金花茶皂素的制备方法.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710611472.4 (22)申请日 2017.07.25 (71)申请人 大连大学 地址 116622 辽宁省大连市开发区学府大 街10号 (72)发明人 于大永宋昱史丽颖 (74)专利代理机构 大连八方知识产权代理有限 公司 21226 代理人 朱秀芬 (51)Int.Cl. C07J 63/00(2006.01) C07H 15/256(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (54)发明名称 金花茶皂素的制备方法 (57)摘要 本发明涉及天然药物金

2、花茶中活性组分的 制备方法， 具体是金花茶皂素的制备方法。 该方 法以4090的乙醇-水溶液为溶剂， 按照料液 比(g:ml)1:515， 温度60100， 时间13h的 条件下提取金花茶种子， 提取13次； 提取液经 D101型大孔树脂柱富集纯化金花茶皂素， 并经 NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩干燥后得到金花 茶皂素产品。 本发明所述的制备方法提高了金花 茶皂素提取的效率及得率， 保护了皂素的原有色 泽， 也有效保护了皂素成分组成、 结构和活性， 最 大量的高效生产， 纯度高， 并且操作简单， 成本 低， 所使用溶剂可以回收， 大孔树脂可再生， 适于 规模化生产。 权利要求书1页 说明书

3、5页 附图1页 CN 107383152 A 2017.11.24 CN 107383152 A 1.金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤： (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过4080目筛； (2)以4090的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料液比(g:ml)1:5 15回流提取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为60100， 提取时间15h， 提取 次数13次， 合并提取液； (3)通过单因素实验和正交试验筛选出皂苷收率最高的提取液； (4)将步骤(3)中提取液减压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； (5)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水，

4、 过滤； (6)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 13倍树脂量(ml/ g)的浓度1020乙醇溶液洗脱杂质， 再以25倍树脂量(ml/g)的浓度2090乙醇溶液 洗脱， 收集洗脱液； (7)通过单因素实验筛选出洗脱液中皂苷含量最高的洗脱液； (8)将步骤(7)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后浓缩干燥， 即得到金花茶皂素产 品。 2.如权利要求1所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中提取溶剂是浓 度为6080乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1:1315， 提取温度为7585， 提取时间为2 4h， 提取次数23次。 3.如权利要

5、求2所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中提取溶剂是浓 度为70乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1:14， 提取温度为80， 提取时间为3h， 提取次数3 次。 4.如权利要求1所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(6)中滤液经D101型 大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 12.5倍树脂量(ml/g)的浓度1020乙 醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度7090乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液。 5.如权利要求1所述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 步骤(8)中所述的干燥为 真空冷冻干燥， 温度为-80。 6.根据权利要求1所

6、述的金花茶皂素的制备方法， 其特征在于， 该方法包括如下步骤： (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过60目筛； (2)以70的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料液比(g:ml)1:14回流提 取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为80， 提取时间3h， 提取次数3次， 合并提取 液； (3)将步骤(2)中提取液减压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； (4)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水， 过滤； (5)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 2倍树脂量(ml/g)的 浓度20乙醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度80乙醇

7、溶液洗脱， 收集洗脱 液； (6)将步骤(5)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后在-80下真空冷冻干燥， 即得 到金花茶皂素产品。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107383152 A 2 金花茶皂素的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及天然药物金花茶中活性组分的制备方法， 具体是金花茶皂素的制备方 法。 背景技术 0002 金花茶属于山茶科、 山茶属， 与茶、 山茶、 南山茶、 油茶、 茶梅等为孪生姐妹， 是国家 一级保护植物之一。 国外称之为神奇的东方魔茶， 被誉为植物界大熊猫、 茶族皇后。 金 花茶是一种古老的植物， 极为罕见， 分布极其狭窄， 全世界90的野生金花茶仅分

8、布于中国 广西防城港市的兰山支脉一带， 生长于海拔700米以下， 以海拔200500米之间的范围较常 见， 垂直分布的下限为海拔20米左右。 0003 金花茶属无毒级、 含有400多种营养物质、 无毒副作用。 富含茶多糖、 茶多酚、 总皂 甙、 总黄酮、 茶色素、 咖啡因、 蛋白质、 维生素B1、 B2、 维生素C、 维生素E、 叶酸、 脂肪酸、 -胡萝 卜素等多种天然营养成份； 金花茶含有茶氨酸、 苏氨酸等几十种氨基酸， 以及富含有多种对 人体具有重要保健作用的天然有机锗(Ge)、 硒(Se)、 钼(Mo)、 锌(Zn)、 钒(V)等微量元素， 和 钾(K)、 钙(Ca)、 镁(Mg)等宏量

9、元素。 金花茶具有明显的降血糖和尿糖作用， 能有效的改善糖 尿病 “三高” 症状。 金花茶在有效降低血糖、 血压的同时， 可有效降低血脂， 改善因高血压而 引起的各种不适应症状， 降低血清中胆固醇和 -脂蛋白， 促进胰岛素分泌、 增强免疫力、 调 节血流量， 防止动脉粥样硬化， 抗菌消炎、 清热解毒、 通便利尿去湿， 增进肝脏代谢、 防癌抑 制肿瘤生长等。 0004 金花茶皂素系自金花茶种子中提取富集的代表性皂苷类成分， 研究表明： 金花茶 皂素具有良好的抗肿瘤活性， 还有舒张血管及抗疲劳， 减慢心率及双相性血压作用促进DNA 和蛋白质及脂质的生物合成， 止渴生津， 排脓消肿， 利咽止痛， 解

10、热镇痛等药理作用。 0005 因此， 对金花茶皂素提取纯化富集工艺的深入研究很有必要， 而目前对于金花茶 皂素的富集工艺研究较少， 且传统的工艺方法多数都要通过酸碱、 酶、 超声等处理， 会影响 原皂苷的组成和结构， 提取物的得率低， 费时费力。 发明内容 0006 本发明的目的在于克服传统技术的不足， 提供一种高纯度金花茶皂素的富集纯化 制备方法。 0007 本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 0008 一种金花茶皂素的制备方法， 所述方法包括以下步骤： 0009 (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过4080目筛； 0010 (2)以4090的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料

11、液比(g:ml)1: 515回流提取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为60100， 提取时间15h， 提 取次数13次， 合并提取液； 0011 (3)通过单因素实验和正交试验筛选出皂苷收率最高的提取液； 说明书 1/5 页 3 CN 107383152 A 3 0012 (4)将步骤(3)中提取液减压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； 0013 (5)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水， 过滤； 0014 (6)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 13倍树脂量 (ml/g)的浓度1020乙醇溶液洗脱杂质， 再以25倍树脂量(ml/g)的浓度

12、2090乙醇 溶液洗脱， 收集洗脱液； 0015 (7)通过单因素实验筛选出洗脱液中皂苷含量最高的一组洗脱液； 0016 (8)将步骤(7)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后浓缩干燥， 即得到金花茶皂 素产品。 0017 优选上述步骤(2)中提取溶剂是浓度为6080乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1: 1315， 提取温度为7585， 提取时间为24h， 提取次数23次。 0018 最优选步骤(2)中提取溶剂是浓度为70乙醇-水溶液， 料液比(g:ml)为1:14， 提 取温度为80， 提取时间为3h， 提取次数3次。 0019 优选步骤(6)中滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用

13、3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 1 2.5倍树脂量(ml/g)的浓度1020乙醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度70 90乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液。 0020 上述步骤(8)中所述的干燥为真空冷冻干燥， 温度为-80。 0021 进一步地， 上述金花茶皂素的制备方法包括如下步骤： 0022 (1)将干燥的金花茶种子粉碎， 过60目筛； 0023 (2)以70的乙醇-水溶液作为溶剂， 金花茶种子与溶剂按照料液比(g:ml)1:14回 流提取步骤(1)中过筛后的金花茶种子； 提取温度为80， 提取时间3h， 提取次数3次， 合并 提取液； 0024 (3)将步骤(2)中提取液减

14、压浓缩成浸膏状， 经石油醚脱脂； 0025 (4)脱脂后水浴蒸馏石油醚， 石油醚蒸发完全转溶于水， 过滤； 0026 (5)滤液经D101型大孔树脂吸附后， 用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、 2倍树脂量(ml/ g) 0027 的浓度20乙醇溶液洗脱杂质， 再以3倍树脂量(ml/g)的浓度80乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液； 0028 (6)将步骤(5)中洗脱液经NKA-9型树脂柱脱色； 脱色后在-80下真空冷冻干燥， 即得到金花茶皂素产品。 0029 与现有技术相比， 本发明的有益效果是： 该制备方法克服了传统工艺金花茶皂苷 易流失、 得率低及纯度不高的不足， 提高了金花茶皂素提取的效率及得率

15、， 保护了皂素的原 有色泽， 也有效保护了皂素成分组成、 结构和活性， 最大量的高效生产， 纯度高， 并且操作简 单， 成本低， 所使用溶剂可以回收， 大孔树脂可再生， 适于规模化生产。 附图说明 0030 图1： 实施例21的金花茶皂素的制备方法流程图。 具体实施方式 0031 下面以具体的实施例来对本发明做进一步说明， 如无特殊说明， 所述实施例中均 说明书 2/5 页 4 CN 107383152 A 4 采用香草醛浓硫酸显色， 分光光度法测定金花茶皂苷的含量。 0032 本发明的金花茶皂素的制备方法的具体实施方式是： 以干燥的金花茶种子为原 料， 粉碎过筛后， 按照设定的不同乙醇-水溶

16、液浓度、 料液比(g:ml)、 提取温度、 时间及次数 浸提， 由单因素实验和正交实验筛选出皂苷收率最高的一组提取液， 将提取液浓缩后经石 油醚脱脂， 水浴蒸去石油醚， 转溶于水、 过滤， 滤液经D101型大孔树脂吸附， 用蒸馏水、 乙醇 溶液洗脱杂质， 然后按照设定的洗脱液浓度、 用量等洗脱条件， 洗脱目标产物， 采集洗脱液， 由单因素实验筛选出皂苷含量最高的一组洗脱液， 再经NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩干燥 后得到白色粉末状金花茶皂素产品。 0033 下面对金花茶皂素的提取及树脂纯化步骤做详细描述。 0034 实施例113 0035 按照上述具体操作步骤， 提取溶剂为不同浓度乙醇-水

17、溶液， 在不同提取温度、 不 同提取次数、 不同料液比的条件下提取金花茶皂素。 产物皂苷的收率计算式如下： 0036 皂苷收率(皂苷质量/原料质量)x100 0037 具体条件及结果见表1： 0038 表1 0039 0040 实施例14 0041 本实施例是考察提取工艺的正交实验， 提取步骤同实施例113， 根据上述实施例 113的结果， 对4个因素分别选择合适的3个水平， 采用L9(34)正交实验安排表考察金花茶 说明书 3/5 页 5 CN 107383152 A 5 皂素的最佳工艺条件。 正交表见表2， 实验结果见表3： 0042 表2 0043 0044 表3 0045 0046 由

18、以上结果分析可知： 所设定四个因素的影响顺序为ABDC， 即料液比提 取温度乙醇浓度提取时间， 最佳工艺组合为A1B2C2D2， 即溶剂为70乙醇， 料液比1:14， 80提取3次， 每次3小时。 其中料液比对总皂苷提取的影响最为显著。 说明书 4/5 页 6 CN 107383152 A 6 0047 D101型大孔树脂预处理： 使用大孔树脂柱之前， 应对大孔树脂进行预处理， 下面是 具体处理过程： 取D101型大孔树脂， 用蒸馏水浸泡12h， 倾去蒸馏水， 再以树脂体积2倍的 95乙醇浸泡2h， 充分溶胀后， 湿法装柱。 以95乙醇洗脱至流出液加3倍量水混合不呈白 色浑浊为止， 用流速为2

19、BV/h的2HCL溶液对树脂进行酸处理2h后， 以蒸馏水洗至中性。 用 流速为2BV/h的5NaOH溶液对树脂进行碱处理2h后， 以蒸馏水洗至中性， 即可使用。 0048 实施例1520 0049 以干燥的金花茶种子为原料， 粉碎过60目筛后， 以浓度为70乙醇水溶液为提 取溶剂、 料液比(g： ml)1:14、 提取温度80、 提取3次每次3h浸提； 所得提取物浓缩后经石 油醚脱脂， 水浴蒸去石油醚， 转溶于水、 过滤， 滤液经D101型大孔树脂吸附， 用蒸馏水、 乙醇 溶液洗脱杂质， 然后按照设定的乙醇溶液洗脱液浓度、 用量等洗脱条件洗脱目标产物， 在本 部分所述实施例中， 洗脱液流速均为

20、2BV/h， 采集洗脱液， 经NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩 在-80下真空干燥后得到白色粉末状金花茶皂素产品。 具体条件与结果见表4： 0050 表4 0051 0052 由实施例1520可以看出， 收集洗脱液时， 随着乙醇浓度的增大， 洗脱液中的皂苷 含量也随之增大， 继续增加乙醇浓度， 皂苷含量反而下降。 0053 实施例21 0054 本实施例工艺流程如图1所示。 0055 以干燥的金花茶种子为原料， 粉碎过60目筛后， 以浓度为70乙醇水溶液为提 取溶剂、 料液比(g:ml)1:14、 提取温度80、 提取3次每次3h浸提； 所得提取物浓缩后经石 油醚脱脂， 水浴蒸去石油醚， 转溶于水、 过滤， 滤液经D101型大孔树脂吸附， 用3BV蒸馏水、 2BV乙醇溶液洗脱杂质， 然后3BV的80乙醇溶液洗脱目标产物， 在本部分所述实施例中， 洗 脱液流速为2BV/h， 采集洗脱液， 经NKA-9型树脂柱脱色， 最后浓缩在-80下真空干燥后得 到白色粉末状金花茶皂素产品， 总皂苷含量85.6。 说明书 5/5 页 7 CN 107383152 A 7 图1 说明书附图 1/1 页 8 CN 107383152 A 8