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1、10申请公布号CN104321321A43申请公布日20150128CN104321321A21申请号201380026183822申请日2013052213/479,39620120524USC07D417/12200601C07D417/14200601C07D277/56200601A61K31/427200601A61P35/0020060171申请人卡尔那生物科学株式会社地址日本兵库县申请人日本国立癌症研究中心72发明人泽匡明森山英树山田哲司下重美纪川濑裕介宇野佑子74专利代理机构中科专利商标代理有限责任公司11021代理人吴胜周54发明名称新型二环噻唑类化合物57摘要本发明涉及新型。
2、二环噻唑类化合物，其抑制TRAT2和NCK相互作用的激酶TNIK，并且因此可以用作TNIK抑制剂施用于癌症患者，尤其是施用于实体癌患者，如结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌或乳腺癌。所述二环噻唑化合物由以下式I所示其中R1、R2、R3和Q是如说明书中所定义，或其药用盐。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014111986PCT国际申请的申请数据PCT/JP2013/0649602013052287PCT国际申请的公布数据WO2013/176293EN2013112851INTCL权利要求书2页说明书106页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书。
3、106页10申请公布号CN104321321ACN104321321A1/2页21一种由以下通式表示的化合物或其药用盐其中，R1是其中A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7各自独立地是CZ或N，R2是氢原子、取代或未取代的烷基，R3是氢原子、取代或未取代的烷基、羟基、取代或未取代的烷氧基，Q是其中Y1、Y2、Y3和Y4各自独立地表示硫原子、氧原子、碳原子，或任选被氢原子或低级烷基取代的氮原子，Z、R4和R5独立地表示氢原子、卤原子、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、羟基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基、羧基、酯基、甲酰基、取代的羰基、取代的氨基甲酰基、取代。
4、或未取代的脲基、取代或未取代的芳族基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的杂芳族基、取代或未取代的酰基氨基、取代或未取代的芳基羰基氨基、硫醇基、取代或未取代的烷硫基、磺酸基、取代的砜基、取代或未取代的磺酰胺基、氰基、硝基，或者相邻的R4和R5可以组合而形成分别形成脂环族的或杂环的二环稠合环的5至7元环，其中所述5至7元环可以任选地具有取代基，R6是取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的杂环基。2根据权利要求1所述的化合物或其药用盐，其中Q是3根据权利要求1所述的化合物或其药用盐，其中Q是权利要求书CN10432132。
5、1A2/2页34根据权利要求1所述的化合物或其药用盐，其中Q是权利要求书CN104321321A1/106页4新型二环噻唑类化合物发明领域0001本发明涉及新型二环噻唑类化合物，其抑制TRAF2和NCK相互作用的激酶TNIK，并且因此可用作TNIK抑制剂施用于癌症患者，尤其是施用于实体癌患者，如结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌或乳腺癌。0002发明背景0003WNT蛋白构成一个大家族的分泌糖蛋白，其激活信号转导通路以控制多种细胞过程如确定细胞命运、增殖、迁移和极性。WNT蛋白能够通过若干通路进行信号传导，被最好表征的是通过联蛋白的规范通路WNT/联蛋白信号传导。WNT/联蛋白信号传导的。
6、失调经常在许多人类癌症如结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌及许多其他癌症中发现。0004TNIK已知是STE20家族激酶中的一个，其激活CJUNN端激酶通路并且调节细胞骨架。近期，在两种结直肠癌细胞系DLD1和HCT116中，TNIK被鉴定为通常与抗TCF4T细胞因子4和抗联蛋白抗体免疫沉淀的70个蛋白中的一个SHITASHIGEM等，GASTROENTEROLOGY2008，134196171。近期的研究已经证实，TNIK在规范的WNT信号传导通路中发挥关键作用，并且因此TNIK可以是消除肿瘤中的异常WNT信号传导的有前景的靶标SHITASHIGEM等，CANCERRES；70。
7、12；5024332010。即，靶向TNIK的小干扰RNA抑制结直肠癌细胞的增殖和通过将结直肠癌细胞皮下SC注射到免疫缺陷小鼠中产生的肿瘤的生长。0005用于本发明效用其是对抗癌剂的筛选的评估方法已经被描述于由本发明的发明人提交的WO2009/104413中。由本发明的发明人提交的WO2010/64111公开了作为有效TNIK抑制剂的新型氨基噻唑类衍生物以及TNIK抑制剂对联蛋白和TCF4复合体的转录活性的作用。然而，至今未公开的是，具有本发明的二环结构的噻唑类化合物可用作TNIK抑制剂。0006发明概述0007本发明提供新型二环噻唑类化合物，其抑制TNIK，并且因此可用作TNIK抑制剂施用于。
8、癌症患者，尤其是施用于实体癌患者，如结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌或乳腺癌。0008发明详述0009根据本发明，我们发现了新型二环噻唑类TNIK抑制剂，其将对疾病如本文中所述的那些及对本领域技术人员明显的那些提供有效治疗。0010本发明提供具有式I的化合物或其药用盐0011说明书CN104321321A2/106页50012其中，0013R1是0014或0015其中A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7各自独立地是CZ或N，0016R2是氢原子、取代或未取代的烷基，0017R3是氢原子、取代或未取代的烷基、羟基、取代或未取代的烷氧基，0018Q是0019或0020其中Y1、Y2、Y。
9、3和Y4各自独立地是表示任选地硫原子、氧原子、碳原子，或被氢原子或低级烷基取代的氮原子，0021Z、R4和R5独立地表示氢原子、卤原子、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、羟基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基、羧基、酯基、甲酰基、取代的羰基、取代的氨基甲酰基、取代或未取代的脲基UREAGROUP、取代或未取代的芳族基AROMATICGROUP、取代或未取代的杂环基HETEROCYCLICGROUP、取代或未取代的杂芳族基HETROAROMATICGROUP、取代或未取代的酰基氨基ACYLAMINOGROUP、取代或未取代的芳基羰基氨基ARYLCARBONYLA。
10、MINOGROUP、硫醇基THIOLGROUP、取代或未取代的烷硫基THIOALKYLGROUP、磺酸基、取代的砜基SULFONEGROUP、取代或未取代的磺酰胺基、氰基、硝基，或邻近的R4和R5可以组合形成5至7元环分别形成脂环族的或杂环的二环稠合环，其中所述5至7元环可以任选地具有取代基，0022R6是取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的杂环基。0023当在本文中使用时，取代基包括，例如，卤原子如F，CL，BR，取代或未取代的烷基如取代或未取代的C1C6烷基，取代或未取代的C3C7环烷基，取代或未取代的芳烷基，。
11、其中所述取代基包括，例如，羟基，二甲基氨基，吗啉代基，4甲基哌嗪1基和哌嗪1基，取代或未取代的烯基如取代或未取代的C2C6烯基，例如，乙烯基，烯丙基，异丙烯基，丁烯基，异丁烯基等，取代或未取代的炔基如取代或未取代的C2C6炔基，例如，乙炔基，2丙炔基，炔丙基等，取代或未取代的烷氧基如取代或未取代的C1C6烷氧基，取代或未取代的氨基如氨基，吗啉代基或4甲基哌嗪1基，取代或未取代说明书CN104321321A3/106页6的酰基氨基如取代或未取代的C1C4酰基氨基，取代或未取代的芳基羰基氨基如苯基羰基氨基或吡啶基羰基氨基，酯基如取代或未取代的C1C4烷基酯基，取代的羰基如乙酰基，苯甲酰基，取代的氨。
12、基甲酰基如取代或未取代的C1C4氨基甲酰基，取代或未取代的脲基如取代或未取代的C1C4脲基，取代或未取代的芳族基如取代或未取代的苯基，取代或未取代的杂环基如取代或未取代的吗啉代基，哌嗪基或吡咯烷基PYRROLIDINOGROUP，取代或未取代的杂芳族基如取代或未取代的吡啶基PYRIDINEGROUP，取代或未取代的烷硫基如取代或未取代的C1C4烷硫基，取代的砜基如取代或未取代的C1C4烷基砜基，取代或未取代的磺酰胺基如取代或未取代的C1C4烷基磺酰胺基。0024以下通用反应方案详述了本文公开的二环噻唑类化合物的合成方法。本文公开的式I的化合物可以如方案17中所示以及如实施例中举例说明的那样，通。
13、过使用标准合成方法和起始物料制备，所述起始物料是商购获得的或可以使用本领域中已知的合成方法或其变形如本领域技术人员理解的自商购获得的前体合成。0025虽然这些方案经常指明精确的结构，但是本领域技术人员将理解，通过有机化学领域的标准方法，合适地考虑保护和去保护或反应性官能团，所述方法广泛地适用于式I的类似化合物。例如，为了防止非所需的副反应，羟基在分子中的其他位点处的化学反应期间通常需要被转化为醚或酯。羟基保护基容易被除去以提供游离羟基。氨基和羧酸基团被类似地衍生化以保护其免于非所需的副反应。用于连接和分解它们的典型保护基和方法充分地由TWGREENE，PROTECTIVEGROUPSINORG。
14、ANICSYNTHESIS有机合成中的保护基第3版，JOHNWILEY和SONS，INC，NEWYORK1999描述。0026以下方案中的每个变量提及与本文提供的对化合物的描述相一致的任一基团。式I的化合物的互变异构体和溶剂化物例如，水合物也在本发明的范围内。0027本文公开的任何通式的任一化合物可以使用反应方案中提供的程序以及实施例中提供的程序，通过选择合适的起始物料并遵循类似的方法获得。因此，本文公开或例示的任何通式的任一化合物，可以通过使用合适的起始物料和合适的试剂，利用所需的取代，并且遵循与本文所述的那些类似的方法获得。0028其中R2是氢原子的式I的化合物，通常通过由5氨基噻唑中间体。
15、II和酰基氯IIIA形成酰胺而合成，如方案1中所示0029方案100300031其中R1、R3和Q与式I中定义的相同。0032相同类型的酰胺偶联反应可以利用羧酸IIIB在通常的酰胺偶联条件如1乙基33二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐EDC，羟基苯并三唑HOBT和碱如二异丙基说明书CN104321321A4/106页7乙胺或三乙胺下进行，从而产生其中R2是氢原子的式I的化合物。0033在另一种方法中，式I的化合物可以通过利用胺的直接氨解制备自酯中间体IV，如方案2中所示0034方案200350036其中R1、R2、R3和Q与式I中定义的相同。0037氨解反应通过使用无水胺溶液或在醇溶液中的胺，在溶剂。
16、如THF或二烷存在下进行。在密封管中在80至150的温度将反应搅拌并加热124小时，优选地使用微波合成器在微波照射下在80进行150分钟。0038如方案3中所示的备选路线，式I的化合物可以通过以下方法制得，即使用已知的合成路线如还原烷基化或利用烷基卤化物的烷基化在所述分子的官能化与此类型的反应相适合的情况下，N烷基化其中R2为氢的式I的化合物。0039方案300400041其中R1、R2、R3和Q与式I中定义的相同并且X是选自CL、BR和I的卤素。0042方案1中由式II表示的化合物，其被用作酰胺偶联反应的起始物料，可以以与由COOK等JCHEMSOC1949，3001描述的类似的方式制备。例。
17、如，式II表示的化合物可以通过以下方案4制备0043方案400440045其中R1和R3与式I中定义的相同。说明书CN104321321A5/106页80046因此，将异硫氰酸酯V和2氨基2氰基N烷基乙酰胺的混合物在合适的溶剂如乙酸乙酯或乙醇中搅拌，并且加热至回流条件持续052小时，从而得到式II表示的化合物。0047异硫氰酸酯V可以是商购获得的，或可以通过有机合成领域中的已知方法如硫光气处理制备自相应的胺。异硫氰酸酯V也可以以与由ZHONG等TETRAHEDRONLETTERS，4713，216121642006描述的类似的方式使用硫氰酸银I制备自相应的卤化物。0048酯中间体IV可以利用胺。
18、VII和2卤代噻唑化合物VI经由钯催化的反应制备，如方案5中所示0049方案500500051其中R1、R2和Q与式I中定义的相同并且X是选自CL、BR和I的卤素。0052这些BUCHWALD/HARTWIG型反应是本领域技术人员熟知的并且在惰性溶剂如甲苯、THF或二烷中进行，且涉及钯催化剂如三二亚苄基丙酮二钯0、四三苯基膦钯0、乙酸钯II，和碱如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯，以及配体如4，5双二苯基膦基9，9二甲基咕吨XANTPHOS。相同类型的钯偶联反应可以利用相应的卤代芳族/杂芳族化合物以及相应的2氨基噻唑类似物进行，从而得到相同的所需的氨基噻唑中间体IV。0053式VI表示的化合物可以通过以。
19、下方案6制备0054方案600550056其中Q与式I中定义的相同并且X是选自CL、BR和I的卤素。0057因此，式VI表示的化合物可以通过由5氨基噻唑中间体VIII和酰基氯IIIA形成酰胺来合成。相同类型的酰胺偶联反应可以利用羧酸IIIB在通常的酰胺偶联条件如EDC、HOBT和碱如二异丙基乙基胺或三乙胺下进行。0058式VIII表示的化合物可以通过以下方案7制备自5氨基噻唑4甲酸乙酯0059方案7说明书CN104321321A6/106页900600061其中X是选自CL、BR和I的卤素。00625氨基噻唑4甲酸乙酯根据由GOLANKIEWICZ等TETRAHEDRON，4124，59895。
20、9941985描述的方法制备。因此，将商购获得的氰基肟基乙酸乙酯用连二硫酸钠在饱和碳酸氢钠水溶液中处理从而得到2氨基2氰基乙酸乙酯，然后将其用甲酸乙酸酐ACETICFORMICANHYDRIDE转化为相应的甲酰胺。随后，将获得的2氰基2甲酰氨基乙酸乙酯用LAWESSON试剂处理，之后用卤化试剂如NCS、NBS处理从而得到所需的产物。0063在以下实施例中进一步定义本发明。应当理解，仅仅通过示例性方式给出这些实施例。根据以上讨论及该实施例，本领域技术人员能够确定本发明的必要特性，并且在不背离其精神和范围的情况下，能够对本发明进行多种改变和改进从而使本发明适于不同用途和条件。所以，本发明不受本文以。
21、下所述的示例性实施例所限，而是受附于本文的权利要求的限制。0064以下在表1中给出式I表示的化合物的具体实例0065表10066说明书CN104321321A7/106页100067说明书CN104321321A108/106页110068说明书CN104321321A119/106页120069说明书CN104321321A1210/106页130070说明书CN104321321A1311/106页140071说明书CN104321321A1412/106页150072说明书CN104321321A1513/106页160073说明书CN104321321A1614/106页170074说。
22、明书CN104321321A1715/106页180075说明书CN104321321A1816/106页190076说明书CN104321321A1917/106页200077说明书CN104321321A2018/106页210078说明书CN104321321A2119/106页220079说明书CN104321321A2220/106页230080说明书CN104321321A2321/106页240081说明书CN104321321A2422/106页250082说明书CN104321321A2523/106页260083说明书CN104321321A2624/106页270084说。
23、明书CN104321321A2725/106页280085根据本发明，所述二环噻唑类化合物I或其药用盐显示TNIK抑制作用测试实施例1和显著的抗增殖活性测试实施例2。0086因此，所述二环噻唑类化合物可以以用于口服或肠胃外给药如静脉滴注的常规药物制剂形式作为药物组合物例如，抗肿瘤剂使用。0087用于口服给药的制剂包括固体制剂如片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊，和液体制剂诸如糖浆剂。这些制剂可以通过常规方法制备。固体制剂可以通过使用常规药物载体来制备，所述常规药物载体如乳糖，淀粉如玉米淀粉，结晶纤维素如微晶纤维素，羟丙基纤维素，羧甲基纤维素钙，滑石，硬脂酸镁等。可以通过将由此制备的颗粒剂或粉剂囊化来制备。
24、胶囊。糖浆剂可以通过将所述二环噻唑类化合物溶解或悬浮在含有蔗糖、羧甲基纤维素等的水溶液中来制备。0088用于肠胃外给药的制剂包括注射液如静脉滴注注射液。注射制剂也可以通过常规说明书CN104321321A2826/106页29方法来制备，并且任选地可以结合在等渗剂例如，甘露醇、氯化钠、葡萄糖、山梨糖醇、甘油、木糖醇、果糖、麦芽糖、甘露糖、稳定剂例如，亚硫酸钠、清蛋白、防腐剂例如，苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯中。0089所述二环噻唑类化合物有效用于治疗肿瘤，尤其是实体瘤，如结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌或乳腺癌。0090所述二环噻唑类化合物的剂量可以根据疾病的严重性、患者的年龄和体重、剂型。
25、等来变化，但通常在成人中范围为1MG1,000MG/天，其可以通过口服或肠胃外途径一次或分成两次或三次施用。0091测试实施例0092测试实施例10093重组人TNIKN端区段的制备0094使用下列引物通过PCR从由人组织合成的CDNA混合物BIOCHAIN扩增编码含有人TNIKNM_0150281的激酶结构域的N端区段TNIK_N，残基1314的CDNA。0095正向引物，包含EHEI位点的40个核苷酸在WO2010/064111P29的重组人TNIKN端区段的制备中被描述为SEQIDNO10096反向引物，包含NOTI位点的42个核苷酸在WO2010/064111P29的重组人TNIKN端。
26、区段的制备中被描述为SEQIDNO2。0097该CDNA被亚克隆入杆状病毒转移载体PFASTBAC_GSTB中，所述转移载体包含蛋白酶切割位点和谷胱甘肽S转移酶纯化标签GST标签。纯化该质粒并且通过DNA测序确认PFASTBAC_GSTBTNIK_N的插入。然后根据对于BAC至BACTM杆状病毒表达系统INVITROGEN的说明书，用该质粒转化大肠杆菌ECOLIDHL0BAC感受态细胞以制备重组杆粒BACMID。使用在SF900II无血清培养基INVITROGEN中的CELLFECTINREAGENTINVITROGEN，用含有PFASTBAC_GSTBTNIK_N的重组杆粒转染SF9细胞。在。
27、转染后72H从培养基中收集病毒上清液。通过在T形烧瓶或转瓶中，在27下，在补充了10FCS和抗生素抗真菌试剂ANTIMYCOTICREAGENTINVITROGEN的GRACES昆虫培养基INVITROGEN中有效感染生长的SF9或SF21细胞72H，将病毒扩增三次。通过使用BACPAKTM杆状病毒快速滴定试剂盒BACULOVIRUSRAPIDTITERKITCLONTECH以236X108PFU/ML估计扩增的TNIK_N病毒的效价。0098在GRACE昆虫培养基中的对数期SF21细胞2X106细胞/ML用重组杆状病毒以30的MOI感染并且在转瓶中在27温育250ML培养基/瓶72H，之后，。
28、通过离心收集细胞，并且用冷PBS洗涤细胞沉淀物，并保持在80直至纯化。在4下进行下列的纯化程序。冰冻的细胞在冰上解冻，并在补充了1MM苯基甲磺酰氟，2G/ML亮抑酶肽，2G/ML抑蛋白酶肽，1MMNAF，100M原钒酸钠和1M斑蝥素的裂解缓冲液50MMTRISHCL，PH75，150MMNACL，1NONIDETP40，5MMDTT，05MMEDTA，05MMEGTA中通过超声作用裂解。悬浮的溶胞产物通过以9000G离心20MIN澄清，并且上清液与谷胱甘肽琼脂糖珠GEHEALTHCARE温育1H。将珠子悬浮在缓冲液H50MMTRISHCL，PH75，1MNACL，1MMDTT，05MMEDTA。
29、，05MMEGTA和005BRIJ35中并用缓冲液H洗涤，紧接着在ECONOPACK柱BIORAD中用缓冲液L50MMTRISHCL，PH75，150MMNACL，1MMDTT，05MMEDTA，05MMEGTA，005BRIJ35洗涤。结合的TNIK_N用洗脱缓冲液50MMTRISHCL，PH80，说明书CN104321321A2927/106页30150MMNACL，1MMDTT，10甘油，05MMEDTA，05MMEGTA和5MM还原型谷胱甘肽洗脱。收集洗脱的级分并由BRADFORD试剂BIORAD确定蛋白浓度。混合TNIK_N级分并使用用储存缓冲液50MMTRISHCL，PH75，15。
30、0MMNACL，1MMDTT，10甘油，005BRIJ35平衡的10DG柱BIORAD脱盐。使用420聚丙烯酰胺凝胶通过电泳和在VOYAGERDERPMALDI/TOF应用生物系统APPLIEDBIOSYSTEMS上的基质辅助激光解吸/电离反射飞行时间MALDITOF质谱仪来表征纯化的TNIK_N。通过分子量和MASCOT肽质量指纹确认TNIK_N。0099激酶测定0100激酶测定使用384孔板GREINER以20L体积中进行。反应混合物由化合物或媒介物1DMSO，008NG/LTNIK_N，1MFITC标记的底物肽，包含氨基己酸和7个氨基酸在WO2010/064111P31的测试实施例1的激。
31、酶测定中被描述为SEQIDNO3，20MMHEPES，PH75，001TRITONX100，5MMMGCL2，25MATP和2MMDTT组成。作为空白，媒介物1DMSO的反应混合物中不包含TNIK_N。在室温下进行激酶反应1H，通过添加60L终止缓冲液127MMHEPES，PH75，267MMEDTA，001TRITONX100，1DMSO和013包被试剂3CALIPERLIFESCIENCES终止反应。通过迁移率变动微流控技术MOBILITYSHIFTMICROFLUIDICTECHNOLOGYCALIPERLC3000SYSTEM，CALIPERLIFESCIENCES检测未磷酸化和磷酸化。
32、FITC标记的底物肽的量。TNIK_N的激酶活性定义为P/PSP磷酸化FITC标记的底物肽的峰高；SFITC标记的底物肽的峰高。化合物的抑制率如下计算抑制率1AC/BCX100A化合物孔的平均P/PS；B媒介物孔的平均P/PS；C空白孔的平均P/PS。化合物针对激酶的IC50值由对数浓度抑制曲线的回归分析来计算。0101结果0102示例化合物的测试结果显示在表2中。0103表20104说明书CN104321321A3028/106页3101050106说明书CN104321321A3129/106页320107说明书CN104321321A3230/106页330108说明书CN1043213。
33、21A3331/106页340109说明书CN104321321A3432/106页350110说明书CN104321321A3533/106页360111测试实施例20112体外细胞增殖测定说明书CN104321321A3634/106页370113使用补充有10FCSINVITROGEN和1青霉素/链霉素SIGMA的、含有2MML谷氨酰胺INVITROGEN的RPMI培养基，将人结肠癌细胞系HCT116以600个细胞/孔接种到96孔板THERMOFISHER中，并且保持在37、5CO2和100湿度。接下来的一天，取出原来的培养基并加入新鲜的培养基。在添加化合物前计数初始的细胞数目。然后一式。
34、两份地用化合物自10M起的半对数连续稀释处理细胞。在每个平板中孵育八个未处理的对照孔。处理72小时后，细胞用2多聚甲醛固定，并且细胞核用HOECHST33258INVITROGEN染色。利用ARRAYSCANTMVTITHERMOFISHERSCIENTIC计数细胞的数目。评估数据，作为对照孔的百分比0114抑制1处理的初始的/对照初始的X1000115其中，处理的在化合物处理72小时后的孔的平均细胞数0116对照未用化合物处理72小时的孔的平均细胞数0117初始的化合物处理前的孔的平均细胞数0118IC50值由对数浓度抑制曲线的回归分析来计算。0119给定以上测定，本发明的式I的化合物的结果。
35、显示具有显著的抗增殖活性，如表3中所示。0120表30121代表性化合物的基于细胞的活性01220123说明书CN104321321A3735/106页380124说明书CN104321321A3836/106页390125IC50100NM0126100IC501000NM说明书CN104321321A3937/106页4001271000IC5010000NM实施例0128下面的实施例仅是举例说明性的，并且不意在限制本发明的范围。0129下列描述中使用的缩写和符号的含义如下0130CDCL3氯仿D0131D2O氧化氘0132DCM二氯甲烷0133DMA二甲基乙酰胺0134DMAP4二甲基氨。
36、基吡啶0135DMF二甲基甲酰胺0136DMSO二甲亚砜0137ETOH乙醇0138ETOAC乙酸乙酯0139HCL盐酸0140K2CO3碳酸钾0141MEOH甲醇0142MGSO4硫酸镁0143NAHCO3碳酸氢钠0144NA2SO4硫酸钠0145NH4CL氯化铵0146NH3氨0147NMPN甲基吡咯烷酮0148POCL3氧氯化磷0149PD2DBA3三二亚苄基丙酮二钯00150THF四氢呋喃0151TFA三氟乙酸0152XANTPHOS4，5二二苯基膦基9，9二甲基咕吨0153EDC1乙基33二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐0154HOBT羟基苯并三唑0155MIN分钟0156H或HRS小时。
37、0157RT或RT室温0158SAT饱和的0159AQ水性的0160TLC薄层色谱法0161HPLC高效液相色谱法0162PREPHPLC制备型HPLC0163LCMS高效液相色谱法/质谱法说明书CN104321321A4038/106页410164MS质谱法0165NMR核磁共振0166实施例1016754乙酰氨基苯甲酰氨基2萘1基氨基噻唑4甲酰胺01680169A5氨基2萘1基氨基噻唑4甲酰胺01700171向2氨基2氰基乙酰胺025G，253MMOL在ETOAC8ML中的悬浮液加入1异硫氰酰萘0467G，253MMOL，并将混合物回流30MIN。将溶剂在减压下蒸发，并将所得的粗剩余物通过。
38、硅胶柱色谱法纯化，其中用在DCM中的2MEOH洗脱，从而得到035G48收率的标题化合物。01721HNMR400MHZ，DMSOD6PPM673BR，2H，681BR，1H，693BR，1H，743T，1H，J79HZ，745755M，3H，787M，1H，829D，2H，J73HZ，942S，1H；LCMSM/ZMH28500173B54乙酰氨基苯甲酰氨基2萘1基氨基噻唑4甲酰胺01740175在0向4乙酰氨基苯甲酸0151G，0845MMOL和催化量的DMF在无水THF8ML中的混合物逐滴加入草酰氯012ML，140MMOL，并将混合物在室温搅拌2小时。将溶剂蒸发，并在氮气氛下使用甲苯利。
39、用共沸蒸馏将剩余的草酰氯除去。然后将所得的酰基氯溶解在吡啶5ML中并冷却至0。在0向该溶液加入5氨基2萘1基氨基噻唑4甲酰胺02G，070MMOL在吡啶5ML中的溶液，并将混合物在室温搅拌12小时。将溶剂蒸发，并将剩余物悬浮到1MHCL中，并将所得的固体收集并干燥。将粗固体通过硅胶柱色谱法纯化，其中用在DCM中的3MEOH洗脱，从而得到91MG29收率的标题化合物。01761HNMR400MHZ，DMSOD6PPM210S，3H，745765M，5H，775789M，5H，792D，1H，J76HZ，834D，1H，J79HZ，849D，1H，J76HZ，992S，1H，1034S，1H，12。
40、53S，1H；LCMSM/ZMH44620177实施例2说明书CN104321321A4139/106页42017854乙酰氨基苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺01790180A2异硫氰酰萘01810182在0向萘2胺050G，349MMOL在水10ML中的混合物加入CSCL203ML，419MMOL，并将混合物在室温搅拌40MIN。然后将反应混合物用水稀释并用醚萃取2X50ML。合并的醚层用NA2SO4干燥，并在减压下浓缩，从而得到062G96收率的标题化合物，其在不进行进一步纯化的情况下用于下一步骤中。01831HNMR400MHZ，DMSOD6PPM750761M，3H，791802M。
41、，4H0184B5氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺01850186向2氨基2氰基乙酰胺0486G，270MMOL在ETOAC15ML中的悬浮液加入2异硫氰酰萘05G，270MMOL，并将混合物回流30MIN。将溶剂在减压下蒸发，并将所得的粗剩余物通过硅胶柱色谱法纯化，其中用在DCM中的2MEOH洗脱，从而得到06G78收率的标题化合物。01871HNMR400MHZ，DMSOD6PPM675S，2H，697S，1H，702S，1H，728T，1H，J73HZ，739D，2H，J82HZ，774777M，2H，794D，1H，J82HZ，835S，1H，978S，1H；LCMSM/ZMH285201。
42、88C54乙酰氨基苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺01890190在0向4乙酰氨基苯甲酸0204G，114MMOL和催化量的DMF在无水THF15ML中的混合物逐滴加入草酰氯02ML，230MMOL，并将混合物在室温搅拌2小时。将溶剂蒸发，并在氮气氛下使用甲苯利用共沸蒸馏4次将剩余的草酰氯除去。然后将所得的酰基氯溶解在吡啶6ML中并冷却至0。在0向该溶液加入5氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺027G，095MMOL在吡啶6ML中的溶液，并将混合物在室温搅拌12小时。将溶剂蒸发，并将剩余物悬浮在1MHCL中，并将所得的固体收集并干燥。将粗固体通过硅胶柱色谱法纯化，其中用在DCM中的3MEOH洗脱，。
43、从而得到16MG37收率说明书CN104321321A4240/106页43的标题化合物。01911HNMR400MHZ，DMSOD6PPM210S，3H，732T，1H，J734HZ，744T，1H，J742HZ，752D，1H，J85HZ，77479M，8H，804D，1H，J80HZ，855S，1H，1029S，1H，1034S，1H，1264S，1H；LCMSM/ZMH44620192实施例301932异喹啉3基氨基54甲氧基苯甲酰氨基噻唑4甲酰胺01940195A3异硫氰酰异喹啉01960197在0向异喹啉3胺02G，138MMOL在水5ML中的混合物缓慢加入CSCL201ML，15。
44、2MMOL达5MIN的时间，并将混合物在室温搅拌40MIN。将反应混合物用水稀释并用醚萃取2X50ML。合并的醚层用NA2SO4干燥并在减压下浓缩，从而得到0158G62收率的标题化合物，其在不进行进一步纯化的情况下用于下一步骤中。01981HNMR400MHZ，DMSOD6PPM773T，1H，J75HZ，785T，1H，J756HZ，790S，1H，799D，1H，J824HZ，819T，1H，J812HZ，926S，1H0199B5氨基2异喹啉3基氨基噻唑4甲酰胺02000201向2氨基2氰基乙酰胺0167G，169MMOL在ETOAC15ML中的悬浮液加入异喹啉3基异氰酸酯0315G，。
45、169MMOL，并将混合物回流2小时。将溶剂在减压下蒸发，并将所得的粗剩余物通过硅胶柱色谱法纯化，其中用在DCM中的2MEOH洗脱，从而得到01G21收率的标题化合物。02021HNMR400MHZ，DMSOD6PPM660670BR，2H，737T，1H，J75HZ，761T，1H，J80HZ，763S，1H，768770M，2H，784D，1H，J82HZ，796D，1H，J803HZ，906S，1H，1058S，1H；LCMSN/ZMH28620203C2异喹啉3基氨基54甲氧基苯甲酰氨基噻唑4甲酰胺02040205向对甲氧苯甲酰氯04ML，30MMOL在吡啶2ML中的混合物逐滴加入5氨。
46、说明书CN104321321A4341/106页44基2异喹啉3基氨基噻唑4甲酰胺020G，070MMOL在吡啶3ML中的溶液，并将混合物在室温搅拌过夜。将溶剂蒸发。将剩余物用MEOH研磨，并将所得的固体收集，从而得到42MG28收率的标题化合物。02061HNMR400MHZ，DMSOD6PPM387S，3H，718D，2H，J85HZ，758762M，2H，78580M，4H，804S，1H，818822M，1H，889S，1H，917S，1H，1079S，1H，1267S，1H；LCMSM/ZMH42040207实施例9020853氨基4甲基苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺020902。
47、10A54甲基3硝基苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺02110212在0，在氮气氛下，向5氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺02G，070MMOL在吡啶5ML中的混合物加入4甲基3硝基苯甲酰氯在吡啶3ML中的溶液。允许混合物温热至室温，并且在室温搅拌16小时。将溶剂蒸发，将粗剩余物悬浮在ETOAC20ML中。将所得的固体通过过滤收集并用MEOH洗涤2X5ML，从而得到021G66收率的标题化合物。02131HNMR400MHZ，DMSOD6PPM263S，3H，745765M，4H，770BR，1H，777D，1H，J81HZ，787796M，2H，809D，1H，J82HZ，835D，1H，J7。
48、7HZ，846S，1H，851D，1H，J77HZ，999S，1H，1277S，1H；LCMSM/ZMH44820214B53氨基4甲基苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺02150216在N2气氛下，向54甲基3硝基苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺007G，015MMOL在MEOHTHF10ML，11中的混合物加入10PD/C0014G。将混合物在氢气氛下搅拌16小时。然后滤除不溶物质，并将滤液在减压下浓缩，从而得到0032G49收率的标题化合物。02171HNMR400MHZ，DMSOD6PPM213S，3H，529BR，2H，692717M，2H，720S，1H，744769M，5H，7。
49、79BR，1H，793D，1H，J69HZ，835D，1H，J73HZ，849D，1H，J73HZ，991S，1H，1239S，1H；LCMSM/ZMH4182说明书CN104321321A4442/106页450218实施例100219542羟基乙基氨基苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺02200221将54氟苯甲酰氨基2萘2基氨基噻唑4甲酰胺010G，025MMOL和2氨基乙醇015G，246MMOL在NMP1ML中的溶液使用微波合成器处理1HRCEMCORP，180。将反应混合物用水3ML稀释，并将所得的固体通过过滤收集。将固体用水洗涤，并干燥，从而得到0035G31收率的标题化合物。02221HNMR400MHZ，DMSOD6PPM320D，2H，J56HZ，358D，2H，J56HZ，477T，1H，J51HZ，661BR，1H，672D，2H，J86HZ，726737M，1H，744T，1H，J76HZ，751D，1H，J86HZ，765D，2H，J86HZ，774792M，4H，804D，1H，J81H。