四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B及其提取方法和药物用途.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201410772590.X

申请日:

20141216

公开号:

CN104387434A

公开日:

20150304

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:

IPC分类号:

C07J17/00,A61P9/12

主分类号:

C07J17/00,A61P9/12

申请人:

吉林农业大学

发明人:

赵岩,张连学,唐国胜,蔡恩博,许永华,郜玉钢,雷锋杰,何忠梅,刘学周

地址:

130118 吉林省长春市新城大街2888号

优先权:

CN201410772590A

专利代理机构:

代理人:

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内容摘要

本发明涉及一种四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B及其提取方法和其药物用途。属于新化合物及其药物用途。以人参和茯苓为原料,经过粉碎、高温高压处理、干燥、氯仿提取、硅胶柱层析、重结晶方法,得到了四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B,其化学名称为:四氢呋喃-2-甲酸(3S,10R,13R)-10,13-二甲基-17-((2R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊[a]菲-3-酯。四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B在制备治疗高血压的药物中的应用。

权利要求书

1.一种如下式的四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B:其化学名称为四氢呋喃-2-甲酸(3S,10R,13R)-10,13-二甲基-17-((2R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊[a]菲-3-酯。 2.一种如权利要求1所述的四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B的提取方法:其特征在于包括下列步骤:(1)加工:取茯苓,粉碎,加5~10倍量水,高温高压处理2~4h,过滤,得茯苓浸出液;另取生晒参,粉碎,以上述茯苓浸出液浸润后,高温高压蒸制4~8h,取出,干燥,即得人参茯苓高温高压处理产物;(2)提取:取步骤(1)中的人参茯苓高温高压处理产物,以氯仿浸提1~3次,每次加5~10倍量氯仿,合并氯仿提取液,蒸干,得氯仿提取物;(3)分离:取步骤(2)中的氯仿提取物,以硅胶为吸附剂进行柱层析,以石油醚-二氯甲烷(20:1~1:1)进行梯度洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B粗品,再进行硅胶柱层析,以石油醚-丙酮(10:1)为洗脱剂洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,以石油醚-丙酮重结晶,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B;步骤(1)中所述的高温高压是指温度110~135℃,或压力0.05~0.22MPa。 3.如权利要求1所述的四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B在制备治疗高血压的药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B及其提取方法和其药物用途。属于新化合物及其药物用途。

背景技术

人参Panax giseng C.A.Mey.为五加科人参属植物。其中,Panax希腊文的含义是“万能药”,人参的满语发音为“奥尔厚达”,是“百草之王”之意。作为传统药材,具有数千年的历史,在世界各国广泛应用。人参大补元气,复脉固脱,补脾益肺,生津,安神。

茯苓,为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。多于7~9月采挖,挖出后除去泥沙,堆置“发汗”后,摊开晾至表面干燥,再“发汗”,反复数次至现皱纹、内部水分大部散失后,阴干,称为“茯苓个”;或将鲜茯苓按不同部位切制,阴干,分别称为“茯苓块”和“茯苓片”。归心、肺、脾、肾经。利水渗湿,健脾,宁心。用于水肿尿少,痰饮眩悸,脾虚食少,便溏泄泻,心神不安,惊悸失眠。

高血压是以体循环动脉压增高为主要表现的临床综合征,是最常见的心血管疾病。原发性高血压的发病因素主要有两大类,一类是内因,如遗传;另一类是外因,如精神紧张、食盐过多、吸烟、肥胖、酗酒、缺乏运动等。长期高血压可影响到心、脑、肾等器官的功能,最终导致这些器官功能的衰竭。高血压属多发病,上世纪80年代,中国高血压发病率为7.7%;到了本世纪初,迅速上升到18.8%;而近10年,高血压的患病率增长了31%。目前,我国高血压病人估计已超过2亿,而且这一趋势仍会继续延续,短时期内不太可能出现逆转。如果再不加以控制,在今后的15年中将增长50%。降压药物种类主要包括利尿药、β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂。这些药物具有一定的副作用,如心脏抑制、代谢异常、肾脏损害等。且具有我国自主知识产权的降血压药物较少。

课题组在人参加工产品研究与开发过程中,发现人参与茯苓共同加工处理(高温高压)后的产物具有较强的血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用,进一步进行活性成分追踪,分离得到了一个新化合物,其化学名称为:四氢呋喃-2-甲酸(3S,10R,13R)-10,13-二甲基-17-((2R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊[a]菲-3-酯[(3S,10R,13R)-17-((2R,E)-5,6-dimethylhept-3-en-2-yl)-10,13-dimethyl-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl tetrahydrofuran-2-carboxylate],简称四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B,经测定该化合物对ACE的半数抑制率(IC50)达到26μg/mL。进一步分析四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B的来源,该化合物在人参、茯苓、人参高温高压处理产物、茯苓高温高压处理产物中均未被检出,说明该化合物是人参、茯苓组方并在高温高压处理后产生的。四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B有望成为新的降血压药物。

发明内容

本发明提供一种四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B及其提取方法和其药物用途。

一种如下式的四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B:

四氢呋喃-2-甲酸(3S,10R,13R)-10,13-二甲基-17-((2R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊[a]菲-3-酯[(3S,10R,13R)-17-((2R,E)-5,6-dimethylhept-3-en-2-yl)-10,13-dimethyl-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl tetrahydrofuran-2-carboxylate]

本发明的目的还在于利用人参和茯苓为原料,经过粉碎、高温高压处理、干燥、氯仿提取、硅胶柱层析、重结晶方法,制备一种具有较强生物活性的新物质。

为实现上述发明目的,需要下述工艺来实现:

(1)加工:取茯苓,粉碎,加5~10倍量水,高温高压处理2~4h,过滤,得茯苓浸出液;另取生晒参,粉碎,以上述茯苓浸出液浸润后,高温高压蒸制4~8h,取出,干燥,即得人参茯苓高温高压处理产物;

(2)提取:取步骤(1)中的人参茯苓高温高压处理产物,以氯仿浸提1~3次,每次加5~10倍量氯仿,合并氯仿提取液,蒸干,得氯仿提取物;

(3)分离:取步骤(2)中的氯仿提取物,以硅胶为吸附剂进行柱层析,以石油醚-二氯甲烷(20:1~1:1)进行梯度洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B粗品,再进行硅胶柱层析,以石油醚-丙酮(10:1)为洗脱剂洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,以石油醚-丙酮重结晶,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B。

本发明四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B在制备治疗高血压的药物中的应用。

当本发明用于制备治疗高血压的药物时,其口服或胃肠外给药,均是安全的。在口服情况下,其可以任何常规形式给药,如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等;当该药物肠胃外给药时,可采取任何常规形式,例如静脉内注射剂、软膏剂、栓剂、和吸入剂等。

本发明制备治疗高血压的的药物是由有效成分单体或有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的,这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的,下面举几个具体例子,散剂是内服的粉末剂,它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁,碳酸氢钠、干燥酵母等;溶液剂的赋形剂有水、甘油、1,2-丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等;软膏剂的赋形剂可以使用脂油,含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。

本发明的有益效果在于,新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B可用于制备降血压药物,具有疗效显著的特点,其对ACE抑制的IC50可达26μg/mL。

具体实施方式

实施例1:

取茯苓200g,粉碎,加水2L,高温高压处理4h,过滤,得茯苓浸出液;另取生晒参1000g,粉碎,以上述茯苓浸出液浸润后,高温高压蒸制4h,取出,干燥,即得人参茯苓高温高压处理产物;所得的人参茯苓高温高压处理产物,以氯仿浸提3次,每次5L,合并氯仿提取液,蒸干,得氯仿提取物;所得的氯仿提取物,以硅胶为吸附剂进行柱层析,以石油醚-二氯甲烷(20:1~1:1)进行梯度洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B粗品,再进行硅胶柱层析,以石油醚-丙酮(10:1)为洗脱剂洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,以石油醚-丙酮重结晶,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B。

1.结构鉴定:

MS:质谱测定其分子离子峰为494.2,结合IR、1H NMR、13C NMR确定其分子式为C33H50O3。

IR光谱:3081 cm-1为双键碳氢伸缩振动峰(υCH),2988-2769 cm-1为饱和烷烃碳氢键的伸缩振动峰(υCH),证明饱和烷烃基团的存在;1736 cm-1为羰基的伸缩振动峰(υC=O),说明该化合物中存在羰基;1688 cm-1为υC=C,说明碳碳双键的存在;1380 cm-1、1368 cm-1为甲基的变形振动峰(δCH3)。

1H NMR (300 MHz, CDCl3) δppm:5.480 (d, 1H, J=5.7Hz)、5.292 (d, 1H, J=5.7Hz)、5.119 (dd, 1H, J=4.2,7.2Hz)、5.080 (dd, 1H, J=4.2,7.2Hz)为甾体母核6、7、3’、4’位烯氢信号,4.675 (m, 1H)为四氢呋喃-2-甲酸2位氢信号,4.344 (m, 1H)为甾体母核3位连氧碳上氢信号,3.938 (dd, 1H, J=7.2,14.4Hz)、3.831 (m, 1H)为四氢呋喃-2-甲酸5位上两个氢的信号,0.950 (d, 3H, J=6.9Hz)、0.855 (s, 3H)、0.829 (d, 3H, J=6.6Hz)、0.752 (d, 3H, J=6.6Hz)、0.736 (d, 3H, J=6.3Hz)、0.528 (s, 3H)为甾体母核及17位侧链上6个甲基氢信号,2.492~0.444为甾体母核及17位侧链和四氢呋喃-2-甲酸其它饱和碳上氢信号,以上数据说明甾体结构和四氢呋喃甲酸的存在。

13C NMR (75 MHz, CDCl3) δppm:碳谱数据共给出33个碳信号,具体如下。171.83为羰基碳信号,137.23、119.26、115.22、140.53、134.49、130.90为甾体母核C5、C6、C7、C8、C3’、C4’不饱和碳信号,75.78、72.22、68.29分别为四氢呋喃-2-甲酸2位、甾体母核3位、四氢呋喃-2-甲酸5位连氧碳信号,54.62、53.45、44.94、41.75、39.40、37.94、36.80、36.01、35.48、32.02、29.21、27.24、26.96、24.14、21.93、20.06、19.96、18.91、18.60、16.56、15.11、11.00为甾体母核及17位侧链及四氢呋喃-2-甲酸基团其它的饱和碳信号。

结合1H NMR、13C NMR及IR光谱进一步综合分析确定该化合物为四氢呋喃-2-甲酸(3S,10R,13R)-10,13-二甲基-17-((2R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊[a]菲-3-酯[(3S,10R,13R)-17-((2R,E)-5,6-dimethylhept-3-en-2-yl)-10,13-dimethyl-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl tetrahydrofuran-2-carboxylate],简称四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B,经文献检索,该化合物为未见文献报道的新化合物。该化合物的具体NMR信号归属如下:

1H NMR (300 MHz, CDCl3) δppm:5.480 (d, 1H, J=5.7Hz, 6-H),5.292 (d, 1H, J=5.7Hz, 7-H),5.119 (dd, 1H, J=4.2,7.2Hz, 3’-H),5.080 (dd, 1H, J=4.2,7.2Hz, 4’-H),4.675 (m, 1H, 2’’-H),4.344 (m, 1H, 3-H),3.938 (dd, 1H, J=7.2,14.4Hz, 5’’-Ha)、3.831 (m, 1H, 5’’-Hb),0.950 (d, 3H, J=6.9Hz, 2’-CH3)、0.855 (s, 3H, 10-CH3)、0.829 (d, 3H, J=6.6Hz, 5’-CH3)、0.752 (d, 3H, J=6.6Hz, 6’-CH3)、0.736 (d, 3H, J=6.3Hz, 7’-H)、0.528 (s, 3H, 13-CH3),2.492~0.444为甾体母核及17位侧链和四氢呋喃-2-甲酸其它饱和碳上氢信号。

13C NMR (75 MHz, CDCl3) δppm:171.83 (C=O)、140.53 (C8)、137.23 (C5)、134.49 (C3’)、130.90 (C4’)、119.26 (C6)、115.22 (C7)、75.78 (C2’’)、72.22 (C3)、68.29 (C5’’)、54.62 (C17)、53.45 (C14)、44.94 (C9)、41.75 (C13,5’)、39.40 (C2’)、37.94 (C12)、36.80 (C1)、36.01 (C4)、35.48 (C10)、32.02 (C6’)、27.24 (C2)、26.96 (C16)、21.93 (C15)、20.06 (C11)、19.96 (C7’)、18.91 (6’-CH3)、18.60 (C1’)、16.56 (5’-CH3)、15.11 (10-CH3)、11.00 (13-CH3)。

2.ACEI抑制活性实验

肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)在高血压发生、发展中起重要作用,其中血管紧张素Ⅱ是主要的效应肽。ACEI抑制血管紧张素Ⅰ转换为血管紧张素Ⅱ,不灭活缓激肽,产生降压效应。本实验采用体外ACE抑制活性实验评价了新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B及同时分离得到的、与该新化合物结构类似的、一已知化合物ergosterol的降血压活性。具体实验方法和结果如下。

2.1 ACE 的制备

将新鲜的猪肺用遇冷的0.9%NaCL溶液冲洗干净,洗去气管、脂肪,切成小块,去一定量的猪肺组织,用遇冷的含PH 8.3、0.1 mol/L 硼酸盐缓冲液5倍体积进行匀浆,将匀浆液置于冰箱中浸提5小时。4℃下离心(8000rmp)离心15 min,得粗提液(上清液)。冷冻干燥待用。

2.2 供试品溶液的制备

取10mg样品(新化合物或ergosterol)配制成5个不同浓度的提取物溶液。按下表顺序加入溶液,37℃保温5 min后,加入5 μL ACE溶液启动反应,37℃保温30 min后加入1 mol/L HCl溶液300 μL终止反应,10 000 r/min离心 10 min,吸取上清作为供试品溶液。

HHL 溶液:取适量的HHL,加入硼酸盐缓冲液配制成浓度为 5 mmol/L 的 HHL 溶液。

2.3 马尿酸含量测定

色谱条件:LC 3000-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)(大连江申分离科学技术公司),流动相甲醇:三氟乙酸水(0.01%),流动相梯度为(0 min,60 %B;3 min,60%B;3.01 min,100%B;6 min,100%B;6.01 min,60%B;8 min,60%B),检测波长 228 nm,流速1.0 mL/min,柱温 25℃,进样量20 μL。

马尿酸对照液:取马尿酸适量,加入硼酸盐缓冲液配制成浓度为0.1 mmol/L的马尿酸对照品溶液。

分别精密吸取供试品溶液及马尿酸对照品溶液注入高效液相色谱仪,记录色谱图,通过外标一点法计算马尿酸的含量。

2.4 ACE 抑制率的计算

计算公式如下:R=(A-B)/A×100% 

式中, A 和 B 分别为空白对照组和试验组马尿酸的峰面积。

对ACE抑制活性用IC50 值表示,IC50 值采用SPSS软件计算获得。

2.5 ACE 抑制活性结果与结论

采用以上的实验获得了新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B及已知化合物β-sitosterol对ACE抑制活性的IC50值。新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B对ACE的IC50=26μg/mL,而已知化合物β-sitosterol对ACE的IC50=892μg/mL。实验结果表明新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B具有较强的ACE抑制活性,其对ACE的抑制作用是已知化合物ergosterol的近40倍。该新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B将有望成为新的降血压药物。

实施例2:

取茯苓200g,剪碎,加水1L,高温高压处理2h,过滤,得茯苓浸出液;另取生晒参500g,粉碎,以上述茯苓浸出液浸润后,高温高压蒸制6h,取出,干燥,即得人参茯苓高温高压处理产物;所得的人参茯苓高温高压处理产物,以10L氯仿浸提1次,提取液蒸干,得氯仿提取物;所得的氯仿提取物,以硅胶为吸附剂进行反复柱层析,以石油醚-二氯甲烷(20:1~1:1)进行梯度洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B粗品,再进行硅胶柱层析,以石油醚-丙酮(5:1)为洗脱剂洗脱,收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液,回收溶剂,以石油醚-丙酮重结晶,得四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B。

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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410772590.X (22)申请日 2014.12.16 C07J 17/00(2006.01) A61P 9/12(2006.01) (71)申请人 吉林农业大学 地址 130118 吉林省长春市新城大街 2888 号 (72)发明人 赵岩 张连学 唐国胜 蔡恩博 许永华 郜玉钢 雷锋杰 何忠梅 刘学周 (54) 发明名称 四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 及其提取方法 和药物用途 (57) 摘要 本发明涉及一种四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B及其提取方法和其药物用途。 属于新化合物及其 药物用途。 以人参和茯苓为原料, 经过粉碎、 。

2、高温高 压处理、 干燥、 氯仿提取、 硅胶柱层析、 重结晶方法, 得到了四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B, 其化学名称 为 : 四氢呋喃 -2- 甲酸 (3S,10R,13R)-10,13- 二甲 基-17-(2R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-2,3, 4,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十二氢 -1H- 环戊 a 菲 -3- 酯。四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 在制 备治疗高血压的药物中的应用。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 104387434 A (43。

3、)申请公布日 2015.03.04 CN 104387434 A 1/1 页 2 1. 一种如下式的四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B : 其化学名称为四氢呋喃 -2- 甲酸 (3S,10R,13R)-10,13- 二甲基 -17-(2R,E)-5,6- 二 甲 基 庚 -3- 烯 -2- 基 )-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十 二 氢 -1H- 环 戊 a 菲 -3- 酯。 2. 一种如权利要求 1 所述的四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 的提取方法 : 其特征在于包 括下列步骤 : (1) 加工 : 取茯苓, 粉碎, 加510倍量水, 高温高压处理24h, 过滤。

4、, 得茯苓浸出液 ; 另取 生晒参, 粉碎, 以上述茯苓浸出液浸润后, 高温高压蒸制 48h, 取出, 干燥, 即得人参茯苓高 温高压处理产物 ; (2) 提取 : 取步骤 (1) 中的人参茯苓高温高压处理产物, 以氯仿浸提13次, 每次加510 倍量氯仿, 合并氯仿提取液, 蒸干, 得氯仿提取物 ; (3) 分离 : 取步骤 (2) 中的氯仿提取物, 以硅胶为吸附剂进行柱层析, 以石油醚 - 二氯甲 烷 (20 : 11 : 1) 进行梯度洗脱, 收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液, 回收溶剂, 得 四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 粗品, 再进行硅胶柱层析, 以石油醚 - 丙酮 (10 。

5、: 1) 为洗脱剂 洗脱, 收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液, 回收溶剂, 以石油醚-丙酮重结晶, 得 四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B ; 步骤 (1) 中所述的高温高压是指温度 110135, 或压力 0.050.22MPa。 3.如权利要求1所述的四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B在制备治疗高血压的药物中的应 用。 权 利 要 求 书 CN 104387434 A 2 1/5 页 3 四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 及其提取方法和药物用途 技术领域 0001 本发明涉及一种四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 及其提取方法和其药物用途。属于 新化合物及其药物用途。 背景技术 0002 人参Panax 。

6、giseng C.A.Mey. 为五加科人参属植物。其中,Panax希腊文的含义 是 “万能药” , 人参的满语发音为 “奥尔厚达” , 是 “百草之王” 之意。作为传统药材, 具有数千 年的历史, 在世界各国广泛应用。人参大补元气, 复脉固脱, 补脾益肺, 生津, 安神。 0003 茯苓, 为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf 的干燥菌核。多于 7 9 月 采挖, 挖出后除去泥沙, 堆置 “发汗” 后, 摊开晾至表面干燥, 再 “发汗” , 反复数次至现皱纹、 内部水分大部散失后, 阴干, 称为 “茯苓个” ; 或将鲜茯苓按不同部位切制, 阴干, 分别称为 “茯苓块。

7、” 和 “茯苓片” 。归心、 肺、 脾、 肾经。利水渗湿, 健脾, 宁心。用于水肿尿少, 痰饮眩 悸, 脾虚食少, 便溏泄泻, 心神不安, 惊悸失眠。 0004 高血压是以体循环动脉压增高为主要表现的临床综合征, 是最常见的心血管疾 病。原发性高血压的发病因素主要有两大类, 一类是内因, 如遗传 ; 另一类是外因, 如精神 紧张、 食盐过多、 吸烟、 肥胖、 酗酒、 缺乏运动等。长期高血压可影响到心、 脑、 肾等器官的功 能, 最终导致这些器官功能的衰竭。高血压属多发病, 上世纪 80 年代, 中国高血压发病率为 7.7% ; 到了本世纪初, 迅速上升到 18.8% ; 而近 10 年, 高血。

8、压的患病率增长了 31%。目前, 我 国高血压病人估计已超过 2 亿, 而且这一趋势仍会继续延续, 短时期内不太可能出现逆转。 如果再不加以控制, 在今后的 15 年中将增长 50%。降压药物种类主要包括利尿药、 受体 阻滞剂、 钙通道阻滞剂、 血管紧张素转换酶抑制剂、 血管紧张素 II 受体阻滞剂。这些药物具 有一定的副作用, 如心脏抑制、 代谢异常、 肾脏损害等。且具有我国自主知识产权的降血压 药物较少。 0005 课题组在人参加工产品研究与开发过程中, 发现人参与茯苓共同加工处理 (高温 高压) 后的产物具有较强的血管紧张素转化酶 (ACE) 抑制作用, 进一步进行活性成分追踪, 分离得。

9、到了一个新化合物, 其化学名称为 : 四氢呋喃 -2- 甲酸 (3S,10R,13R)-10,13- 二甲 基 -17-(2R,E)-5,6- 二甲基庚 -3- 烯 -2- 基 )-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十二 氢 -1H- 环 戊 a 菲 -3- 酯 (3S,10R,13R)-17-(2R,E)-5,6-dimethylhept-3-en-2-yl) -10,13-dimethyl-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopentaa phenanthren-3-yl tetrahydr。

10、ofuran-2-carboxylate, 简称四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B, 经测定该化合物对 ACE 的半数抑制率 (IC50) 达到 26g/mL。进一步分析四氢糠酸环戊烷 并多氢菲酯 B 的来源, 该化合物在人参、 茯苓、 人参高温高压处理产物、 茯苓高温高压处理 产物中均未被检出, 说明该化合物是人参、 茯苓组方并在高温高压处理后产生的。 四氢糠酸 环戊烷并多氢菲酯 B 有望成为新的降血压药物。 发明内容 说 明 书 CN 104387434 A 3 2/5 页 4 0006 本发明提供一种四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 及其提取方法和其药物用途。 0007 一种如下式的四氢糠酸环戊烷。

11、并多氢菲酯 B : 四 氢 呋 喃 -2- 甲 酸 (3S,10R,13R)-10,13- 二 甲 基 -17-(2R,E)-5,6- 二 甲 基 庚 -3- 烯 -2- 基 )-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十二氢 -1H- 环戊 a 菲 -3- 酯 (3S,10R,13R)-17-(2R,E)-5,6-dimethylhept-3-en-2-yl)-10,13-dimethyl-2,3, 4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopentaaphenanthren-3-yl tetrahydrofur。

12、an-2-carboxylate 本发明的目的还在于利用人参和茯苓为原料, 经过粉碎、 高温高压处理、 干燥、 氯仿提 取、 硅胶柱层析、 重结晶方法, 制备一种具有较强生物活性的新物质。 0008 为实现上述发明目的, 需要下述工艺来实现 : (1) 加工 : 取茯苓, 粉碎, 加510倍量水, 高温高压处理24h, 过滤, 得茯苓浸出液 ; 另取 生晒参, 粉碎, 以上述茯苓浸出液浸润后, 高温高压蒸制 48h, 取出, 干燥, 即得人参茯苓高 温高压处理产物 ; (2) 提取 : 取步骤 (1) 中的人参茯苓高温高压处理产物, 以氯仿浸提13次, 每次加510 倍量氯仿, 合并氯仿提取液。

13、, 蒸干, 得氯仿提取物 ; (3) 分离 : 取步骤 (2) 中的氯仿提取物, 以硅胶为吸附剂进行柱层析, 以石油醚 - 二氯甲 烷 (20 : 11 : 1) 进行梯度洗脱, 收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液, 回收溶剂, 得 四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 粗品, 再进行硅胶柱层析, 以石油醚 - 丙酮 (10 : 1) 为洗脱剂 洗脱, 收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液, 回收溶剂, 以石油醚-丙酮重结晶, 得 四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B。 0009 本发明四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 在制备治疗高血压的药物中的应用。 0010 当本发明用于制备治疗高血压的药物时, 其。

14、口服或胃肠外给药, 均是安全的。 在口 服情况下, 其可以任何常规形式给药, 如散剂、 粒剂、 片剂、 胶囊剂、 丸剂、 溶液剂、 悬浮液、 糖 浆、 口腔含片、 舌下含片等 ; 当该药物肠胃外给药时, 可采取任何常规形式, 例如静脉内注射 剂、 软膏剂、 栓剂、 和吸入剂等。 0011 本发明制备治疗高血压的的药物是由有效成分单体或有效成分与固体或液体的 赋形剂一起构成的, 这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的, 下面举几个 具体例子, 散剂是内服的粉末剂, 它的赋形剂有乳糖、 淀粉、 浆糊精、 碳酸钙、 合成或天然硫 酸铝、 氧化镁、 硬脂酸镁, 碳酸氢钠、 干燥酵母等 ; 溶。

15、液剂的赋形剂有水、 甘油、 1,2- 丙二醇、 单糖浆、 乙醇、 乙二醇、 聚乙二醇、 山梨糖醇等 ; 软膏剂的赋形剂可以使用脂油, 含水羊毛脂、 凡士林、 甘油、 蜂腊、 木腊、 液体石腊、 树脂、 高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。 说 明 书 CN 104387434 A 4 3/5 页 5 0012 本发明的有益效果在于, 新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 可用于制备降血 压药物, 具有疗效显著的特点, 其对 ACE 抑制的 IC50可达 26g/mL。 具体实施方式 0013 实施例 1 : 取茯苓200g, 粉碎, 加水2L, 高温高压处理4h, 过滤, 得茯苓浸出液 ; 另取生。

16、晒参1000g, 粉碎, 以上述茯苓浸出液浸润后, 高温高压蒸制 4h, 取出, 干燥, 即得人参茯苓高温高压处理 产物 ; 所得的人参茯苓高温高压处理产物, 以氯仿浸提 3 次, 每次 5L, 合并氯仿提取液, 蒸 干, 得氯仿提取物 ; 所得的氯仿提取物, 以硅胶为吸附剂进行柱层析, 以石油醚 - 二氯甲烷 (20 : 11 : 1) 进行梯度洗脱, 收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 部分洗脱液, 回收溶剂, 得四 氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 粗品, 再进行硅胶柱层析, 以石油醚 - 丙酮 (10 : 1) 为洗脱剂洗 脱, 收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯B部分洗脱液, 回收溶剂, 以石油醚。

17、-丙酮重结晶, 得四 氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B。 0014 1. 结构鉴定 : MS : 质谱测定其分子离子峰为494.2, 结合IR、 1H NMR、13C NMR确定其分子式为C 33H50O3。 0015 IR光谱 : 3081 cm-1为双键碳氢伸缩振动峰 (CH) , 2988-2769 cm-1为饱和烷烃碳氢 键的伸缩振动峰 (CH) , 证明饱和烷烃基团的存在 ; 1736 cm-1为羰基的伸缩振动峰 (C=O) , 说明该化合物中存在羰基 ; 1688 cm-1为C=C, 说明碳碳双键的存在 ; 1380 cm-1、 1368 cm-1为 甲基的变形振动峰 (CH3) 。 0。

18、016 1H NMR (300 MHz, CDCl 3) ppm : 5.480 (d, 1H, J=5.7Hz)、 5.292 (d, 1H, J=5.7Hz)、 5.119 (dd, 1H, J=4.2,7.2Hz)、 5.080 (dd, 1H, J=4.2,7.2Hz) 为甾体母核 6、 7、 3 、 4 位烯氢信号, 4.675 (m, 1H) 为四氢呋喃 -2- 甲酸 2 位氢信号, 4.344 (m, 1H) 为 甾体母核 3 位连氧碳上氢信号, 3.938 (dd, 1H, J=7.2,14.4Hz)、 3.831 (m, 1H) 为四氢呋 喃-2-甲酸5位上两个氢的信号, 0。

19、.950 (d, 3H, J=6.9Hz)、 0.855 (s, 3H)、 0.829 (d, 3H, J=6.6Hz)、 0.752 (d, 3H, J=6.6Hz)、 0.736 (d, 3H, J=6.3Hz)、 0.528 (s, 3H)为甾体母核 及17位侧链上6个甲基氢信号, 2.4920.444为甾体母核及17位侧链和四氢呋喃-2-甲酸 其它饱和碳上氢信号, 以上数据说明甾体结构和四氢呋喃甲酸的存在。 0017 13C NMR (75 MHz, CDCl 3) ppm : 碳谱数据共给出33个碳信号, 具体如下。 171.83 为羰基碳信号, 137.23、 119.26、 11。

20、5.22、 140.53、 134.49、 130.90 为甾体母核 C5、 C6、 C7、 C8、 C3 、 C4不饱和碳信号, 75.78、 72.22、 68.29 分别为四氢呋喃 -2- 甲酸 2 位、 甾体母核 3 位、 四氢呋喃 -2- 甲酸 5 位连氧碳信号, 54.62、 53.45、 44.94、 41.75、 39.40、 37.94、 36.80、 36.01、 35.48、 32.02、 29.21、 27.24、 26.96、 24.14、 21.93、 20.06、 19.96、 18.91、 18.60、 16.56、 15.11、 11.00 为甾体母核及 17。

21、 位侧链及四氢呋喃 -2- 甲酸基团其它的饱和碳信号。 0018 结合 1H NMR、13C NMR 及 IR 光谱进一步综合分析确定该化合物为四氢呋喃 -2- 甲 酸(3S,10R,13R)-10,13-二甲基-17-(2R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-2,3,4,9,10,1 1,12,13,14,15,16,17- 十二氢 -1H- 环戊 a 菲 -3- 酯 (3S,10R,13R)-17-(2R,E)-5,6-d imethylhept-3-en-2-yl)-10,13-dimethyl-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecah yd。

22、ro-1H-cyclopentaaphenanthren-3-yl tetrahydrofuran-2-carboxylate, 简称四氢 糠酸环戊烷并多氢菲酯 B, 经文献检索, 该化合物为未见文献报道的新化合物。该化合物的 说 明 书 CN 104387434 A 5 4/5 页 6 具体 NMR 信号归属如下 : 1H NMR (300 MHz, CDCl 3) ppm : 5.480 (d, 1H, J=5.7Hz, 6-H), 5.292 (d, 1H, J=5.7Hz, 7-H), 5.119 (dd, 1H, J=4.2,7.2Hz, 3 -H), 5.080 (dd, 1H, 。

23、J=4.2,7.2Hz, 4 -H), 4.675 (m, 1H, 2 -H), 4.344 (m, 1H, 3-H), 3.938 (dd, 1H, J=7.2,14.4Hz, 5 -Ha)、 3.831 (m, 1H, 5 -Hb), 0.950 (d, 3H, J=6.9Hz, 2 -CH3)、 0.855 (s, 3H, 10-CH3)、 0.829 (d, 3H, J=6.6Hz, 5 -CH3)、 0.752 (d, 3H, J=6.6Hz, 6 -CH3)、 0.736 (d, 3H, J=6.3Hz, 7 -H)、 0.528 (s, 3H, 13-CH3), 2.4920.4。

24、44 为甾体母核及 17 位侧链和四 氢呋喃 -2- 甲酸其它饱和碳上氢信号。 0019 13C NMR (75 MHz, CDCl 3) ppm : 171.83 (C=O)、 140.53 (C8)、 137.23 (C5)、 134.49 (C3 )、 130.90 (C4 )、 119.26 (C6)、 115.22 (C7)、 75.78 (C2 )、 72.22 (C3)、 68.29 (C5 )、 54.62 (C17)、 53.45 (C14)、 44.94 (C9)、 41.75 (C13,5 )、 39.40 (C2 )、 37.94 (C12)、 36.80 (C1)、 。

25、36.01 (C4)、 35.48 (C10)、 32.02 (C6 )、 27.24 (C2)、 26.96 (C16)、 21.93 (C15)、 20.06 (C11)、 19.96 (C7 )、 18.91 (6 -CH3)、 18.60 (C1 )、 16.56 (5 -CH3)、 15.11 (10-CH3)、 11.00 (13-CH3)。 0020 2.ACEI 抑制活性实验 肾素 - 血管紧张素 - 醛固酮系统 (RAS) 在高血压发生、 发展中起重要作用, 其中血管紧 张素是主要的效应肽。 ACEI抑制血管紧张素转换为血管紧张素, 不灭活缓激肽, 产生 降压效应。本实验采用。

26、体外 ACE 抑制活性实验评价了新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 及同时分离得到的、 与该新化合物结构类似的、 一已知化合物 ergosterol 的降血压活性。 具体实验方法和结果如下。 0021 2.1 ACE 的制备 将新鲜的猪肺用遇冷的 0.9%NaCL 溶液冲洗干净, 洗去气管、 脂肪, 切成小块, 去一定量 的猪肺组织, 用遇冷的含 PH 8.3、 0.1 mol/L 硼酸盐缓冲液 5 倍体积进行匀浆, 将匀浆液置 于冰箱中浸提 5 小时。4下离心 (8000rmp) 离心 15 min, 得粗提液 (上清液) 。冷冻干燥待 用。 0022 2.2 供试品溶液的制备 取 10m。

27、g 样品 (新化合物或 ergosterol) 配制成 5 个不同浓度的提取物溶液。按下表顺 序加入溶液, 37保温 5 min 后, 加入 5 L ACE 溶液启动反应, 37保温 30 min 后加入 1 mol/L HCl溶液300 L终止反应, 10 000 r/min离心 10 min, 吸取上清作为供试品溶液。 0023 HHL 溶液 : 取适量的 HHL, 加入硼酸盐缓冲液配制成浓度为 5 mmol/L 的 HHL 溶 液。 0024 2.3 马尿酸含量测定 色谱条件 : LC 3000-C18色谱柱 (4.6 mm250 mm, 5 m) (大连江申分离科学技术公 司) , 流。

28、动相甲醇 : 三氟乙酸水 (0.01%) , 流动相梯度为 (0 min, 60 B ; 3 min, 60 B ; 3.01 min, 100B ; 6 min, 100B ; 6.01 min, 60B ; 8 min, 60B) , 检测波长 228 nm, 流速1.0 说 明 书 CN 104387434 A 6 5/5 页 7 mL/min, 柱温 25, 进样量 20 L。 0025 马尿酸对照液 : 取马尿酸适量, 加入硼酸盐缓冲液配制成浓度为 0.1 mmol/L 的马 尿酸对照品溶液。 0026 分别精密吸取供试品溶液及马尿酸对照品溶液注入高效液相色谱仪, 记录色谱 图, 通。

29、过外标一点法计算马尿酸的含量。 0027 2.4 ACE 抑制率的计算 计算公式如下 : R=(A-B)/A100% 式中, A 和 B 分别为空白对照组和试验组马尿酸的峰面积。 0028 对 ACE 抑制活性用 IC50 值表示, IC50 值采用 SPSS 软件计算获得。 0029 2.5 ACE 抑制活性结果与结论 采用以上的实验获得了新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 及已知化合物 -sitosterol 对 ACE 抑制活性的 IC50值。新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 对 ACE 的 IC50=26g/mL, 而已知化合物 -sitosterol 对 ACE 的 IC50=。

30、892g/mL。实验结果表明 新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 具有较强的 ACE 抑制活性, 其对 ACE 的抑制作用是 已知化合物 ergosterol 的近 40 倍。该新化合物四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 将有望成为 新的降血压药物。 0030 实施例 2 : 取茯苓 200g, 剪碎, 加水 1L, 高温高压处理 2h, 过滤, 得茯苓浸出液 ; 另取生晒参 500g, 粉碎, 以上述茯苓浸出液浸润后, 高温高压蒸制 6h, 取出, 干燥, 即得人参茯苓高温高压处理 产物 ; 所得的人参茯苓高温高压处理产物, 以 10L 氯仿浸提 1 次, 提取液蒸干, 得氯仿提取 物 ; 所得的氯仿提取物, 以硅胶为吸附剂进行反复柱层析, 以石油醚 - 二氯甲烷 (20 : 11 : 1) 进行梯度洗脱, 收集四氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 部分洗脱液, 回收溶剂, 得四氢糠酸环 戊烷并多氢菲酯 B 粗品, 再进行硅胶柱层析, 以石油醚 - 丙酮 (5 : 1) 为洗脱剂洗脱, 收集四 氢糠酸环戊烷并多氢菲酯 B 部分洗脱液, 回收溶剂, 以石油醚 - 丙酮重结晶, 得四氢糠酸环 戊烷并多氢菲酯 B。 说 明 书 CN 104387434 A 7 。

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