新型二羟基己酸衍生物 本发明涉及新型二羟基己酸衍生物、应用方法和含它们的药物组合物。
本发明的化合物是见于炎性细胞和免疫调制细胞(优选为白细胞和淋巴细胞)上的、与其受体CCR1结合的MIP-1α的有效的和选择性的抑制剂。CCR1受体有时也被称为CC-CKR1受体。这些化合物还抑制MIP-1α(及其相关的、被证实与CCR1相互作用的趋化因子(例如RANTES和MCP-3))诱导的THP-1细胞和人白细胞的趋化性，并且可能适用于治疗或预防：自身免疫病[例如类风湿性关节炎、I型糖尿病(新近发作)、炎性肠病、眼神经炎、牛皮癣、多发性硬化、风湿性多肌痛、眼色素层炎和脉管炎]，急性和慢性炎症(例如骨关节痛、成人呼吸窘迫综合症、婴儿呼吸窘迫综合症、局部缺血性再灌注损伤和肾小球炎)，变应性疾病(例如气喘和特应性皮炎)，与发炎相关的感染[例如病毒性炎症(包括流感和肝炎)和急性感染性多神经炎]，移植组织排异反应(慢性的和急性的)，器官排异反应(慢性的和急性的)，动脉粥样硬化，再狭窄，HIV感染性(共同受体应用)，以及肉芽肿病(包括结节病、麻风和结核病)。
MIP-1α和RANTES都是可溶性趋化肽(趋化因子)，它们是由炎性细胞，特别是CD8+淋巴细胞、多形核白细胞(PMNs)和巨噬细胞产生的，生物化学杂志(J．Biol．Chem．)，270(30)29671～29675(1995)。这些趋化因子通过引起关键炎性细胞和免疫调制细胞的迁移和活化而起作用。已在类风湿性关节炎患者、慢性和排斥组织移植物的患者的滑液中以及在接触过敏原后的过敏性鼻炎患者的鼻分泌物中发现了趋化因子含量的升高[Teran等，免疫学杂志(J．immunol．)，1806～1812(1996)，以及Kuna等，变态反应和临床免疫学杂志(J．Allergy Clin．Immunol．)321(1994)]。通过中和MIP-1α或基因破坏而干扰趋化因子／受体相互作用的抗体已为MIP-1α和RANTES在疾病中通过限制单核细胞和CD8+淋巴细胞的募集的作用提供了直接证据[Smith等，免疫学杂志，153，4704(1994)和Cook等，科学(Science)，269，1583(1995)]。该信息还阐明了CCR1拮抗剂在数种基于免疫的疾病的治疗方面应是有效的。其中描述地化合物是CCR1的高度可溶的、有效的和选择性的拮抗剂。
1990年5月8日发布的美国专利4，923，864涉及一些适用于治疗高血压的杂环己酰胺。
1989年2月23日公开的PCT公开WO89／01488涉及具有非肽键的肾素抑制肽。
1993年2月4日公开的PCT公开WO93／025057涉及据称可抑制逆转录病毒蛋白酶的二肽类似物。
1993年9月2日公开的PCT公开WO93／17003涉及据称可抑制逆转录病毒蛋白酶的其它二肽类似物。
1992年10月15日公开的PCT公开WO92／17490涉及含至少一种O-磷酸酯单酯或二酯的肽。据称该化合物具有抑制逆转录病毒的活性。
1996年4月24日公开的欧洲专利公开708，085涉及天冬氨酸蛋白酶抑制剂的抗病毒醚。
1997年2月26日提交的美国临时专利申请60／039169涉及其它己酸衍生物，它们也是与CCR1相互作用的MIP-1α／RANTES的拮抗剂。
本发明涉及式Ⅰ的化合物其中，所述化合物是：
喹喔啉-2-羧酸4(R)-甲氨酰-1(S)-(3-氯-苄基)-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺；
7，8-二氟-喹啉-3-羧酸(1S)-苄基-4(R)-甲氨酰-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺；
6，7，8-三氟-喹啉-3-羧酸(1(S)-苄基-4(R)-甲氨酰-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺；
喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(3-氟-苄基)-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺；
喹喔啉-2-羧酸(1(S)-苄基-2(S)，7-二羟基-4(R)-羟基甲氨酰-7-甲基-辛基]-酰胺；
喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(2-氯-苄基)-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺；
喹喔啉-2-羧酸[1(S)-(2-氟-苄基)-2(S)，7-二羟基-4(R)-羟基甲氨酰-7-甲基-辛基]-酰胺；
喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(2-氟-苄基)-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺；
喹喔啉-2-羧酸[1(S)-(3，4-二氟-苄基)-2(S)，7-二羟基-4(R)-羟基甲氨酰-7-甲基-辛基]-酰胺；
喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(3，4-二氟-苄基)-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺；或
喹喔啉-2-羧酸(4(R)-甲氨酰-2(S)，7-二羟基-7-甲基-1(S)-萘-1-基甲基-辛基]-酰胺；
及其药物上可接受的盐。
本发明还涉及式Ⅰ化合物的药物上可接受的酸加合盐。用于制备本发明的前述碱化合物药物上可接受的酸加合盐的酸是那些形成无毒的酸加合盐的酸，该酸加合盐即是含药理上可接受的阴离子的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、糖二酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和巴莫酸盐[即，1，1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]。
本发明还涉及式Ⅰ的碱加合盐。可用作试剂来制备呈酸性的那些式Ⅰ化合物的药物上可接受的碱盐的化学碱是与这样的化合物形成无毒的碱盐的那些碱。这样的无毒碱盐包括但不限于得自这样的药物上可接受的阳离子的那些，例如碱金属阳离子(例如，钾和钠)以及碱土金属阳离子(例如，钙和镁)，铵或者水溶性胺加合盐，例如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺)，以及低级烷醇铵和其它药物上可接受的有机胺的碱盐。
本发明还涉及一种用于治疗或预防哺乳动物(优选是人)中选自如下的障碍或病的药物组合物：自身免疫病[例如类风湿性关节炎、I型糖尿病(新近发作)、炎性肠病、眼神经炎、牛皮癣、多发性硬化、风湿性多肌痛、眼色素层炎和脉管炎]，急性和慢性炎症(例如骨关节痛、成人呼吸窘迫综合症、婴儿呼吸窘迫综合症、局部缺血性再灌注损伤和肾小球炎)，变应性疾病(例如气喘和特应性皮炎)，与发炎相关的感染[例如病毒性炎症(包括流感和肝炎)和急性感染性多神经炎]，移植组织排异反应，动脉粥样硬化，再狭窄，HIV感染性(共同受体应用)，以及肉芽肿病(包括结节病、麻风和结核病)；该组合物包含：一定量可有效地治疗或预防这样的障碍或病的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐，以及药物上可接受的载体。
本发明还涉及一种用于治疗或预防哺乳动物(优选是人)中可通过抑制与受体CCR1结合的MIP-1α而治疗或预防的障碍或病的药物组合物，该组合物包含：一定量可有效地治疗或预防这样的障碍或病的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐，以及药物上可接受的载体。这样的障碍和病的实例有前一段中列举的那些。
本发明还涉及一种治疗或预防哺乳动物(优选是人)中选自如下的障碍或病的方法：自身免疫病[例如类风湿性关节炎、I型糖尿病(新近发作)、炎性肠病、眼神经炎、牛皮癣、多发性硬化、风湿性多肌痛、眼色素层炎和脉管炎]，急性和慢性炎症(例如骨关节痛、成人呼吸窘迫综合症、婴儿呼吸窘迫综合症、局部缺血性再灌注损伤和肾小球炎)，变应性疾病(例如气喘和特应性皮炎)，与发炎相关的感染[例如病毒性炎症(包括流感和肝炎)和急性感染性多神经炎]，移植组织排异反应，动脉粥样硬化，再狭窄，HIV感染性(共同受体应用)，以及肉芽肿病(包括结节病、麻风和结核病)；该方法包括：给需要这种治疗或预防的哺乳动物施用一定量可有效地治疗或预防这样的障碍或病的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐。
本发明还涉及一种治疗或预防哺乳动物(优选是人)中可通过拮抗CCR1受体而治疗或预防的障碍或病的方法，该方法包括：给需要这种治疗或预防的哺乳动物施用一定量可有效地治疗或预防这样的障碍或病的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐。
本发明还涉及一种用于治疗或预防哺乳动物(优选是人)中选自如下的障碍或病的药物组合物：自身免疫病[例如类风湿性关节炎、I型糖尿病(新近发作)、炎性肠病、眼神经炎、牛皮癣、多发性硬化、风湿性多肌痛、眼色素层炎和脉管炎]，急性和慢性炎症(例如骨关节痛、成人呼吸窘迫综合症、婴儿呼吸窘迫综合症、局部缺血性再灌注损伤和肾小球炎)，变应性疾病(例如气喘和特应性皮炎)，与发炎相关的感染[例如病毒性炎症(包括流感和肝炎)和急性感染性多神经炎]，移植组织排异反应，动脉粥样硬化，再狭窄，HIV感染性(共同受体应用)，以及肉芽肿病(包括结节病、麻风和结核病)；该组合物包含：CCR1受体拮抗有效量的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐，以及药物上可接受的载体。
本发明还涉及一种用于治疗或预防哺乳动物(优选是人)中可通过拮抗CCR1受体而治疗或预防的障碍或病的药物组合物，该组合物包含：CCR1受体拮抗有效量的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐，以及药物上可接受的载体。
本发明还涉及一种用于治疗或预防哺乳动物(优选是人)中选自如下的障碍或病的方法：自身免疫病[例如类风湿性关节炎、I型糖尿病(新近发作)、炎性肠病、眼神经炎、牛皮癣、多发性硬化、风湿性多肌痛、眼色素层炎和脉管炎]，急性和慢性炎症(例如骨关节痛、成人呼吸窘迫综合症、婴儿呼吸窘迫综合症、局部缺血性再灌注损伤和肾小球炎)，变应性疾病(例如气喘和特应性皮炎)，与发炎相关的感染[例如病毒性炎症(包括流感和肝炎)和急性感染性多神经炎]，移植组织排异反应，动脉粥样硬化，再狭窄，HIV感染性(共同受体应用)，以及肉芽肿病(包括结节病、麻风和结核病)；该方法包括：给需要这种治疗或预防的哺乳动物施用CCR1受体拮抗有效量的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐。
本发明还包括含式Ⅰ化合物的前体药物的药物组合物和治疗或预防方法，该方法包括：施用式Ⅰ化合物的前体药物。具有游离氨基、酰氨基、羟基或羧基的式Ⅰ化合物可被转化成前体药物。前体药物包括这样的化合物：其中，一个氨基酸残基，或者两个或多个(例如二、三或四个)氨基酸残基的多肽链通过肽键以共价键连接到式Ⅰ化合物的游离氨基、羟基或羧基上。所述氨基酸残基包括通常由三个字母符号表示的20种天然氨基酸并且还包括：4-羟基脯氨酸、羟赖氨酸、锁链赖氨素、异锁链赖氨素、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。前体药物还包括这样的化合物：其中，碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通过前体药物侧链的羰基碳以共价键连接到式Ⅰ的上述取代基上。前体药物还包括这样的式Ⅰ化合物：其中，一个酰胺氮和一个羟基一起构成一个环基，如下式所示： 其中，R1和R2同式Ⅰ中的定义，U和V独立地是羰基、亚甲基、SO2或SO3，并且，b是0～3的整数，其中，每个亚甲基任选被羟基取代。
式Ⅰ的化合物可按下列反应图式和讨论制备。 图式1
图式1涉及具有准确立体化学结构的式Ⅰ化合物的制备
式Ⅰ的化合物或其任何中间体都可按照本领域普通技术人员熟知的方法通过柱色谱法分离，得式Ⅰ的纯化合物。
参照图式1，式Ⅰ的化合物可这样制备，即从式Ⅱ的化合物通过与氨或另一种挥发性低分子量胺在极性溶剂中在约-10℃～约35℃、优选在约30℃的温度下反应而制备。合适的溶剂包括：醇，例如甲醇、乙醇或丁醇；或者醚，例如甘醇二甲醚或二噁烷(可应用一种酸催化剂与一种醚溶剂)。优选地，该溶剂是甲醇。
式Ⅱ的化合物是通过式Ⅲ的化合物与式R1CO2H的酸(或其酰基氯，其中，R1是喹喔啉-2-羧酸、7，8-二氟-喹啉-3-羧酸或6，7，8-三氟喹啉-3-羧酸)偶联而制备。这种偶联反应通常是在约-30℃～约80℃、优选约0℃～约25℃的温度下进行的。活化羧酸官能度的合适的偶联剂实例有：二环己基碳二亚胺／羟基苯并三唑(DCC／HBT)、N-3-二甲氨基丙基-N’-乙基碳二亚胺(EDC)／HBT、2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)、碳酰二咪唑(CDI)／二甲氨基吡啶(DMAP)和二乙基氰化磷酰。偶联是在惰性溶剂、优选为非质子溶剂(例如乙腈、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺)中进行。优选的溶剂是二氯甲烷。
至于酰胺偶联所应用的其它条件的讨论，参见Houben-Weyl，Vol．ⅩⅤ，第Ⅱ部分，E．Wunsch编辑，George Theime Veriag，1974，Stuttgart，以及描述于下列文献中的那些：M．Bodanszky，肽合成原理(Principles ofPeptide Synthesis)，Springer-Verlag，Berlin(1984)和肽，分析，合成和生物学(The Peptides，Analysis，Synthesis and Biology)(E．Gross和J．Meienhofer编辑)，Vois 1～5，(Academic Press，NewYork)1979～1983。
式Ⅲ的化合物可通过式Ⅳ化合物的去保护和烯烃水解，通过与三氟乙酸的反应制备。式P的合适的保护基包括叔丁氧羰基。
式Ⅳ的化合物可通过式Ⅴ的化合物与4-溴-2-甲基-2-丁烯在强碱存在下在非质子极性溶剂中的反应而制备。合适的碱包括二烷基氨基化锂[例如N-异丙基-N-环己基氨基化锂(LDA)]或氢化钾。合适的溶剂包括：醚(例如THF、甘醇二甲醚或二噁烷)、苯或甲苯，优选为THF。上述反应在约-78℃～约0℃、优选在约-78℃下进行。
式Ⅴ的化合物可通过本领域普通技术人员熟知的方法制备或者可商购。具体地说，式Ⅴ的化合物可通过Fray等的方法[有机化学杂志(J．Org，Chem．)，51，4828～4833(1986)]应用下式的(S)-醛制备
式Ⅶ的化合物是这样制备的：将氨基酸或氨基酯还原成醇[Stanfield等，有机化学杂志，46，4799～4800(1981)，Soai等，日本化学学会通报(Bull．Chem．Soc．Jpn．)，57，2327(1984)]，接着将该醇氧化成式Ⅶ的醛[Luly等，有机化学杂志，53(26)，6109～6112(1988)和Denis等，有机化学杂志，56(24)，6939～6942(1991)]。非天然氨基酸可按Myers等，四面体通讯(Tet．Lett．)，36，(1995)和Myers等，美国化学学会会志(J．Am．Chem．Soc．)，117，8488～8489(1995)的方法制备。
或者，式Ⅴ的化合物还可通过DeCamp等，[四面体通讯(TetrahedronLett．)，32，1867(1991)]的方法制备。
除非另外指明，上述每一反应的压力都不是关键性的。通常，这些反应将在约一个～约三个大气压的压力下，优选在常压(约一个大气压)下进行。
呈碱性的式Ⅰ化合物能与各种无机酸和有机酸形成种种不同的盐。虽然这样的盐必须是给动物施用的药物上可接受的盐，但通常在实施中需要先作为药物上不可接受的盐而从反应混合物分离式Ⅰ的化合物，再通过用碱性试剂处理而简单地将后者变回游离碱化合物，接着将该游离碱变成药物上可接受的酸加合盐。本发明的碱化合物的酸加合盐容易通过用大致等当量的选定的无机酸或有机酸在水性溶剂介质或在合适的有机溶剂(例如甲醇或乙醇)中处理该碱化合物而制备。在小心地蒸发溶剂后，得所需的固体盐。
用于制备本发明的碱化合物的药物上可接受的酸加合盐的酸是那些形成无毒的酸加合盐的酸，该酸加合盐即是含药理上可接受的阴离子的盐，例如：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或酸式磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐或酸式柠檬酸盐、酒石酸盐或酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、糖二酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐和巴莫酸盐[即1，1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]。
还呈酸性的式Ⅰ的那些化合物能与各种药理上可接受的阳离子形成碱盐。这样的盐的实例包括碱金属盐或碱土金属盐，尤其是钠盐和钾盐。这些盐都是通过常规技术制备的。用作试剂而制备本发明的药物上可接受的碱盐的化学碱是与本文所述式Ⅰ的酸性化合物形成无毒的碱盐的那些。这些无毒的碱盐包括得自诸如钠、钾、钙和镁这样的药理上可接受的阳离子的那些。这些盐可容易地通过下列方法制备：用含所需的药理上可接受的阳离子的水溶液处理相应的酸性化合物，然后优选在减压下将形成的溶液蒸发至干。或者，它们还可这样制备：将所述酸性化合物的低级链烷醇溶液与所需的碱金属醇盐一起混合，然后按与前述相同的方式将形成的溶液蒸发至干。在任一情况下，优选应用化学计算量的试剂以保证反应完全和最大产率。
式Ⅰ的化合物及其药物上可接受的盐(下文合起来称为“活性化合物”)是CCR1受体的有效拮抗剂。该活性化合物适用于治疗或预防自身免疫病[例如类风湿性关节炎、I型糖尿病(新近发作)、炎性肠病、眼神经炎、牛皮癣、多发性硬化、风湿性多肌痛、眼色素层炎和脉管炎]，急性和慢性炎症(例如骨关节痛、成人呼吸窘迫综合症、婴儿呼吸窘迫综合症、局部缺血性再灌注损伤和肾小球炎)，变应性疾病(例如气喘和特应性皮炎)，与发炎相关的感染[例如病毒性炎症(包括流感和肝炎)和急性感染性多神经炎]，移植组织排异反应，动脉粥样硬化，再狭窄，HIV感染性(共同受体应用)，以及肉芽肿病(包括结节病、麻风和结核病)。
本发明的化合物的活性可按本领域普通技术人员已知的方法估测。测定CCR1诱导的迁移的公认方法实例可见于Coligan，J．E．，Kruisbeek，A．M．，Margulies，D．H．，Shevach，E．M．，Strober，W．编辑：免疫学中的现行方案(Current Protocols in Immunology)6．12．1～6．12．3(JohnWiley and Sons，NY，1991)。下面详细描述了一个如何测定化合物抑制迁移的活性的具体实例。
趋化性分析：
可应用具有一个5微米聚碳酸酯滤器的标准48孔或96孔Boyden室评估化合物抑制对各种趋化因子的趋化性的能力。所有试剂和细胞都可在补加了1mg／ml牛血清白蛋白的标准RPMI(BioWhitikker Inc．)组织培养基中配制。简单地说，将MIP-1α(Peprotech，Inc．，P．O．Box 275，Rocky Hill NJ)或其它试验兴奋剂置于Boyden室的下方室中。然后装上聚碳酸酯滤器并固定上方的室。选定的兴奋剂的量是该系统中被确定为给出趋化性的最大量(例如，就MIP-1α来说，1nM应是合适的)。
然后，就可将通过标准技术分离的THP-1细胞(ATCC TIB-202)、初级人单核细胞或初级淋巴细胞一式三份地与各种浓度的试验化合物一起加到上方室中。化合物稀释液可应用标准血清学技术配制并在添加到室中之前与细胞混合。
在37摄氏度下适当保温期(例如，对THP-1细胞来说为3．5小时，对初级淋巴细胞来说是90分钟)后，取出该室，吸出上方室中的细胞，擦拭滤器的上部，可按下列方法测定细胞迁移数。
就THP-1细胞来说，可将该室(由Neuroprobe制造的96孔型)离心而使细胞偏离下方室，可通过染料荧光素二乙酸酯(fluorocein diacetate)的颜色变化对照标准曲线定量分析细胞数。
就初级人单核细胞或淋巴细胞来说，可用Dif Quik_染料(AmericanScientific Products)将滤器染色，于是就可用显微镜法测定细胞迁移数。
将所述化合物存在下的细胞迁移数除以对比孔中(不含该化合物)的细胞迁移数。商数是该化合物的％抑制，然后，可应用标准制图法将该商数对应用的化合物浓度绘图。再应用曲线拟合分析法对所有测试的浓度测定50％抑制点。对所有数据点的曲线拟合必须具有＞90％的相关系数(R平方)就被认为是有效分析。
在该趋化性分析中，所有被测试的本发明化合物都具有小于25μM的IC50。
本发明的组合物可按常规方法应用一种或多种药物上可接受的载体配制。这样，本发明的活性化合物可被配制供经口、经颊、鼻内、肠胃外(例如，静脉内、肌内或皮下)或者经直肠施药或者呈适合通过吸入或吹入施药的形式。本发明的活性化合物还可被配制供持续送递。
至于经口施药，药物组合物可呈例如通过常规方法用下列物质制备的片剂或胶囊的形式，即用药物上可接受的赋形剂，例如粘合剂(例如，预糊化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或者润湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)。该片剂可通过本技术熟知的方法包衣。供口服的液体制剂可呈例如溶液、糖浆剂或悬浮剂的形式，或者它们可作为干产品提供，在应用前用水或其它合适的载体配制。这样的液体制剂可通过常规方法用下列物质制备，即用药物上可接受的添加剂，例如悬浮剂(例如，山梨糖醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水载体(例如，杏仁油、油性酯或乙醇)；以及防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或者山梨酸)。
至于经颊施药，该组合物可呈按常规方法配制的片剂或锭剂的形式。
本发明的活性化合物可被配制供肠胃外施药，即通过注射(包括应用常规插管法)或输注。注射用制剂可呈单位剂型提供，例如，在添加了防腐剂的安瓿或多剂量容器中。所述组合物可呈处于油性或水性载体中的悬浮剂、溶液或乳剂的形式，并且可含有配制剂(formulating agents)，例如悬浮剂、稳定剂和／或分散剂。或者，所述活性组分可呈粉末形式，供使用前用合适的载体(例如，灭菌无热原水)复制。
本发明的活性化合物还可被配成直肠用组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如，含常规栓剂基质(例如可可脂或其它甘油酯)。
至于鼻内施药或通过吸入施药，本发明的活性化合物就便呈溶液或悬浮剂的形式从泵喷雾容器(由患者挤压或抽吸)送递，或者作为气溶胶喷雾剂，应用合适的喷射剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)从加压的容器或喷雾器给药。就加压的气溶胶来说，剂量单位可通过提供一个阀而送递计量的量来确定。所述加压的容器或喷雾器可盛有活性化合物的溶液或悬浮液。胶囊和吸入器或吹入器中应用的弹射剂(例如，从明胶制备)可被配制成含本发明的化合物和合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
用于给普通成人经口、肠胃外或经颊施药而治疗前述疾病(例如，类风湿性关节炎)的本发明的活性化合物的建议剂量是每单元剂量为0．1～1000mg该活性组分，它可被例如每天1～4次施药。
用于治疗普通成人中上述疾病(例如，类风湿性关节炎)的气溶胶制剂优选被这样装配，以致气溶胶的每次计量的剂量或“一喷”含20μg～1000μg本发明的化合物。施用气溶胶的全部日剂量将在0．1mg～1000mg的范围内。可以每天数次(例如2、3、4或8次)施药，每次给出例如1、2或3个剂量。
所述活性剂可按本领域普通技术人员熟知的方法配制而供持续送递。这类制剂的实例可见于美国专利3，538，214、4，060，598、4，173，626、3，119，742和3，492，397中。
本发明的化合物还可被用于和其它治疗剂的结合疗法中，例如与免疫抑制剂，例如环孢菌素A和FK-506、Cellcept_、雷怕霉素、leuflonamide；或者与经典的抗炎剂(例如环加氧酶／脂肪氧化酶抑制剂)，例如替尼达帕、阿斯匹林、对乙酰氨基酚、萘普生和吡罗昔康；类固醇，包括泼尼松、硫唑嘌呤；以及生物制剂，例如OKT-3、抗IL-2单克隆抗体(例如TAC)。
本发明的化合物具有出乎意外的溶解性，这是不能根据1997年2月26日提交的美国专利申请60／039169预计的。明确地说，本发明的全部化合物的溶解性至少比基于美国临时申请60／039169的化合物所能期望的好13倍。具体地说，当按下述动力学溶解度检测法(kinetic solubilityassay)检测时，喹喔啉-2-羧酸(2(S)-羟基-6-甲基-4(R)-甲基甲氨酰-1(S)-萘-2-基甲基-庚基]-酰胺(实施例127)和N-1(S)-苄基-4(R)-甲氨酰-7-氟-2(S)-羟基-7-甲基-辛基)-5，6-二氯-烟酰胺(实施例247)的溶解度都小于5μg／mL。
如下实施例阐述了本发明化合物的制备。熔点未经校正。NMR数据是以每百万的份数(δ)报道的，并参照样品溶剂(氘氯仿，除非另有说明)的氘锁峰信号定位。商品化试剂未进一步纯化就直接用。THF表示四氢呋喃。DMF表示N，N-二甲基甲酰胺。色谱法指应用32～63mm硅胶和在氮气压力(急骤色谱)条件下操作的柱色谱。低分辨质谱(LRMS)或者是在应用化学电离(铵)的Hewlett Packard 5989_上记录的，或者是在应用50／50乙腈／水的混合物以0．1％甲酸作为离子化剂的Fisons(或微型质谱)大气压化学电离(APCI)台上记录的。室温或常温指20～25℃。所有非水反应都是在为方便起见的氮气氛中进行的并进行到最大产率。在减压下浓缩表示应用了旋转式蒸发器。本发明的化合物名称是通过Beistein信息系统GmbH(ISBN 3-89536-976-4)的Autonom 2．0 PC-batch version产生的。
所述化合物的溶解度是通过动力学溶解度检测法[例如描述于高级药物送递综述(Advanced Drug Delivery Review)，23，3～25(1997)中的方法]测定的。下文描述了高级药物送递综述，23，3～25(1997)中描述的方法的一个实施方案。本领域普通技术人员将会明白，可通过很多不同的方法测定溶解度。
所述化合物的溶解度是在四个固定的浓度下测定的并以μg／mL表示。溶解性或不溶性是应用浊度计板式读出器通过自动微量添加预先溶于DMSO中的化合物而在磷酸盐缓冲液中测定的。在50、100、200和250或者100、200、400和500微克／mL时的溶解性可通过预先将1mg化合物溶于足量DMSO中达到20或40μg／μL的初始浓度而测定。
将200uL pH 7磷酸盐缓冲原液注入一个spectramax 250UV透明的96孔微量培养板中。对于微量培养板中只含pH缓冲液的每个孔，取一组在5×5基质中波长为492nm处的25个吸收读数。将该扫描用作“空白”，并将原始光色散(OD)值用作基线。
然后将化合物的DMSO溶液(逐行地)加到下方的微量培养板上。分析了多达二十四个样品，将每种化合物逐行地置于四个相邻的孔中。微量培养板的每行含呈递增浓度的四个浓度的化合物并以递升的列顺序(A～D)或行(E～H)。加到每个孔的DMSO原液体积在缓冲液孔体积的0．25～1．25％范围内。再将该培养板振荡20分钟使之混合。
标准分配方法：列μL，体积μg，溶于DMSO中的化合物％DMSOA0．5200．25B1．0200．50C2．0201．00D2．5201．25列μL，体积μg，溶于DMSO中的化合物％DMSOE0．5400．25F1．0400．50G2．0401．00H2．5401．25
在添加化合物后，对于微量培养板中每个孔，取第二次扫描的一组在5×5基质中与第一次空白扫描相同的波长处的25个吸收读数。从5×5基质中相应的“空白”值减去5×5基质中关于每个读数的原始化合物OD值而得原始溶解性OD数据。
然后，应用直观Basic计算机程序分析得自Tecan SLT光谱图象读出器的数据(或者可按本领域普通技术人员熟知的方法人工计算)，以便为每种化合物提供溶解度数据。当吸收度值大于基线值的三倍时，就认为该化合物析出溶液。本发明的全部化合物溶解度都大于100μg／mL。
制备1
方法A
烯丙位烷基化
{1(S)-[4(R)-(3-甲基-丁-2-烯基)-5-氧代-四氢-呋喃-2(S)-基]-2-苯基-乙基}-氨基甲酸叔丁酯
在氮气氛中往火焰干燥过的圆底烧瓶中添加四氢呋喃(40mL)，接着添加1，1，1，3，3，3-六甲基二硅烷基胺(8mL， 37．8mmol)。将该混合物冷却到0℃，添加正丁基锂(14．5mL的2．5M己烷溶液，36．0mmol)。将该混合物搅拌15分钟，再在干冰／丙酮浴中冷却到-78℃。通过注射器滴加溶于四氢呋喃(50mL)的{1(S)-[5-氧代-四氢-呋喃-2(S)-基]-2-苯基-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(5g，16．4mmol)[通过Fray在有机化学杂志，(51)4828(1986)中描述的方法制备的]并继续搅拌30分钟。用注射器滴加4-溴-2-甲基-2-丁烯(2．07mL，18．0mmol)于40mL THF中的溶液。继续搅拌3小时，在此期间，温度升到-60℃。通过缓慢添加饱和氯化铵水溶液(25mL)猝灭该混合物。在暖至室温时，用乙醚(300mL)稀释该溶液，转入分液漏斗。用饱和柠檬酸水溶液(2×100mL)、饱和碳酸氢钠(NaHCO3)水溶液(2×100mL)和100mL盐水洗涤有机相。在硫酸镁(MgSO4)上干燥有机层，减压除去溶剂。薄层色谱法[在1∶2己烷／乙醚(Et2O)中]表明产品的Rf为0．8。在硅胶(225g)上用色谱法处理(用2∶1己烷／乙醚洗脱)生成的粗油而提供4．73g(77％)标题化合物。TLC：1∶2己烷／Et2O Rf：0．8。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7．27ppm(5H，m)，5．02(1H，b)，4．52(1H，d，J=9. 3Hz)，4. 42(1H，t，J=7. 1Hz)，3. 98(1H，dt，J=8. 5，7. 8Hz)，2．93(2H，m)，2．88(1H，b)， 2．68(1H，m)，2．41(1H，m)，2．24(1H，m)，1．92(1H，m)，1．65(3H，s)，1．58(3H，s)，1．37(9H，s)。
方法B
喹喔啉-2-羧酸1(S)-苄基-4(R)-甲氨酰-2(S)，7-二羟基-7-甲基-辛基)-酰胺
往方法A得到的内酯(100mg，0．27mmol)中加入纯三氟乙酸(1mL)。将形成的溶液搅拌1h，在真空下除去三氟乙酸。将剩下的残余物在二氯甲烷(10mL)和三乙胺(0．15mL，1．07mmol)中溶剂化。以固体形式添加喹喔啉基氯(58mg，0．3mmol)，将混合物搅拌18h。将混合物转入分液漏斗，用柠檬酸(2×10mL)、NaHCO3(10mL)和盐水(10mL)洗涤。干燥(MgSO4)有机层，将溶剂过滤。真空浓缩滤液，在硅胶(10g)上用色谱法处理(用2∶1己烷∶乙酸乙酯洗脱)形成的残余物而提供99mg喹喔啉酰胺。将该物质在MeOH中溶剂化并鼓泡通入氨气达5min。搅拌形成的溶液达16h，在真空下除去溶剂。将剩下的残余物重结晶(二氯甲烷／甲醇／己烷)而提供标题化合物(90mg，72％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)：d9．38(1H，s)，8．21(1H，dd，J=4．4，2．5Hz)，8．14(1H，dd，J=4．4，2．5Hz)，7．93(2H，m)，7．26(2H，d，J=6．9Hz)，7．17(2H，t，J=7．1Hz)，7．09(1H，t，J=7．3Hz)，4．30(1H，m)，3．75(1H，m)，3．03-2．98(2H，m)，2．47(1H，m)，1．77(1H，m)，1．56(2H，m)，1．4(2H，m)，1．07(6H，s)。
实施例1
喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-2(S)，7-二羟基-7-甲基-1(S)-噻吩-2-基甲基-辛基)酰胺
在氮气氛中往火焰干燥过的圆底烧瓶中添加四氢呋喃(5mL)，接着添加1，1，1，3，3，3-六甲基二硅烷基胺(0．78mL，3．7mmol)。将该混合物冷却到0℃，添加正丁基锂(1．4mL的2．5M己烷溶液，3．38mmol)。搅拌该混合物达15分钟，再在干冰／丙酮浴中冷却到-78℃。通过注射器滴加溶于四氢呋喃(6mL)的{1(S)-[5-氧代-四氢-呋喃-2(S)-基]-2-噻吩基-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(500mg，1．61mmol)[应用BOC-L-2-噻吩基丙氨酸作原料通过Fray在有机化学杂志，(51)4828(1986)中描述的方法制备的]并继续搅拌30分钟。用注射器滴加4-溴-2-甲基-2-丁烯(0．21mL，1．77mmol)于5mL THF中的溶液。继续搅拌3小时，在此期间，温度升到-60℃。通过缓慢添加饱和氯化铵水溶液猝灭该混合物。在暖至室温时，用乙醚稀释该溶液，转入分液漏斗。用饱和柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠(NaHCO3)水溶液和盐水洗涤有机相。在硫酸镁(MgSO4)上干燥有机层，减压除去溶剂。薄层色谱法[在2∶1己烷／乙醚(Et2O)中]表明产品的Rf为0．25。在硅胶上用色谱法处理(用2∶1己烷／乙醚洗脱)生成的粗油而提供450mg(74％)内酯。
往上述内酯(450mg，1．19mmol)中加入纯三氟乙酸(4．5mL)。将形成的溶液搅拌1小时，在真空下除去三氟乙酸。将形成的胺盐(100mg，0．34mmol)在二氯甲烷(15mL)和三乙胺(0．2mL，1．34mmol)中溶剂化。以固体形式添加喹喔啉基氯(71mg，0．37mmol)，将混合物搅拌18小时。将混合物转入分液漏斗，用柠檬酸、NaHCO3和盐水洗涤。干燥(MgSO4)有机层，将溶剂过滤。真空浓缩滤液，在硅胶上用色谱法处理(用2∶1己烷∶乙酸乙酯洗脱)形成的残余物而提供108mg(71％)喹喔啉酰胺。将该物质在MeOH中溶剂化并鼓泡通入氨气达5分钟。搅拌形成的溶液达16小时，在真空下除去溶剂。将剩下的残余物重结晶(二氯甲烷／甲醇／己烷)而提供标题化合物(60mg，53％)。熔点(MP)158～159。低分辨质谱(LRMS)471、453、436。溶解度大于250mg／mL。
表1涉及通过与制备1和实施例1的方法类似的方法制备的式Ⅰ化合物。
表1实施例IUPAC名称熔点LRMS溶解度2喹喔啉-2-羧酸4(R)-甲氨酰-1(S)-(3-氯-苄基)-2(S),7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺161-163499,481,464＞100μg/ml37,8-二氟-喹啉-3-羧酸1(S)-苄基-4(R)-甲氨酰-2(S),7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺171-173501,484＞250μg/ml4喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(3-氟-苄基)-2(S),7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺153-155483,465,448＞250μg/ml56,7,8-三氟-喹啉-3-羧酸(1(S)-苄基-4(R)-甲氨酰-2(S),7-二羟基-7-甲基-辛基)-酰胺185-188519,502＞250μg/ml6喹喔啉-2-羧酸(1(S)-苄基-2(S),7-二羟基-4(R)-羟基甲氨酰-7-甲基-辛基)-酰胺108-110482,464,447＞250μg/ml7喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(2-氯-苄基)-2(S),7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺481,464＞250μg/ml8喹喔啉-2-羧酸[1(S)-(2-氟-苄基)-2(S),7-二羟基-4(R)-羟基甲氨酰-7-甲基-辛基]-酰胺130-131499＞250μg/ml9喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(2-氟-苄基)-2(S),7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺147-148483＞250μg/ml10喹喔啉-2-羧酸[1(S)-(3,4-二氟-苄基)-2(S),7-二羟基-4(R)-羟基甲氨酰-7-甲基-辛基]-酰胺150-153517,499,466＞200μg/ml11喹喔啉-2-羧酸[4(R)-甲氨酰-1(S)-(3,4-二氟-苄基)-2(S),7-二羟基-7-甲基-辛基]-酰胺110-120501,483,466＞250μg/ml12喹喔啉-2-羧酸(4(R)-甲氨酰-2(S),7-二羟基-7-甲基-1(S)-萘-1-基甲基-辛基)-酰胺155-158515,497,480＞250μg/ml