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1、10申请公布号CN104292163A43申请公布日20150121CN104292163A21申请号201410440712522申请日20140901201310392413420130902CNC07D225/06200601C07D405/12200601C07D403/12200601C07D401/12200601C07D409/12200601C07F9/553200601A61K31/395200601A61K31/4523200601A61K31/5377200601A61K31/4025200601A61K31/675200601A61P35/0020060171申请人中国。
2、医学科学院医药生物技术研究所地址100050北京市东城区天坛西里1号72发明人李艳萍武临专王真李卓荣蒋智崔靖74专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司11139代理人孙皓晨马鑫54发明名称具有抗多种肿瘤活性的格尔德霉素类似物及其制备方法和应用57摘要本发明公开了一组具有抗多种肿瘤活性的格尔德霉素类似物及其制备方法和应用。本发明利用半合成方法得到17及19位分别被修饰的格尔德霉素类似物，实验证明，这些化合物具有抗多种肿瘤的活性，且毒性比格尔德霉素明显降低，因此本发明的一组具有抗多种肿瘤活性的格尔德霉素类似物在作为抗肿瘤药物方面将具有广阔的应用前景。66本国优先权数据51INTCL权利要。
3、求书1页说明书7页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书7页10申请公布号CN104292163ACN104292163A1/1页21格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述的格尔德霉素类似物的结构如式I所示其中，R1为取代的氨基，R2为烷基取代的巯基。2如权利要求1所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐，其特征在于R1为NHCH2NR，其中N16，R为饱和或不饱和的杂环基、经取代的饱和或不饱和的杂环基或磷酸酯基，R2为含15个碳原子的烷基取代的巯基。3如权利要求2所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐，其特征在于当R为饱和或不饱和的杂环基或经。
4、取代的饱和或不饱和的杂环基时，N13，其中杂环基为含N、O或S杂原子中至少一种的五元或六元饱和或不饱和的杂环烃，R2为含13个碳原子的烷基取代的巯基；当R为磷酸酯基时，N12，R2为含13个碳原子的烷基取代的巯基。4如权利要求3所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述的经取代的饱和或不饱和的杂环基中，取代基为含15个碳原子的烷基；所述的磷酸酯基为磷酸甲酯基、磷酸二甲酯基、磷酸乙酯基或磷酸二乙酯基。5如权利要求14任一项所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐，其特征在于R1为R2为甲硫基、乙硫基或丙硫基。6权利要求15任一项所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐，其特征。
5、在于所述的药学上可接受的盐包括所述的格尔德霉素类似物的盐酸盐、硫酸盐、磺酸盐、苯甲酸盐、草酸盐或富马酸盐。7权利要求16任一项所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。8权利要求7所述的用途，其特征在于所述的抗肿瘤药物为抗胃癌、乳腺癌、宫颈癌、肠癌或肝癌的药物。9一种用于抗肿瘤的药物组合物，其特征在于由权利要求16任一项所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐为活性成分，与一种或多种药学上可接受的载体所组成。权利要求书CN104292163A1/7页3具有抗多种肿瘤活性的格尔德霉素类似物及其制备方法和应用技术领域0001本发明涉及格尔德霉素类似物及其在制备抗肿瘤药物。
6、中的用途，特别涉及一组17,19位分别被取代的格尔德霉素类似物及其在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明属于医药技术领域。背景技术0002格尔德霉素GELDANAMYCIN，GA是一种从链霉菌中分离得到的天然的苯醌安莎类抗生素，具有抗肿瘤和抗病毒等多种生物活性SASAKIKETAL,JANTIBIOT,1979,32,84951。GA可以通过改变热休克蛋白HEATSHOCKPROTEIN，HSP90的构象，抑制其正常的分子伴侣功能，导致HSP90受体蛋白的降解HAHNJSETAL,BMBREP,2009,42,62330，继而阻断肿瘤赖以生存的信号转导通路。由于GA具有水溶性低和肝毒性大的缺陷，诸多。
7、旨在改善其缺陷，提高抗肿瘤活性的研究被报道。TIAN等曾经合成和评价了大量17烷氨基17脱甲氧基的GA衍生物、7位氨基甲酸酯类似物以及11位取代的GA类似物，17烷氨基17脱甲氧基的GA衍生物表现出了更明显的优势，其中17AAG和17DMAG已经进入临床试验阶段，但临床试验的结果不太乐观，这些肝毒性仍然较大TIANETAL,BMC,2004,12,531729；BMCL,2005,15,501621；JMC,2009,52,326573；后来有研究显示GA衍生物的氢醌型化合物具有明显改善的水溶性，且毒性明显降低，代表化合物也已经处于临床研究阶段GEJETAL,JMC,2006,49,46061。
8、5；SYDORJRETAL,PROCNATLACADSCIUSA2006；1031740813。另外已有研究显示GA类似物的19位在体内能与含硫蛋白发生加和反应可能是其致毒的原因CYSYK,RL,CHEMRESTOXICOL,2006,19,37681，因而提示19位取代可能降低这类化合物的毒性，而且最新的一篇发表在NATURECHEMISTRY上的文章显示，19位取代的格尔德霉素具有明显的低毒性优势KITSONRRETAL,NATURECHEMISTRY,2013,5,30714，而且之前我们的同事也分离或合成得到了多种19位硫醚取代的GA类似物，并且发现这些化合物具有明显的抗肿瘤活性，水溶。
9、性试验表明这些化合物还具有相比GA明显更高的溶解度LIUXETAL,JOURNALOFANTIBIOTICS,2011,64,51922；NISETAL,JMICROBIOLBIOTECHNOL,2011,21,599603。但是这类19位取代GA类似物的抗肿瘤活性中等，没有GA的活性强，因此有必要对其进行相应的改造，在改善水溶性的同时提高其抗肿瘤活性。0003本发明的目的，就是要以19位硫醚取代的GA类似物为原料，通过化学合成和活性测定筛选得到抗肿瘤活性更强，毒性降低的新型GA类似物。而且本发明涉及的这些化合物及其用于制备抗肿瘤药物的用途迄今均未见相关报道。发明内容0004本发明所要解决的技。
10、术问题在于提供一系列具有抗肿瘤活性强，且低毒的17烷氨基取代19硫醚取代的格尔德霉素类似物及其制备方法和应用。说明书CN104292163A2/7页40005为了达到上述目的，本发明所采用的技术手段为0006本发明以天然分离或合成得到的19位硫醚取代GA类似物为原料，在极性非质子性溶剂中，将其与氨基化合物反应后，经过柱层析分离纯化从而得到一系列17烷氨基取代19硫醚取代的新型格尔德霉素类似物。0007本发明的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述的格尔德霉素类似物的结构如式I所示00080009其中，R1为取代的氨基，R2为烷基取代的巯基。0010在本发明中，优选的，R1为NHC。
11、H2NR，其中N16，R为饱和或不饱和的杂环基、经取代的饱和或不饱和的杂环基或磷酸酯基，R2为含15个碳原子的烷基取代的巯基。0011其中，优选的，当R为饱和或不饱和的杂环基或经取代的饱和或不饱和的杂环基时，N13，其中杂环基为含N、O或S杂原子中至少一种的五元或六元饱和或不饱和的杂环烃，R2为含13个碳原子的烷基取代的巯基；当R为磷酸酯基时，N12，R2为含13个碳原子的烷基取代的巯基。0012其中，所述的经取代的饱和或不饱和的杂环基中，取代基优选为含15个碳原子的烷基；所述的磷酸酯基优选为磷酸甲酯基、磷酸二甲酯基、磷酸乙酯基或磷酸二乙酯基。0013更优选的，R1为R2为甲硫基、乙硫基或丙硫。
12、基。0014在本发明中，所述的药学上可接受的盐包括所述的格尔德霉素类似物的盐酸盐、硫酸盐、磺酸盐、苯甲酸盐、草酸盐或富马酸盐。0015采用MTT法测定了上述化合物对多种肿瘤细胞的抑制活性，如人乳腺癌细胞MCF7、宫颈癌细胞系HELA或人结肠癌细胞系HCT116，结果表明本发明合成的这些化合物具有抗多种肿瘤的活性，且对正常细胞的毒性比格尔德霉素明显降低，因此本发明的化合物具有更高的选择性指数，这类17，19位被分别取代的格尔德霉素类似物也因此能够成为更安全的用于单一给药或联合治疗抗肿瘤药物的选择。0016因此，进一步的，本发明还提出了所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的。
13、用途。说明书CN104292163A3/7页50017在本发明中，优选的，所述的抗肿瘤药物为抗胃癌、乳腺癌、宫颈癌、肠癌或肝癌的药物。0018更进一步的本发明还提出了一种用于抗肿瘤的药物组合物，其特征在于由本发明所述的格尔德霉素类似物或其药学上可接受的盐为活性成分，与一种或多种药学上可接受的载体所组成。0019有益效果0020本发明通过化学合成得到了一系列具有抗肿瘤活性强，且低毒的GA类似物，本发明的一组具有抗多种肿瘤活性的格尔德霉素类似物在作为抗肿瘤药物方面将具有广阔的应用前景。具体实施方式0021下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅。
14、是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。0022实施例119乙硫基格尔德霉素的制备化合物10023将GA分散到PBS溶液中，加入3当量的乙硫醇，室温避光搅拌至GA上方出现明显红色斑点，用乙酸乙酯萃取PBS溶液，有机层浓缩后上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到红色固体纯品。分子式C31H44N2O9S，ESIMS621M10024实施例219丙硫基格尔德霉素的制备化合物20025将GA分散到PBS溶液中，加入3当量的丙硫醇，室温避光搅拌。
15、至GA上方出现明显红色斑点，用乙酸乙酯萃取PBS溶液，有机层浓缩后上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到红色固体纯品。分子式C32H46N2O9S，ESIMS635M10026实施例317丙烯氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物30027将19乙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM30ML，加入2当量的丙烯胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C33H47N3O8S,ESIMS646M10028实施例4172二甲氨基乙氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物40029将19乙硫基格尔德。
16、霉素100MG溶于DCM30ML，加入2当量的2二甲氨基乙胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C34H52N4O8S，ESIMS677M10030实施例517丙烯氨基19甲硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物50031将从链霉菌发酵液中分离得到的19甲硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的丙烯胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C32H45N3O8S,ESIMS632M10032实施例617丙烯氨基19丙硫基17去甲氧基。
17、格尔德霉素的制备化合物60033将19丙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM30ML，加入2当量的丙烯胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到说明书CN104292163A4/7页6灰黑色固体纯品。分子式C34H49N3O8S,ESIMS660M10034实施例7172吡啶4基乙氨基19甲硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物70035将从链霉菌发酵液中分离得到的19甲硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的2吡啶4基乙胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分。
18、子式C36H54N4O8S；ESIMS703M10036实施例8172吡啶4基乙氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物80037将19乙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM30ML，加入2当量的2吡啶4基乙胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C37H56N4O8S，ESIMS717M10038实施例91722”羟基乙氧基乙氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物90039将19乙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM30ML，加入2当量的22羟基乙氧基乙胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上。
19、硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C34H51N3O10S，ESIMS694M10040实施例10172吡啶4基乙氨基19丙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物100041将19丙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM30ML，加入2当量的2吡啶4基乙胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C38H58N4O8S，ESIMS731M10042实施例1117磷酸二乙酯基甲氨基19甲硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物110043将从链霉菌发酵液中分离得到的19甲硫基格尔德霉素100M。
20、G溶于DCM，加入2当量的磷酸二酯基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C34H52N3O11PS,ESIMS742M10044实施例1217磷酸二乙酯基甲氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物120045将19乙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的磷酸二酯基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C35H54N3O11PS,ESIMS756M10046实施例1317磷酸二乙酯基甲氨基19丙硫基17去甲氧基格尔。
21、德霉素的制备化合物130047将19丙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的磷酸二酯基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C36H56N3O11PS,ESIMS770M10048实施例1417哌啶4基甲氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的说明书CN104292163A5/7页7制备化合物140049将19乙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的哌啶4基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C36H54N4O8。
22、S，ESIMS703M10050实施例15171乙基四氢吡咯2基甲氨基19甲硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物150051将从链霉菌发酵液中分离得到的19甲硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的1乙基四氢吡咯2基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C36H54N4O8S，ESIMS703M10052实施例16172噻吩2基乙氨基19甲硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物160053将从链霉菌发酵液中分离得到的19甲硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的2噻吩2基乙胺，室温密闭搅拌，4小。
23、时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C35H47N3O8S2，ESIMS702M10054实施例1717四氢呋喃2基甲氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物170055将19乙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的四氢呋喃2基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C35H51N3O9S，ESIMS690M10056实施例18171乙基四氢吡咯2基甲氨基19乙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物180057将19乙硫基格尔德霉素100。
24、MG溶于DCM，加入2当量的1乙基四氢吡咯2基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C37H56N4O8S，ESIMS717M10058实施例19171乙基四氢吡咯2基甲氨基19丙硫基17去甲氧基格尔德霉素的制备化合物190059将19丙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的1乙基四氢吡咯2基甲胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C38H58N4O8S，ESIMS731M10060实施例20172噻吩2基乙氨基19乙硫基1。
25、7去甲氧基格尔德霉素的制备化合物200061将19乙硫基格尔德霉素100MG溶于DCM，加入2当量的2噻吩2基乙胺，室温密闭搅拌，4小时后，浓缩反应液，残余物上硅胶柱，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇20/1，分离得到灰黑色固体纯品。分子式C36H49N3O8S2，ESIMS716M10062实施例21抗肿瘤活性测定0063收集生长良好的肿瘤细胞，用含10胎牛血清的MEM培养液配细胞悬液，接种于96孔板内，每孔190L，6000细胞/孔，37，5CO2孵箱培养24H后,加入20药说明书CN104292163A6/7页8液10L，每浓度设3个平行孔，设置空白对照。培养48H后弃上清,每孔加入MTT液20L。
26、5MG/ML，继续培养4H，吸弃上清液，用BIORAD680型酶标仪在检测波长570NM下测吸光度A值，存活率计算A样品/A空白对照100，采用GRAPHPADPRISM5统计软件计算IC50，GA类似物的抗肿瘤活性见表1。0064表1GA类似物的抗肿瘤活性及半数毒性浓度006500660067实施例22细胞毒性测定0068收集生长良好的正常人肝细胞L02，用含10胎牛血清的DMEM培养液配成说明书CN104292163A7/7页94104/ML的细胞悬液，接种于96孔板内，每孔100L。37，5CO2孵箱培养24H后,分别加入含不同稀释度药物的培养液100L，每浓度设3个平行孔，并设置空白对照。培养48H后吸弃上清，每孔加入MTT液20L5MG/ML，继续培养4H，吸弃上清液，用BIORAD680型酶标仪在检测波长570NM下测吸光度A值，存活率A样品/A空白对照100，采用GRAPHPADPRISM5统计软件计算IC50，结果如表1所示。说明书CN104292163A。