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1、10申请公布号CN101993824A43申请公布日20110330CN101993824ACN101993824A21申请号200910169257922申请日20090825C12N1/14200601C12P7/64200601C12R1/64520060171申请人王顺岭地址100094北京市海淀区永丰屯72发明人林爱玉王顺岭曾洪梅54发明名称裂殖壶菌高密度培养的营养物配方57摘要本发明涉及一种大幅度提高海洋真菌裂殖壶菌生物量，并提高其代谢产物DHA二十二碳六烯酸产量的营养物配方，所涉及营养物包括复合维生素、复合氨基酸及复合微量元素，最后能使裂殖壶菌的生物量以菌丝干重计算达到115G/。
2、L以上，最高达1252G/L；DHA积累量达菌丝干重的15以上，最高达192，本发明使得利用裂殖壶菌进行DHA产业化成为可能。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页CN101993828A1/1页21一种裂殖壶菌SCHIZOCHYTRIUM的高密度培养的营养物配方，其特征在于在培养基中使用了复合维生素、复合氨基酸及复合微量元素。2根据权利要求1所述的营养物配方，其特征在于配方应用于海洋真菌裂殖壶菌属。3根据权利要求1所述的复合维生素，其特征在于组成为VB1硫胺素、VB2核黄素、VB6吡哆醇、VB12钴胺素、硫辛酸、VK、VPP尼克酰胺、VB9叶酸。
3、。4根据权利要求1所述的复合氨基酸，其特征在于组成为蛋氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸。5根据权利要求1所述的复合微量元素，其特征在于组成为MN2、CO2、FE2、NI2、SESEO32的形式。6根据权利要求2所述的复合维生素，其特征在于在培养基中的含量为VB1硫胺素10PPM1PPMVB2核黄素20PPM2PPMVB6吡哆醇60PPM5PPMVB12钴胺素14PPM1PPM硫辛酸30PPM3PPMVK20PPM2PPMVPP尼克酰胺10PPM1PPMVB9叶酸30PPM3PPM。7根据权利要求3所述的复合氨基酸，其特征在于在培养基中的含量为蛋氨酸25G/L30G/L赖氨酸03G/L05。
4、G/L组氨酸03G/L05G/L谷氨酰胺10G/L12G/L苏氨酸18G/L20G/L。8根据权利要求4所述的复合微量元素，其特征在于在培养基中的含量为MN290PPM100PPMCO220PPM25PPMFE25PPM10PPMNI260PPM70PPMSESEO32的形式120PPM130PPM。权利要求书CN101993824ACN101993828A1/2页3裂殖壶菌高密度培养的营养物配方技术领域0001本发明涉及一种大幅度提高海洋真菌裂殖壶菌生物量，并提高其代谢产物DHA二十二碳六烯酸产量的营养物配方，属于生物工程领域。技术背景0002DHA二十二碳六烯酸属于3系列多不饱和脂肪酸中的。
5、一种，其烯键位置为4，7，10，13，16，19，据有关报道，DHA具有健脑作用、保护和改善视力、预防和治疗心血管疾病、降低血管阻力、减低血液粘稠度、抑制血小板凝聚、抗血栓和降低血压、改善血液粘度、防止动脉硬化、预防老年痴呆、抗肿瘤、提高运动员耐久力等生理功能。0003DHA的功能决定了它是一种非常有价值的产物，值得开发，在国际市场上把它开发成食品添加剂、饲料添加剂及保健品，富含DHA的鱼油已经被美国医师用药手册PDR列为防治高血脂的第四类参考用药。0004DHA的早期主要来源是一些深海鱼，但是，这种来源存在着一些突出的缺陷资源有限、提取工艺复杂、污染环境、含有强烈的鱼腥味而不适于食品添加等。。
6、很多藻类和海洋微生物能够合成DHA，为DHA的来源开辟了新的途径，并解决了传统来源DHA的一些弊端。0005裂殖壶菌SCHIZOCHYTRIUMSP是产DHA的重要海洋微生物之一，DHA的含量能占其总脂肪酸的1520。在推进裂殖壶菌实现DHA产业化的过程中，生物量和DHA产量无疑是最重要的决定因素，它们直接决定了DHA的生产成本和可开发性，在以往的工作中，已基本确定了裂殖壶菌培养的基质和碳源、氮源，进一步提高生物量和DHA产量需要对裂殖壶菌的培养进行更加细致的工作。发明内容0006本发明利用从广东湛江地区红树林中筛选得到一株产DHA裂殖壶菌SCHIZOCHYTRIUMSP，在确定了以一定浓度的。
7、海水为基质，并确定了基本的碳源、氮源和基本培养条件后对促进裂殖壶菌生物量积累、促进菌丝体中DHA积累的一些重要营养。0007本发明的目标是这样实现的00081首先，通过单因子实验对多种维生素包括VB系列、VD、VH、VK、VPP、硫辛酸、VR等、多种氨基酸选择了常见的15种氨基酸和多种微量元素包括铜、铁、钴、锰、锌、钼、镍、铬、锡等进行了考察分析，找出与生物量及DHA积累量具有正相关的因子，排除与生物量及DHA积累量无关或具负相关的因子。00092在单因子实验基础上，利用正交设计试验分别对维生素、氨基酸和微量元素的添加量和添加比例进行了优化，通过统计分析，得到了以下结果0010A优化的维生素含。
8、量配方0011VB1硫胺素10PPM1PPM0012VB2核黄素20PPM2PPM0013VB6吡哆醇60PPM5PPM说明书CN101993824ACN101993828A2/2页40014VB12钴胺素14PPM1PPM0015硫辛酸30PPM3PPM0016VK20PPM2PPM0017VPP尼克酰胺10PPM1PPM0018VB9叶酸30PPM3PPM0019B优化的氨基酸含量配方0020蛋氨酸25G/L30G/L0021赖氨酸03G/L05G/L0022组氨酸03G/L05G/L0023谷氨酰胺10G/L12G/L0024苏氨酸18G/L20G/L0025C优化的微量元素含量配方0026MN290PPM100PPM0027CO220PPM25PPM0028FE25PPM10PPM0029NI260PPM70PPM0030SESEO32的形式120PPM130PPM。00313在以海水为基质，葡萄糖和甘油为碳源、酵母粉和大豆蛋白胨为氮源的培养基上，使用本发明的配方，最后能使裂殖壶菌的生物量以菌丝干重计算达到115G/L以上，最高达1252G/L；DHA积累量达菌丝干重的15以上，最高达192。说明书CN101993824A。