《一种表告依春的生产工艺及其标准.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种表告依春的生产工艺及其标准.pdf（8页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 102766105 A (43)申请公布日 2012.11.07 CN 102766105 A *CN102766105A* (21)申请号 201110115528.X (22)申请日 2011.05.05 C07D 263/16(2006.01) G01N 30/36(2006.01) (71)申请人 苏州思源天然产物研发有限公司 地址 215163 江苏省苏州高新区科技城培源 路 11 号 (72)发明人 徐丽华 潘国平 黄芳 马昕明 (74)专利代理机构 上海专利商标事务所有限公 司 31100 代理人 陶家蓉 (54) 发明名称 一种表告依春的生产工艺及其标。
2、准 (57) 摘要 提供了一种表告依春提取方法， 包括步骤 ： a) 用6-12倍板蓝根药材重量的50-90乙醇水溶液 渗漉8-24小时， 得到渗漉液 ； b)将步骤a)得到的 渗漉液于 70以下减压回收乙醇得到药液 ； c) 步 骤 b) 的药液过大孔树脂吸附柱， 流出液检出表告 依春停止上液， 水洗柱床至无色， 30-60乙醇洗 脱， 收集洗脱液， 流出液未检出表告依春停止收集 药液 ； d)70以下减压回收乙醇， 药液过滤柱， 得 到滤液 ； e)步骤d)得到的滤液过所含表告依春重 量30-90倍的粒径为75-150u的中压层析树脂柱， 用 15-50乙醇洗脱， 收集洗脱液， 流出液未检。
3、出 表告依春停止收集 ； f)70以下减压回收乙醇并 浓缩至近干， 以 10-50乙醇在 40-60下溶解成 近饱和溶液， 放置析晶 ； g) 回收步骤 f) 得到的晶 体， 在 -10 到 -30下冷冻干燥。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 6 页 1/1 页 2 1. 一种表告依春提取方法， 其特征在于， 包括步骤 ： a) 用 6-12 倍板蓝根药材重量的 50-90乙醇水溶液渗漉 8-24 小时， 得到渗漉液 ； b) 将步骤 a) 得到的渗漉液于 70以下减压回收乙醇得。
4、到药液 ； c) 步骤 b) 的药液过大孔树脂吸附柱， 流出液检出表告依春停止上液， 水洗柱床至无 色， 30-60乙醇洗脱， 收集洗脱液， 流出液未检出表告依春停止收集药液 ； d)70以下减压回收乙醇， 药液过滤柱， 得到滤液 ； e) 步骤 d) 得到的滤液过所含表告依春重量 30-90 倍的粒径为 75-150u 的中压层析树 脂柱， 用 15-50乙醇洗脱， 收集洗脱液， 流出液未检出表告依春停止收集 ； f)70以下减压回收乙醇并浓缩至近干， 以 10-50乙醇在 40-60下溶解成近饱和 溶液， 放置析晶 ； g) 回收步骤 f) 得到的晶体， 在 -10 到 -30下冷冻干燥。。
5、 2. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述步骤 a) 中使用的乙醇为板蓝根药材重 量的 9 倍。 3. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述步骤 a) 中使用的乙醇为 70的乙醇。 4. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述渗漉时间是 14 小时。 5. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述步骤 c) 中乙醇洗脱所使用的是 40乙 醇。 6.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述步骤d)中的填充柱选自氧化铝柱、 聚酰 胺柱和硅藻土柱。 7. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述步骤 e) 中树脂柱为表告依春重量的 50 倍。 。
6、8.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述步骤e)和步骤f)中所用的乙醇浓度为 25乙醇。 9. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述步骤 f) 中乙醇溶解的温度为 50。 10. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 步骤 c) 中表告依春的检测方法是 ： 用高效液相法在 240 纳米波长下检测表告依春的含量， 流动相为甲醇水三乙胺的 体积比为 25 75 0.2， 柱温 20 度， 流速 1.0ml/ 分。 权 利 要 求 书 CN 102766105 A 2 1/6 页 3 一种表告依春的生产工艺及其标准 技术领域 0001 本发明涉及中药有效成分的提取方法， 具。
7、体是表告依春的提取方法。 背景技术 0002 流感是一种烈性传染病， 世界上已经历多次流感的威胁， 如 SARS、 禽流感、 甲流， 人 类需要抗流感的药物， 但目前仅有少量化药， 如金刚烷胺、 奥司他韦等， 毒性较大。 0003 板蓝根是一种常用中药材， 是菘蓝(Isatis indigotica)的根。 它在中国有广泛栽 培， 具有清热解毒的功效 ( 中华本草， pp.2346， 3 709)。已有报道表明， 它具有抗病毒 ( 板 蓝根化学成分研究 (I)， 中草药， 2001 年第 32 卷第 12 期， pp1057)， 抗细菌内毒素 (Herald of Medicine， 卷 21。
8、， No.2， pp.74， 2002)， 抗癌， 抗抑郁 ( 中草药， 2001 年第 32 卷第 7 期， pp.670-671) 的功效。也有文献公布了板蓝根的抗病毒作用来自板蓝根多糖或者喹唑酮或 靛红玉 ( 中草药， 2000 年第 31 卷第 6 期， 474-476 页 )。但是， 这些方法是基于粗浸膏的注 射液 ( 中草药， 2001 年第 32 卷第 7 期， pp.670-671) 或氯仿提取物 ( 中国中药杂志， 2002 年 6 月， Vol.27， No.6， p.439-442) 或其它成分。由于缺乏高度纯化和检测的手段， 因此作 为生物碱成分的表告依春难以获得， 对。
9、于其用途也缺乏研究和报道。天然成分表告依春是 一种安全有效的抗流感成分， 但在药材中的含量通常在 0.01-0.09， 含量较低， 需要高度 提纯的工艺手段 ； 同时， 板蓝根中大量的多糖也是有效成分， 需要考虑药材综合利用。 0004 目前对板蓝根的主要生产工艺是粗提取， 以所得的浸膏量作为考察的依据。见例 如中国药典， 2000， pp.490， 其中主要是将板蓝根煎煮， 乙醇浸泡后取上清液， 压制得到常见 的板蓝根茶和颗粒， 在该传统工艺中并没有对有效部位的分离。在 1995 年的中华人民共和 国药典中规定， 以热浸法测定， 45的乙醇浸出物不少于 25为合格产品。这样获得的产 品有效部。
10、位含量低， 质量控制手段粗略。Huang Qiao Shu 等， Planta Medica， 1981， 42(3)， 308-310， 描述了一种从中药材板蓝根提取纯表告依春的方法， 其方法主要是用己烷和二氯 甲烷抽提， 进行硅胶层析并用 TLC 监测。该方法仅适合实验室提取， 其目的也是仅供研究使 用， 由于成本等原因不能用于大规模生产。 0005 发明人对于从板蓝根中提取表告依春的制备工艺及其抗流感用途进行了广泛研 究， 在 2003 年提交了专利 ( 专利号 ZL03110306.5， 该专利虽然描述了使用乙醇和大孔树 脂吸附柱提纯板蓝根的有效部位， 但是其中并没有实现对于表告依春的。
11、大生产提取， 未考 虑表告依春转移率和药材合理利用 )， 随后也有 3 个专利申请了不同的制备工艺， 例如 ZL 200410016902.0 中提取了表告依春晶体， 该方法采用了氯仿和甲醇混合洗脱。申请人经过 进一步的研究， 认为这些方法虽然获得了高纯度的表告依春纯度已高达 98， 但得率和转 移率较低且复杂耗时， 又使用了氯仿等有毒有机溶剂， 适合用于制备对照品或标准物质， 在 制药大生产中仍然会有毒性等问题， 因此应用性仍然有问题。 0006 综上所述， 迫切需要一种高效率且安全无害的表告依春提取方法。 发明内容 说 明 书 CN 102766105 A 3 2/6 页 4 0007 因。
12、此， 本发明的目的是提供一种高效无害的表告依春提取方法。 0008 因此， 提供了一种表告依春提取方法， 其包括步骤 ： 0009 a) 用 6-12 倍板蓝根药材重量的 50-90乙醇水溶液渗漉 8-24 小时， 得到渗漉液 ； 0010 b) 将步骤 a) 得到的渗漉液于 70以下减压回收乙醇得到药液 ； 0011 c) 步骤 b) 的药液过大孔树脂吸附柱， 流出液检出表告依春停止上液， 水洗柱床至 无色， 30-60乙醇洗脱， 收集洗脱液， 流出液未检出表告依春停止收集药液 ； 0012 d)70以下减压回收乙醇， 药液过滤柱， 得到滤液 ； 0013 e) 步骤 d) 得到的滤液过所含。
13、表告依春重量 30-90 倍的粒径为 75-150u 的中压层 析树脂柱， 用 15-50乙醇洗脱， 收集洗脱液， 流出液未检出表告依春停止收集 ； 0014 f)70以下减压回收乙醇并浓缩至近干， 以 10-50乙醇在 40-60下溶解成近 饱和溶液， 放置析晶 ； 0015 g) 回收步骤 f) 得到的晶体， 在 -10 到 -30下冷冻干燥。 0016 在该方法的一个优选例中， 步骤 a) 中使用的乙醇为板蓝根药材重量的 9 倍。 0017 在该方法的另一个优选例中， 步骤 a) 中使用的乙醇为 70的乙醇。 0018 在该方法的另一个优选例中， 渗漉时间是 14 小时。 0019 在该。
14、方法的还有一个优选例中， 步骤 c) 中乙醇洗脱所使用的是 40乙醇。 0020 在该方法的仍然一个优选例中， 步骤 d) 中的填充柱选自氧化铝柱、 聚酰胺柱和硅 藻土柱， 更优选的是氧化铝柱。 0021 在该方法的还有一个优选例中， 步骤 e) 中树脂柱为表告依春重量的 50 倍。 0022 在该方法的还有一个优选例中， 步骤e)和步骤f)中所用的乙醇浓度为25乙醇。 0023 在该方法的还有一个优选例中， 步骤 f) 中乙醇溶解的温度为 50。 0024 在该方法的还有一个优选例中， 步骤 g) 中的冷冻温度是 -20。 0025 在该方法的还有一个优选例中， 步骤 c) 中表告依春的检测。
15、方法是用高效液 相法在 240 纳米波长下检测表告依春的含量， 流动相为甲醇水三乙胺的体积比为 25 75 0.2， 柱温 20 度， 流速 1.0ml/ 分。 0026 在以下描述中详细说明了本发明的一种或多种实施方式。 通过下述详细描述的内 容和权利要求书， 本发明的其它特征、 目的和优点将是显而易见的。 具体实施方式 0027 申请人经过对表告依春提取方法的改进， 开发了一种安全无害， 适合自动化和大 工业生产的方法。 0028 如说明书和权利要求书中所述的 “乙醇” 指的是重量的乙醇水溶液。 0029 本申请的方法采用乙醇渗漉提取法， 溶剂用量少而且无需加热， 再使用 3 根不同 除杂。
16、原理的柱子， 将表告依春由药材中的 0.05左右纯化至 90以上， 整个工艺转移率高 达 80以上， 使用的溶剂均是水和乙醇， 最后以冷冻干燥得到终产品， 表告依春由药材到终 产品损失仅为 10左右， 药渣中保留了 80以上的多糖。 0030 该技术提取后的药渣里保留了板蓝根的多糖成分， 可另设计工艺提取多糖， 为药 材综合利用奠定了基础， 是一种经济环保的制备工艺。 0031 该技术还对制备的表告依春按国家中药一类新药要求， 建立了制药用途的质量标 说 明 书 CN 102766105 A 4 3/6 页 5 准， 表告依春含量 90 ； 水分 2 ； 灰份 1 ； 重金属 20ppm ； 。
17、有机残留 20ppm。 0032 渗漉法利用溶剂自上而下， 由稀至浓， 不断造成浓度差， 相当于无数次浸渍， 是一 个动态过程， 可连续操作， 浸出效率高， 适用于贵重药材、 毒性及高浓度的制剂， 也适用于有 效成分含量较低的药材的提取。本申请使用的渗漉装置是中药制备领域常用的渗漉桶， 也 可使用其他的渗漉装置。渗漉器底部带有滤过装置。不必单独滤过， 节省工序 ； 在常温下的 渗漉法无需调节温度， 例如对药材进行加热等， 可以保护有效成分。 0033 本申请的方法中使用大孔树脂对渗漉液进行进一步的纯化。使用的大孔树脂是 LSA-7 也可使用苯乙烯骨架的其他的常规大孔树脂， 例如 LSA-33、。
18、 D101、 LS-300 等。 0034 本申请的方法中过树脂柱和洗脱的速度按常规的 2BV/ 小时和 1BV/ 小时， 也可以 根据生产时间和设备具体的要求， 进行调整， 通常变化幅度为 50。 0035 在使用大孔树脂进一步纯化后， 使药液通过填充柱进一步过滤， 以除去固体杂质。 填充柱是氧化铝， 也可使用常规的聚酰胺， 硅藻土。 0036 滤液进一步通过中压层析树脂柱 ( 粒径 75-150m)， 过柱和洗脱的速度按常规的 10BV/ 小时和 3BV/ 小时， 也可以根据生产时间和设备具体的要求， 进行调整， 通常变化幅度 为 50。 0037 接着， 使用 15-50乙醇 ( 最佳 。
19、25乙醇 ) 洗脱， 收集洗脱液， 流出液未检出表告 依春停止， 70以下减压回收乙醇并浓缩至近干。 0038 以 10-50乙醇 ( 最佳 25乙醇 ) 趁热 ( 温度 40 60 ) 溶解成近饱和溶液， 放 置析晶， 取出晶体， 冷冻干燥 ( 温度 -10 -30 ) 即得到表告依春晶体。 0039 使用本发明的乙醇渗漉结晶法， 获得了高达 85以上表告依春由药材到结晶的转 移率。虽然现有技术中， 例如本申请人曾经发现过转移率相当， 甚至可能更高的提取方法， 但是本申请的方法仅仅采用无毒无害， 工业中最常用的酒精作为提取试剂， 因此在制备过 程中对于人体和动物完全无害， 也不需要额外的除去。
20、有毒成分的步骤， 因此安全可靠， 并且 非常高效， 比起现有技术的方法能够大大节约成本， 而且安全性和实用性更佳。 0040 经检测， 药渣中多糖保留率达到了接近 90， 因此非常适合循环利用药渣再对有 用的多糖进行进一步的提取处理， 因此也提高了药材的利用率。 0041 以下实施例进一步描述了本发明， 这些实施例不限制权利要求书所述的本发明范 围。 0042 实施例 - 表告依春的提取 0043 1. 材料和试剂 ： 0044 板蓝根药材购自安徽毫州药材市场， 0045 试剂乙醇为食用级， 购自东吴酒厂 0046 其它分析试剂如甲醇、 三乙胺、 冰醋酸等购自上海国药试剂有限公司 0047 说。
21、 明 书 CN 102766105 A 5 4/6 页 6 0048 均为常州德尔松耐压容器有限公司生产制药设备 0049 2. 提取方法 ： 0050 用6-12倍(最佳9倍)板蓝根重量的50-90乙醇(最佳70的乙醇)渗漉8-24 小时(最佳14小时)， 渗漉液于70以下减压回收乙醇得到药液， 药液过大孔树脂柱(吸附 柱， 填充大孔树脂， 中试 1-3 为 LSA-7， 中试 4-6 为 LS-300)， 流出液检出表告依春停止上液， 水洗柱床至无色， 30-60乙醇洗脱(最佳40乙醇)， 收集洗脱液， 流出液未检出表告依春 停止， 70以下减压回收乙醇得到药液， 药液过滤柱 ( 填充滤柱。
22、， 填充助滤吸附剂， 中试 1-3 为氧化铝， 中试 4-6 为聚酰胺 )， 滤液过所含表告依春重量 30-90 倍 ( 最佳 50 倍 ) 的中压 树脂柱 ( 层析柱， 填充微型树脂， 填料粒径 75-150m， 型号 CHP)， 15-50乙醇 ( 最佳 25 乙醇 ) 洗脱， 收集洗脱液， 流出液未检出表告依春停止， 70以下减压回收乙醇并浓缩至近 干， 以 10-50乙醇 ( 最佳 25乙醇 ) 趁热溶解成饱和溶液， 放置析晶， 取出晶体， -20冷 冻干燥即得到表告依春晶体。 0051 板蓝根药材 ( 含表告依春 0.048 ( 在本实验中使用的表告依春检测方法是用高 效液相法在 2。
23、40 纳米波长下检测表告依春的含量， 流动相为甲醇水三乙胺的体积比为 25 75 0.2， 柱温 20 度， 流速 1.0ml/ 分。) 共 360 公斤， 每批 60 公斤， 具体的提取条件 如下表 1 所示， 进行了 6 批实验。 0052 表 1 ： 表告依春提取的条件 0053 0054 0055 3. 表告依春工艺的检测方法 ： 0056 申请人对表告依春的工艺制定了如下标准 ： 0057 1) 性状要求 0058 1.1) 外观本品为白色至黄白色粉末或晶体。 说 明 书 CN 102766105 A 6 5/6 页 7 0059 1.2) 指标要求 0060 0061 上述表格中所。
24、述的专利方法是根据 ZL200410016902.0 中所述的表告依春检测 法。 0062 水分、 灰分、 重金属和有机残留物的检测方法是根据 2010 版中国药典二部附录中 所述。 0063 2) 上述 6 批表告依春提取物的检测结果 ： 0064 0065 注 ： 0066 表 2 中所述的提取率渗漉液中表告依春含量 / 药材中表告依春含量 0067 最终转移率晶体中表告依春含量 / 药材中表告依春含量 0068 得率晶体重量 / 药材投料量 0069 药渣多糖保留率药渣多糖含量 / 药材多糖含量 0070 多糖含量测定方法参照王光亚主编 保健食品功效成分检测方法 第 15 19 页， 2。
25、002 年， 中国营养学会， 营养与保健食品研究及科学进展学术资料汇编， 中国工业出版社所 述。 0071 4. 结果和讨论 ： 0072 如上所述， 使用乙醇渗漉结晶法获得了高达95以上的提取率。 虽然现有技术中， 例如本申请人曾经发现过得率相当， 甚至可能更高的提取方法， 但是本申请的方法仅仅采 用无毒无害， 工业中最常用的酒精作为提取试剂， 因此在制备过程中对于人体和动物完全 无害， 也不需要额外的除去有毒成分的步骤， 因此安全可靠， 并且非常高效， 比起现有技术 的方法能够大大节约成本， 而且安全性和实用性更佳。 说 明 书 CN 102766105 A 7 6/6 页 8 0073 经检测， 药渣中多糖保留率达到了接近 90， 因此非常适合循环利用药渣再对有 用的多糖进行进一步的提取处理， 因此也提高了药材的利用率。 0074 其它实施方式 0075 应理解， 虽然已经结合发明详述描述了本发明， 但是上面的详述旨在说明而非限 制本发明的范围， 该范围由所附权利要求的范围限定。 0076 其它方面、 益处和修改落在所附权利要求的范围内。 说 明 书 CN 102766105 A 8 。