放弃)、申请系列08/615760号(1996年3月13日递交，目前已放弃)、WO97/23478(1997年7月3日公开，公开系列号08/577951和08/615760的主题)以及申请系列08/712924号(1996年9月13日递交)中所述方法和下述方法制备本发明的化合物，这些公开的内容结合在此作为参考。
本发明的化合物可以用下列方法制备，即于约25℃、在DMF中，通过使下式的化合物：其中所有的取代基与式1.0中定义相同，与适当保护的哌啶基乙酸(如1-N-叔丁氧基羰基哌啶基乙酸)以及DEC/HOBT/NMM反应约18小时，产生下式的化合物：
然后使式17.0化合物与TFA或10％硫酸在二氧六环和甲醇中反应，接着与氢氧化钠反应，得到式18.0化合物
例如，根据上述方法，通过使式16.0化合物与1-N-叔丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸反应，可以制备下式的化合物：如，式19.0化合物包括下列化合物：
这些化合物的制备方法分别在以下制备实施例3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13中描述。
本发明的化合物可以用下列方法制备，即于约25℃、在DMF中，通过使下式的化合物：与适当保护的哌啶基乙酸(如1-N-叔丁氧基羰基哌啶基乙酸)以及DEC/HOBT/NMM反应约18小时，产生下式的化合物：
然后使式17.1化合物与TFA或10％硫酸在二氧六环和甲醇中反应，接着与氢氧化钠反应，得到式19.1化合物：
在偶合试剂例如DEC和HOBT存在下、在二甲基甲酰胺中，通过使式19.1化合物与适当的羧酸反应可以制备由式1.7代表的本发明的酰胺化合物：或者使式19.1化合物与酰氯或酸酐在溶剂如吡啶中反应。
用间-氯代过苯甲酸氧化，由相应的吡啶基化合物：可以制备具有1-N-O基团的化合物：该反应可以于适当的温度下、在适当的有机溶剂例如二氯甲烷(通常为无水的)中进行，产生在三环环系的环I的1位具有N-O取代基的本发明的化合物。
一般而言，在加入间-氯代过苯甲酸前，将原料三环反应物的有机溶剂溶液冷却至约0℃。然后在反应过程中将该反应物温热至室温。通过标准的分离方法可以回收所需产物。例如，用适当碱的水溶液如饱和的碳酸氢钠或氢氧化钠(如1N氢氧化钠)水溶液洗涤反应混合物，然后经无水硫酸镁干燥。真空浓缩含有产物的溶液。用标准方法，如经硅胶层析(像快速柱层析)纯化产物。
或者通过用上述的间-氯代过苯甲酸和下式的化合物：其中为保护基团，如BOC的氧化的方法，由下式中间体：制备N-O化合物。氧化后，用本领域熟知的技术脱去保护基团。然后使N-O中间体进一步反应产生本发明的化合物。
式16.0化合物包括下式的化合物：如，下式的化合物：
根据本领域已知的方法，例如用WO95/10516、U.S.5151423中所述方法和下列所述方法可以制备式16.0A或16.0B化合物。由包括下列步骤的方法也可以制备上述中间体化合物：
(a)在强碱存在下，使下式的酰胺其中R11a为Br,R5a为氢，R6a为C1-C6烷基、芳基或杂芳基；R5a为C1-C6烷基、芳基或杂芳基，R6a为氢；R5a和R6a独立选自C1-C6烷基和芳基；或R5a和R6a与它们所连接的氮一起形成含有4-6个碳原子或包含3-5个碳原子以及1个选自-O-和-NR9a(其中R9a为H、C1-C6烷基或苯基)的杂部分的环；与下式的化合物反应：其中R1a、R2a、R3a和R4a独立选自氢和卤代，R7a为Cl或Br，得到下式的化合物：(b)使步骤(a)的化合物与(ⅰ)POCl3反应得到下式的氰基化合物：；或(ⅱ)DIBALH反应得到下式的醛化合物：(c)使氰基化合物或醛与下式的哌啶衍生物反应：其中L为选自Cl和Br的离去基团，分别得到下式的酮或醇： 或
(d)(ⅰ)用CF3SO3H使所述酮环化得到式16.0A或16.0B化合物，其中虚线代表双键；或
(dd)(ⅱ)用多磷酸使所述醇环化得到中间体化合物，其中虚线代表单键。
制备WO95/10516、U.S.5151423公开的中间体化合物和下述的中间体化合物的方法使用三环酮中间体。下式的中间体其中R11b、R1a、R2a、R3a和R4a独立选自氢和卤代的制备可以用下列方法完成，该方法包括
(a)使下式的化合物
(ⅰ)在钯催化剂和一氧化碳的存在下，与式NHR5aR6a的胺反应，其中R5a和R6a与上述方法中定义相同，得到下式的酰胺：；或
(ⅱ)在钯催化剂和一氧化碳的存在下，与式R10aOH的醇反应，其中R10a为C1-C6低级烷基或C3-C6环烷基，得到下式的酯：，然后使该酯与式NHR5aR6a的胺反应，得到所述酰胺；
(b)在强碱存在下，使所述酰胺与下式的碘代苄基化合物反应其中R1a、R2a、R3a、R4a和R7a与上述定义相同，得到下式的化合物；和
(c)用式R8aMgL试剂，其中R8a为C1-C8烷基、芳基或杂芳基，L为Br或Cl，使步骤(b)的化合物环化，前提为在环化前，使其中R5a或R6a为氢的化合物与适当的N-保护基反应。
用包括高度对映选择性的酶催化酯基转移方法可以制备式16.2化合物的(+)-异构体：优选使式16.3的外消旋化合物：与酶如Toyobo LIP-300和酰化剂如三氟乙基异丁酸酯反应；然后根据本领域熟知的方法分离生成的(+)-酰胺与(-)-对映体的胺，接着水解(+)-酰胺，例如与酸例如硫酸回流，然后根据本领域熟知的技术用DIBAL还原产生的化合物得到相应的式16.2的富含(+)-旋光异构体的产物。或者首先将式16.3外消旋的化合物还原为相应的式16.2外消旋化合物，然后根据上述用酶(Toyobo LIP-300)和酰化剂处理得到(+)-酰胺，将其水解得到富含(+)-旋光异构体的产物。
本领域技术人员可以理解用上述的酶方法，可以制备具有其它的R1、R2、R3和R4取代基的式1.0化合物。
为得到式1.0化合物，可以使式18.0或19.0化合物与适当的磺酰氯(R12SO2Cl)或氨磺酰氯(R15R16NSO2Cl)反应，当W为-SO2R12时；或者当W为-P(O)R13R14时与适当的氧膦基氯(R13R14P(O)Cl)反应。该反应根据本领域已知的方法进行。例如，在适当的有机溶剂(如二氯甲烷)和适当的碱(如三乙胺)中，使式18.0或19.0化合物与适当的磺酰氯或氨磺酰氯反应。
例如，使下式的化合物：与(R12SO2Cl)或R13R14P(O)Cl在二氯甲烷和三乙胺中反应，或者与R15R16NSO2Cl在乙腈和三乙胺中反应分别得到下式的化合物：或同样，使下式的化合物：与R12SO2Cl在二氯甲烷和三乙胺中反应得到下式的化合物：
或者，优选使式23.1化合物在约100℃下与过量的磺酰胺在水中反应，或者在约150℃、在熔融下与磺酰胺反应，或者在约86℃、在异丙醇中与磺酰胺反应，得到下式的化合物：
用下面的实施例来示范说明本发明化合物，这些不应构成对本公开范围的限制。
制备实施例1步骤A：
于-20℃，将4-吡啶基乙酸乙酯(10g,60.5mmol)和120ml无水二氯甲烷混合，加入10.45g(60.5mmol)MCPBA，于-20℃搅拌1小时，然后于25℃搅拌67小时。再加入3.48g(20.2mmol)MCPBA，于25℃搅拌24小时。用二氯甲烷稀释，用饱和的碳酸氢钠水溶液，然后用水洗涤。经硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物，层析(硅胶，2％-5.5％(10％氢氧化铵的甲醇溶液)/二氯甲烷)，得到8.12g产物化合物。质谱：MH+=182.15。
步骤B：
将步骤A的产物(3.5g,19.3mmol)、17.5ml乙醇和96.6ml 10％的氢氧化钠水溶液混合，于67℃加热该混合物2小时。加入2N盐酸水溶液将pH调至2.37，真空浓缩为残留物。加入200ml无水乙醇，通过celite过滤，用无水乙醇(2×50ml)洗涤滤饼。真空浓缩合并的滤液得到2.43g目标化合物。
制备实施例2
根据PCT国际公开WO95/10516号公开的方法制备目标化合物。
制备实施例3
步骤A：
将8-氯代-11-{1-乙氧基-羰基-4-哌啶基)-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶(14.95g,39mmol)与150ml二氯甲烷混合，然后加入(nBu)4NNO3(13.07g,42.9mmol)，将该混合物冷却至0℃。用1.5小时缓慢加入(滴加)6.09ml(42.9mmol)TFAA的20ml二氯甲烷溶液。将该混合物于0℃保持过夜，然后顺序用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机溶液，真空浓缩为残留物，将残留物层析(硅胶，乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)分别得到两种产物化合物3A(ⅰ)和3A(ⅱ)4.32g和1.90g。
质谱：3A(ⅰ)化合物：MH+=428.2。
质谱：3A(ⅱ)化合物：MH+=428.3。
步骤B：
将步骤A的产物3A(ⅰ)(22.0g,51.4mmol)、150ml 85％乙醇水溶液、25.85g(0.463mol)铁粉和2.42g(21.8mmol)氯化钙混合，于回流下加热过夜。加入12.4g(0.222mol)铁粉和1.2g(10.8mmol)氯化钙，于回流下加热2小时。再加入12.4g(0.222mol)铁粉和1.2g(10.8mmol)氯化钙，于回流下再加热2小时。通过celite过滤热的混合物，用50ml热乙醇洗涤celite，真空浓缩滤液得到残留物。加入100ml无水乙醇，浓缩为残留物，将残留物层析(硅胶，甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到16.47g产物化合物。
步骤C：
将步骤B的产物(16.47g,41.4mmol)与150ml 48％HBr水溶液混合，冷却至-3℃。缓慢加入(滴加)18ml溴，然后缓慢加入(滴加)亚硝酸钠(8.55g,0.124mol)的85ml水溶液。于-3℃至0℃搅拌45分钟，然后加入50％氢氧化钠水溶液将pH调至10。用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤萃取物，用硫酸钠干燥萃取物。浓缩为残留物并层析(硅胶，乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)纯化，分别得到两种产物化合物3C(ⅰ)和3C(ⅱ)10.6g和3.28g。
质谱：3C(ⅰ)化合物：MH+=461.2。
质谱：3C(ⅱ)化合物：MH+=539。
步聚D：
通过溶于浓盐酸中并加热至约100℃16小时使步骤C的产物3C(ⅰ)水解。冷却该混合物，加入1M氢氧化钠水溶液中和。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥萃取物，过滤并真空浓缩得到目标化合物。质谱：MH+=466.9。
步骤E：
将步骤D的目标化合物(1.160g,2.98mmol)溶于20ml DMF中，于室温下搅拌，加入0.3914g(3.87mmol)4-甲基吗啉、0.7418g(3.87mmol)DEC、0.5299g(3.87mmol)HOBT和0.8795g(3.87mmol)1-N-叔丁氧基羰基-哌啶基-4-乙酸。于室温下将该混合物搅拌2天，然后真空浓缩为残留物，使该残留物分配于二氯甲烷和水之间。顺序用饱和的碳酸氢钠水溶液、10％磷酸二氢钠水溶液和盐水洗涤有机相。经硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩为残留物。层析纯化残留物(硅胶，2％甲醇/二氯甲烷+氨)得到1.72g产物。m.p.=94.0-94.5℃，质谱：MH+=616.3。
元素分析：计算值：C,60.54；H,6.06；N,6.83
实测值：C,59.93；H,6.62；N,7.45。
步骤F：
将步骤E的产物(1.67g,2.7mmol)与20ml二氯甲烷混合，于0℃搅拌。加入20ml TFA，将该混合物搅拌2小时，然后用1N氢氧化钠水溶液碱化该混合物。用二氯甲烷萃取，用硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩，得到1.16g产物。m.p.=140.2-140.8℃，质谱：MH+=516.2。
制备实施例4
步骤A：
于-5℃，将4-(8-氯代-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-甲酸乙酯与250ml浓硫酸混合，然后加入4.8g(56.4mmol)硝酸钠，搅拌2小时。将该混合物倾至600g冰中，用浓氢氧化铵水溶液碱化。过滤该混合物，用300ml水洗涤，然后用500ml二氯甲烷萃取。用200ml水洗涤萃取物，经硫酸镁干燥，然后过滤并真空浓缩为残留物。层析纯化残留物(硅胶，10％乙酸乙酯/二氯甲烷)，得到24.4g(86％产率)产物，m.p.=165-167℃，质谱：MH+=506(CI)。
元素分析：计算值：C,52.13；H,4.17；N,8.29
实测值：C,52.18；H,4.51；N,8.16。
步骤B：
于20℃将步骤A的产物(20g,40.5mmol)与200ml浓硫酸混合，然后将该混合物冷却至0℃。向该混合物中加入7.12g(24.89mmol)1,3-二溴代-5,5-二甲基-乙内酰脲，于20℃搅拌3小时。冷却至0℃，再加入二溴代乙内酰脲(1.0g,3.5mmol)，于20℃搅拌2小时。将该混合物倾至400g冰中，于0℃用浓氢氧化铵水溶液碱化，过滤收集产生的固体。用300ml水洗涤该固体，在200ml丙酮中制成淤浆，过滤得到19.79g(85.6％产率)产物。m.p.=236-237℃，质谱：MH+=584(CI)。
元素分析：计算值：C,45.11；H,3.44；N,7.17
实测值：C,44.95；H,3.57；N,7.16。
步骤C：
于50℃将25g(447mmol)铁屑、10g(90mmol)氯化钙和20g(34.19mmol)步骤B的产物的700ml 90∶10乙醇/水的悬浮液混合。于回流下，将该混合物加热过夜，通过Celite过滤，用2×200ml热乙醇洗涤滤饼。合并滤液和洗涤液，真空浓缩为残留物。用600ml二氯甲烷萃取残留物，用300ml水洗涤，经硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩为残留物，然后层析(硅胶，30％乙酸乙酯/二氯甲烷)，得到11.4g(产率60％)产物。m.p.=211-212℃，质谱：MH+=554(CI)。
元素分析：计算值：C,47.55；H,3.99；N,7.56
实测值：C,47.45；H,4.31；N,7.49。
步骤D：
于-10℃，缓慢将步骤C的产物(20g,35.9mmol)加至(逐份)8g(116mmol)亚硝酸钠的120ml浓盐酸水溶液中。于0℃将产生的混合物搅拌2小时，然后于0℃、用1小时缓慢加入(滴加)150ml(1.44mol)50％次磷酸。于0℃搅拌3小时，然后倾至600g冰中，用浓氢氧化铵水溶液碱化。用2×300ml二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥萃取物，然后过滤并真空浓缩为残留物。将残留物层析(硅胶，25％乙酸乙酯/己烷)得到13.67g(产率70％)产物。m.p.=163-165℃，质谱：MH+=539(CI)。
元素分析：计算值：C,48.97；H,4.05；N,5.22。
实测值：C,48.86；H,3.91；N,5.18。
步骤E：
将步骤D的产物(6.8g,12.59mmol)和100ml浓盐酸水溶液混合，于85℃搅拌过夜。将该混合物冷却，倾至300g冰中，用浓氢氧化铵水溶液碱化。用2×300ml二氯甲烷萃取，然后用硫酸镁干燥萃取物。过滤并真空浓缩为残留物，然后层析纯化(硅胶，10％甲醇/乙酸乙酯+2％氢氧化铵水溶液)得到5.4g(产率92％)的目标化合物。m.p.=172-174℃，质谱：MH+=467(FAB)。
元素分析：计算值：C,48.69；H,3.65；N,5.97
实测值：C,48.83；H,3.80；N,5.97。
步骤F：
根据与下列制备实施例5步骤C基本相同的方法，使上述步骤E的目标化合物与1-N-叔丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸反应得到该化合物
步骤G：
根据与下列制备实施例5步骤D基本相同的方法，使步骤F的目标化合物去保护得到制备实施例4的目标化合物。
制备实施例5
步骤A：
通过与制备实施例3步骤D所述基本相同的方法，水解2.42g 4-(8-氯代-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-甲酸乙酯，得到1.39g(产率69％)的产物。
步骤B：
将步骤A的产物(1g,2.48mmol)与25ml无水甲苯混合，加入2.5ml1M DIBAL的甲苯溶液，于回流下加热该混合物。0.5小时后，再加入2.5ml 1M DIBAL的甲苯溶液，于回流下加热1小时。(用TLC监测反应的进行，用50％甲醇/二氯甲烷+氢氧化铵水溶液展开)。将该混合物冷却至室温，加入50ml 1N盐酸水溶液，搅拌5分钟。加入100ml1N氢氧化钠水溶液，然后用乙酸乙酯(3×150ml)萃取。用硫酸镁干燥萃取物，过滤并真空浓缩，得到1.1g目标化合物。
步骤C：
将步骤B的目标化合物(0.501g,1.28mmol)与20ml无水DMF混合，然后加入0.405g(1.664mmol)1-N-叔丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸、0.319g(1.664mmol)DEC、0.225g(1.664mmol)HOBT和0.168g(1.664mmol)4-甲基吗啉，于室温下将该混合物搅拌过夜。真空浓缩该混合物为残留物，然后使残留物分配于150ml二氯甲烷和150ml饱和的碳酸氢钠水溶液之间。再用150ml二氯甲烷萃取水相。用硫酸镁干燥有机相，真空浓缩为残留物。层析纯化该残留物(硅胶，500ml己烷、1L 1％甲醇/二氯甲烷+0.1％氢氧化铵水溶液，然后用1L 2％甲醇/二氯甲烷+0.1％氢氧化铵水溶液洗脱)得到0.575g产物。m.p.=115-125℃，质谱：MH+=616。
步骤D：
将步骤C的产物(0.555g,0.9mmol)与15ml二氯甲烷混合，将该混合物冷却至0℃。加入15ml TFA，于0℃搅拌2小时。于40-45℃真空浓缩为残留物，然后使该残留物分配于150ml二氯甲烷和100ml饱和的碳酸氢钠水溶液之间。用100ml二氯甲烷萃取水层，合并萃取物，经硫酸镁干燥。真空浓缩得到0.47g产物。m.p.=140-150℃，质谱：MH+=516。
制备实施例6[外消旋物以及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
将制备实施例4步骤D的产物(16.6g,0.03mol)与3∶1乙腈和水(212.65ml乙腈和70.8ml水)的溶液混合，于室温下将产生的淤浆搅拌过夜。加入32.833g(0.153mol)高碘酸钠，然后加入0.31g(2.30mmol)RuO2，并于室温下搅拌得到1.39g(产率69％)产物。(加入RuO为放热反应，温度由20℃升至30℃)。将该混合物搅拌1.3小时(约30分钟后温度回至25℃)，然后过滤去除固体，用二氯甲烷洗涤固体。真空浓缩滤液得到残留物，将残留物溶于二氯甲烷中。过滤去除不溶性固体，用二氯甲烷洗涤固体。用水洗涤滤液，浓缩至约200ml体积，用漂白剂洗涤，然后用水洗涤。用6N盐酸水溶液萃取。将水溶液萃取物冷却至0℃，缓慢加入50％氢氧化钠水溶液将pH调至4，同时保持温度低于30℃。用二氯甲烷萃取两次，经硫酸镁干燥，真空浓缩为残留物。将其在20ml乙醇中制成淤浆，冷却至0℃。过滤收集产生的固体，真空干燥固体，得到7.95g产物。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.7(s,1H)；7.85(m,6H)；7.5(d,2H)；3.45(m,2H)；3.15(m,2H)。
步骤B：
将步骤A的产物(21.58g,53.75mmol)与500ml无水1∶1乙醇和甲苯的混合液混合，加入1.43g(37.8mmol)硼氢化钠，于回流下将该混合物加热10分钟。将该混合物冷却至0℃，加入100ml水，然后用1M盐酸水溶液将pH调至约4-5，同时保持温度低于10℃。加入250ml乙酸乙酯，分离各层。用盐水(3×50ml)洗涤有机层，然后经硫酸钠干燥。真空浓缩为残留物(24.01g)，将残留物层析纯化(硅胶，30％己烷/二氯甲烷)得到产物。将不纯的组分再层析纯化。共得到产物18.57g。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):8.5(s,1H)；7.9(s,1H)；7.5(dd,2H)；6.2(s,1H)；6.1(s,1H)；3.5(m,1H)；3.4(m,1H)；3.2(m,2H)。
步骤C：
将步骤B的产物(18.57g,46.02mmol)与500ml氯仿混合，然后加入6.70ml(91.2mmol)二氯亚砜，于室温下将该混合物搅拌4小时。用5分钟加入哌嗪(35.6g,0.413mol)的800ml THF溶液，于室温下将该混合物搅拌1小时。于回流下，将该混合物加热过夜，然后冷却至室温，用1L二氯甲烷稀释该混合物。用水(5×200ml)洗涤，用氯仿(3×100ml)萃取含水洗涤液。合并所有的有机溶液，用盐水(3×200ml)洗涤，经硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，层析纯化(硅胶，5％、7.5％、10％甲醇/二氯甲烷+氢氧化铵梯度洗脱)，得到为外消旋混合物的目标化合物18.49g。
步骤D-对映体的分离
用制备性手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，流速100ml/min,20％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱)分离步骤C的外消旋的目标化合物，得到9.14g(+)-异构体和9.30g(-)-异构体。
(+)-异构体的物化数据：m.p.=74.5-77.5℃；质谱MH+=471.9；[α]D25=+97.4°(8.48mg/2ml甲醇)。
(-)-异构体的物化数据：m.p.=82.9-84.5℃；质谱MH+=471.8；[α]D25=-97.4°(8.32mg/2ml甲醇)。
步骤E：
(-)-异构体
将步骤D的(-)-异构体产物(3.21g,6.80mmol)与150ml无水DMF混合。加入2.15g(8.8mmol)1-N-叔丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸、1.69g(8.8mmol)DEC、1.19g(8.8mmol)HOBT和0.97ml(8.8mmol)N-甲基吗啉，于室温下将该混合物搅拌过夜。真空浓缩去除DMF，加入50ml饱和的碳酸氢钠水溶液。用二氯甲烷(2×250ml)萃取，用50ml盐水洗涤萃取物，经硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，层析纯化(硅胶，2％甲醇/二氯甲烷+10％氢氧化铵)得到4.75g产物。m.p.=75.7-78.5℃；质谱MH+=697；[α]D25=-5.5°(6.6mg/2ml甲醇)。
步骤F：
将步骤E的产物(4.70g,6.74mmol)与30ml甲醇混合，然后用1小时以每份10ml加入50ml 10％硫酸/二氧六环溶液。将该混合物倾至50ml水中，加入15ml 50％氢氧化钠水溶液将pH调至约10-11。过滤去除产生的固体，用二氯甲烷(2×250ml)萃取滤液。真空浓缩水层去除甲醇，用250ml二氯甲烷再次萃取。用硫酸镁干燥合并的萃取物，真空浓缩得到产物。m.p.=128.1-131.5℃；质谱MH+=597；[α]D25=-6.02°(9.3mg/2ml甲醇)。
制备实施例7
步骤A：
于-5℃，将4-(8-氯代-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-甲酸乙酯(15g,38.5mmol)与150ml浓硫酸混合，然后加入3.89g(38.5mmol)硝酸钾，搅拌4小时。将该混合物倾至3L冰中，用50％氢氧化钠水溶液碱化。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥，然后过滤，真空浓缩为残留物。从丙酮中重结晶该残留物得到6.69g产物。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.5(s,1H)；7.75(s,1H)；7.6(s,1H)；7.35(s,1H)；4.15(q,2H)；3.8(m,2H)；3.5-3.1(m,4H)；3.0-2.8(m,2H)；2.6-2.2(m,4H)；1.25(t,3H)。
步骤B：
将步骤A的产物(6.69g,13.1mmol)与100ml 85％乙醇/水混合，然后加入0.66g(5.9mmol)氯化钙和6.56g(117.9mmol)铁，然后于回流下将该混合物加热过夜。通过celite过滤热的反应混合物，用热乙醇洗涤滤饼。真空浓缩滤液得到7.72g产物。质谱MH+=478.0。
步骤C：
将7.70g步骤B的产物与35ml乙酸混合，然后加入45ml溴的乙酸溶液，于室温下将该混合物搅拌过夜。加入300ml 1N氢氧化钠水溶液，然后加入75ml 50％氢氧化钠水溶液，用乙酸乙酯萃取。经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩为残留物。将残留物层析(硅胶，20％-30％乙酸乙酯/己烷)得到3.47g产物(以及另外1.28g部分纯化的产物)。质谱MH+=555.9。
1H NMR(CDCl3,300MHz):8.5(s,1H)；7.5(s,1H)；7.15(s,1H),4.5(s,2H)；4.15(m,3H)；3.8(br s,2H)；3.4-3.1(m,4H)；9-2.75(m,1H)；2.7-2.5(m,2H)；2.4-2.2(m,2H)；1.25(m,3H)。
步骤D：
将叔丁基腈(0.557g,5.4mmol)与3ml DMF混合，将该混合物加热至60-70℃。缓慢加入(滴加)2.00g(3.6mmol)步骤C的产物与4mlDMF的混合物，然后将该混合物冷却至室温。于40℃再加入0.64ml叔丁基腈，将该混合物再加热至60-70℃0.5小时。冷却至室温，将该混合物倾至150ml水中。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥萃取物并真空浓缩为残留物。层析纯化该残留物(硅胶，10％-20％乙酸乙酯/己烷)得到0.74g产物。质谱MH+=541.0。
1H NMR(CDCl3,200MHz):8.52(s,1H)；7.5(d,2H)；7.2(s,1H),4.15(q,2H)；3.9-3.7(m,2H)；3.5-3.1(m,4H)；3.0-2.5(m,2H)；2.4-2.2(m,2H)；2.1-1.9(m,2H)；1.26(t,3H)。
步骤E：
将步骤D的产物(0.70g,1.4mmol)与8ml浓盐酸水溶液混合，于回流下将该混合物加热过夜。加入30ml 1N氢氧化钠水溶液，然后加入5ml 50％氢氧化钠水溶液，用二氯甲烷萃取。用硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩得到0.59g目标化合物。质谱M+=468.7。m.p.=123.9-124.2℃。
步骤F：
根据与制备实施例5步骤C所述基本相同的方法，使步骤E的目标化合物(6.0g,12.8mmol)与3.78g(16.6mmol)1-N-叔丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸反应，得到8.52g产物。质谱MH+=694.0(FAB)。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.5(d,1H)；7.5(d,2H)；7.2(d,1H),4.15-3.9(m,3H)；3.8-3.6(m,1H)；3.5-3.15(m,3H)；2.9(d,2H)；2.8-2.5(m,4H)；2.4-1.8(m,6H)；1.8-1.6(br d,2H)；1.4(s,9H)；1.25-1.0(m,2H)。
步骤G：
将8.50g步骤F的产物与60ml二氯甲烷混合，然后冷却至0℃，加入55ml TFA。于0℃将该混合物搅拌3小时，然后加入500ml 1N氢氧化钠水溶液，接着加入30ml 50％氢氧化钠水溶液。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥，真空浓缩，得到7.86g产物。质谱M+=593.9(FAB)。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.51(d,1H)；7.52(dd,2H)；7.20(d,1H),4.1-3.95(m,2H)；3.8-3.65(m,2H)；3.5-3.05(m,5H)；3.0-2.5(m,6H)；2.45-1.6(m,6H)；1.4-1.1(m,2H)。
制备实施例8
[外消旋物以及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
制备得自制备实施例7步骤E的目标化合物(8.1g)的甲苯溶液，加入17.3ml 1M DIBAL的甲苯溶液。于回流下加热该混合物，用40分钟缓慢再加入(滴加)21ml 1M DIBAL/甲苯溶液。将该反应混合物冷却至约0℃，加入700ml 1M盐酸水溶液。分离并弃去有机相。用二氯甲烷洗涤水相，弃去萃取物，然后加入50％氢氧化钠水溶液碱化水相。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩得到7.30g目标化合物，为对映体的外消旋混合物。
步骤B-对映体的分离
用制备性手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，用20％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱)分离步骤A的外消旋的目标化合物，得到目标化合物的(+)-异构体和(-)-异构体。
(+)-异构体的物化数据：m.p.=148.8℃；质谱MH+=469；[α]D25=+65.6°(12.93mg/2ml甲醇)。
(-)-异构体的物化数据：m.p.=112℃；质谱MH+=469；[α]D25=-65.2°(3.65mg/2ml甲醇)。
步骤C：
(+)-异构体
根据与制备实施例5步骤C所述基本相同的方法，使制备实施例8步骤B目标化合物的(+)-异构体(1.33g)与1.37g 1-N-叔丁氧基羰基哌啶基-4-乙酸反应，得到2.78g产物。质谱MH+=694.0(FAB)；[α]D25=+34.1°(5.45mg/2ml甲醇)。
步骤D：
通过与制备实施例5步骤D所述基本相同的方法，处理2.78g步骤C的产物，得到1.72g产物。m.p.=104.1℃。质谱MH+=594；[α]D25=+53.4°(11.42mg/2ml甲醇)。
制备实施例9
[外消旋物以及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
将原料酮(40.0g,0.124mol)与200ml硫酸混合，冷却至0℃。用1.5小时缓慢加入13.78g(0.136mol)硝酸钾，然后加热至室温并搅拌过夜。用与制备实施例4步骤A所述基本相同的方法处理反应物。层析纯化(硅胶，用20％、30％、40％、50％乙酸乙酯/己烷，然后用100％乙酸乙酯洗脱)得到28g 9-硝基产物以及少量的7-硝基产物和19g 7-硝基化合物与9-硝基化合物的混合物。
步骤B：
根据与制备实施例4步骤C基本相同的方法，使步骤A的9-硝基产物(28g,76.2mmol)、400ml 85％乙醇/水、3.8g(34.3mmol)氯化钙和38.28g(0.685mol)铁反应，得到24g产物。
步骤C：
将步骤B的产物(13g,38.5mmol)与140ml乙酸混合，用20分钟缓慢加入2.95ml(57.8mmol)溴的10ml乙酸溶液。于室温下搅拌该反应混合物，然后真空浓缩为残留物。加入二氯甲烷和水，然后用50％氢氧化钠水溶液将pH调至8-9。顺序用水和盐水洗涤有机相，经硫酸钠干燥。真空浓缩得到11.3g产物。
步骤D：
将100ml浓盐酸水溶液冷却至0℃，然后加入5.61g(81.4mmol)亚硝酸钠，搅拌10分钟。缓慢加入(逐份)11.3g(27.1mmol)步骤C的产物，于0-3℃将该混合物搅拌2.25小时。缓慢加入(滴加)180ml 50％次磷酸水溶液，于0℃将该混合物放置过夜。用30分钟缓慢加入(滴加)150ml 50％氢氧化钠将pH调至9，然后用二氯甲烷萃取。顺序用水和盐水洗涤萃取物，用硫酸钠干燥。真空浓缩为残留物，层析纯化(硅胶，2％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到8.6g产物。
步骤E：
将步骤D的产物(8.6g,21.4mmol)与300ml甲醇混合，冷却至0-2℃。加入1.21g(32.1mmol)硼氢化钠，于约0℃搅拌该混合物1小时。再加入0.121g(3.21mmol)硼氢化钠并于0℃再搅拌2小时，然后于0℃放置过夜。真空浓缩为残留物，使其分配于二氯甲烷和水之间。分离有机相，真空(50℃)浓缩得到8.2g产物。
步骤F：
将步骤E的产物(8.2g,20.3mmol)与160ml二氯甲烷混合，冷却至0℃，然后用30分钟缓慢加入(滴加)14.8ml(203mmol)二氯亚砜。将该混合物温热至室温，搅拌4.5小时，然后真空浓缩为残留物，加入二氯甲烷，顺序用1N氢氧化钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥。真空浓缩为残留物，然后加入无水THF和8.7g(101mmol)哌嗪，于室温下搅拌过夜。真空浓缩为残留物，加入二氯甲烷，顺序用0.25N氢氧化钠水溶液、水和盐水洗涤。经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到9.46g粗品产物。层析(硅胶，5％甲醇/二氯甲烷+氨)得到3.59g目标化合物，为外消旋物。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.43(d,1H)；7.55(d,1H)；7.45(d,1H)；7.11(d,1H)；5.31(s,1H)；4.86-4.65(m,1H)；3.57-3.40(m,1H)；2.98-2.55(m,6H)；2.45-2.20(m,5H)。
步骤G-对映体的分离
根据制备实施例6步骤D所述方法，层析分离步骤F的外消旋的目标化合物(5.7g)，用30％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱，得到2.88g目标化合物的R-(+)-异构体和2.77g目标化合物的S-(-)-异构体。
R-(+)-异构体的物化数据：质谱MH+=470.0；[α]D25=+12.1°(10.9mg/2ml甲醇)。
S-(-)-异构体的物化数据：质谱MH+=470.0；[α]D25=-13.2°(11.51mg/2ml甲醇)。
步骤H：
根据与制备实施例5步骤C和D所述基本相同的方法，由步骤F的外消旋化合物获得制备实施例9的外消旋目标化合物。同样，分别由步骤G的(-)-或(+)-异构体获得制备实施例9的目标化合物的(-)-或(+)-异构体。
制备实施例10
[外消旋物以及(+)-和(-)-异构体]
步骤A：
于20℃，将制备实施例4步骤E的目标化合物(13g,33.3mmol)与300ml甲苯混合，然后加入32.5ml(32.5mmol)1M DIBAL的甲苯溶液。于回流下将该混合物加热1小时，冷却至20℃，再加入32.5ml 1MDIBAL溶液，于回流下加热1小时。将该混合物冷却至20℃，将该混合物倾至400g冰、500ml乙酸乙酯和300ml 10％氢氧化钠水溶液的混合物中。用二氯甲烷(3×200ml)萃取水层，用硫酸镁干燥有机相，然后真空浓缩为残留物。层析(硅胶，12％甲醇/二氯甲烷+4％氢氧化铵)得到10.4g目标化合物，为外消旋物。质谱：MH+=469(FAB)。部分1H NMR(CDCl3,400MHz):8.38(s,1H)；7.57(s,1H)；7.27(d,1H)；7.06(d,1H)；3.95(d,1H)。
步骤B-对映体的分离
用制备手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，用5％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱)分离步骤A的外消旋的目标化合物，得到目标化合物的(+)-异构体和(-)-异构体。
(+)-异构体的物化数据：质谱MH+=469(FAB)；[α]D25=+43.5°(c=0.402,EtOH)；部分1H NMR(CDCl3,400MHz):8.38(s,1H)；7.57(s,1H)；7.27(d,1H)；7.05(d,1H)；3.95(d,1H)。
(-)-异构体的物化数据：质谱MH+=469(FAB)；[α]D25=-41.8°(c=0.328,EtOH)；部分1H NMR(CDCl3,400MHz):8.38(s,1H)；7.57(s,1H)；7.27(d,1H)；7.05(d,1H)；3.95(d,1H)。
步骤C：
根据制备实施例9步骤H的方法，可以获得制备实施例10的目标化合物的外消旋化合物，即(+)-异构体或(-)-异构体。
制备实施例11
[外消旋物以及R-(+)-和S-(-)-异构体]
根据WO95/10516(1995年4月20日公开)的制备实施例40的方法、然后进行WO95/10516实施例193所述方法可以制备下式的化合物：
根据与制备实施例6步骤D基本相同的方法，可以分离(+)-和(-)-异构体。
R-(+)-异构体的物化数据：13C NMR(CDCl3):155.8(C)；146.4(CH)；140.5(CH)；140.2(C)；136.2(C)；135.3(C)；133.4(C)；132.0(CH)；129.9(CH)；125.6(CH)；119.3(C)；79.1(CH)；52.3(CH2)；52.3(CH)；45.6(CH2)；45.6(CH2)；30.0(CH2)；29.8(CH2)。[α]D25=+25.8°(8.46mg/2ml MeOH)。
S-(-)-异构体的物化数据：13C NMR(CDCl3):155.9(C)；146.4(CH)；140.5(CH)；140.2(C)；136.2(C)；135.3(C)；133.3(C)；132.0(CH)；129.9(CH)；125.5(CH)；119.2(C)；79.1(CH)；52.5(CH2)；52.5(CH)；45.7(CH2)；45.7(CH2)；30.0(CH2)；29.8(CH2)；[α]D25=-27.9°(8.90mg/2ml MeOH)。
根据与制备实施例5步骤C和D基本相同的方法，由相应的外消旋化合物，即下式化合物的(+)-异构体或(-)-异构体可以获得制备实施例11的目标化合物的外消旋化合物的(+)-异构体或(-)-异构体：
实施例1
向溶于无水二氯甲烷(10ml)中的式20.0化合物(制备实施例8,0.10g,0.17mmol)： 和三乙胺(0.04ml,0.26mmol)中加入苯磺酰氯(0.03ml,1.2eq)。于室温下搅拌过夜后，用二氯甲烷稀释该溶液，用1M盐酸洗涤，然后用1N氢氧化钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩得到式6.0化合物(0.11g,89％,mp102-105℃)。
实施例2
向溶于无水二氯甲烷(10ml)中的式20.0化合物(制备实施例8,0.11g,0.19mmol)和三乙胺(0.04ml,0.28mmol)中加入甲磺酰氯(0.02ml,1.2eq)。于室温下搅拌过夜后，用二氯甲烷稀释该溶液，用1M盐酸洗涤，然后用1N氢氧化钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩得到式2.0化合物(0.10g,80％,mp133-136℃)。
实施例3
向溶于无水二氯甲烷(10ml)中的式20.0化合物(制备实施例8,0.20g,0.34mmol)和三乙胺(0.08ml,0.50mmol)中加入N,N-二甲基氨磺酰氯(0.04ml,1.2eq)。于室温下搅拌过夜后，用二氯甲烷稀释该溶液，用1M盐酸洗涤，然后用1N氢氧化钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩得到式13.0化合物(0.22g,93％,mp107.4-109.5℃)。
实施例4
步骤1：
于0℃，向溶于无水乙腈(10ml)中的式20.0化合物(制备实施例8,0.30g,0.50mmol)和三乙胺(0.22ml,3eq)中缓慢加入氨磺酰氯(0.12g,2eq,Chem.Ber.，第91卷，第1339页(1958))的乙腈溶液(2ml)。于0℃搅拌1小时，然后于室温下搅拌72小时，真空浓缩该混合物，用二氯甲烷稀释，用1M盐酸洗涤，然后用1N氢氧化钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩，得到固体，将其经制备性薄层层析纯化(硅胶)，用5％甲醇-二氯甲烷和浓氢氧化铵洗脱，得到式14.0化合物(0.05g,14％,mp151.5-155.6℃)。
步骤2：
将无水吡啶(2ml,24.8mmol)于冰水浴上冷却。用约5分钟滴加SO2Cl2(0.3ml,3.8mmol)，将产生的混合物搅拌约5分钟。用约1分钟滴加式20.0化合物(制备实施例8,150mg)的二氯甲烷溶液，于约0℃将该混合物搅拌约10分钟。滴加浓氢氧化铵(40ml)，于室温下将该混合物搅拌约1小时。加入二氯甲烷，于室温下搅拌该混合物。分离各相，向有机相中加入1MHCl，搅拌产生的混合物。分离各相，用1M盐酸水溶液洗涤有机相，分离各相。用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，经无水硫酸镁干燥，过滤并旋转蒸发浓缩。残留物经制备性薄层层析(硅胶)纯化，用5％甲醇/二氯甲烷+氢氧化铵展开，得到式14.0化合物(18mg,14％)。MS-FAB DMSO:673(MH+)；mp151.5-155.6℃。
实施例5
向溶于无水二氯甲烷(5ml)中的式20.0化合物(制备实施例8,0.15g,0.25mmol)和三乙胺(0.14ml,1.0mmol)中加入二甲基氧膦基氯(0.12g,4eq)。于室温下搅拌48小时后，用二氯甲烷稀释该溶液，用1M盐酸洗涤，然后用1N氢氧化钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩得到油状物，将其经制备性薄层层析(硅胶)纯化，用2％甲醇-二氯甲烷和浓氢氧化铵洗脱，得到式15.0化合物(0.03g,18％)。
实施例6-14
根据类似于实施例1的步骤，但是用表1第1栏中的磺酰氯代替苯磺酰氯，得到式24的化合物，其中R17如表1第3栏中定义。第3栏括号中的数字为获得的化合物的式号。 表1实施例号 磺酰氯 R17 6 乙磺酰氯 -SO2CH2CH3(3.0) 产率：83％,mp119-124℃ 7 1-丙磺酰氯 -SO2CH2CH2CH3(4.0) 产率：78％,mp111-119℃ 8 异丙磺酰氯 -SO2CH(CH3)2(5.0) 产率：43％,mp95-103℃ 9 苯甲基磺酰氯 -SO2CH2C6H5(9.0) 产率：69％,mp116-123℃ 10 (1S)-(+)-10-樟脑磺酰 氯
实施例15
将1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-(4-哌啶基乙酰基)哌嗪(1.5g,1eq，根据制备实施例11所述制备)溶于无水二氯甲烷(50ml)中，加入三乙胺(0.8792g,1.211ml,3eq)和甲磺酰氯(0.498g,0.336ml,1.5eq)。于25℃、氩气下，将该混合物搅拌18小时。再加入甲磺酰氯(0.259g,0.118ml,0.75eq)，继续搅拌6小时。再加入甲磺酰氯(0.259g,0.118ml,0.75eq)和三乙胺(0.8792g,1.211ml,3eq)，继续搅拌共90小时。用二氯甲烷稀释该混合物，用饱和的碳酸氢钠和水洗涤。用硫酸镁干燥二氯甲烷层，过滤并蒸发至干。产生的产物经硅胶柱层析(60×2.5cm)，用1％(10％浓氢氧化铵)的甲醇溶液作为洗脱剂，得到目标化合物(式14.1,1.2505g,72％),FABMS:m/z 595.1(MH+)。
δc(CDCl3)，式14.1化合物 三环CH2:CH:C:30.0,30.1146.6,140.8,132.0,125.8,130.0,78.5119.6,140.4,133.8,134.8,136.3,155.0 哌嗪CH2:41.1,50.9,51.4,45.1 哌嗪 N-取代基CH3:CH2:CH:C:33.945.7,45.7,31.3,31.3,38.431.9169.0
实施例16
方法1：
将1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(0.555g,1eq，根据制备实施例11所述制备)和磺酰胺(1.03g,10eq)加至水(20ml)中，于100℃、回流下将该混合物加热43小时。将产生的溶液蒸发至干。将固体溶于甲醇-水-二氯甲烷中，加入硅胶。将混合物蒸发至干。将产生的固体上于硅胶柱(60×2.5cm)上，用3％-7％(10％氢氧化铵的甲醇溶液)-二氯甲烷作为洗脱剂梯度洗脱，得到目标化合物(式14.2,0.5282g,83％),FABMS:m/z 596.0(MH+)。
δc(d6-DMSO)，式14.2化合物 三环CH2:CH:C:29.3,29.7146.4,141.1,132.8,125.8,130.3,78.0119.5,141.4,132.8,135.8,137.1,155.8 哌嗪CH2:41.0,51.1,51.7,45.0 哌嗪 N-取代基CH2:CH:C:46.1,46.1,30.8,30.8,38.232.0169.2
方法2：
于150℃，在配有回流冷凝器的烧瓶中加热1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1.25g,1eq，根据制备实施例11所述制备)和磺酰胺(2.32g,10eq)。将各固体物熔融，将该混合物搅拌73小时，然后冷却。将固体溶于甲醇-水-二氯甲烷中，加入硅胶。将混合物蒸发至干。将产生的固体上于硅胶柱(60×2.5cm)上，用2％-7％(10％浓氢氧化铵的甲醇溶液)-二氯甲烷作为洗脱剂梯度洗脱，得到目标化合物(式14.2,0.3788g,26％)。
方法3：
将1-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-4-[(4-哌啶基)乙酰基]哌嗪(1.5g,1eq，根据制备实施例11所述制备)和磺酰胺(2.79g,10eq)加至异丙醇(100ml)中，于86℃、回流下将该混合物加热241小时。将产生的溶液蒸发至干。将固体溶于甲醇-水-二氯甲烷中，加入硅胶。将混合物蒸发至干。将产生的固体上于硅胶柱(60×2.5cm)上，用0.5％-7％(10％浓氢氧化铵的甲醇溶液)-二氯甲烷作为洗脱剂梯度洗脱，得到目标化合物(式14.2,0.088g,5％)。
测定
根据WO95/10516(1995年4月20日公开)中所述的下列测定方法，测定FPT IC50(法呢基蛋白转移酶的抑制，体外酶测定)和COS细胞IC50(细胞基测定)。GGPT IC50(香叶基香叶基蛋白转移酶的抑制，体外酶测定)、细胞垫测定和抗肿瘤活性(体内抗肿瘤研究)可以用WO95/10516中所述测定方法测定。在此引入WO95/10516的公开内容作参考。
另外的测定方法根据与上述方法基本相同的方法进行，但是用另外的指示肿瘤细胞系代替T24-BAG细胞。测定可以用表达激活的K-ras基因的DLD-1-BAG人结肠癌细胞或表达激活的K-ras基因的SW620-BAG人结肠癌细胞进行。用其它的本领域已知的肿瘤细胞系，可以证明本发明化合物的抗其它类型的癌细胞的活性。
软琼脂测定：
无贴壁依赖性生长为致瘤细胞系的特征。将人肿瘤细胞悬浮于含有0.3％琼脂糖和指定浓度的法呢基转移酶抑制剂的生长培养基中。将溶液涂在用含有相同浓度的法呢基转移酶抑制剂作为上层的0.6％琼脂糖固化的生长培养基上。待上层固化后，将培养板于37℃、5％二氧化碳下孵育10-16天使集落生长。孵育后，将MTT(3-[4,5-二甲基-噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑鎓，噻唑兰)的溶液(1mg/ml的PBS溶液)涂于所述琼脂上进行集落染色。对集落进行计数并计算IC50。
结果列于表1中。 表1实施例号 式号 FPT IC50(nM) (H-ras)COS细胞IC50 (nM) 1 6.0 72 ---- 22 2.0 2.1 30 3 13.0 7.3 9 4 14.0 2.9 35 6 3.0 3.7 12 7 4.0 5 30 8 5.0 5.8 ---- 9 9.0 17.5,8.0 350 10 10.0 34.1 ---- 11 11.0 34.8 ---- 12 8.0 34％，于73nM下 ---- 13 7.0 20 50 14 12.0 5.7 400 15 14.1 54 ---- 16 14.2 80 ----
下列化合物的FPT IC50(K-ras)结果如下：2.0,8.2nM；3.0,16.4nM；4.0,14.2nM；5.0,22.9nM；10.0,52.5nM；12.0,23nM；13.0,10nM。
下列化合物的软琼脂IC50结果如下：2.0,50nM；3.0,100nM；4.0,250nM；7.0,＞250nM；13.0,100nM。
在由本发明所述的化合物制备药用组合物时，惰性的药学上可接受的载体可以为固体或液体。固体制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可含有约5-约70％的活性组分。适当的固体载体是本领域已知的，如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂为适合口服给药的固体剂型。
制备栓剂时，首先将低熔点的蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，搅拌下将活性组分均匀分散其中。将融化的均匀混合物倾至方便大小的模中，使其冷却并因此固化。
液体制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。适合胃肠外注射的实例为水或水-丙二醇溶液。
液体制剂也可以包括鼻内给药的溶液。
适合吸入的气雾剂制剂可包括溶液和粉末形式的固体，它们可以与药学上可接受的载体例如惰性压缩气体混合。
也包括固体制剂，在马上将使用前将其转化为供口服或胃肠外给药的液体制剂。此类液体制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。
也可以将本发明的化合物经皮给药。透皮组合物可以为软膏剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂，包括如常规本领域此目的的基质或药库型的透皮贴剂。
优选该化合物口服给药。
优选该药用制剂为单位剂型。为此类剂型时，该制剂可以分为含有适当量(如达到所需目的的有效量)的活性组分的单位剂量。
制剂的单位剂型中活性化合物的量可以根据特定用途在约0.1mg-1000mg、更优选在约1mg-300mg之间变化或调整。
根据病人的需要和治疗的疾病的严重程度可以改变使用的实际剂量。本领域技术人员可以决定具体情况下的合适剂量。一般而言，治疗以比该化合物的最佳剂量小的剂量开始。此后，逐渐增加剂量至在特定情况下达到最佳效果。为方便起见，可以将每日总剂量分开，并根据需要在全天中分次给药。
在考虑了各种因素如病人的年龄、身体状况和身高、体重以及治疗的症状的严重程度后，根据医师的判断调整本发明的化合物及其药学上可接受的盐的给药量和给药频率。口服给药的一般推荐剂量方案为每天10mg-2000mg、优选每天10-1000mg在全天分2-4次给药以阻断肿瘤生长。当在该剂量范围内给药时，所述化合物是无毒性的。
下列为含有本发明化合物的药用剂型的实施例。本发明的药用组合物方面的范围不受所提供的实施例的限制。
药物剂型实施例
实施例A-片剂序号 成分 mg/片 mg/片 1 活性化合物 100 500 2乳糖USP 122 113 3玉米淀粉，食用级，为纯水中10％的糊 30 40 4玉米淀粉，食用级 45 40 5硬脂酸镁 3 7合计 300 700
生产方法
使序号1和2的成分在适合的混合器中混合10-15分钟。将与序号3成分的混合物制粒。如果需要可通过粗筛(如1/4”,0.63cm)磨碎湿颗粒。干燥湿颗粒。如果需要，过筛干燥的颗粒并使其与序号4的成分混合10-15分钟。加入序号5的成分并混合1-3分钟。在合适的压片机上将该混合物压片成适当的大小和重量。
实施例B-胶囊序号成分mg/胶囊mg/胶囊 1活性化合物 100 500 2乳糖USP 106 123 3玉米淀粉，食用级 40 70 4硬脂酸镁NF 7 7合计 253 700
生产方法
使序号1、2和3的成分在适合的混合器中混合10-15分钟。加入序号4的成分并混合1-3分钟。在合适的胶囊填充机上将该混合物填入两节的硬明胶胶囊中。
尽管结合以上提出的具体实施方案介绍了本发明，它的许多另外的方案、修改和变化对本领域普通技术人员来说应是显而易见的。所有这些选择、修改和变化都将认为是在本发明的精神和范围内。