技术领域
本发明属于生物检测领域，特别是可用于肠道病毒71型的临床辅助诊 断的多肽、包含该多肽的检测器件的检测试剂盒。
背景技术
肠道病毒71型(Human enterovirus 71)，简称EV71，是引起婴幼儿手 足口病(hand-foot and mouth disease；HFMD)主要病原体之一。人类肠病 毒71型于1969年首次从加利福尼亚患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本 中分离出来的。
EV71主要引起手足口病，还可引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰 质炎样的麻痹等多种神经系统疾病。手足口病和中枢神经系统感染是EV71 感染而引起的两大常见临床症状。病毒从咽部或肠道侵入，在局部黏膜或淋 巴组织中繁殖，并由局部排出，此时可引起局部症状。继而病毒又侵入局部 淋巴结，并由此进入血液循环导致第一次病毒血症。病毒经血循环侵入网状 内皮组织、深层淋巴结、肝、脾、骨髓等处大量繁殖并由此进入血液循环， 引起第二次病毒血症。病毒可随血流进入全身各器官，如中枢神经系统、皮 肤黏膜、心脏等处，进一步繁殖并引起病变。易感者感染EV71后，出现血 管变态反应和组织炎症病变。当病毒累及中枢神经系统时，组织炎症较神经 毒性作用更加强烈，中枢神经系统小血管内皮最易受到损害。细胞融合、血 管炎性变、血栓形成可导致缺血和梗死。在脊髓索、脑干、间脑、大脑和小 脑的局部组织中，除嗜神经性作用外，还存在广泛的血管周围和实质细胞炎 症道病毒71型危害极大，目前急需简便快捷准确的仪器是实现对其的快速 检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多肽、包含该多肽的检测器件、以及包含该 检测器件的检测试剂盒，它们对肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71 型抗体IgG的临床辅助诊断是有用的。本发明目的在于提供该多肽在制备可 用于肠道病毒71型诊断的检测试剂盒中的用途。
即，本发明包含下述技术方案：
1.一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，即： EYGLTMTPADKSPCFNEVNW。
2.一种检测器件，其包括：
固体载体，以及
连接于该固体载体上的权利要求1所述的多肽。
3.根据权利要求2所述的检测器件，其中，所述固体载体是SJ改性硅 胶。
4.根据权利要求2所述的检测器件，其用于肠道病毒71型抗体IgM或 者肠道病毒71型抗体IgG的临床辅助诊断。
5.一种检测试剂盒，其包括权利要求2～4中任一项所述的检测器件。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其用于肠道病毒71型抗体IgM 或者肠道病毒71型抗体IgG的临床辅助诊断。
7.权利要求1所述的多肽在制备检测试剂盒中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其中，所述检测试剂盒用于肠道病毒 71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体IgG的临床辅助诊断。
9.根据权利要求7所述的用途，其中，所述检测试剂盒包括权利要求 2～4中任一项所述的检测器件。
将本发明应用于肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体IgG的 临床辅助诊断，能够取得令人满意的效果。
附图说明
图1对SJ改性硅胶(iPDMS薄膜)的制作过程进行说明的示意图。
图2说明肠道病毒EV71型IgM多肽微阵列的点样模式的示意图。
图3说明肠道病毒EV71型IgM多肽微阵列的点样模式的示意图。
图4显示对健康正常人或非肠道病毒71型感染病人血清进行检测的结 果的照片。
图5显示对肠道病毒71型感染病人血清中的抗体IgM进行检测的结果 的照片。
图6显示对肠道病毒71型感染病人血清中的抗体IgG进行检测的结果 的照片。
发明的具体实施方式
本发明的多肽
在另一个方面中，本发明提供对对肠道病毒71型的早期筛查和临床辅 助诊断有用的多肽，由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列构成，即： EYGLTMTPADKSPCFNEVNW。如实施例所示，本发明的多肽对肠道病毒 71型感染病人的血清呈阳性反应，而对健康正常人或非肠道病毒71型感染 病人血清呈阴性反应。因此，本发明的多肽作为肠道病毒71型抗体IgM或 者肠道病毒71型抗体IgG的临床辅助诊断工具是有用的。本发明的多肽可 以用于制造可用于肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体IgG临床 辅助诊断的检测器件(例如下述的本发明的检测器件)或检测试剂盒(例如 下述的本发明的检测试剂盒)。
本发明的多肽可以适宜采用(1)化学合成方法、或(2)酶反应合成方法等 公知方法来获得，但不限于此，其中化学合成更为简便。在化学合成本发明 的多肽情况下，通过使用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学 合成方法，可以列举出例如肽固相合成法等。这样合成的肽可以采用常规手 段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱等进行纯化。这样的肽 固相合成方法以及其后的肽纯化都是本技术领域公知的。
此外，在通过酶反应生产本发明的多肽的情况下，可以采用例如国际公 开小册子WO2004/011653号所述的方法。即，可以这样来生产：将一方的 氨基酸或二肽的羧基末端被酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、与氨基酸 处于游离状态的氨基酸(例如羧基保护的氨基酸)在肽合成酶的存在下进行反 应，生成的二肽或三肽。作为肽合成酶，可以列举出：具有生成肽的能力的 微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体处理物、 或该微生物来源的肽合成酶。
而且，除了上述的酶方法、化学合成方法以外，还可以采用例如基因工 程方法来生产本发明的多肽。
本发明的多肽的氨基酸序列可以采用常规的方法进行分析和确认，例如 可以利用质谱、色谱等方法来进行分析和确认。
本发明的检测器件
在另一方面中，本发明还提供一种检测器件(本发明的检测器件)，其包 括固体载体、以及连接于该固体载体上的本发明的蛋白质或本发明的多肽。 所述检测器件对于肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体IgG临床 辅助诊断是有用的。
在本发明中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料 (例如是可以通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料)的载 体即可。
构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶(聚二甲基硅氧烷，PDMS)、 纤维素、特氟隆TM、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯乙烯、聚 丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚丙烯、尼龙、聚偏二氟乙烯、胶乳、 二氧化硅、玻璃、玻璃纤维、金、铂、银、铜、铁、不锈钢、铁氧体、硅晶 片、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白(白蛋白等)、碳或 它们的组合等。
固体载体的形状包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、 板、微量板、碳纳米管、传感器芯片等。正如本技术领域公知的那样，薄膜 或板等平坦的固体载体上可以设置凹坑、沟槽、滤膜底部等。
在本发明中，磁珠可以具有约25nm～约1mm范围的球体直径。在优选 的实施方式中，磁珠具有约50nm～约10μm范围的直径。磁珠的尺寸可以根 据特定的用途来进行选择。
在本发明中，由Sepharose等高交联球形琼脂糖制成的珠子具有约 24μm～约165μm范围的直径。优选地，高交联球形琼脂糖珠具有约24μm～ 约44μm范围的直径。高交联球形琼脂糖珠的尺寸可以根据特定的用途来进 行选择。
具有疏水性表面的固体载体的例子包括可从Polysciences，Warrington， PA或Spherotech，Liberville，IL购买的制品等聚苯乙烯胶乳珠。
二氧化硅(SiO2)-处理或二氧化硅(SiO2)基的固体载体的例子包括可从 Polysciences，Warrington，PA购买的超常磁性二氧化硅珠等，其可以用于捕 捉核酸(例如DNA)。或者，还可以使用可从Dynal Biotech购买的M-280等。
具有亲水性表面的磁珠可用于捕捉增殖期的细菌细胞、核酸以及其它成 分。作为该磁珠的例子，可以列举出Polysciences，Warrington，PA销售的 珠子(名称：Biomag(注册商标)羧基)、或者Bangs Laboratory，Inc.，Fishers， IN的名称为MC02N/2928的珠子。或者，可以使用Dynal Biotech销售的 M-270等。
在本发明的一个优选实施方式中，所述固体载体是SJ改性硅胶，其是 苏州偲聚生物材料有限公司开发的一种硅橡胶材质的微阵列固体支撑材料 (iPDMS薄膜，参见中国专利公开CN101265329A)。这种材料是以生物学研 究常用的PDMS为基础，在其中加入特定的引发剂成分(使该材料可通过表 面引发聚合反应(SIP)实现表面功能化修饰)，再经过聚乙二醇甲基丙烯酸酯 (poly(oligo(ethylene glycol)methacrylate)，pOEGMA)表面修饰获得的。SJ 改性硅胶具有优秀的抗蛋白质非特异性吸附(Nonspecific protein adsorption， NPA)能力，可以将复杂蛋白免疫检测中的非特异性蛋白质吸附控制到接近 “绝对0”水平(接近或低于仪器的检测极限)，不仅可以免除封闭和多次清洗 的麻烦，还可以通过使用更强的信号扩增手段来提高蛋白质微阵列的灵敏 性。而且其硅橡胶的本质赋予了该材料较强的机械性能和良好的可操作性。 苏州偲聚已经成功地将SJ改性硅胶应用于11个肿瘤标志物组成的多指标联 检微阵列ELISA试剂盒，实现了高通量和高灵敏的检测，证明了这种材料 是一种优秀的蛋白质微阵列固体支撑材料。同时，这种材料还具有表面性质 可调的特性，可以通过控制修饰反应时间在一定范围内调整其表面形貌。
本发明的多肽与固体载体的连接可以采用本领域技术人员公知的多肽 与固体载体的连接方法来进行。例如，对于蛋白质/多肽与改性硅胶表面的连 接而言，可以通过1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺 [1-ethyl-3-(3-dimethyl ami-nopropyl)carbodiimide，EDC]和N-羟基琥珀酰亚胺 (N-hydroxysuccinimide，NHS)的反应将改性硅胶表面高分子链上的羧基 (-COOH)基团改为活化基团，该活化基团可与蛋白/多肽上所带的氨基(-NH2) 反应从而实现将蛋白/多肽固定于固体载体表面(参见例如Hongwei Ma， Yuanzi Wu,Xiaoli Yang,Xing Liu,Jian’an He,Long Fu,Jie Wang,Hongke Xu, Yi Shi and Renqian Zhong,Integrated poly(dimethysiloxane)with an intrinsic nonfouling property approaching“Absolute”zero background in immunoassays, Anal.Chem.,82,6338–6342,2010)。
对于点样时使用的点样液中本发明的多肽的浓度没有特殊限制，本领域 技术人员可以依常规选择，优选为1μg～1000μg/mL，更优选10μg～500μg/mL。 此外，对于本发明的多肽在固体载体上分布的密度没有特殊限制，本领域技 术人员可以依常规选择，优选为1～100点/10mm2，更优选5～50点/10mm2。
本发明的检测器件对于肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体 IgG临床辅助诊断是有用的，或者其可以用于制造肠道病毒71型抗体IgM 或者肠道病毒71型抗体IgG临床辅助诊断的检测试剂盒。
本发明的检测试剂盒
在另一个方面中，本发明还提供一种检测试剂盒(本发明的检测试剂盒)， 其包括本发明的检测器件。该检测试剂盒可用于肠道病毒71型抗体IgM或 者肠道病毒71型抗体IgG的临床辅助诊断。
本发明的检测试剂盒必须包含本发明的检测器件。本发明的检测试剂盒 还可以包括：
1.配好的血清样本稀释液或血清样本稀释液组分溶液：样本稀释液，例 如有北京赛驰生物科技有限公司的样本稀释液(产品编号070021-S2)、郑州 博威嘉生物科技有限公司的加样变色样本稀释液(产品编号bwj010103)等。 该类样本稀释液为含BSA、蔗糖等成分的PBS溶液，含防腐剂，澄清液体， 可直接使用。该样本稀释液用来稀释血清，试剂盒检测的血清要稀释适当倍 数，例如2～200倍，优选10～100倍。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
2.浓缩洗液及洗液：固体载体表面孵育血清及酶标二抗后，需用洗液清 洗掉固体载体表面未结合的抗体和酶标二抗。浓缩洗液例如是1％的吐温20 水溶液，使用时需稀释2～40倍、优选5～20倍。可以通过将浓缩洗液(10×) 用纯化水或蒸馏水按1:9稀释，来配置洗液。例如，450mL纯化水或蒸馏水 中加入50mL浓缩洗液(10×)，充分混匀。未使用完的洗液放在2～8℃保存, 可保存3个月。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
3.酶标二抗溶液：人肠道病毒71型感染者血清中的IgM或者IgG可与 固体载体(例如SJ改性硅胶)上的本发明的多肽结合，酶标二抗可与抗体结 合，而酶标二抗上的标记物可与发光底物混合溶液反应，从而发出可检测的 光。酶标二抗可以是例如辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM或辣根过氧化物 酶标记的羊抗人IgG。对酶标二抗在酶标二抗溶液中的浓度没有特殊限制， 可以是例如1ng～1000ng/mL。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
4.发光底物混合溶液：发光底物混合溶液可与酶标二抗上标记的辣根过 氧化物酶反应，使得反应发出仪器可检测到的化学光，发光底物混合溶液包 括发光底物液A—过氧化氢溶液，及发光底物液B—发光氨(鲁米诺)溶液。使 用时预先采用两种发光底物液体以等体积混合而成，得到发光底物混合溶液 (45分钟内使用)。发光氨只有用氧化剂处理过才会发光。通常使用双氧水 和一种氢氧化物碱的混合水溶液作为激发剂。在辣根过氧化物酶催化下，双 氧水分解为氧气和水：
2H2O2→O2+2H2O
鲁米诺与氢氧化物反应时生成了一个双负离子，它可被过氧化氢分解出 的氧气氧化，产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定，立即分解出 氮气，生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸。激发态至基态转化中，释放的能量 以光子的形式存在，波长位于可见光的蓝光部分。发光底物混合溶液的例子 例如Thermo Seientific公司的ELISA Femto Maximum Sensitivi- ty Substrate，货号37074。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
5.一个或两个以上的反应腔体，根据需求可以采用例如双面的生物孵育 反应器，中国专利ZL 201120177686.3或者ZL201110142518.5；或者单面的 生物孵育反应器ZL201220430886.x。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
6.其他用于检测肠道病毒71型的检测分子(例如多肽、蛋白质、核酸等)。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
7.使用说明书，其中记载了该检测试剂盒可以用于肠道病毒71型抗体 IgM或者肠道病毒71型抗体IgG临床辅助诊断。
反应器件和反应试剂盒可以例如采用凝胶成像仪进行化学发光成像。作 为凝胶成像仪，可以采用例如GE LAS4000mini型或天能5500型微阵列成 像仪。
实施例
以下，通过实施例对本发明进行更具体的说明，但并不是对本发明技术 范围的限定。通过本说明书的记载，本领域技术人员可以容易的对本发明进 行修饰/改变，这些包含在本发明的技术范围内。本发明的范围由权利要求书 确定。
1.多肽制备与确认
实施例中使用的多肽具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，由上海吉 尔生化有限公司合成，该多肽的表征可通过氢谱和质谱确认合成了所述多 肽。液相色谱法检测纯度:96.03％(面积归一法)：质谱法检测(ESI-MS):计 算分子量：2302.58，测试值：2302.70。
2.检测器件的制备
检测芯片是以SJ改性硅胶(iPDMS薄膜)为固体支撑材料，在其上通过 点样固定多肽溶液制备而成。改性硅胶是在传统的聚二甲基硅氧烷材料中加 入带烯烃末端的、表面引发聚合反应的引发剂，并通过热交联(硅氢键键合) 固定到聚二甲基硅氧烷的三维结构中，得到SJ改性硅胶，其制作过程如图1 所示。
其中的A和B为聚二甲基硅氧烷的两个组分，聚二甲基硅氧烷 (Poly(dimethylsiloxane)，Sylgard 184)购买自美国道康宁(DowCorning)公司， 包含液态组分A(成分为金属铂催化剂与带乙烯基的二甲硅氧烷高分子前体 混合物)和交联剂B(成分为带有乙烯基和Si-H基团的二甲基硅氧烷前体)两 种成分。C为末端带乙烯基的引发剂，购于杭州东伟公司。最后修饰上的高 分子是寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯单体(Oligo(ethylene glycol)methacrylate，以 下简称OEGMA，分子量Mw＝526)购买于Aldrich。将聚二甲基硅氧烷前体 A和交联剂B与带乙烯基末端的引发剂C以A：B：C＝10：1：0.5比例充 分混合。通过固化反应制成透明的弹性硅橡胶，然后通过SIP技术进行表面 修饰即可得到SJ改性硅胶。实验表明，SJ改性硅胶的表面有足够高密度的、 通过共价键固定的引发剂，其可以通过表面引发聚合反应(SIP)实现表面高分 子修饰。使用poly(OEGMA)(聚乙二醇甲基丙烯酸酯)进行反应获得聚乙二醇 (Polyethylene Glycol，PEG)修饰的表面，实现较强的抗蛋白非特异性吸附 的能力。
制好的SJ改性硅胶薄膜需保存在4℃冰箱中。
采用晶芯16个人点样仪在改性硅胶上制备多肽微 阵列，过程为：
1)预处理
将SJ改性硅胶薄片(15×15mm2)浸泡在活化液中，30min后取出用去离 子水淋洗3次，用氮气吹干，马上用于点样。
2)点样
将点样液稀释好并转移到384孔板相应的微孔中，将带样本的384孔 板置于点样仪基台上，同时将预处理的改性硅胶薄片置于点样仪的基台上， 马上进行点样。点样环境条件为室温(25℃)，湿度设定为50％。制成的多肽 微阵列上每个点的点样量约为0.6nL，样点半径为200μm。
3)化学固定
刚制好的多肽微阵列要放在恒温恒湿箱(26℃，60％湿度)中固定至少6h。 化学固定过程如下:
首先通过点样仪将包含有捕获多肽分子的缓冲液点在改性硅胶薄膜上， 接着缓冲液开始蒸发，捕获多肽分子与SJ改性硅胶表面亲密接触并相互作 用，通过化学结合，改性硅胶表面的ploy(OEGMA)高分子的末端-COOH与 多肽分子的-—NH2形成稳定共价键，进而将有化学活性的多肽分子固定在 SJ改性硅胶表面。
4)装配
固定6h的多肽微阵列必须在两天内装配好。首先通过背胶将SJ改性硅 胶薄片贴在专门的反应柱上，盖上反应腔体。生物孵育反应器可以根据需求 采用双面生物孵育反应器，即，一个反应器由两个反应柱和一个反应腔体组 成，或者单面生物孵育反应器，即，一个反应器由一个反应柱和一个反应腔 体组成。
5)保存
装配好的多肽微阵列，需要抽真空密封，保存在4℃的冰箱中，备用。
3.用检测器件进行检测
检验步骤
抗体IgM检测芯片：
1)平衡试剂温度：将所有试剂平衡至室温。
2)洗液的配制：将浓缩洗液用纯化水或蒸馏水按1:9稀释，例如：450mL 纯化水或蒸馏水中加入50mL浓缩洗液，充分混匀。未使用完的洗 液放在2～8℃保存,可保存3个月。
3)样品的稀释：将待测样品用血清稀释液按1:100稀释(如：2μL血清 加入到198μL血清稀释液，充分混匀)。一次样品检测需要稀释后 的样品200μL。
4)润湿芯片：取出检测所需的生物芯片孵育反应器。加入1mL洗液， 浸润芯片表面3分钟。弃去浸泡芯片的洗液。
5)加样：在本实施例中，以单面生物孵育反应器加样，使用移液枪将稀 释好的待测样品通过加液通气孔(两个中任意一个)加入单面生物 孵育反应器中，每个单面生物孵育反应器加200μL，用密封贴封 闭加液通气孔(两个)。
6)样品孵育：将加完样的单面生物孵育反应器置于水平摇床上150rpm， 室温孵育30分钟。
7)清洗：将反应柱从单面生物孵育反应器的反应腔体中取出，弃去反应 器内液体，反复冲洗反应柱顶部芯片表面和反应腔体内部3次(每 次约用12mL洗液，冲洗1-2分钟)。
8)酶标抗体孵育：将反应柱与反应腔体重新组合，卡紧。揭去密封贴， 每个单面生物孵育反应器加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM溶 液200μL。重新用密封贴封闭加液通气孔。置于摇床上150rpm， 室温孵育30分钟。
9)再清洗：弃去反应腔体，用洗液仔细清洗芯片表面3次。
10)加入发光底物液：每个芯片表面分别加入30μL发光底物液，使发光 液能均匀的铺于芯片表面
11)芯片成像：将加入了发光底物液液的芯片用化学发光图像分析系统 对芯片进行曝光1分钟成像。作为化学发光图像分析系统时，没有 特殊限制，使用例如天能5500型微阵列成像仪、偲捷牌TN5500型 微阵列成像仪或偲捷牌CLEAR4000型微阵列成像仪等均可。
抗体IgG检测芯片：：
1)平衡试剂温度：将所有试剂平衡至室温。
2)洗液的配制：将浓缩洗液用纯化水或蒸馏水按1:9稀释，例如：450mL 纯化水或蒸馏水中加入50mL浓缩洗液，充分混匀。未使用完的洗 液放在2～8℃保存,可保存3个月。
3)样品的稀释：将待测样品用血清稀释液按1:100稀释(如：2μL血清 加入到198μL血清稀释液，充分混匀)。一次样品检测需要稀释后 的样品200μL。
4)润湿芯片：取出检测所需的生物芯片孵育反应器。加入1mL洗液， 浸润芯片表面3分钟。弃去浸泡芯片的洗液。
5)加样：在本实施例中，以单面生物孵育反应器加样，使用移液枪将稀 释好的待测样品通过加液通气孔(两个中任意一个)加入单面生物 孵育反应器中，每个单面生物孵育反应器加200μL，用密封贴封 闭加液通气孔(两个)。
6)样品孵育：将加完样的U型芯片反应器置于水平摇床上150rpm，室 温孵育30分钟。
7)清洗：将反应柱从单面生物孵育反应器的反应腔体中取出，弃去反应 器内液体，反复冲洗反应柱顶部芯片表面和反应腔体内部3次(每 次约用12mL洗液，冲洗1-2分钟)。
8)酶标抗体孵育：将反应柱与反应腔体重新组合，卡紧。揭去密封贴， 每个单面生物孵育反应器加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG溶 液200μL。重新用密封贴封闭加液通气孔。置于摇床上150rpm， 室温孵育30分钟。
9)再清洗：弃去反应腔体，用洗液仔细清洗芯片表面3次。
10)加入发光底物液：每个芯片表面分别加入30μL发光底物液，使发光 液能均匀的铺于芯片表面。
11)芯片成像：将加入了发光底物液液的芯片用化学发光图像分析系统 对芯片进行曝光1分钟成像。作为化学发光图像分析系统时，没有 特殊限制，使用例如天能5500型微阵列成像仪、偲捷牌TN5500型 微阵列成像仪或偲捷牌CLEAR4000型微阵列成像仪等均可。
健康正常人血清、肠道病毒71型感染病人血清及其他疾病病人血清样 本由合作医院提供，疾病标准均经过临床检验确证，均获得了提供者的知情 同意书。
阴性对照有PBS缓冲液(即在第3步中不用待测血清孵育，而用PBS溶 液孵育，其余步骤相同)的对照，血清稀释液的对照，及阴性血清(指健康人 及非肠道病毒71型感染病人的血清)的对照。
检测肠道病毒EV71型IgM多肽微阵列的点样模式如图2所示：其中， 黑色圆形的16个点的样本为人IgM或人IgG，作为定位点；正方形的4个 点的样本为PB点样液，作为实验的空白对照；白色圆形点的样本是其他的 肠道病毒71型自身抗原蛋白多肽，作为检测指标(这些多肽有响应说明被检 测的血清中有肠道病毒71型自身抗体)；星形点的样本多肽为本发明的多肽， 它是肠道病毒71型自身抗原蛋白多肽，会对肠道病毒71型感染患者血清产 生响应。
检测肠道病毒EV71型IgG多肽微阵列的点样模式如图3所示：其中， 黑色圆形的16个点的样本为人IgG，作为定位点；正方形的4个点的样本 为PB点样液，作为实验的空白对照；白色圆形点的样本是其他的肠道病毒 71型自身抗原蛋白多肽，作为检测指标(这些多肽有响应说明被检测的血清 中有肠道病毒71型自身抗体)；星形点的样本多肽为本发明的多肽，它是肠 道病毒71型自身抗原蛋白多肽，会对肠道病毒71型感染患者血清产生响应。
使用该多肽微阵列按照上述检测步骤对肠道病毒71型感染病人血清及 阴性对照进行了检测，响应模式如图4～6所示：其中，图4显示了阴性对照 的检测结果，只有黑色圆形所示的点的样本有响应。图5显示了肠道病毒71 型感染病人血清IgM的检测结果，黑色圆形、白色圆形和星形点的样本有响 应。图6显示了肠道病毒71型感染病人血清IgG的检测结果，黑色圆形、 白色圆形和星形点的样本有响应。需要说明的是，仪器测得信号值由低到高， 相应的信号点颜色由黑—红—白渐变。
通过实验证明，本发明的多肽在肠道病毒71型的检测中是有用的，不 仅可以用于检测血清中的IgM抗体，还可以用于检测血清中的IgG抗体，能 够取得令人满意的效果。
序列表
<110> 苏州九龙医院有限公司
<120> 多肽、包含该多肽的检测器件和包含该器件的检测试剂盒
<130> E05-090
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<223> 肠道病毒71型抗原性多肽
<400> 1
Glu Tyr Gly Leu Thr Met Thr Pro Ala Asp Lys Ser Pro Cys Phe Asn
1 5 10 15
Glu Val Asn Trp
20