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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711389735.8 (22)申请日 2017.12.21 (71)申请人 中南大学 地址 410083 湖南省长沙市岳麓区麓山南 路932号 (72)发明人 刘佳佳刘朝水刘健 (51)Int.Cl. C08F 8/32(2006.01) C08F 8/24(2006.01) C08F 212/08(2006.01) B01J 20/26(2006.01) B01D 15/08(2006.01) C07H 15/203(2006.01) C07H 1/08(2006.01。
2、) (54)发明名称 一种用于三叶苷分离纯化的改性树脂及其 在木姜叶柯中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种改性树脂及其在分离纯 化木姜叶柯中三叶苷的应用。 以传统树脂为起始 树脂， 经氯甲基化后与氨基葡萄糖盐酸盐反应得 到氨基葡萄糖改性树脂。 将木姜叶柯嫩叶干燥、 粉碎、 有机溶剂提取、 碱化、 萃取， 萃取液经氨基 葡萄糖改性树脂上柱纯化， 浓缩结晶得到高纯度 的三叶苷产品。 经氨基葡萄糖改性后的树脂对木 姜叶柯甜茶中三叶苷有较高的选择性， 容易洗 脱， 减少了树脂的用量， 改性树脂经乙醇洗脱之 后， 再生性能较好， 有利于循环使用。 权利要求书1页 说明书3页 CN 108102012。
3、 A 2018.06.01 CN 108102012 A 1.一种用于三叶苷纯化分离的树脂， 其特征在于： 包括如下步骤： (1)商业树脂经预处理后， 在体积为树脂质量510倍的二氯甲烷溶液中溶胀， 加入质 量为树脂质量12倍的氯化钠、 质量为树脂质量0.52倍的氯化锌、 体积为树脂质量0.5 1倍的氯甲基甲醚后回流搅拌1040h， 过滤、 洗涤、 干燥， 得氯甲基化树脂； (2)将步骤(1)得到的氯甲基化树脂用醇溶液浸泡1224h， 用蒸馏水洗至无醇味， 再用 1.0M HCl浸泡3h， 洗至中性， 然后用1.0M NaOH浸泡3h， 再洗至中性后真空330K干燥8h。 (3)将步骤(2)中。
4、得到的树脂于体积为树脂质量1020倍的DMF溶液中溶胀2448h， 加 入质量为树脂质量23倍的氨基葡萄糖盐酸盐、 质量为树脂质量24倍K2CO3。 343363K条 件下搅拌1020h。 反应结束后， 过滤、 水洗、 醇洗、 真空干燥， 得到氨基葡萄糖修饰的树脂。 2.根据权利要求1所述的树脂， 其特征在于： 所述的商业树脂是聚苯乙烯树脂。 3.根据权利要求1所述的树脂修饰基团， 其特征在于： 所述的树脂修饰基团是： 氨基葡 萄糖基团。 4.一种用权利要求1所述的树脂分离纯化三叶苷的方法， 其特征在于： 包括如下步骤： a.木姜叶柯嫩叶采摘、 洗净、 干燥、 粉碎； b.有机溶剂加热回流提取。
5、、 碱性溶液萃取； c.萃取液经新型树脂纯化； d.30-90乙醇溶液洗脱、 浓缩、 结晶、 干燥即得三叶苷产品。 5.根据权利要求4所述， 其特征在于： 提取液经碱性溶液和有机溶剂萃取。 6.根据权利要求4所述， 其特征在于： 氨基葡萄糖改性后的树脂对三叶苷的吸附选择性 提高。 7.根据权利要求4所述， 其特征在于： 所用的萃取体系是碳酸钠溶液和石油醚、 乙酸乙 酯、 二氯甲烷中的一种或者两种。 权利要求书 1/1 页 2 CN 108102012 A 2 一种用于三叶苷分离纯化的改性树脂及其在木姜叶柯中的 应用 技术领域 0001 本发明涉及天然产物提取分离技术领域， 具体涉及一种分离纯化。
6、用的树脂及其在 木姜叶柯中的应用。 背景技术 0002 三叶苷， (Trilobatin,CAS NO.4192-90-9),是木姜叶柯甜茶中一种重要的黄酮类 化合物 ， 分子式C2 1H2 4O1 0,相对分子质量436 .413 ， 其化学名称为1-4- (-D- Glucopyranosyloxy)-2,6-dihydroxyphenyl-3-(4-hydroxyphenyl)-1-propanone。 三叶 苷属于二氢查尔酮类化合物， 具有抑制与型糖尿病有关的 -葡萄糖苷酶和 -淀粉酶活 性， 抗氧化性， 清除自由基的活性， 其甜度是蔗糖的300倍。 在新药和功能性食品开发等方面 具有。
7、广阔的应用前景。 0003 专利201510358050.1报道了 “一种大量分离天然甜味剂三叶苷的方法” ， 包括提 取， 分离纯化三叶苷的方法。 该方法后续的分离采用的高速逆流萃取技术， 成本高， 不利于 扩大化生产。 0004 专利200910027421.2报道了 “一种含三叶苷活性提取物及其用途” ， 包括提取方法 以及用途等内容。 分离方法采用的是传统树脂， 消耗溶剂大， 选择性不高， 耗时较长。 发明内容 0005 本发明所要解决的技术问题是提供一种低成本、 选择性高的用于高效分离纯化三 叶苷的新型树脂， 用该树脂来分离纯化三叶苷， 树脂用量少， 洗脱溶剂少， 三叶苷回收率高， 。
8、能有效降低生产成本。 0006 为了解决上述问题， 本发明采用传统树脂进行氯甲基化， 然后与氨基葡萄糖盐酸 盐反应得到新型树脂。 对该类新型树脂的研究表明， 该类树脂能高效选择性的吸附木姜叶 柯甜茶提取液中的三叶苷， 提取液中的三叶苷被选择性的吸附在新型树脂上， 经梯度浓度 乙醇溶液洗脱后可得到浓度较高的三叶苷洗脱液。 将洗脱液碱化后经乙酸乙酯等低毒低成 本溶剂萃取， 可得高纯度的三叶苷。 0007 该新型树脂具体制作步骤如下： 0008 (1)商业树脂经预处理后， 在体积为树脂质量510倍的二氯甲烷溶液中充分溶 胀， 加入质量为树脂质量12倍的氯化钠、 质量为树脂质量0.52倍的氯化锌、 体。
9、积为树脂 质量0.51倍的氯甲基甲醚后回流搅拌1040h， 过滤、 洗涤、 干燥， 得氯甲基化树脂； 商业 树脂优先选AB-8。 0009 (2)将步骤(1)得到的氯甲基化树脂用无水乙醇浸泡1224h， 用蒸馏水洗至无醇 味， 再用1.0M HCl浸泡3h， 洗至中性， 然后用1.0M NaOH浸泡3h， 再洗至中性后真空330K干燥 8h。 0010 (3)将步骤(2)中得到的树脂于体积为树脂质量1020倍的DMF溶胀2448h， 加入 说明书 1/3 页 3 CN 108102012 A 3 质量为树脂质量23倍的氨基葡萄糖盐酸盐、 质量为树脂质量24倍K2CO3。 343363K条件 下。
10、恒温机械搅拌1020h。 反应结束后， 过滤、 水洗、 醇洗、 真空干燥， 得到氨基葡萄糖修饰的 树脂。 0011 该新型树脂用于分离纯化木姜叶柯甜茶三叶苷的步骤如下： 0012 a.木姜叶柯甜茶叶采摘、 洗净、 烘干、 粉碎； 0013 b.有机溶剂加热回流提取、 碱性溶液萃取； 0014 c.萃取液经新型树脂纯化； 0015 d.30-90乙醇溶液洗脱、 浓缩、 结晶、 干燥即得三叶苷产品。 0016 与已有专利相比， 本发明的特点和优点在于： 采用高选择性的新型树脂对木姜叶 柯甜茶叶提取液进行分离纯化， 商业树脂中引入氨基葡萄糖官能团成为新型树脂后对提取 酸液中三叶苷的吸附量由引入之前的。
11、3mg/g提高为15mg/g,提取液经新型树脂选择性吸附 后， 目标产物富集在树脂表面或者孔隙中， 经梯度浓度的乙醇洗脱可以得到纯度较高的三 叶苷产品。 新型树脂的高选择性吸附有效的减少树脂用量， 处理500g木姜叶柯甜茶叶， 需要 的新型树脂干重约为40g； 后处理的碱化萃取过程采用经济低毒的石油醚、 乙酸乙酯等溶剂 作为萃取溶剂。 有效节约生产成本， 有利于工业化生产。 具体实施方式 0017 本发明中涉及到的部分新型树脂及其用于分离纯化三叶苷的方法， 用以下实施例 进行说明， 但本发明的保护范围不局限于此。 0018 实施例1： 0019 (1)将预处理好的200g AB-8干树脂加入三。
12、颈瓶中， 加入1500mL二氯甲烷浸泡溶胀 48h， 后分别加入400g氯化钠、 200g氯化锌、 100mL氯甲基甲醚， 于333K条件下回流搅拌24h， 后经去离子水、 甲醇洗涤， 干燥， 得氯甲基化树脂。 0020 (2)称取步骤(1)得到的氯甲基化树脂100g用无水乙醇浸泡24h， 用蒸馏水洗至无 醇味， 再用1.0M HCl浸泡3h， 洗至中性， 然后用1.0M NaOH浸泡3h， 再洗至中性后真空330K干 燥8h。 0021 (3)将步骤(2)中得到的树脂于1500mL的DMF溶胀48h， 加入质量为300g的氨基葡萄 糖盐酸盐、 质量为200g的K2CO3。 353K条件下恒温。
13、机械搅拌20h。 反应结束后， 过滤、 水洗， 95 乙醇索氏抽提10h， 产物在323K下真空干燥48h得到氨基葡萄糖修饰的新型树脂。 0022 (4)称取100g木姜叶柯嫩叶粉碎， 用80的乙醇溶剂1000mL回流提取3次， 合并提 取液， 浓缩去除醇溶液； 再加入250mL 1的碳酸钠溶液碱化， 过滤， 得木姜叶柯甜茶提取碱 液。 0023 (5)将步骤(4)得到的提取液上柱， 用30-90乙醇溶液洗脱， 用100mL乙酸乙酯 萃取， 浓缩得到纯度大于80的三叶苷3.53g。 0024 实施例2： 0025 (1)将预处理好的200g AB-8干树脂加入三颈瓶中， 加入2000mL二氯甲。
14、烷浸泡溶胀 24h， 后分别加入200g氯化钠、 400g氯化锌、 200mL氯甲基甲醚， 于333K条件下回流搅拌24h， 后经去离子水、 甲醇洗涤， 干燥， 得氯甲基化树脂。 0026 (2)称取步骤(1)得到的氯甲基化树脂100g用无水乙醇浸泡12h， 用蒸馏水洗至无 说明书 2/3 页 4 CN 108102012 A 4 醇味， 再用1.0M HCl浸泡3h， 洗至中性， 然后用1.0M NaOH浸泡3h， 再洗至中性后真空330K干 燥8h。 0027 (3)将步骤(2)中得到的树脂于2000mL的DMF溶胀24h， 加入质量为200g的氨基葡萄 糖盐酸盐、 质量400g的K2CO3。 363K条件下恒温机械搅拌10h。 反应结束后， 过滤， 水洗， 95乙 醇索氏抽提10h， 产物在323K下真空干燥48h得到氨基葡萄糖修饰的新型树脂。 0028 (4)称取100g木姜叶柯干燥嫩叶粉碎， 用85的乙醇溶剂1000mL回流提取3次， 合 并提取液， 浓缩去除醇溶液； 再加入250mL 1的碳酸钠溶液酸化， 过滤， 得木姜叶柯甜茶提 取碱液。 0029 (5)将步骤(4)得到的提取液上柱， 用30-90乙醇溶液洗脱， 用100mL乙酸乙酯 萃取， 浓缩得到纯度大于80的三叶苷3.04g。 说明书 3/3 页 5 CN 108102012 A 5 。