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1、(10)申请公布号 CN 103242389 A (43)申请公布日 2013.08.14 CN 103242389 A *CN103242389A* (21)申请号 201310188706.0 (22)申请日 2013.05.21 C07H 15/18(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人 南京泽朗医药科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边 108 号 05 幢 6 楼 (72)发明人 刘东锋 万冬梅 (54) 发明名称 一种穆萨树甙的提纯方法 (57) 摘要 本方法提供一种穆萨树甙的提纯方法， 其 特征在于包含以下步骤 ：（。
2、1） 以穆萨树的树皮为 原料， 加 8-12 倍量 5070% 乙醇水溶液微波提取 2-3 次， 收集提取液 ；（2） 将提取液通过超滤膜系 统， 得透过液 ；（3） 将透过液减压浓缩至无醇， 加 水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 乙醇水溶液洗 脱， 收集目标成分， 减压浓缩， 离心， 将清液干燥， 得粗提物 ；（4） 以乙酸乙酯 - 甲醇 - 水为溶剂系 统， 上相为固定相， 下相为流动相， 将上述得到的 粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化， 即得 到高纯度的穆萨树甙。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 。
3、权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103242389 A CN 103242389 A *CN103242389A* 1/1 页 2 1. 一种穆萨树甙的提纯方法， 其特征在于包括以下步骤 ： （1） 以穆萨树的树皮为原料， 加 8-12 倍量 5070% 乙醇水溶液微波提取 2-3 次， 微波功 率为 2-8kw， 收集提取液 ； （2） 将提取液通过超滤膜系统， 得透过液 ； （3） 将透过液减压浓缩至无醇， 加水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 先用水洗脱， 再用 50-65% 的乙醇水溶液洗脱， 收集目标成分， 减压浓缩， 离心， 将清液干燥， 得粗提物 ； （4） 。
4、以乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统， 上相为固定相， 下相为流动相， 将上述得到的粗 提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化， 即得到高纯度的穆萨树甙。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于步骤 （2） 中所述超滤膜为中空超滤膜， 材质 为聚醚砜， 截留分子量为 2000-3000 道尔顿。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于步骤 （3） 中所述乙酸乙酯 - 甲醇 - 水的体 积比为 （4-7） ：（2-4） ：（6-11） 。 权 利 要 求 书 CN 103242389 A 2 1/3 页 3 一种穆萨树甙的提纯方法 技术领域 0001 本发明属于天然植物技术领域， 涉及。
5、一种穆萨树甙的提纯方法。 背景技术 0002 穆 萨 树 甙 （Butrom） ， 又 名 紫 矿 春， 分 子 式 为 C27H32O15， 分 子 量 为 596.54， mp.190。穆萨树甙是从豆科植物紫铆Butea monospeerma (Lam.)Kuntze 的花中分离 得到的一种黄酮苷类化合物。 穆萨树的树皮提取物穆萨树甙和异穆萨树甙在印度多用 于治疗肝病。麦军利通过在氯仿和半乳糖胺引起的肝细胞损害的实验表明， 穆萨树的树皮 提取物显示有护肝作用， 并证实可增强小鼠干细胞核的 RNA 合成， 从而提高部分肝切除小 鼠干细胞的再生率。麦军利分离穆萨树甙是通过溶剂层析、 TLC 。
6、和 HPLC 分离， 该方法制 备量小， 成本高， 仅适用于实验室化学成分分析少量制备。 0003 经检索， 尚未发现适宜于大量制备穆萨树甙的工业化方法的专利或文献报道。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种穆萨树甙的提纯方法， 成品穆萨树甙含量高、 生产 成本低， 可适用于工业化生产。 0005 本发明是通过如下技术方案实现的 ： （1） 以穆萨树的树皮为原料， 加 8-12 倍量 5070% 乙醇水溶液微波提取 2-3 次， 微波功 率为 2-8kw， 收集提取液 ； （2） 将提取液通过超滤膜系统， 得透过液 ； （3） 将透过液减压浓缩至无醇， 加水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附，。
7、 先用水洗脱， 再用 50-65% 的乙醇水溶液洗脱， 收集目标成分， 减压浓缩， 离心， 将清液干燥， 得粗提物 ； （4） 以乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统， 上相为固定相， 下相为流动相， 将上述得到的粗 提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化， 即得到高纯度的穆萨树甙。 0006 步骤 （2） 中所述超滤膜为中空超滤膜， 材质为聚醚砜， 截留分子量为 2000-3000 道 尔顿。 0007 步骤 （3） 中所述乙酸乙酯 - 甲醇 - 水的体积比为 （4-7） ：（2-4） ：（6-11） 。 0008 本发明的有益效果是 ： 采用微波提取， 提取率高， 耗时短， 且避免目标产品的损失， 是。
8、一种低耗能环保的提取方法 ； 聚酰胺树脂吸附洗脱， 提高了产品的纯度 ； 采用高速逆流 色谱法进行穆萨树甙的分离纯化， 与以往技术手段相比， 具有分离能力强、 分离时间短、 样品损失小、 产品质量高等优点。 0009 具体实施方式 ： 下面结合具体实施方式对本发明进行进一步说明。 0010 实施例 1 ： 取 200g 穆萨树的树皮粉碎过 20 目筛， 加入 8 倍量 70% 乙醇微波提取 10min， 提取 2 次， 微波功率为 4kw， 合并提取液， 再用 2000 道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤， 透过液减压 说 明 书 CN 103242389 A 3 2/3 页 4 浓缩至无醇， 加水。
9、分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 先用水洗脱， 再用 6BV50% 乙醇洗脱有效成 分， 收集目标成分减压浓缩， 离心， 将离心液干燥， 得到粗提物。取乙酸乙酯、 甲醇、 水按比 例4:2:6混合， 静置分层， 两相分别微波脱气30分钟， 取上相为固定相， 下相为流动相， 将固 定相以 4ml/min 的流速泵入高速逆流色谱分离柱中， 启动高速逆流色谱主机， 调节分离柱 转速为 950rpm， 将流动相以 2.5ml/min 的流速泵入， 将 150mg 穆萨树甙粗提物溶于 10ml 上相和 10ml 下相组成的溶剂中作为样品溶液备用， 待分离柱达到平衡， 将样品溶液注入进 样阀中， 使用分步收。
10、集器收集流出组分， 根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并， 低温真 空浓缩至干， 得到穆萨树甙， 经 HPLC 检测、 核磁共振进行结构确认， 穆萨树甙的含量为 98.2%。 0011 实施例 2 ： 取 1kg 穆萨树的树皮粉碎过 40 目筛， 加入 9 倍量 60% 乙醇微波提取 30min， 提取 2 次， 微波功率为 2kw， 合并提取液， 再用 2000 道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤， 透过液减压浓 缩至无醇， 加水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 先用水洗脱， 再用 5BV50% 乙醇洗脱有效成 分， 收集目标成分减压浓缩， 离心， 将离心液干燥， 得到粗提物。取乙酸乙酯、 甲醇、 。
11、水按比 例 4:2:10 混合， 静置分层， 两相分别微波脱气 30 分钟， 取上相为固定相， 下相为流动相， 将 固定相以 10ml/min 的流速泵入高速逆流色谱分离柱中， 启动高速逆流色谱主机， 调节分离 柱转速为 900rpm， 将流动相以 3ml/min 的流速泵入， 将 200mg 穆萨树甙粗提物溶于 10ml 上相和 10ml 下相组成的溶剂中作为样品溶液备用， 待分离柱达到平衡， 将样品溶液注入进 样阀中， 使用分步收集器收集流出组分， 根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并， 低温真 空浓缩至干， 得到穆萨树甙， 经 HPLC 检测、 核磁共振进行结构确认， 穆萨树甙的含量为 。
12、98.6%。 0012 实施例 3 ： 取 2kg 穆萨树的树皮粉碎过 20 目筛， 加入 10 倍量 65% 乙醇微波提取 15min， 提取 3 次， 微波功率为 5kw， 合并提取液， 再用 3000 道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤， 透过液减压 浓缩至无醇， 加水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 先用水洗脱， 再用 4BV65% 乙醇洗脱有效成 分， 收集目标成分减压浓缩， 离心， 将离心液干燥， 得到粗提物。取乙酸乙酯、 甲醇、 水按比 例 7:3:11 混合， 静置分层， 两相分别微波脱气 30 分钟， 取上相为固定相， 下相为流动相， 将 固定相以 4ml/min 的流速泵入高速逆流。
13、色谱分离柱中， 启动高速逆流色谱主机， 调节分离 柱转速为 850rpm， 将流动相以 3ml/min 的流速泵入， 将 200mg 穆萨树甙粗提物溶于 10ml 上相和 10ml 下相组成的溶剂中作为样品溶液备用， 待分离柱达到平衡， 将样品溶液注入进 样阀中， 使用分步收集器收集流出组分， 根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并， 低温真 空浓缩至干， 得到穆萨树甙， 经 HPLC 检测、 核磁共振进行结构确认， 穆萨树甙的含量为 99.2 %。 0013 实施例 4 ： 取 2kg 穆萨树的树皮粉碎过 60 目筛， 加入 12 倍量 50% 乙醇微波提取 20min， 提取 3 次， 微波。
14、功率为 5.5kw， 合并提取液， 再用 3000 道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤， 透过液减压 浓缩至无醇， 加水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 先用水洗脱， 再用 5BV55% 乙醇洗脱有效成 分， 收集目标成分减压浓缩， 离心， 将离心液干燥， 得到粗提物。取乙酸乙酯、 甲醇、 水按比 例5:4:7混合， 静置分层， 两相分别微波脱气30分钟， 取上相为固定相， 下相为流动相， 将固 说 明 书 CN 103242389 A 4 3/3 页 5 定相以 10ml/min 的流速泵入高速逆流色谱分离柱中， 启动高速逆流色谱主机， 调节分离柱 转速为 1000rpm， 将流动相以 3ml/mi。
15、n 的流速泵入， 将 200mg 穆萨树甙粗提物溶于 10ml 上相和 10ml 下相组成的溶剂中作为样品溶液备用， 待分离柱达到平衡， 将样品溶液注入进 样阀中， 使用分步收集器收集流出组分， 根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并， 低温真 空浓缩至干， 得到穆萨树甙， 经 HPLC 检测、 核磁共振进行结构确认， 穆萨树甙的含量为 98.1%。 0014 实施例 5 ： 取 10kg 穆萨树的树皮粉碎过 40 目筛， 加入 10 倍量 50% 乙醇微波提取 10min， 提取 2 次， 微波功率为 8kw， 合并提取液， 再用 2000 道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤， 透过液减压 浓缩至无。
16、醇， 加水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 先用水洗脱， 再用 4BV55% 乙醇洗脱有效成 分， 收集目标成分减压浓缩， 离心， 将离心液干燥， 得到粗提物。取乙酸乙酯、 甲醇、 水按比 例6:3:8混合， 静置分层， 两相分别微波脱气30分钟， 取上相为固定相， 下相为流动相， 将固 定相以 5ml/min 的流速泵入高速逆流色谱分离柱中， 启动高速逆流色谱主机， 调节分离柱 转速为 900rpm， 将流动相以 3.5ml/min 的流速泵入， 将 150mg 穆萨树甙粗提物溶于 10ml 上相和 10ml 下相组成的溶剂中作为样品溶液备用， 待分离柱达到平衡， 将样品溶液注入进 样阀中， 。
17、使用分步收集器收集流出组分， 根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并， 低温真 空浓缩至干， 得到穆萨树甙， 经 HPLC 检测、 核磁共振进行结构确认， 穆萨树甙的含量为 98.2%。 0015 实施例 6 ： 取 20kg 穆萨树的树皮粉碎过 20 目筛， 加入 9 倍量 65% 乙醇微波提取 25min， 提取 2 次， 微波功率为 2kw， 合并提取液， 再用 3000 道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤， 透过液减压 浓缩至无醇， 加水分散， 加入聚酰胺树脂柱吸附， 先用水洗脱， 再用 6BV65% 乙醇洗脱有效成 分， 收集目标成分减压浓缩， 离心， 将离心液干燥， 得到粗提物。取乙酸乙酯。
18、、 甲醇、 水按比 例 5:3:9 混合， 静置分层， 两相分别微波脱气 30 分钟， 取上相为固定相， 下相为流动相， 将 固定相以 10ml/min 的流速泵入高速逆流色谱分离柱中， 启动高速逆流色谱主机， 调节分离 柱转速为 850rpm， 将流动相以 3ml/min 的流速泵入， 将 200mg 穆萨树甙粗提物溶于 10ml 上相和 10ml 下相组成的溶剂中作为样品溶液备用， 待分离柱达到平衡， 将样品溶液注入进 样阀中， 使用分步收集器收集流出组分， 根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并， 低温真 空浓缩至干， 得到穆萨树甙， 经 HPLC 检测、 核磁共振进行结构确认， 穆萨树甙的含量为 98.0%。 说 明 书 CN 103242389 A 5 。