技术领域
本发明涉及一种新的化学物质，具体涉及一种氟吡汀的偶联物及其制备方法及用途。
背景技术
氟吡汀的化学名称为2-氨基-3-乙氧羰基氨基-6-对氟苯甲基氨基吡啶，具有式
氟吡汀是临上广泛使用的无成瘾性镇痛药，疗效确切，安全性好，主要用于：适应于急、慢性轻，中度疼痛；如运动性肌肉痉挛导致的疼痛。本品具有良好的镇痛作用及肌肉松驰及神经保护作用，早在DE1795858B1中就公开的其制备方法，多年来被成功地用于治疗神经痛、与关节病变有关的痛疼、头痛、和手术后疼痛，是优良的中枢作用但无成瘾性的镇痛药。DE4122166A1公开了氟吡汀用来控制病症或病理性症状，所述的病症或症状基于肌肉紧张或是这样肌肉紧张的后果。DE4327516此外描述了氟吡汀治疗脑缺血和神经变性病症的应用。DE19541405A1公开了氟吡汀预防和治疗与血细胞生成细胞系统的损伤有关的病症的应用。DE10048969A1此外描述了氟吡汀对于耳鸣治疗的应用。DE1795858C2、DE3133519C2和DE3416609A1公开了氟吡汀及其可药用盐的制备。此外，DE9321574U1描述了例如含有氟吡汀马来酸盐作为活性成分的片剂、颗粒剂或栓剂形式的药物制剂。DE4319694A1公开了具有活性组分控制递送的含有氟吡汀的固体口服剂型。DE3416609A1及CN1838943A公开了含氟吡汀的注射剂。但是，氟吡汀制备或常规储存时的不太稳定，尤其是在高温及光照下容易氧化变色从而形成氧化产物。然而至今为止，未见有关氟吡汀氧化产物的分离、结构确证及其用途研究的相关报道。而进一步研究氟西汀中的氧化物成分，则有助于提高药品的质量和药品的安全性。
发明内容
针对以上技术缺陷，本发明提供一种新的氟吡汀偶联物或其盐，所述氟吡汀偶联具有如式(II)所示结构：
本发明还进一步提供了制备氟吡汀偶联物的方法，所述方法包括：
将氟吡汀或其盐在含金属离子或其离子配合物为催化剂作用下跟氧化剂进行氧化反应得到。
进一步，所述的氧化反应是：
1)以式(I)所示氟吡汀或其盐或其溶剂合物为反应起始原料：
2)在含金属离子或其离子配合物为催化剂作用下，在溶剂中进行氧化偶联即得。
在本发明制备方法中，作为实施方式之一，所述金属离子或其离子配合物包括但不限于钯、铑、铜、铁、铝、镍、铅、锌、镁、锡、锰、钛、铂或钒离子或它们的离子配合物中的一种或多种混合；作为实施方式之一，所述金属离子或其离子配合物进一步优选为氯化钯、氯化铑、氯化亚铁、三氯化铁、氯化亚铜、氯化铜、铜(II)胺配合物、铜(I)胺配合物、Cu(OH)Cl-TMEDA、醋酸铅、氯化镁、氯化锡、氯化锰、四氯化钛、氯化钯或氯化铂。
在本发明制备方法中，作为实施方式之一，所述的溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、1，2-二氯乙烷、乙腈、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、乙醚、异丙醚或二氧六环。所述的氧化剂包括但不限于空气、氧气、过氧化氢、过氧化苯甲酸或过氧化叔丁酸，进一步优选为空气、氧气或过氧化氢。
作为实施方式之一，本发明所述式II所示结构化合物的制备方法进一步包括：氧化偶联反应产物的分离、纯化；其中所述的分离纯化方法包括但不限于重结晶或制备型液相分离精制或两者结合。其中重结晶的溶剂包括但不限于醇类，优选为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇或正丁醇。所述的制备型液相分离精制条件包括：流动相为甲醇-水、乙腈-水或甲醇-乙腈-水或它们的组合，在添加或不添加酸的条件下，进行等度或梯度洗脱，收集产品流份，蒸干或冷冻干燥，即得。
在制备型液相分离精制的条件中，所述的酸包括但不限于无机酸或有机酸，所述无机酸优选盐酸、高氯酸、氢氟酸或硫酸或它们的任意组合；所述有机酸优选冰醋酸、三氟乙酸或甲酸或它们的任意组合。如有流动相中加酸，收集产品流份，再蒸干或冷冻干燥，即得氟吡汀偶联物相应的盐。
本发明所述氟吡汀偶联物的盐可以通过本领域常规的制备方法进行制备，所述方法可采用在流动相中加酸的方法收集样品，再蒸干或冷冻干燥析晶得到，或采用氟吡汀偶联物碱与相应酸反应成盐得到；其中所述酸包括但不限于醋酸、三氟乙酸、马来酸、乳酸、葡萄糖酸、烟酸、甲磺酸、磺酸、盐酸、硫酸、碳酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、对甲苯磺酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、乙酸、甲酸、苯甲酸、肉桂酸、丁二酸、枸椽酸、门冬氨酸或重酒石酸。
实验研究发现，氟吡汀偶联物具有较大毒副作用，制备出的氟吡汀药品中氟吡汀偶联物含量的多少直接影响到药品的质量和安全性。
因此，本发明还进一步提供了氟吡汀偶联物在药品检测中的应用，即将氟吡汀偶联物用作标准品或对照品以检测药品中含有氟吡汀偶联物的量，从而检测采用各种方法制备的或各种来源的氟吡啶原料或药剂是否符合有关标准的要求。
本发明人通过合成氟吡汀偶联物及其不同盐还发现，氟吡汀偶联物碱在固体状态下比较稳定，但在溶液状态下不太稳定，在成盐后，稳定性大大增加，氟吡汀偶联物盐即使在溶液状态下也比较稳定。
本发明人通过对氟吡汀偶联的详细研究还发现，本发明氟吡汀偶联物具有良好的杀虫活性，如对于螨虫具有很好的杀虫活性。
因此，本发明提供一种氟吡汀偶联物在制备杀虫剂中的应用。
本发明还提供一种新的杀虫剂组合物，所述组合物中含有有效量的氟吡汀偶联物，并可选择含有本领域常规的各种辅料。
本发明所述的杀虫剂组合物可以采用本领域常规的方法进行制备，并可以制备不同的制剂形式，包括但不限于溶液剂。
附图说明
图1式(II)所示结构化合物的HPLC图；
图2式(II)所示结构化合物的ESI质谱图；
图3式(II)所示结构化合物的H1-NMR图；
图4式(II)所示结构化合物的H1-NMR重水交换图；
图5式(II)所示结构化合物的碳谱图；
图6式(II)所示结构化合物的碳谱局部放大图；
图7式(II)所示结构化合物的DEPT图；
图8式(II)所示结构化合物的GCOSY图；
图9式(II)所示结构化合物的HMQC图；
图10式(II)所示结构化合物的HMBC图；
图11式(II)所示结构化合物的HMBC图局部放大图1；
图12式(II)所示结构化合物的HMBC图局部放大图2；
图13式(II)所示结构化合物的F-NMR图；
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例不应对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1
氟吡汀偶联化合物(II)的制备
将2克氟吡汀溶于100ml二氯甲烷中，加入氯化钯2克，加Cu(OH)Cl-TMEDA0.5克，搅拌反应至反应完成，过滤，滤液旋干，即得粗品5.0g，HPLC制备，即得式(II)化合物120mg，HPLC峰面积归一法纯度98.6％。
HPLC条件如下：
1、仪器：
高压制备色谱：ShimadzuLC-8A
ShimadzuSPD-20A
ShimadzuLC-solution
2、色谱柱：50×250mm，C18弹簧柱
3、流动相：A(水相)：去离子水
B(有机相)：制备乙腈
4、流速：80ml/min
5、检测波长：220nm、254nm
6、梯度：有机相浓度从0-23min由20％线性增加到45％，然后保持5min。
7、制备过程：取2.5g粗品用100mlDMF溶解，用0.45um滤膜过滤，取2.0ml过滤液注入色谱仪，收集目标峰。收集液混合均匀后分装到40ml冻干瓶中，每瓶约35ml，冻干瓶首先放入氮吹仪中在室温下浓缩2.5h，浓缩后的样品放入冻干机中冻干，冻干48h样品彻底干燥，将样品转移至棕色瓶中并称重得120mg样品。
产品纯度检测条件如下：
供试品溶液的配制：避光操作，取液相制备的式(II)氟吡汀偶联物，用乙腈溶解制成每1ml中含1.5mg的溶液，作为供试品溶液；
色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.02mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈(60∶47，混合均匀后用磷酸调pH值5.4～5.5)为流动相，检测波长为252nm。
MS(MS-ESI)＝607.5(M+H+)，303.1(M+2H+)；
1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ：
8.0-9.0(s，2H)，6.5-7.5(m，10H)，5.0-6.0(s，4H)，4.44(m，4H)，4.06(m，4H)，3.37(4H)，1.21(m，6H)。
重水交换：8.0-9.0(s，2H)，5.0-6.0(s，4H)，3.37(4H)峰消失，或变小，说明是活泼氢。
氟谱(VNS-600，DMSO-d6)δ：-73.665，-116.690。
碳谱：(500MHz，DMSO-d6)δ：
162.627，160.701，155.769，152.153，138.741，137，403，129.96，115.35，107.639，104.904，61.000，44.217，15.193。
实施例2：
氟吡汀偶联化合物的制备
将2克氟吡汀溶于100ml异丙醇中，加入氯化铁2克，加Cu(OH)Cl-TMEDA0.5克，搅拌反应至反应完成，过滤，滤液旋干，HPLC制备，即得产品(II)50mg，纯度大于99％。HPLC制备条件及样品纯度检测条件如实施例1。
HPLC条件如下：
1、仪器：
高压制备色谱：ShimadzuLC-8A
ShimadzuSPD-20A
ShimadzuLC-solution
2、色谱柱：50×250mm，C18弹簧柱
3、流动相：A(水相)：去离子水
B(有机相)：制备乙腈
4、流速：80ml/min
5、检测波长：220nm、254nm
6、梯度：有机相浓度从0-23min由20％线性增加到45％，然后保持5min。
7、制备过程：将粗品用100mlDMF溶解，用0.45um滤膜过滤，取2.0ml过滤液注入色谱仪，收集目标峰。收集液混合均匀后分装到40ml冻干瓶中，每瓶约35ml，冻干瓶首先放入氮吹仪中在室温下浓缩2.5h，浓缩后的样品放入冻干机中冻干，冻干48h样品彻底干燥，将样品转移至棕色瓶中并称重得50mg样品。
产品纯度检测条件如下：
供试品溶液的配制：避光操作，取液相制备的式(II)氟吡汀偶联物，用乙腈溶解制成每1ml中含1.5mg的溶液，作为供试品溶液；
色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.02mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈(60∶47，混合均匀后用磷酸调pH值5.4～5.5)为流动相，检测波长为252nm。
实施例3：化合(II)醋酸盐的制备
将2克氟吡汀溶于100mlDMF中，加入氯化亚铜2克，加入Cu(OH)Cl-TMEDA0.5克，搅拌反应至反应完成，过滤，滤液旋干，HPLC制备，即得产品(II)60mg，纯度为98.8％。HPLC制备条件及样品纯度检测条件如实施例1。
HPLC条件如下：
1、仪器：
高压制备色谱：ShimadzuLC-8A
ShimadzuSPD-20A
ShimadzuLC-solution
2、色谱柱：50×250mm，C18弹簧柱
3、流动相：A(水相)：5ml冰醋酸加入20L去离子水中
B(有机相)：制备乙腈
4、流速：80ml/min
5、检测波长：220nm、254nm
6、梯度：有机相浓度从0-23min由20％线性增加到45％，然后保持5min。
7、制备过程：取粗品用100mlDMF溶解，用0.45um滤膜过滤，取2.0ml过滤液注入色谱仪，收集目标峰。收集液混合均匀后分装到40ml冻干瓶中，每瓶约35ml，冻干瓶首先放入氮吹仪中在室温下浓缩2.5h，浓缩后的样品放入冻干机中冻干，冻干48h样品彻底干燥，将样品转移至棕色瓶中并称重得60mg样品。
产品纯度检测条件如下：
供试品溶液的配制：避光操作，取液相制备的式(II)氟吡汀偶联物，用乙腈溶解制成每1ml中含1.5mg的溶液，作为供试品溶液；
色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.02mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈(60∶47，混合均匀后用磷酸调pH值5.4～5.5)为流动相，检测波长为252nm。
实施例4：化合物(II)三氟乙酸盐的制备
将2克氟吡汀溶于100ml二氯甲烷中，加入0.2克Cu(OH)Cl-TMEDA，室温搅拌反应至反应完成，直接旋干，即得氟吡汀偶联物粗品。粗品经HPLC制备，即得精品氟吡汀偶联物(II)三氟乙酸盐80mg，纯度为98.6％。HPLC制备条件及样品纯度检测条件如下：
HPLC条件如下：
1、仪器：
高压制备色谱：ShimadzuLC-8A
ShimadzuSPD-20A
ShimadzuLC-solution
2、色谱柱：50×250mm，C18弹簧柱
3、流动相：A(水相)：5ml三氟乙酸加入20L去离子水中
B(有机相)：制备乙腈
4、流速：80ml/min
5、检测波长：220nm、254nm
6、梯度：有机相浓度从0-23min由20％线性增加到45％，然后保持5min。
7、制备过程：取2.5g粗品用100mlDMF溶解，用0.45um滤膜过滤，取2.0ml过滤液注入色谱仪，收集目标峰。收集液混合均匀后分装到40ml冻干瓶中，每瓶约35ml，冻干瓶首先放入氮吹仪中在室温下浓缩2.5h，浓缩后的样品放入冻干机中冻干，冻干48h样品彻底干燥，将样品转移至棕色瓶中并称重得0.2000g样品。
产品纯度检测条件如下：
供试品溶液的配制：避光操作，取液相制备的式(II)氟吡汀偶联物，用乙腈溶解制成每1ml中含1.5mg的溶液，作为供试品溶液；
色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.02mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈(60∶47，混合均匀后用磷酸调pH值5.4～5.5)为流动相，检测波长为252nm。
实施例5：氟吡偶联物不同盐的稳定性
原料来源：氟吡汀偶联物，纯度为98.6％，蓝色；氟吡汀偶联物醋酸盐，纯度为98.8％；氟吡汀偶联物三氟乙酸盐98.5％。
实验方法：取供试物，用乙腈溶解制成每1ml中含1.5mg氟吡汀偶联物碱的溶液，于25度下放置，在0、2、4、8、16、32小时下检测，比较峰面积降解情况。
色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.02mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈(60∶47，混合均匀后用磷酸调pH值5.4～5.5)为流动相，检测波长为252nm。
结果：
不同盐溶液稳定性比较表(峰面积)
结论：氟吡汀偶联物醋酸盐与三氟乙酸盐较氟吡汀偶联物碱稳定性显著提高。氧吡汀偶联物碱在溶液中很快分解。
实施例6氟吡偶联物的杀虫活性研究
原料来源：纯度为99.9％的马来酸氟吡汀，白色无臭粉末；纯度为98.6％的氟吡汀偶联物醋酸盐。
实验动物：选取经取样镜检证实为体外寄生螨虫(肉螨)的阳性昆明小鼠24只，随机分成给氟吡汀组、给氟吡汀偶联物药组和空白对照组，每组8只小鼠。
动物处理：给药组按1∶1000马来酸氟吡汀、氟吡汀偶联物与水配成的溶液进行喷浴；以5d间隔连续药浴3次，次日检查杀虫效果，观察60d。空白对照组用蒸馏水喷浴，方法同给药组。标准小鼠饲料喂养，自由饮食。笼具、垫料等经消毒处理，且各组在实验过程中严防交差感染。
动物取材：每次用药后进行检查杀虫效果，用小镊子对小鼠的腹股沟，嘴巴两侧，前肢内侧，耳后进行拔毛，放在滴有生理盐水的玻片上用镊子轻轻推均，并盖上盖玻片在显微镜的低倍镜下进行观察，有活螨的为阳性。
实验结果：表1氟吡汀偶联物杀螨效果
注*：与空白对照组相比，P＜0.05。
讨论：从表1结果可见，氟吡汀偶联物具有显著的杀螨效果，而氟吡汀及空白对照组没有杀螨效果。
实施例7马来酸氟吡汀产品中氟吡偶联物含量的测定方法
1.1仪器设备
LC-20ATvp泵日本岛津
SPD-20Avp紫外多波长检测器日本岛津
1.2方法及色谱条件
方法：照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部，附录VD)测定。
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.02mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈(60∶47，混合后用磷酸调pH值至5.4～5.5)为流动相，检测波长为252nm。
1.3测定法
避光操作。取马来酸氟吡汀供试品适量，用溶剂(水∶乙腈＝60∶47，下同)制成每1ml中含1.5mg的溶液，作为供试品溶液；另取氟吡汀偶联物对照品9mg，置100ml量瓶中，加甲醇适量，微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(1)；精密量取对照品溶液(1)5ml置于一100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(2)。立即精密量取供试品溶液与对照品溶液(2)各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如出现氟吡汀偶联物相同保留时间的显杂质峰，按外标法计算杂质的含量，即得。计算公式如下：
供试品中含氟吡汀偶联物的量(％)＝(供试品中氟吡汀偶联物峰面积/对照溶液中氟吡汀偶联物峰面积)×0.3％。