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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710611472.4 (22)申请日 2017.07.25 (71)申请人 大连大学 地址 116622 辽宁省大连市开发区学府大 街10号 (72)发明人 于大永宋昱史丽颖 (74)专利代理机构 大连八方知识产权代理有限 公司 21226 代理人 朱秀芬 (51)Int.Cl. C07J 63/00(2006.01) C07H 15/256(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (54)发明名称 金花茶皂素的制备方法 (57)摘要 本发明涉及天然药物金。
2、花茶中活性组分的 制备方法， 具体是金花茶皂素的制备方法。 该方 法以4090的乙醇-水溶液为溶剂， 按照料液 比(g:ml)1:515， 温度60100， 时间13h的 条件下提取金花茶种子， 提取13次； 提取液经 D101型大孔树脂柱富集纯化金花茶皂素， 并经 NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩干燥后得到金花 茶皂素产品。 本发明所述的制备方法提高了金花 茶皂素提取的效率及得率， 保护了皂素的原有色 泽， 也有效保护了皂素成分组成、 结构和活性， 最 大量的高效生产， 纯度高， 并且操作简单， 成本 低， 所使用溶剂可以回收， 大孔树脂可再生， 适于 规模化生产。 权利要求书1页 说明书。
3、5页 附图1页 CN 107383152 A 2017.11.24 CN 107383152 A 1.金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤： (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过4080目筛； (2)以4090的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料液比(g:ml)1:5 15回流提取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为60100， 提取时间15h， 提取 次数13次， 合并提取液； (3)通过单因素实验和正交试验筛选出皂苷收率最高的提取液； (4)将步骤(3)中提取液减压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； (5)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水，。
4、 过滤； (6)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 13倍树脂量(ml/ g)的浓度1020乙醇溶液洗脱杂质， 再以25倍树脂量(ml/g)的浓度2090乙醇溶液 洗脱， 收集洗脱液； (7)通过单因素实验筛选出洗脱液中皂苷含量最高的洗脱液； (8)将步骤(7)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后浓缩干燥， 即得到金花茶皂素产 品。 2.如权利要求1所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中提取溶剂是浓 度为6080乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1:1315， 提取温度为7585， 提取时间为2 4h， 提取次数23次。 3.如权利要。
5、求2所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中提取溶剂是浓 度为70乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1:14， 提取温度为80， 提取时间为3h， 提取次数3 次。 4.如权利要求1所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(6)中滤液经D101型 大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 12.5倍树脂量(ml/g)的浓度1020乙 醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度7090乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液。 5.如权利要求1所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(8)中所述的干燥为 真空冷冻干燥， 温度为-80。 6.根据权利要求1所。
6、述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 该方法包括如下步骤： (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过60目筛； (2)以70的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料液比(g:ml)1:14回流提 取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为80， 提取时间3h， 提取次数3次， 合并提取 液； (3)将步骤(2)中提取液减压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； (4)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水， 过滤； (5)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 2倍树脂量(ml/g)的 浓度20乙醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度80乙醇。
7、溶液洗脱， 收集洗脱 液； (6)将步骤(5)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后在-80下真空冷冻干燥， 即得 到金花茶皂素产品。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107383152 A 2 金花茶皂素的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及天然药物金花茶中活性组分的制备方法， 具体是金花茶皂素的制备方 法。 背景技术 0002 金花茶属于山茶科、 山茶属， 与茶、 山茶、 南山茶、 油茶、 茶梅等为孪生姐妹， 是国家 一级保护植物之一。 国外称之为神奇的东方魔茶， 被誉为植物界大熊猫、 茶族皇后。 金 花茶是一种古老的植物， 极为罕见， 分布极其狭窄， 全世界90的野生金花茶仅分。
8、布于中国 广西防城港市的兰山支脉一带， 生长于海拔700米以下， 以海拔200500米之间的范围较常 见， 垂直分布的下限为海拔20米左右。 0003 金花茶属无毒级、 含有400多种营养物质、 无毒副作用。 富含茶多糖、 茶多酚、 总皂 甙、 总黄酮、 茶色素、 咖啡因、 蛋白质、 维生素B1、 B2、 维生素C、 维生素E、 叶酸、 脂肪酸、 -胡萝 卜素等多种天然营养成份； 金花茶含有茶氨酸、 苏氨酸等几十种氨基酸， 以及富含有多种对 人体具有重要保健作用的天然有机锗(Ge)、 硒(Se)、 钼(Mo)、 锌(Zn)、 钒(V)等微量元素， 和 钾(K)、 钙(Ca)、 镁(Mg)等宏量。
9、元素。 金花茶具有明显的降血糖和尿糖作用， 能有效的改善糖 尿病 “三高” 症状。 金花茶在有效降低血糖、 血压的同时， 可有效降低血脂， 改善因高血压而 引起的各种不适应症状， 降低血清中胆固醇和 -脂蛋白， 促进胰岛素分泌、 增强免疫力、 调 节血流量， 防止动脉粥样硬化， 抗菌消炎、 清热解毒、 通便利尿去湿， 增进肝脏代谢、 防癌抑 制肿瘤生长等。 0004 金花茶皂素系自金花茶种子中提取富集的代表性皂苷类成分， 研究表明： 金花茶 皂素具有良好的抗肿瘤活性， 还有舒张血管及抗疲劳， 减慢心率及双相性血压作用促进DNA 和蛋白质及脂质的生物合成， 止渴生津， 排脓消肿， 利咽止痛， 解。
10、热镇痛等药理作用。 0005 因此， 对金花茶皂素提取纯化富集工艺的深入研究很有必要， 而目前对于金花茶 皂素的富集工艺研究较少， 且传统的工艺方法多数都要通过酸碱、 酶、 超声等处理， 会影响 原皂苷的组成和结构， 提取物的得率低， 费时费力。 发明内容 0006 本发明的目的在于克服传统技术的不足， 提供一种高纯度金花茶皂素的富集纯化 制备方法。 0007 本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 0008 一种金花茶皂素的制备方法， 所述方法包括以下步骤： 0009 (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过4080目筛； 0010 (2)以4090的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料。
11、液比(g:ml)1: 515回流提取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为60100， 提取时间15h， 提 取次数13次， 合并提取液； 0011 (3)通过单因素实验和正交试验筛选出皂苷收率最高的提取液； 说明书 1/5 页 3 CN 107383152 A 3 0012 (4)将步骤(3)中提取液减压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； 0013 (5)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水， 过滤； 0014 (6)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 13倍树脂量 (ml/g)的浓度1020乙醇溶液洗脱杂质， 再以25倍树脂量(ml/g)的浓度。
12、2090乙醇 溶液洗脱， 收集洗脱液； 0015 (7)通过单因素实验筛选出洗脱液中皂苷含量最高的一组洗脱液； 0016 (8)将步骤(7)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后浓缩干燥， 即得到金花茶皂 素产品。 0017 优选上述步骤(2)中提取溶剂是浓度为6080乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1: 1315， 提取温度为7585， 提取时间为24h， 提取次数23次。 0018 最优选步骤(2)中提取溶剂是浓度为70乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1:14， 提 取温度为80， 提取时间为3h， 提取次数3次。 0019 优选步骤(6)中滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用。
13、3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 1 2.5倍树脂量(ml/g)的浓度1020乙醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度70 90乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液。 0020 上述步骤(8)中所述的干燥为真空冷冻干燥， 温度为-80。 0021 进一步地， 上述金花茶皂素的制备方法包括如下步骤： 0022 (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过60目筛； 0023 (2)以70的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料液比(g:ml)1:14回 流提取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为80， 提取时间3h， 提取次数3次， 合并 提取液； 0024 (3)将步骤(2)中提取液减。
14、压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； 0025 (4)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水， 过滤； 0026 (5)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 2倍树脂量(ml/ g) 0027 的浓度20乙醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度80乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液； 0028 (6)将步骤(5)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后在-80下真空冷冻干燥， 即得到金花茶皂素产品。 0029 与现有技术相比， 本发明的有益效果是： 该制备方法克服了传统工艺金花茶皂苷 易流失、 得率低及纯度不高的不足， 提高了金花茶皂素提取的效率及得率。
15、， 保护了皂素的原 有色泽， 也有效保护了皂素成分组成、 结构和活性， 最大量的高效生产， 纯度高， 并且操作简 单， 成本低， 所使用溶剂可以回收， 大孔树脂可再生， 适于规模化生产。 附图说明 0030 图1： 实施例21的金花茶皂素的制备方法流程图。 具体实施方式 0031 下面以具体的实施例来对本发明做进一步说明， 如无特殊说明， 所述实施例中均 说明书 2/5 页 4 CN 107383152 A 4 采用香草醛浓硫酸显色， 分光光度法测定金花茶皂苷的含量。 0032 本发明的金花茶皂素的制备方法的具体实施方式是： 以干燥的金花茶种子为原 料， 粉碎过筛后， 按照设定的不同乙醇-水溶。
16、液浓度、 料液比(g:ml)、 提取温度、 时间及次数 浸提， 由单因素实验和正交实验筛选出皂苷收率最高的一组提取液， 将提取液浓缩后经石 油醚脱脂， 水浴蒸去石油醚， 转溶于水、 过滤， 滤液经D101型大孔树脂吸附， 用蒸馏水、 乙醇 溶液洗脱杂质， 然后按照设定的洗脱液浓度、 用量等洗脱条件， 洗脱目标产物， 采集洗脱液， 由单因素实验筛选出皂苷含量最高的一组洗脱液， 再经NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩干燥 后得到白色粉末状金花茶皂素产品。 0033 下面对金花茶皂素的提取及树脂纯化步骤做详细描述。 0034 实施例113 0035 按照上述具体操作步骤， 提取溶剂为不同浓度乙醇-水。
17、溶液， 在不同提取温度、 不 同提取次数、 不同料液比的条件下提取金花茶皂素。 产物皂苷的收率计算式如下： 0036 皂苷收率(皂苷质量/原料质量)x100 0037 具体条件及结果见表1： 0038 表1 0039 0040 实施例14 0041 本实施例是考察提取工艺的正交实验， 提取步骤同实施例113， 根据上述实施例 113的结果， 对4个因素分别选择合适的3个水平， 采用L9(34)正交实验安排表考察金花茶 说明书 3/5 页 5 CN 107383152 A 5 皂素的最佳工艺条件。 正交表见表2， 实验结果见表3： 0042 表2 0043 0044 表3 0045 0046 由。
18、以上结果分析可知： 所设定四个因素的影响顺序为ABDC， 即料液比提 取温度乙醇浓度提取时间， 最佳工艺组合为A1B2C2D2， 即溶剂为70乙醇， 料液比1:14， 80提取3次， 每次3小时。 其中料液比对总皂苷提取的影响最为显著。 说明书 4/5 页 6 CN 107383152 A 6 0047 D101型大孔树脂预处理： 使用大孔树脂柱之前， 应对大孔树脂进行预处理， 下面是 具体处理过程： 取D101型大孔树脂， 用蒸馏水浸泡12h， 倾去蒸馏水， 再以树脂体积2倍的 95乙醇浸泡2h， 充分溶胀后， 湿法装柱。 以95乙醇洗脱至流出液加3倍量水混合不呈白 色浑浊为止， 用流速为2。
19、BV/h的2HCL溶液对树脂进行酸处理2h后， 以蒸馏水洗至中性。 用 流速为2BV/h的5NaOH溶液对树脂进行碱处理2h后， 以蒸馏水洗至中性， 即可使用。 0048 实施例1520 0049 以干燥的金花茶种子为原料， 粉碎过60目筛后， 以浓度为70乙醇水溶液为提 取溶剂、 料液比(g： ml)1:14、 提取温度80、 提取3次每次3h浸提； 所得提取物浓缩后经石 油醚脱脂， 水浴蒸去石油醚， 转溶于水、 过滤， 滤液经D101型大孔树脂吸附， 用蒸馏水、 乙醇 溶液洗脱杂质， 然后按照设定的乙醇溶液洗脱液浓度、 用量等洗脱条件洗脱目标产物， 在本 部分所述实施例中， 洗脱液流速均为。
20、2BV/h， 采集洗脱液， 经NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩 在-80下真空干燥后得到白色粉末状金花茶皂素产品。 具体条件与结果见表4： 0050 表4 0051 0052 由实施例1520可以看出， 收集洗脱液时， 随着乙醇浓度的增大， 洗脱液中的皂苷 含量也随之增大， 继续增加乙醇浓度， 皂苷含量反而下降。 0053 实施例21 0054 本实施例工艺流程如图1所示。 0055 以干燥的金花茶种子为原料， 粉碎过60目筛后， 以浓度为70乙醇水溶液为提 取溶剂、 料液比(g:ml)1:14、 提取温度80、 提取3次每次3h浸提； 所得提取物浓缩后经石 油醚脱脂， 水浴蒸去石油醚， 转溶于水、 过滤， 滤液经D101型大孔树脂吸附， 用3BV蒸馏水、 2BV乙醇溶液洗脱杂质， 然后3BV的80乙醇溶液洗脱目标产物， 在本部分所述实施例中， 洗 脱液流速为2BV/h， 采集洗脱液， 经NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩在-80下真空干燥后得 到白色粉末状金花茶皂素产品， 总皂苷含量85.6。 说明书 5/5 页 7 CN 107383152 A 7 图1 说明书附图 1/1 页 8 CN 107383152 A 8 。