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1、(10)授权公告号 CN 102823504 B (45)授权公告日 2013.05.29 CN 102823504 B *CN102823504B* (21)申请号 201210363419.4 (22)申请日 2012.09.26 C12N 5/00(2006.01) A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 钦州市林业科学研究所 地址 535099 广西壮族自治区钦州市西环南 路 118 号 (72)发明人 何贵整 陈乃明 吴红英 时群 赖崇健 张桂兰 陶建华 吕月保 邓月梅 陈丽文 梁刚 (74)专利代理机构 桂林市持衡专利商标事务所 有限公司 45107 代理人 汤凌志。
2、 CN 101258836 A,2008.09.10, 全文 . CN 101331853 A,2008.12.31, 全文 . CN 101658137 A,2010.03.03, 全文 . CN 101869052 A,2010.10.27, 全文 . 王志洁 .“桉树组培工厂化育苗中培养基调 配技术研究” .福建林业科技 .2006, 第 33 卷 ( 第 3 期 ), 第 85-87,100 页 . 赖崇健等 .“桉树组培苗产业化发展的机遇 与对策” .吉林农业 .2011,( 第 2 期 ), 第 8-10 页 . 江海涛 .“桉树组培快繁研究及其应用进 展” .现代物业 .2012。
3、, 第 11 卷 ( 第 7 期 ), 第 64-67 页 . (54) 发明名称 桉树组织培养培养基 (57) 摘要 本发明公开了一种桉树组织培养培养基， 该 培养基包括继代培养基、 生根培养基。 该培养基具 有在继代培养时， 桉树材料继代苗月增殖高、 继代 苗生长良好， 小苗粗壮、 整齐， 叶色浓绿、 玻璃化苗 少， 得苗率高等优点， 生根无须经过壮苗阶段， 可 直接进行生根， 生根苗生根率高、 出根快， 根系发 达， 小苗木质化好， 移栽成活率高。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 荆丹丹 权利要求书 1 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)。
4、发明专利 权利要求书1页 说明书8页 (10)授权公告号 CN 102823504 B CN 102823504 B *CN102823504B* 1/1 页 2 1. 一种桉树组织培养培养基， 该培养基包括继代培养基和生根培养基， 其特征在于 ： 每升 （L） 继代培养基的组分及各组分的含量如下 ： KNO3 1900mg/L 肌醇 100mg/L NH3NO3 400mg/L 盐酸硫胺素 （VB1） 10mg/L KH2PO4 280mg/L 盐酸吡哆醇 （VB6） 0.8mg/L Ca（NO3） 24H2O 650mg/L 生物素 （VH） 0.05mg/L MgSO47H2O 360m。
5、g/L 烟酸 （VB3） 0.5mg/L FeSO47H2O 27.8mg/L 甘氨酸 3.0mg/L Na2EDTA 37.3mg/L D- 泛酸钙 2.0mg/L KI 0.083mg/L 抗坏血酸 （VC） 3.0mg/L MnSO44H2O 22.3mg/L 核黄素 （VB2） 4.0mg/L ZnSO47H2O 8.6mg/L L- 半胱氨酸 2.5mg/L CuSO45H2O 0.025mg/L 6- 苄氨基嘌呤 0.4-0.6mg/L H3BO3 6.2mg/L 萘乙酸 0.2-0.3mg/L NaMoO42H2O 0.25mg/L 蒸馏水 余量 ； 每升 （L） 生根培养基的组。
6、分及各组分的含量如下 ： KNO3 250mg/L 肌醇 60mg/L NH3NO3 165mg/L 盐酸硫胺素 （VB1） 4.8mg/L KH2PO4 440mg/L 盐酸吡哆醇 （VB6） 0.48mg/L Ca（NO3） 24H2O 220mg/L 生物素 （VH） 0.0969mg/L MgSO47H2O 260mg/L 烟酸 （VB3） 0.5mg/L FeSO47H2O 27.8mg/L 甘氨酸 0.8mg/L Na2EDTA 37.3mg/L 泛酸钙 1.0mg/L MnSO44H2O 22.3mg/L 抗坏血酸 （VC） 0.2mg/L ZnSO47H2O 8.6mg/L L。
7、- 半胱氨酸 0.5mg/L CuSO45H2O 0.025mg/L ABT6 号 0.5-0.8mg/L H3BO3 6.2mg/L 吲哚丁酸 0.2-0.4mg/L NaMoO42H2O 0.25mg/L 蒸馏水 余量。 权 利 要 求 书 CN 102823504 B 2 1/8 页 3 桉树组织培养培养基 技术领域 0001 本发明涉及组织培养基， 尤其涉及一种桉树组织培养培养基。 背景技术 0002 桉树 (Eucalyptus) 是桃金娘科桉树属、 杯果木属、 伞房桉属植物的泛称， 约有 900 种。原产澳大利亚及马来西亚， 广泛引种于亚洲热带、 亚热带各地， 我国四川中部及长江以。
8、 南各地栽培最多， 是经济价值和观赏价值都很高的树种。它生长快、 用途广。既可用于营造 用材林和经济林， 也可用于营造防护林和风景林。 我国已成为世界桉树栽培第二大国。 桉树 也因此成为我国发展前景广阔的树种。我国引种桉树已有 110 多年的历史， 现已成为我国 南方速生丰产林的战略性树种， 桉树与杨树、 松树一起被称为世界三大速生树种。 目前我国 桉树人工林面积已达 170 万公顷， 主要分布在广东、 广西、 云南、 海南、 福建、 四川、 湖南、 江 西等省。 桉树是目前我国南方三大用材树种之一， 以其速生丰产、 轮伐期短、 适生性广、 用途 多等优点， 已成为南方速生丰产林基地工程的首选。
9、树种， 深受广西、 广东、 福建、 云南、 海南、 四川、 贵州、 湖南、 江西等省的推广种植， 并且以种子繁殖育苗转变到用无性繁殖育苗造林， 特别是扦插繁殖育苗更受欢迎和采用。 0003 目前， 国内已有许多桉树组培技术研究报道， 组织培养中， 芽的增殖速度在离体快 速繁殖中是最为重要的一环， 在这阶段中繁殖速度快生产实践中才有应用价值， 决定繁殖 速度的因子最主要是材料本身的生理生长状态和培养基及其附加成分的相互作用。 在生根 培养时， 将继代增殖培养过程中获得的丛芽 （无根苗） 分割成单株， 选取健壮的的芽苗转接 到 1/2MS+IBA0.5 生根培养基上， 经 25d 左右培养， 即可。
10、获得可供瓶移栽的完整植株。接入 生根培养基 10d 左右即可生根。有些还需经过壮苗过程， 再进行生根培养才能获得较好的 生根效果。在上述培养基中， 生根培养的时间长、 生根苗不壮、 根量少、 移栽成活率低。 发明内容 0004 本发明的目的是克服现有技术的不足， 提供一种桉树组织培养培养基， 该培养基 包括继代培养基和生根培养基， 其中 ： 0005 每升 （L） 继代培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0006 说 明 书 CN 102823504 B 3 2/8 页 4 0007 每升 （L） 生根培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0008 0009 本发明桉树组织培养培养基中的继代培养。
11、基、 生根培养基的配制方法为 ： 0010 1、 母液配制 ： 为便于取样， 宜先配制各种母液， 分为大量元素母液、 微量元素母液、 有机物母液和各种植物生长调节剂母液。蔗糖、 琼脂不宜配成母液， 需要时直接称样。 0011 （1） 大量元素母液与培养基的组分浓度成100200的倍数关系， 有机物母液和微 量元素母液成 200 的倍数关系， 而植物生长调节试剂母液的浓度宜配成 1mg/ml ； 0012 （2） 母液宜用无菌的蒸馏水、 去离子水或超纯水配制， 大量生产时可用沉淀过夜的 开水 ； 0013 （3） 配制大量元素母液时， 每个组分应单独溶解， 后按氮、 磷、 钙、 镁、 的顺序逐个。
12、混 合， 否则容易引起沉淀 ； 说 明 书 CN 102823504 B 4 3/8 页 5 0014 （4） 微量元素母液含有见光易分解的碘化钾和易氧化的硫酸亚铁， 应用棕色瓶保 存 ； 0015 （5） 植物生长调节剂母液和有机物母液应置于冰箱中保存 ； 0016 （6） 母液配制后应及时使用， 贮存时间不宜超过 1 个月 ； 0017 （7） 发现母液有沉淀， 或有微生物生长， 或有藻类生长， 应废弃不用。 0018 2、 配制培养基 0019 （1） 依照培养基配方， 按配制体积用量筒量取母液至量杯中， 备用 ； 0020 （2） 量取一定量水至不锈钢锅内 ； 0021 （3） 称取适。
13、量琼脂和糖， 加入不锈钢锅内并搅拌使凝固剂充分分散， 糖充分溶解 ； 0022 （4） 加热至沸腾， 使琼脂和糖完全溶解， 用量杯量水至规定体积 ； 0023 （5） 用 1.0N 盐酸或 1.0N 氢氧化钾调整至 pH 至 5.8 ； 0024 （6） 尽快将培养基分装到培养器皿内， 以免培养基凝固或变稠而难以分装 ； 0025 （7） 分装培养基时应避免培养基粘到瓶口， 一旦粘上， 应擦除干净， 否则容易引起 污染。 0026 本发明桉树组织培养继代培养的方法为 ： 0027 （1） 继代材料培养 ： 培养室内的温度控制在 26-28。培养器皿上部的光照强度 为1500-3000Lx， 光。
14、照时间每天10-16小时。 刚接种出来的继代材料宜放在弱光环境下培养 7-10 天左右， 避免直射光照， 待有芽分化后， 新芽长高约 0.5 厘米后， 转到较强的散射光下 培养， 避免直射光照及过高的温度， 温度过高， 苗易衰老， 切口及老组织易产生愈伤及褐化， 温度过高、 光照不足， 材料易玻璃化。 0028 本发明桉树组织培养生根培养的方法为 ： 0029 （1） 生根苗的选取 ： 选取健壮芽条， 叶片展开， 茎轴通直， 木质化或半木质化 1.5 厘 米以上的粗壮芽条， 除去基部叶片、 小芽、 愈伤组织等， 切分为单个芽， 避免两个以上的芽连 在一起生根。每瓶均匀直扦 25 株。 0030。
15、 （2） 生根材料的培养 ： 刚接种的生根材料以塑料筐装好置弱光培养 7-10 天， 待出 根达 80% 以上， 再转到炼苗室培养 10-20 天。 0031 与目前现有技术的桉树组织培养基相比， 本发明的优点是 ： 0032 1、 用继代培养基进行培养， 桉树材料继代苗月增殖 5 倍、 年增殖率达到 512、 继代苗 生长良好， 小苗粗壮、 整齐， 叶色浓绿、 玻璃化苗少， 得苗率高 ； 0033 2、 用生根培养基进行培养生根苗生根率可达 98%、 出根快， 温度 252时， 平均 出根时间为 5-7 天， 根系发达， 出根量多平均有 5-8 条根， 小苗木质化好， 移栽成活率高， 移 栽。
16、成活率达 97% 以上， 出苗时间快温度 252时， 瓶苗出圃时间平均为 16 天左右。 具体实施方式 0034 下面以实施例对本发明作进一步说明， 但本发明并不局限于这些实施例。 0035 实施例 1 ： 0036 桉树组织培养培养基， 该培养基包括继代培养基和生根培养基， 其中 ： 0037 每升 （L） 继代培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0038 说 明 书 CN 102823504 B 5 4/8 页 6 0039 每升 （L） 生根培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0040 0041 实施例 2 ： 0042 桉树组织培养培养基， 该培养基包括继代培养基和生根培养基， 其中 。
17、： 0043 每升 （L） 继代培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0044 说 明 书 CN 102823504 B 6 5/8 页 7 0045 每升 （L） 生根培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0046 0047 实施例 3 ： 0048 桉树组织培养培养基， 该培养基包括继代培养基和生根培养基， 其中 ： 0049 每升 （L） 继代培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0050 说 明 书 CN 102823504 B 7 6/8 页 8 0051 每升 （L） 生根培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0052 0053 实施例 4 ： 0054 桉树组织培养培养基， 该培养基包括。
18、继代培养基和生根培养基， 其中 ： 0055 每升 （L） 继代培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0056 说 明 书 CN 102823504 B 8 7/8 页 9 0057 每升 （L） 生根培养基的组分及各组分的含量如下 ： 0058 0059 对比例 ： 0060 继代培养基 ： 现有技术采用采用 1/2MS+6-BA0.2-1.0mg/L+NAA0.1-0.25mg/L 的组 合 ； 0061 生根培养基 ： 现有技术采用 1/2MS+IBA0.5-1.0mg/L。 0062 利用上述实施例 1 和对比例制成的培养基， 对桉树进行组织培养， 从下表的结果 可以看出， 实施例的技术指标远超过对比例。 0063 说 明 书 CN 102823504 B 9 8/8 页 10 说 明 书 CN 102823504 B 10 。