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1、(10)申请公布号 CN 102108384 A (43)申请公布日 2011.06.29 CN 102108384 A *CN102108384A* (21)申请号 200910200488.1 (22)申请日 2009.12.23 C12Q 1/68(2006.01) G01N 21/64(2006.01) (71)申请人 上海主健生物工程有限公司 地址 200433 上海市国定路 335 号 2 号楼 6 楼 (72)发明人 冯哲民 邹祖烨 贺宪民 (54) 发明名称 预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒 (57) 摘要 本发明公开了一种预防妊娠高血压综合征的 检测试剂盒， 包括检测 ACE。
2、 基因上 rs4646994 号 I/D 多态性基因型的电泳检测引物对、 检测 MTHFR 基因上 rs1801133 号 SNP 多态性基因型的特异性 引物对及特异性荧光探针对、 Taq 酶、 dNTP 混合 液、 MgCl2溶液、 荧光定量 PCR 反应缓冲液、 去离子 水。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 CN 102108387 A1/1 页 2 1. 一种预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒， 包括电泳检测引物对、 特异性引物对及 特异性荧光探针对、 Taq 酶、 dNTP 混合液、 MgCl2溶液、。
3、 荧光定量 PCR 反应缓冲液、 去离子水， 其特征在于 ： 电泳检测引物对是针对ACE基因上rs4646994号I/D多态性基因型设计的， 特 异性引物对及特异性荧光探针对是针对 MTHFR 基因上 rs1801133 号 SNP 多态性基因型设计 的。 权 利 要 求 书 CN 102108384 A CN 102108387 A1/2 页 3 预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒 技术领域 0001 本发明涉及分子生物学和医学领域， 更具体的， 本发明涉及一种预防妊娠高血压 的检测试剂盒。 背景技术 0002 围产期保健对降低孕产妇死亡、 围产儿死亡以及病残儿的发生、 保障母婴安全健 康具有。
4、重要意义。 在围产期期间， 孕妇容易发生妊娠高血压综合征。 妊娠高血压综合征(简 称妊高征 )， 是孕产妇特有的一种全身性疾病， 在我国的发病率为 10.32， 多发生在妊娠 20 周以后至产后 2 周， 临床上主要表现为水肿、 高血压、 蛋白尿三大症候群， 重度患者伴有 头痛、 眼花、 甚至抽搐、 昏迷。 本病严重威胁母胎健康， 是引起孕产妇和围产儿死亡的主要原 因。 0003 众多研究发现， 该疾病具有较高的遗传倾向。妊娠高血压综合征的遗传易感基因 主要为血管紧张素转换酶基因 (ACE) 和 5， 10- 亚甲基四氢叶酸还原酶基因 (MTHFR)。 0004 血管紧张素转换酶 (ACE) 。
5、基因与围产期妊高征密切相关。ACE 基因编码血管紧张 素转化酶， 在人体内具有多种功能。 ACE基因多态性是冠心病、 心肌病、 高血压等多种围产期 疾病发病的独立危险因素。Bedir A 在土耳其人群中的研究发现 ACE 的 I/D 基因型影响着 ACE 的活性， 其中 DD 基因型的活性较高而 II 基因型的活性较低。而在高血压中 ACE 的血清 水平明显比非高血压个体的水平为高， 因此认为 ACE 的 DD 基因型与高血压相关， 并可能是 严重高血压的重要标记和高血压的独立危险因子。 2006年， 陈柏坤等人对92例妊娠高血压 综合征患者及 85 名正常妊娠者的 ACE 基因多态性进行研究。
6、。结果显示， 妊娠高血压综合征 组 ACE 基因 3 种基因型频率分别为 DD 型 44.6、 ID 型 33.7、 II 型 21.7 ； 对照组 ACE 基因 3 种基因型频率分别为 DD 型 18.8、 ID 型 40.0、 II 型 41.2。两组的 DD 基因型 及 D 等位基因频率比较差异有显著性 (P 0.05)。结果显示 ACE 基因的缺失多态性 (DD) 可能为妊高征发病的重要遗传因素之一。 0005 5， 10- 亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR) 基因与妊娠期高血压综合征密切相关。 MTHFR 为亚甲基四氢叶酸还原酶蛋白编码基因， 主要作用是在叶酸代谢通路中将 5， 1。
7、0- 亚 甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸盐。 MTHFR基因的缺陷可以导致机 体多个必需生化途径的紊乱， 包括细胞周期调控、 DNA 合成和甲基化修饰等， 并进而引发各 类心脑血管疾病、 癌症和神经管缺陷等多种疾病。 2006年， 王素敏等人对同型半胱氨酸代谢 酶 - 甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR) 基因多态性在妊高征发病中的作用地位进行研究。结果 显示， 病例组 MTHFR C677T C/T 基因型频率显著高于正常对照组， T 等位基因频率显著高于 对照组 (P 0.05)。MTHFR C677T 基因突变是妊高征发生的遗传风险因素， 可作为妊高征 预后的检测指标。。
8、 发明内容 0006 本发明提供一种预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒。 说 明 书 CN 102108384 A CN 102108387 A2/2 页 4 0007 该试剂盒包括 ： 检测 ACE 基因上 rs4646994 号 I/D 多态性基因型的电泳检测引物 对、 检测 MTHFR 基因上 rs1801133 号 SNP 多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针 对、 Taq 酶、 dNTP 混合液、 MaCl2溶液、 荧光定量 PCR 反应缓冲液、 去离子水。 0008 本试剂盒中所述的特异性引物和荧光探针对于本领域的普通技术人员来说是能 够轻易完成设计的， 特异性引物和荧光探针对。
9、可用常规的 DNA 合成技术进行合成。 具体实施方式 0009 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验 方法， 通常按照常规条件， 或按照厂商所建议的条件。 0010 实施例 检测试剂盒的使用 0011 步骤 1 ： DNA 模板的抽取 0012 用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组 DNA。 0013 步骤 2 ： 荧光定量 PCR 反应 0014 使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装， 进行荧光定量PCR反应， 反应的体系为总 体积 10l， 包含浓度为 20ng/l 的 DNA 模板 2l、 1l 10X 荧光定量 PCR 反应缓冲液、 0.1l 25m。
10、M dNTP 混合液、 0.6l 25mMMgCl2溶液、 0.025l(5units/l)Taq DNA 聚合 酶、 20M 的有义引物和反义引物各 0.225l、 10M 的带 VIC 荧光探针和带 FAM 荧光探针 各 0.25l， 去离子水 5.325l。 0015 在PCR扩增仪上进行反应， 反应条件为50、 2分钟， 95、 10分钟， 进行60个循环 的 95、 30 秒， 60、 1 分钟。反应结束后在荧光定量 PCR 仪上读取样品荧光量。 0016 步骤 4 ： 基因型分析 0017 根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对 SNP 位点进行基因型分析。 0018 熟悉荧光定量 PCR 技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量 PCR 仪上显示 的最终样品荧光量， 根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的 SNP 位点的基因 型。 说 明 书 CN 102108384 A 。