小白菊内酯类似物的制备方法及应用.pdf

摘要
申请专利号：	CN201610279424.5	申请日：	20160429
公开号：	CN105906615A	公开日：	20160831
当前法律状态：		有效性：	审查中
法律详情：
IPC分类号：	C07D407/04,C07D407/14,C07D493/10,A61K31/365,A61P35/00	主分类号：	C07D407/04,C07D407/14,C07D493/10,A61K31/365,A61P35/00
申请人：	常州大学
发明人：	胡昆,钟健,任杰,许园元,赵月欣
地址：	213164 江苏省常州市武进区滆湖路1号
优先权：	CN201610279424A
专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明涉及小白菊内酯类似物的制备方法及应用，属于有机合成领域。在保留小白菊内酯主要活性基团α‑亚甲基γ‑内酯和环氧结构的基础上，通过改变其骨架，设计了一系列化合物，并对其体外抗癌活性进行测试。通过简便的方法合成一系列具有生物活性小白菊内酯类似物，其中有两个化合物对正常细胞无毒性。

权利要求书

1.小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：当底物为醛时：称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯，N置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛，室温反应10-15min；反应结束后，除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，浓缩物柱层析，得α亚甲基γ丁内酯结构化合物；对应的α亚甲基γ丁内酯结构化合物溶于二氯甲烷中，置于冰浴中，称取化合物MCPBA加入反应液，反应30min移至室温；反应结束后，用1MNaOH水溶液洗涤有机相3次，收集有机相，有机相用无水NaSO干燥，减压旋蒸浓缩物柱层析，得最终产物。 2.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的醛的结构式为，通式中R为苯环，R和R为氢；或R和R为氢，R为甲基。 3.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的MCPBA的结构式为。 4.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的醛、Zn与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。 5.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的α亚甲基γ丁内酯结构化合物与MCPBA的摩尔比为1:1.5。 6.小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：当底物为酮时：将NaOH和HO缓慢加入烧瓶中，加入MeOH，再加入底物酮，室温反应10min，反应结束后，减压旋蒸浓缩物柱层析，得环氧化合物；称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯，N置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加环氧化合物，室温反应10-15min；反应结束后，减压旋蒸除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，旋干，浓缩物柱层析。 7.根据权利要求6所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的酮的结构式为，通式中R为甲基，苯基，苯并环己基，4-氟苯基，4-硝基苯基，2-硝基苯基，丙烯基苯基，环己基。 8.根据权利要求6所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的酮、NaOH与HO的摩尔比为1:1:1，MeOH为溶剂。 9.根据权利要求6所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的环氧化合物、Zn与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。 10.根据权利要求1-9所述的方法制备得到的小白菊内酯类似物，作为制备抗癌药物的应用。

说明书

技术领域

本发明属于有机合成领域，具体的说是小白菊内酯类似物的制备方法及作为制备抗癌药物的应用

背景技术

野甘菊起源于巴尔干半岛地区，最早欧洲人和希腊人以观赏和医药为目的种植和使用野甘菊。因为其具有抗炎活性，野甘菊常常用于治疗关节炎，除此之外，其还有很好的抗凝血，助消化，驱虫的作用，并且可以治疗抑郁症，眩晕症，肾结石等疾病。直到1978年，野甘菊具有减压作用被英国健康杂志报道，并因此以植物药的形式被人们广泛种植。在1997年这个最畅销的植物药剂的主要活性成分被确定为小白菊内酯，并对其进行纯化。小白菊内酯主要发现于植物的枝条、花和叶，根部小白菊内酯的含量目前还无法准确测量。实验证明晒干的植物中至少含有0.1％-0.2％的小白菊内酯才具有药理活性。

小白菊内酯(Parthenolide)，是野甘菊中一种含有α-亚甲基-γ-丁内酯倍半萜内酯类化合物，分子式为C15H20O3,其化学结构如式1-1。结构特征：以十元环为骨架，骨架上并着一个五元环内酯结构，五元环内酯是主要活性基团，结构中还含有甲基，环氧和双键等。

最近，纽约罗切斯特大学医学院的专家Jordan,C.T和其同事发现小白菊内酯可以在不损害正常骨髓细胞的前提下，选择性的消灭急性骨髓性白血病干细胞，进而从根本上治疗该疾病。此外，人们研究发现小白菊内酯也可以抑制乳腺癌干细胞和前列腺癌干细胞。目前人们推测小白菊内酯选择性消灭急性骨髓白血病干细胞的作用机制：p65/NF-κB亚基的Cys38上的巯基与小白菊内酯的α-亚甲基-γ-丁内酯的环外双键发生1,4-Michael加成，从而抑制NF-κB的激活。而NF-κB只有在癌细胞中才处于活化状态，在正常细胞是非活化状态。这样急性骨髓白血病干细胞就成了小白菊内酯选择进攻靶点，这是许多其他NF-κB抑制剂都不具有这样特性。小白菊内酯除了可以抑制NF-κB的激活，其抗癌机制还有：抑制SERCA、HDAC1和COX-2等。正是因为小白菊内酯特殊的生物活性，吸引了许多科研工作者对其和其类似物的研究，并且取得了一些成果。

发明内容

本发明在保留小白菊内酯主要活性基团α-亚甲基γ-内酯和环氧结构的基础上，通过改变其骨架，设计了一系列化合物，如式1-2所示，并对其体外抗癌活性进行测试。根据化合物的结构特征，主要通过对R1、R2、R3和R4进行修饰。在设计化合物中，对R1的修饰可以分为芳香环、烷烃、环烷烃、带取代的芳香环等等，R2和R3为H，对R4的修饰可以是芳香环、烷烃、环烷烃和环并苯环等等，希望通过对R1、R2、R3和R4的修饰，得到结构简单，活性更好，无毒的化合物。

合成方法：在保留主要活性基团(α-亚甲基-γ-丁内酯，环氧)的基础上，通过对小白菊内酯骨架进行改变，我们设计了一系列小白菊内酯类似物，合成方式如式1-3。

本发明选择Reformatsky反应合成α-亚甲基-γ-丁内酯，该方法具有合成简便，后处理简单，机理成熟，产率高等特点。而环氧结构的形成，我们设计了两种方法，当化合物为酮时，用双氧水(H2O2)和氢氧化钠(NaOH)氧化双键，而当底物为醛时，H2O2和NaOH不能氧化双键，因此我们选用间氯过氧苯甲酸(MCPBA)氧化双键。

小白菊内酯类似物的制备方法，按照下述步骤进行：

当底物为醛时：称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯，N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛，室温反应10-15min。反应结束后，除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，浓缩物柱层析，得α-亚甲基-γ-丁内酯结构化合物；对应的α-亚甲基-γ-丁内酯结构化合物溶于二氯甲烷中，置于冰浴中，称取化合物MCPBA加入反应液，反应30min移至室温。反应结束后，用1M NaOH水溶液洗涤有机相3次，收集有机相，有机相用无水NaSO4干燥，减压旋蒸浓缩物柱层析,得最终产物。

其中所述的醛的结构式为通式中R1为苯环R2和R3为氢或R1和R2为氢R3为甲基。

其中所述的MCPBA的结构式为

其中所述的醛、Zn与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。

其中所述的α-亚甲基-γ-丁内酯结构化合物与MCPBA的摩尔比为1:1.5。

当底物为酮时：将NaOH和H2O2缓慢加入烧瓶中，加入MeOH，再加入底物酮，室温反应10min，反应结束后，减压旋蒸浓缩物柱层析，得环氧化合物；称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯，N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加环氧化合物，室温反应10-15min。反应结束后，减压旋蒸除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，旋干，浓缩物柱层析。

其中所述的酮的结构式为通式中R4为甲基，苯基，苯并环己基，4-氟苯基，4-硝基苯基，2-硝基苯基，丙烯基苯基，环己基。

其中所述的酮、NaOH与H2O2的摩尔比为1:1:1,MeOH为溶剂。

其中所述的环氧化合物、Zn与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。

上述小白菊内酯类似物作为制备抗癌药物的应用。

本发明优点：通过简便的方法合成一系列具有生物活性小白菊内酯类似物，其中有两个化合物对正常细胞无毒性。

具体实施方式

本发明合成方式如式1-3。

具体实验步骤：

实施例1化合物3a-3c的合成

称量Zn粉(2.0mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入5mL四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯(2.0mmol)，N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛(1.0mmol)，室温反应10-15min(薄层色谱TLC监测反应进程)。反应结束后，减压旋蒸除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，浓缩物柱层析[洗脱剂:V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]纯化，得目标化合物3a-3c。

化合物3a[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]:白色固体，产率90％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.33-7.17(m,5H),6.63-6.58(d,J＝15.0Hz,1H),6.20-6.18(t,J＝3.0Hz,1H),6.14-6.07(dd,J＝6.0,15.0Hz,1H),5.60-5.58(t,J＝3.0Hz,1H),5.08-5.01(m,1H),3.18-3.08(m,1H),2.76-2.67(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ169.0,134.6,133.0,132.2,127.7,127.4,125.7,125.6,121.4,76.5,33.3.

化合物3b[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]:无色油状液体，产率87％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.16-6.15(d,J＝3.0Hz,1H),5.59-5.58(d,J＝3.0Hz,1H),4.98(s,1H),4.86-4.81(d,J＝15.0Hz,1H),3.11-3.01(m,1H),2.70-2.62(m,1H),1.66-1.65(d,J＝3.0Hz,3H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ170.2,142.3,134.2,122.2,112.8,79.4,32.5,16.9.

化合物3c[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-6:1]:无色油状液体，产率87％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.16-6.14(t,J＝3.0Hz,1H),6.06-6.02(m,1H),5.63-5.60(m,1H),5.56-5.54(t,J＝3.0Hz,1H),2.92-2.89(dd,J＝3.0,6.0Hz,3H),2.59-2.48(m,1H),2.39-2.21(m,2H),2.00-1.91(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ168.8,136.7,134.7,131.1,93.7,38.4,36.2,30.2.

实施例2化合物4a-4c的合成

称量内酯化合物(1.0mmol)溶于二氯甲烷中，置于冰浴中，称取化合物MCPBA(1.5mmol)加入反应液，反应30min移至室温(薄层色谱TLC监测反应进程)。反应结束后，用1M NaOH水溶液洗涤有机相3次，收集有机相，有机相用无水NaSO4干燥，减压旋蒸浓缩物柱层析[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]纯化，得化合物4a-4c。

化合物4a[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-4:1]:白色固体，熔点59.8℃，产率80％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.31-7.16(m,5H),6.22-6.20(t,J＝3.0Hz,1H),5.65-5.63(t,J＝3.0Hz,1H),4.60-4.54(m,1H),3.74-3.73(d,J＝3.0Hz,1H),3,19-3,17(dd,J＝3.0Hz,6.0Hz,1H),3.04-2.94(m,1H),2.87-2.77(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ168.4,134.4,131.9,127.7,127.6,124.7,122.3,74.6,60.8,55.5,28.0.HRMS(EI)m/z calcd for C13H12O3(M+H)+217.0865,found 217.0858.

化合物4b[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-8:1]:无色油状液体，产率70％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.24-6.22(t,J＝3.0Hz,1H),5.66-5.65(t,J＝3.0Hz,1H),3.59-3.58(t,J＝3.0Hz,1H),3.28-3.27(d,J＝3.0Hz,1H),3.24-3.16(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),2.85-2.77(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),2.09-2.00(m,1H),1.96-1.83(m,2H),1.61-1.54(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ168.3,133.2,122.0,86.8,57.9,56.7,33.3,31.6,25.2.HRMS(EI)m/z calcd for C8H10O3(M+Na)+177.0528,found177.0523.

化合物4c[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]:黄色固体，熔点47.8℃，产率75％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.24-6.22(t,J＝3.0Hz,1H),5.66-5.65(t,J＝3.0Hz,1H),3.59-3.58(t,J＝3.0Hz,1H),3.28-3.27(d,J＝3.0Hz,1H),3.24-3.16(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),2.85-2.77(dt,J＝3.0Hz,18.0,1H),2.09-2.00(m,1H),1.96-1.83(m,2H),1.61-1.54(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ168.3,133.2,122.0,86.8,57.9,56.7,33.3,31.6,25.2.HRMS(EI)m/z calcd for C9H10O3(M+H)+167.0708,found 167.0702.

实施例3化合物5a-5h的合成

将NaOH(1.0mmol)和H2O2(1.0mmol)缓慢加入圆底烧瓶中，加入10mL MeOH，再加入底物醛或酮(1.0mmol)，室温反应10min(薄层色谱TLC监测反应进程)，反应结束后，减压旋蒸浓缩物柱层析[V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1～5:1]纯化，得化合物5a-5f。

化合物5a[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝8:1-5:1]:白色固体，产率80％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.31-7.39(m,5H),3.94-3.93(d,J＝3.0Hz,1H),3.43-3.42(d,J＝3.0Hz,1H),2.13(s,3H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ203.2,134.0,128.0,127.7,124.7,62.4,56.7,23.8

化合物5b[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]:白色固体，产率85％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.93-7.90(m,2H),7.56-7.50(m,1H),7.42-7.37(m,2H),7.42-7.26(m,5H),4.22-4.21(d,J＝3.0Hz,1H),3.99-3.98(d,J＝3.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ192.0,134.2,134.2,133.0,128.0,127.9,127.8,127.3,124.8,60.0,58.4.

化合物5c[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-6:1]:白色固体，产率88％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.06-8.03(m,1H),7.47-7.42(td,J＝3.0,6.0,15.0Hz,1H),7.33-7.26(m,6H),7.16-7.13(d,J＝9.0Hz,1H),4.28(s,1H),2.77-2.73(dd,J＝3.0,9.0Hz,2H),2.42-2.32(m,1H),1.81-1.74(dt,J＝3.0,12.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ193.7,143.4,134.3,134.1,132.7,128.8,128.4,127.7,127.0,126.6,64.4,64.1,27.4,25.3.

化合物5d[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝15:1-5:1]:白色固体，产率85％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.94-7.91(m,2H),7.58-7.52(m,1H),7.45-7.39(m,2H),7.30-7.25(m,2H),7.04-6.99(m,2H),4.20-4.19(d,J＝3.0Hz,1H),3.99-3.98(d,J＝3.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ192.9,164.8,161.5,135.4,134.1,131.3,131.2,128.9,128.4,127.7,127.6,116.0,115.7,61.0,58.8.

化合物5e[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝20:1-5:1]:白色固体，产率85％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.23-8.18(m,2H),7.96-7.92(m,2H),7.61-7.42(m,5H),4.22(d,J＝3.0Hz,1H),4.14(d,J＝3.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ191.1,147.3,141.7,134.1,133.4,128.0,127.4,125.6,123.1,59.8,57.0.

化合物5e[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝5:1-3:1]:白色固体，产率85％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.17-8.14(m,1H),7.97-7.94(m,2H),7.69-7.67(m,2H),7.59-7.40(m,4H),4.58-4.57(d,J＝3.0Hz,1H),4.17-4.16(d,J＝3.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ192.6,135.3,134.7,134.1,132.6,129.5,128.9,128.5,127.4,125.0,59.6,57.7.

化合物5g[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]:黄色固体，产率85％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.39-7.28(m,10H),4.18-4.17(d,J＝3.0Hz,1H),4.10-4.09(d,J＝3.0Hz,1H),3.82-3.81(d,J＝3.0Hz,1H),3.73-3.72(d,J＝3.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ199.3,199.3,134.6,134.5,129.3,129.3,128.8,128.8,125.8,125.8,61.0,60.4,59.0,58.9.

化合物5h[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-4:1]:白色固体，产率85％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.35-7.19(m,5H),3.99(s,1H),2.70-2.62(m,1H),2.42-2.31(m,1H),2.00-1.88(m,2H),1.81-1.65(m,2H),1.60-1.52(m,1H),1.46-1.35(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ205.6,132.5,127.3,127.3,125.7,66.0,63.0,40.9,26.4,23.6,22.4.

实施例4化合物4d-4k的合成

称量Zn粉(2.0mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入5mL四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯(2.0mmol)，N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛(1.0mmol)，室温反应10-15min(薄层色谱TLC监测反应进程)。反应结束后，减压旋蒸除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，旋干，浓缩物柱层析[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-5:1]纯化，得化合物4d-4k。

化合物4d[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-3:1]:白色固体，熔点为94.8℃，产率90％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.30-7.17(m,5H),6.20-6.18(t,J＝3.0Hz,1H),5.61-5.60(t,J＝3.0Hz,1H),3.96-3.95(d,J＝3.0Hz,1H),3.16-3.08(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),3.02-3.01(d,J＝3.0Hz,1H),2.75-2.67(dt.J＝3.0,18.0Hz,1H),1.49(s,3H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ168.3,135.0,133.5,127.6,127.5,124.7,121.3,78.1,65.2,54.4,36.7,22.9.HRMS(EI)m/z calcd for C14H14O3(M+H)+231.1021,found 231.1017.

化合物4e[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-3:1]:白色固体，熔点为88.1℃，产率90％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.40-7.10(m,10H),6.23-6.31(m,1H),5.66-5.64(t,J＝3.0Hz,1H),4.08-4.07(d,J＝3.0Hz,1H),3.58-3.51(dt,J＝3.0Hz,18.0,1H),3.26-3.25(d,J＝3.0Hz,1H),3.20-3.12(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ167.9,138.7,134.7,132.8,127.9,127.6,127.5,124.7,123.9,121.3,80.5,66.1,54.6,37.5.HRMS(EI)m/z calcd for C19H17O3(M+H)+293.1178,found 293.1752.

化合物4f[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-3:1]:白色固体，熔点为137.5℃，产率90％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.30-7.16(m,8H),7.01-6.98(m,1H),6.26-6.25(t,J＝3.0Hz,1H),5.63-5.62(t,J＝3.0Hz,1H),4.49(s,1H),3.55-3.47(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),3.01-2.93(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),2.66-2.44(m,2H),2.16-2.06(m,1H),1.64-1.56(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ168.6,137.2,134.7,133.6,133.5,127.4,127.1,125.3,125.1,120.7,80.4,66.4,59.5,40.2,26.3,22.8.HRMS(EI)m/z calcd for C21H18O3(M+H)+319.1334,found 319.1330.

化合物4g[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝8:1-4:1]:白色腊状，产率91％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.40-7.27(m,5H),7.11-7.07(m,2H),6.93-6.87(m,2H),6.23-6.21(m,1H),5.67-5.65(t,J＝3.0Hz,1H),4.07-4.06(d,J＝3.0Hz,1H),3.58-3.51(dt,J＝3.0Hz,18.0,1H),3.23-3.22(d,J＝3.0Hz,1H),3.21-3.13(dt,J＝3.0Hz,18.0,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ167.8,163.4,160.2,138.6,132.7,130.5,130.4,128.0,127.7,126.5,126.4,123.8,121.4,114.7,114.4,80.4,66.1,54.0,37.5.HRMS(EI)m/z calcd for C19H15FO3(M+Na)+333.0903,found 333.0897.

化合物4h[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-3:1]:白色腊状，产率80％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.10-8.07(dd,J＝3.0,6.0Hz,2H),7.38-7.19(m,7H),6.27-6.25(m,1H),5.71-5.69(t,J＝3.0Hz,1H),4.19(d,J＝3.0Hz,1H),3.60-3.53(dt,J＝3.0Hz,18.0,1H),3.25-3.17(m,2H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ167.7,146.9,142.2,138.3,132.4,128.1,127.9,125.4,123.7,122.8,121.8,80.1,66.7,53.5,37.6.HRMS(EI)m/z calcd for C19H15NO5(M+Na)+360.0848,found 360.0842.

化合物4i[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-3:1]:白色固体，熔点为144.5℃，产率70％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.04-8.00(dd,J＝3.0,9.0Hz,1H),7.57-7.19(m,8H),6.25-6.23(t,J＝3.0Hz,1H),5.68-5.66(t,J＝3.0Hz,1H),4.46-4.45(d,J＝3.0Hz,1H),3.59-3.52(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),3.31-3.23(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),3.13-3.12(d,J＝3.0Hz,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ167.8,146.4,137.5,133.3,132.6,131.8,127.8,127.6,125.9,124.6,123.7,121.7,81.4,65.5,52.9,37.3.HRMS(EI)m/z calcd for C19H15NO5(M+H)+338.1028,found 338.1024.

化合物4j[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-2:1]:黄色油状液体，产率60％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.28-7.16(m,10H),6.26-6.24(t,J＝3.0Hz,1H),5.69-5.67(t,J＝3.0Hz,1H),4.03-4.02(d,J＝3.0Hz,1H),3.82-3.79(m,1H),3.30-3.25(m,1H),3.06-2.83(m,2H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ167.5,134.4,134.0,131.9,127.9,127.7,127.7,127.7,124.7,124.6,122.3,78.7,62.2,61.4,54.5,54.0,30.7.HRMS(EI)m/z calcd for C21H18O4(M+H)+335.1283,found 335.1280.

化合成4k[洗脱剂：V(石油醚)：V(乙酸乙酯)＝10:1-4:1]:白色固体，产率90％；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.31-7.19(m,10H),6.19-6.17(t,J＝3.0Hz,1H),5.61-5.60(t,J＝3.0Hz,1H),4.38(s,1H),3.20-3.13(dt,J＝3.0,18.0Hz,1H),2.77-2.69(t,J＝3.0Hz,18.0,1H),1.93-1.84(m,2H),1.76-1.71(m,1H),1.58-1.47(m,2H),1.36-1.30(m,2H),1.11-1.00(m,1H)；13C NMR(75MHz,CDCl3)δ169.1,135.0,134.6,128.1,127.7,126.3,122.1,82.2,67.3,60.5,37.7,35.3,26.2,23.6,22.3.HRMS(EI)m/z calcd for C17H18O3(M+H)+271.1334,found 271.1331.

实验例1生物活性测试部分：

细胞抗癌活性和毒性检测主要运用MTT法测试受试化合物对DU-145(人前列腺癌细胞腺)，SGC-7901(人胃癌细胞腺)，Mcf-7(人乳腺癌细胞腺)，K562(人白血病细胞腺)，HepG2(人肝癌细胞腺)，HeLa(人宫颈癌细胞腺)细胞进行体外活性测试，同时对Vero(非洲绿猴肾细胞)进行体外毒性测试。

(1)接种细胞

本实验需要用到的Vero细胞和6种癌细胞腺接种于含有10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMIl640培养基中。当细胞生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面时，用0.25％胰蛋白酶消化，传代。待细胞长至75％左右时，收集细胞。实验时取对数生长期的癌症细胞为实验对象。

收集细胞的步骤如下所示：弃除培养皿中上层培养基，用5mL PBS洗涤细胞两次，再将500μL的0.25％的胰酶蛋白加入其中，放置含5％CO2的培养箱中，等到细胞脱壁后，在加入5mL新培养基，轻轻吹打至细胞完全脱落，等到细胞吹打均匀后吸入至15mL的离心管中进行离心3min，离心后去出上层液体，再加入5mL新培养基，轻轻吹打，计算细胞浓度，接着接种与孔板中，每个孔板中加入90μL的细胞悬液，板的边缘为了防止细胞蒸发，用无菌的PBS进行填充。

(2)细胞培养

接种完的孔板放置瓶置于37℃、5％CO2饱和湿度培养箱培养，每1-2天换一次培养液。

(3)MTT检测

通过MTT法检测化合物的细胞体外毒活性。用于测试的6种肿瘤细胞分别DU-145(人前列腺癌细胞腺)，SGC-7901(人胃癌细胞腺)，Mcf-7(人乳腺癌细胞腺)，K562(人白血病细胞腺)，HepG2(人肝癌细胞腺)，HeLa(人宫颈癌细胞腺)及正常细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)。在测试过程中，以化合物小白菊内酯为阳性对照物。小白菊内酯通过抑制核转录因子NF-kB的激活，对癌细胞有一定的抑制作用。

所有受试化合物均由HPLC检测纯度大于95％。

取对数生长期的肿瘤细胞，用RPMI1640或DMEM培养液稀释成5×104个/mL，接种在96孔板中。放置于37℃，5％CO2培养箱中培养过夜后加入不同浓度的药物培养液，再孵育72小时，加入10.0μL/well的MTT溶液(5mg·mL-1)。于37℃孵化4小时后，4小时后，停止培养，小心吸除孔板上的上层清液。随后每孔加入150.0μL DMSO溶液，摇床震荡10分钟后使蓝色结晶物完全溶解。将孔板置于自动微孔板分光光度计上，检测其在波长为570nm和630nm处的吸光度值。通过软件”Dose-Effect Analysis with Microcomputers”计算半数有效抑制浓度(IC50)。细胞抑制率％＝(空白对照组平均OD值-给药组平均OD值)/对照组平均OD值×100％。每组样品平行测试3次。

生物活性结果：

表1-1受试化合物的活性测试结果

所合成的衍生物进行了体外抗癌活性测试，从表1-1中的活性数据，可以得到以下几点结果：

1.合成的11个小白菊内酯类似物都具有抗癌活性。

2.通过4a，4b，4c活性数据对比，发现芳香基连接α-亚甲基-γ-丁内酯结构(4a)体外抗癌活性要好于烷基(4b)，五元环(4c)，与小白菊内酯体外抗癌活性相差不大，并且4a，4b，4c这三个化合物对正常细胞无损害。

3.苯环(左侧部分)上不同类型取代基对类似物抗癌活性的影响：通过化合物4d，4g，4h，4i体外抗癌活性数据对比，发现苯环无取代(4d)抗癌活性要好于卤素取代(4g)，吸电子取代(4h)的活性，对位取代(4h)活性要好于邻位取代的(4i)。

4.α-亚甲基-γ-丁内酯连接的基团进行改变对类似物体外抗癌活性的影响：通过化合物4a，4d，4e，4j，4kl体外抗癌活性数据对比，发现连接基团为烷基(4e)，芳香基(4d)，环己烷(4k)，苯并环己烷(4f))活性都好与连接基团为H(4a)，但是其对正常细胞的毒性要大于4a。

结论：本发明根据小白菊内酯的特殊抗癌活性，在保留主要活性基团的基础下，设计并合成了11个化合物，并对其抗癌活性进行了初步研究，所采用的合成路线简便，原料易得，并且产率高，具体总结为如下几个方面：

1.对于化合物4a-4c的合成，采用两步简便的反应，即首先是不同醛或酮通过Reformatsky反应生成α-亚甲基-γ-丁内酯，再与MCPBA反应，双键氧化得化合物4a-4c；化合物4d-4k的合成和4a-4c的合成类似，双键先和H2O2/NaOH反应氧化双键，接着通过Reformatsky反应生成α-亚甲基-γ-丁内酯得最终产物4d-4k。

2.细胞抗癌活性测试MTT结果显示，我们所合成的11个小白菊内酯类化合物对DU-145(人前列腺癌细胞腺)，SGC-7901(人胃癌细胞腺)，Mcf-7(人乳腺癌细胞腺)，K562(人白血病细胞腺)，HepG2(人肝癌细胞腺)，HeLa(人宫颈癌细胞腺)均有生物活性，其中化合物4a，4b对各种癌细胞腺的IC50值与小白菊内酯相差不大，并且其对正常细胞无毒，而化合物4c对各种癌细胞的作用效果要明显差于小白菊内酯；化合物4d-4k虽然作用于癌细胞腺的效果要好于或接近小白菊内酯，但是其对正常细胞都具有巨大的损失，因此，根据MTT测试结果可以得到，化合物4a，4b具有成为抗癌药物的潜力。

资源描述

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610279424.5 (22)申请日 2016.04.29 (71)申请人常州大学地址 213164 江苏省常州市武进区滆湖路1 号 (72)发明人胡昆钟健任杰许园元赵月欣 (51)Int.Cl. C07D 407/04(2006.01) C07D 407/14(2006.01) C07D 493/10(2006.01) A61K 31/365(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称小白菊内酯类似物的制备方法及应用 (57)摘。

2、要本发明涉及小白菊内酯类似物的制备方法及应用，属于有机合成领域。在保留小白菊内酯主要活性基团 -亚甲基-内酯和环氧结构的基础上，通过改变其骨架，设计了一系列化合物，并对其体外抗癌活性进行测试。通过简便的方法合成一系列具有生物活性小白菊内酯类似物，其中有两个化合物对正常细胞无毒性。权利要求书2页说明书14页 CN 105906615 A 2016.08.31 CN 105906615 A 1.小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：当底物为醛时：称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯， N2置换保护，反应液用热。

3、风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛，室温反应10-15min；反应结束后，除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，浓缩物柱层析，得 -亚甲基-丁内酯结构化合物；对应的-亚甲基-丁内酯结构化合物溶于二氯甲烷中，置于冰浴中，称取化合物MCPBA加入反应液，反应30min移至室温；反应结束后，用1MNaOH水溶液洗涤有机相3次，收集有机相，有机相用无水NaSO4干燥，减压旋蒸浓缩物柱层析，得最终产物。 2.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的醛的。

4、结构式为，通式中R1为苯环， R2和R3为氢；或R1和R2为氢， R3为甲基。 3.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的MCPBA 的结构式为。 4.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的醛、 Zn 与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。 5.根据权利要求1所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的-亚甲基-丁内酯结构化合物与MCPBA的摩尔比为1:1.5。 6.小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：当底物为酮时：将NaOH和H2O2缓慢加入烧瓶中，加入MeOH，再加入底物酮。

5、，室温反应 10min，反应结束后，减压旋蒸浓缩物柱层析，得环氧化合物；称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯， N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加环氧化合物，室温反应10-15min；反应结束后，减压旋蒸除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，旋干，浓缩物柱层析。 7.根据权利要求6所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的酮的结构式为，通式中R4为甲基，苯基，苯并环己基， 4-氟苯基， 4-硝基苯基， 2-。

6、硝基苯基，丙烯基苯基，环己基。 8.根据权利要求6所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的酮、 NaOH与H2O2的摩尔比为1:1:1， MeOH为溶剂。 9.根据权利要求6所述的小白菊内酯类似物的制备方法，其特征在于其中所述的环氧权利要求书 1/2 页 2 CN 105906615 A 2 化合物、 Zn与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。 10.根据权利要求1-9所述的方法制备得到的小白菊内酯类似物，作为制备抗癌药物的应用。权利要求书 2/2 页 3 CN 105906615 A 3 小白菊内酯类似物的制备方法及应用技术领域 0001 本发明属于有机。

7、合成领域，具体的说是小白菊内酯类似物的制备方法及作为制备抗癌药物的应用背景技术 0002 野甘菊起源于巴尔干半岛地区，最早欧洲人和希腊人以观赏和医药为目的种植和使用野甘菊。因为其具有抗炎活性，野甘菊常常用于治疗关节炎，除此之外，其还有很好的抗凝血，助消化，驱虫的作用，并且可以治疗抑郁症，眩晕症，肾结石等疾病。直到1978年，野甘菊具有减压作用被英国健康杂志报道，并因此以植物药的形式被人们广泛种植。在1997 年这个最畅销的植物药剂的主要活性成分被确定为小白菊内酯，并对其进行纯化。小白菊内酯主要发现于植物的枝条、花和叶，根部小白菊内酯的含量目前还。

8、无法准确测量。实验证明晒干的植物中至少含有0.1-0.2的小白菊内酯才具有药理活性。 0003 小白菊内酯(Parthenolide)，是野甘菊中一种含有 -亚甲基-丁内酯倍半萜内酯类化合物，分子式为C15H20O3,其化学结构如式1-1。结构特征：以十元环为骨架，骨架上并着一个五元环内酯结构，五元环内酯是主要活性基团，结构中还含有甲基，环氧和双键等。 0004 0005 最近，纽约罗切斯特大学医学院的专家Jordan,C.T和其同事发现小白菊内酯可以在不损害正常骨髓细胞的前提下，选择性的消灭急性骨髓性白血病干细胞，进而从根本上治疗该疾病。此外，人们研究发。

9、现小白菊内酯也可以抑制乳腺癌干细胞和前列腺癌干细胞。目前人们推测小白菊内酯选择性消灭急性骨髓白血病干细胞的作用机制： p65/NF- B亚基的Cys38上的巯基与小白菊内酯的 -亚甲基-丁内酯的环外双键发生1,4-Michael加成，从而抑制NF- B的激活。而NF- B只有在癌细胞中才处于活化状态，在正常细胞是非活化状态。这样急性骨髓白血病干细胞就成了小白菊内酯选择进攻靶点，这是许多其他NF- B抑制剂都不具有这样特性。小白菊内酯除了可以抑制NF-B的激活，其抗癌机制还有：抑制 SERCA、 HDAC1和COX-2等。正是因为小白菊内酯特殊的生物活性，吸引了许多科。

10、研工作者对其和其类似物的研究，并且取得了一些成果。发明内容 0006 本发明在保留小白菊内酯主要活性基团 -亚甲基-内酯和环氧结构的基础上，通过改变其骨架，设计了一系列化合物，如式1-2所示，并对其体外抗癌活性进行测试。根据化合物的结构特征，主要通过对R1、 R2、 R3和R4进行修饰。在设计化合物中，对R1的修饰可以分为芳香环、烷烃、环烷烃、带取代的芳香环等等， R2和R3为H，对R4的修饰可以是芳香环、烷烃、说明书 1/14 页 4 CN 105906615 A 4 环烷烃和环并苯环等等，希望通过对R1、 R2、 R3和R4的修饰，得到结构简单，。

11、活性更好，无毒的化合物。 0007 0008 合成方法：在保留主要活性基团( -亚甲基-丁内酯，环氧)的基础上，通过对小白菊内酯骨架进行改变，我们设计了一系列小白菊内酯类似物，合成方式如式1-3。 0009 0010 本发明选择Reformatsky反应合成 -亚甲基-丁内酯，该方法具有合成简便，后处理简单，机理成熟，产率高等特点。而环氧结构的形成，我们设计了两种方法，当化合物为酮时，用双氧水(H2O2)和氢氧化钠(NaOH)氧化双键，而当底物为醛时， H2O2和NaOH不能氧化双键，因此我们选用间氯过氧苯甲酸(MCPBA)氧化双键。 0011 说明书。

12、 2/14 页 5 CN 105906615 A 5 0012 小白菊内酯类似物的制备方法，按照下述步骤进行： 0013 当底物为醛时：称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯， N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛，室温反应10- 15min。反应结束后，除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，浓缩物柱层析，得 -亚甲基-丁内酯结构化合物；对应的 -亚甲基-丁内酯结构化合物溶于二氯甲烷中，置于冰浴中，称取化合物MCPBA加入反应液，反。

13、应30min移至室温。反应结束后，用1MNaOH水溶液洗涤有机相3次，收集有机相，有机相用无水NaSO4干燥，减压旋蒸浓缩物柱层析,得最终产物。 0014其中所述的醛的结构式为通式中R1为苯环R2和R3为氢或R1和R2为氢R3为甲基。 0015其中所述的MCPBA的结构式为 0016 其中所述的醛、 Zn与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。 0017 其中所述的 -亚甲基-丁内酯结构化合物与MCPBA的摩尔比为1:1.5。 0018 当底物为酮时：将NaOH和H2O2缓慢加入烧瓶中，加入MeOH，再加入底物酮，室温反应 10min，反应结束后，减压旋蒸浓缩物柱。

14、层析，得环氧化合物；称量Zn粉于烧瓶中，加入四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯， N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加环氧化合物，室温反应10-15min。反应结束后，减压旋蒸除掉THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，旋干，浓缩物柱层析。 0019其中所述的酮的结构式为通式中R4为甲基，苯基，苯并环己基， 4-氟苯基， 4-硝基苯基， 2-硝基苯基，丙烯基苯基，环己基。 0020 其中所述的酮、 NaOH与H2O2的摩尔比为1:1:1,MeOH为溶剂。 0。

15、021 其中所述的环氧化合物、 Zn与2-溴甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:2:2。 0022 上述小白菊内酯类似物作为制备抗癌药物的应用。 0023 本发明优点：通过简便的方法合成一系列具有生物活性小白菊内酯类似物，其中有两个化合物对正常细胞无毒性。具体实施方式 0024 本发明合成方式如式1-3。说明书 3/14 页 6 CN 105906615 A 6 0025 0026 具体实验步骤： 0027 实施例1化合物3a-3c的合成 0028 0029 称量Zn粉(2.0mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入5mL四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯(2.0mmol)， N2置。

16、换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛 (1.0mmol)，室温反应10-15min(薄层色谱TLC监测反应进程)。反应结束后，减压旋蒸除掉 THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，浓缩物柱层析洗脱剂:V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1纯化，得目标说明书 4/14 页 7 CN 105906615 A 7 化合物3a-3c。 0030 化合物3a洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1:白色固体，产率90； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.33。

17、-7.17(m,5H),6.63-6.58(d,J15.0Hz,1H),6.20-6.18(t,J 3.0Hz,1H),6.14-6.07(dd,J6.0,15.0Hz,1H),5.60-5.58(t,J3.0Hz,1H),5.08-5.01 (m,1H),3.18-3.08(m,1H),2.76-2.67(m,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 169.0,134.6,133.0, 132.2,127.7,127.4,125.7,125.6,121.4,76.5,33.3. 0031 0032 化合物3b洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1:无色油状液体，。

18、产率 87； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 6.16-6.15(d,J3.0Hz,1H),5.59-5.58(d,J3.0Hz,1H), 4.98(s,1H),4.86-4.81(d,J15.0Hz,1H),3.11-3.01(m,1H),2.70-2.62(m,1H),1.66- 1.65(d,J3.0Hz,3H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 170.2,142.3,134.2,122.2,112.8,79.4, 32.5,16.9. 0033 0034 化合物3c洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-6:1:无色油状液体，产率 87； 1HNMR(30。

19、0MHz,CDCl3) 6.16-6.14(t,J3.0Hz,1H),6.06-6.02(m,1H),5.63-5.60 (m,1H),5.56-5.54(t,J3.0Hz,1H),2.92-2.89(dd,J3.0,6.0Hz,3H),2.59-2.48(m, 1H),2.39-2.21(m,2H),2.00-1.91(m,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 168.8,136.7,134.7, 131.1,93.7,38.4,36.2,30.2. 0035 实施例2化合物4a-4c的合成 0036 0037 称量内酯化合物(1 .0mmol)溶于二氯甲烷中，置于冰浴中，称。

20、取化合物MCPBA (1.5mmol)加入反应液，反应30min移至室温(薄层色谱TLC监测反应进程)。反应结束后，用 1MNaOH水溶液洗涤有机相3次，收集有机相，有机相用无水NaSO4干燥，减压旋蒸浓缩物柱层析洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1纯化，得化合物4a-4c。 0038 0039 化合物4a洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-4:1:白色固体，熔点59.8，产率80； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 7.31-7.16(m,5H),6.22-6.20(t,J3.0Hz,1H),5.65- 5.63(t,J3.0Hz,。

21、1H),4.60-4.54(m,1H),3.74-3.73(d,J3.0Hz,1H),3,19-3,17(dd,J 说明书 5/14 页 8 CN 105906615 A 8 3.0Hz,6.0Hz,1H),3.04-2.94(m,1H),2.87-2.77(m,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 168.4, 134.4,131.9,127.7,127.6,124.7,122.3,74.6,60.8,55.5,28.0.HRMS(EI)m/zcalcdfor C13H12O3(M+H)+217.0865,found217.0858. 0040 0041 化合物4b洗脱剂： V(。

22、石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-8:1:无色油状液体，产率 70； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 6.24-6.22(t,J3.0Hz,1H),5.66-5.65(t,J3.0Hz,1H), 3.59-3.58(t,J3.0Hz,1H),3.28-3.27(d,J3.0Hz,1H),3.24-3.16(dt,J3.0,18.0Hz, 1H),2.85-2.77(dt,J3.0,18.0Hz,1H),2.09-2.00(m,1H),1.96-1.83(m,2H),1.61-1.54 (m,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 168.3,133.2,122.0,86.。

23、8,57.9,56.7,33.3,31.6, 25.2.HRMS(EI)m/zcalcdforC8H10O3(M+Na)+177.0528,found177.0523. 0042 0043 化合物4c洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1:黄色固体，熔点47.8，产率75； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 6.24-6.22(t,J3.0Hz,1H),5.66-5.65(t,J3.0Hz, 1H),3.59-3.58(t,J3.0Hz,1H),3.28-3.27(d,J3.0Hz,1H),3.24-3.16(dt,J3.0, 18.0Hz,1H),2.85-2.7。

24、7(dt,J3.0Hz,18.0,1H),2.09-2.00(m,1H),1.96-1.83(m,2H), 1.61-1.54(m,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 168.3,133.2,122.0,86.8,57.9,56.7,33.3, 31.6,25.2.HRMS(EI)m/zcalcdforC9H10O3(M+H)+167.0708,found167.0702. 0044 实施例3化合物5a-5h的合成 0045 0046 将NaOH(1.0mmol)和H2O2(1.0mmol)缓慢加入圆底烧瓶中，加入10mLMeOH，再加入底物醛或酮(1.0mmol)，室温。

25、反应10min(薄层色谱TLC监测反应进程)，反应结束后，减压旋蒸浓缩物柱层析V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:15:1纯化，得化合物5a-5f。 0047 0048 化合物5a洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)8:1-5:1:白色固体，产率80； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.31-7.39(m,5H),3.94-3.93(d,J3.0Hz,1H),3.43-3.42(d,J 3.0Hz,1H),2.13(s,3H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 203.2,134.0,128.0,127.7,124.7,62.4, 56.7,23.8 说明书。

26、6/14 页 9 CN 105906615 A 9 0049 0050 化合物5b洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1:白色固体，产率85； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.93-7.90(m,2H),7.56-7.50(m,1H),7.42-7.37(m,2H),7.42-7.26 (m,5H),4.22-4.21(d,J3.0Hz,1H),3.99-3.98(d,J3.0Hz,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 192.0,134.2,134.2,133.0,128.0,127.9,127.8,127.3,124.8,60.0,58.4. 。

27、0051 0052 化合物5c洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-6:1:白色固体，产率88； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 8.06-8.03(m,1H),7.47-7.42(td,J3.0,6.0,15.0Hz,1H),7.33- 7.26(m,6H),7.16-7.13(d,J9.0Hz,1H),4.28(s,1H),2.77-2.73(dd,J3.0,9.0Hz,2H), 2.42-2.32(m,1H),1.81-1.74(dt,J3.0,12.0Hz,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 193.7, 143.4,134.3,134.1,132。

28、.7,128.8,128.4,127.7,127.0,126.6,64.4,64.1,27.4,25.3. 0053 0054 化合物5d洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)15:1-5:1:白色固体，产率85； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.94-7.91(m,2H),7.58-7.52(m,1H),7.45-7.39(m,2H),7.30-7.25 (m,2H),7.04-6.99(m,2H),4.20-4.19(d,J3.0Hz,1H),3.99-3.98(d,J3.0Hz,1H)； 13C NMR(75MHz,CDCl3) 192.9,164.8,161.5,13。

29、5.4,134.1,131.3,131.2,128.9,128.4,127.7, 127.6,116.0,115.7,61.0,58.8. 0055 0056 化合物5e洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)20:1-5:1:白色固体，产率85； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 8.23-8.18(m,2H),7.96-7.92(m,2H),7.61-7.42(m,5H),4.22(d,J 3.0Hz,1H),4.14(d,J3.0Hz,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 191.1,147.3,141.7,134.1, 133.4,128.0,127.4,125.。

30、6,123.1,59.8,57.0. 0057 0058 化合物5e洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)5:1-3:1:白色固体，产率85； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 8.17-8.14(m,1H),7.97-7.94(m,2H),7.69-7.67(m,2H),7.59-7.40 (m,4H),4.58-4.57(d,J3.0Hz,1H),4.17-4.16(d,J3.0Hz,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 192.6,135.3,134.7,134.1,132.6,129.5,128.9,128.5,127.4,125.0,59.6,57.7. 说明。

31、书 7/14 页 10 CN 105906615 A 10 0059 0060 化合物5g洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1:黄色固体，产率85； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.39-7.28(m,10H),4.18-4.17(d,J3.0Hz,1H),4.10-4.09(d,J 3.0Hz,1H),3.82-3.81(d,J3.0Hz,1H),3.73-3.72(d,J3.0Hz,1H)； 13CNMR(75MHz, CDCl3) 199.3,199.3,134.6,134.5,129.3,129.3,128.8,128.8,125.8,125.8,6。

32、1.0,60.4, 59.0,58.9. 0061 0062 化合物5h洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-4:1:白色固体，产率85； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.35-7.19(m,5H),3.99(s,1H),2.70-2.62(m,1H),2.42-2.31(m,1H), 2.00-1.88(m,2H),1.81-1.65(m,2H),1.60-1.52(m,1H),1.46-1.35(m,1H)； 13CNMR(75MHz, CDCl3) 205.6,132.5,127.3,127.3,125.7,66.0,63.0,40.9,26.4,23.6,2。

33、2.4. 0063 实施例4化合物4d-4k的合成 0064 0065 称量Zn粉(2.0mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入5mL四氢呋喃，缓慢滴加2-溴甲基丙烯酸乙酯(2.0mmol)， N2置换保护，反应液用热风枪加热超声至Zn粉完全溶解，缓慢滴加醛 (1.0mmol)，室温反应10-15min(薄层色谱TLC监测反应进程)。反应结束后，减压旋蒸除掉 THF，加水淬灭反应，加乙酸乙酯萃取3次，收集有机相，有机相再用饱和食盐水洗3次，加无水硫酸钠干燥，旋干，浓缩物柱层析洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-5:1纯化，得化合物4d-4k。。

34、0066 0067 化合物4d洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-3:1:白色固体，熔点为94.8 ，产率90； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 7.30-7.17(m,5H),6.20-6.18(t,J3.0Hz,1H), 5.61-5.60(t,J3.0Hz,1H),3.96-3.95(d,J3.0Hz,1H),3.16-3.08(dt,J3.0,18.0Hz, 1H),3.02-3.01(d,J3.0Hz,1H),2.75-2.67(dt.J3.0,18.0Hz,1H),1.49(s,3H)； 13CNMR (75MHz,CDCl3) 168.3,135.0,1。

35、33.5,127.6,127.5,124.7,121.3,78.1,65.2,54.4,36.7, 22.9.HRMS(EI)m/zcalcdforC14H14O3(M+H)+231.1021,found231.1017. 说明书 8/14 页 11 CN 105906615 A 11 0068 0069 化合物4e洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-3:1:白色固体，熔点为88.1 ，产率90； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 7.40-7.10(m,10H),6.23-6.31(m,1H),5.66-5.64(t, J3.0Hz,1H),4.08-4.07(d,J。

36、3.0Hz,1H),3.58-3.51(dt,J3.0Hz,18.0,1H),3.26- 3.25(d,J3.0Hz,1H),3.20-3.12(dt,J3.0,18.0Hz,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 167.9, 138.7,134.7,132.8,127.9,127.6,127.5,124.7,123.9,121.3,80.5,66.1,54.6, 37.5.HRMS(EI)m/zcalcdforC19H17O3(M+H)+293.1178,found293.1752. 0070 0071 化合物4f洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-3:1:白色固体。

37、，熔点为137.5 ，产率90； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 7.30-7.16(m,8H),7.01-6.98(m,1H),6.26-6.25(t,J 3.0Hz,1H),5.63-5.62(t,J3.0Hz,1H),4.49(s,1H),3.55-3.47(dt,J3.0,18.0Hz, 1H),3.01-2.93(dt,J3.0,18.0Hz,1H),2.66-2.44(m,2H),2.16-2.06(m,1H),1.64-1.56 (m,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 168.6,137.2,134.7,133.6,133.5,127.4,127.1,。

38、125.3, 125.1,120.7,80.4,66.4,59.5,40.2,26.3,22.8.HRMS(EI)m/zcalcdforC21H18O3(M+H)+ 319.1334,found319.1330. 0072 0073 化合物4g洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)8:1-4:1:白色腊状，产率91； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.40-7.27(m,5H),7.11-7.07(m,2H),6.93-6.87(m,2H),6.23-6.21 (m,1H),5.67-5.65(t,J3.0Hz,1H),4.07-4.06(d,J3.0Hz,1H),3.58-3。

39、.51(dt,J 3.0Hz,18.0,1H),3.23-3.22(d,J3.0Hz,1H),3.21-3.13(dt,J3.0Hz,18.0,1H)； 13CNMR (75MHz,CDCl3) 167.8,163.4,160.2,138.6,132.7,130.5,130.4,128.0,127.7,126.5, 126.4,123.8,121.4,114.7,114.4,80.4,66.1,54.0,37.5.HRMS(EI)m/zcalcdfor C19H15FO3(M+Na)+333.0903,found333.0897. 0074 0075 化合物4h洗脱剂： V(石油醚)： V(乙。

40、酸乙酯)10:1-3:1:白色腊状，产率80； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 8.10-8.07(dd,J3.0,6.0Hz,2H),7.38-7.19(m,7H),6.27-6.25(m, 说明书 9/14 页 12 CN 105906615 A 12 1H),5.71-5.69(t,J3.0Hz,1H),4.19(d,J3.0Hz,1H),3.60-3.53(dt,J3.0Hz,18.0, 1H),3.25-3.17(m,2H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 167.7,146.9,142.2,138.3,132.4,128.1, 127.9,125.4,123.。

41、7,122.8,121.8,80.1,66.7,53.5,37.6.HRMS(EI)m/zcalcdfor C19H15NO5(M+Na)+360.0848,found360.0842. 0076 0077 化合物4i洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-3:1:白色固体，熔点为144.5 ，产率70； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 8.04-8.00(dd,J3.0,9.0Hz,1H),7.57-7.19(m, 8H),6.25-6.23(t,J3.0Hz,1H),5.68-5.66(t,J3.0Hz,1H),4.46-4.45(d,J3.0Hz, 1H),3.59。

42、-3.52(dt,J3.0,18.0Hz,1H),3.31-3.23(dt,J3.0,18.0Hz,1H),3.13-3.12 (d,J3.0Hz,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 167.8,146.4,137.5,133.3,132.6,131.8, 127.8,127.6,125.9,124.6,123.7,121.7,81.4,65.5,52.9,37.3.HRMS(EI)m/zcalcdfor C19H15NO5(M+H)+338.1028,found338.1024. 0078 0079 化合物4j洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-2:1:黄色油状液。

43、体，产率 60； 1HNMR(300MHz,CDCl3) 7.28-7.16(m,10H),6.26-6.24(t,J3.0Hz,1H),5.69-5.67 (t,J3.0Hz,1H),4.03-4.02(d,J3.0Hz,1H),3.82-3.79(m,1H),3.30-3.25(m,1H), 3.06-2.83(m,2H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 167.5,134.4,134.0,131.9,127.9,127.7, 127.7,127.7,124.7,124.6,122.3,78.7,62.2,61.4,54.5,54.0,30.7.HRMS(EI)m/zcalcd。

44、 forC21H18O4(M+H)+335.1283,found335.1280. 0080 0081 化合成4k洗脱剂： V(石油醚)： V(乙酸乙酯)10:1-4:1:白色固体，产率90； 1H NMR(300MHz,CDCl3) 7.31-7.19(m,10H),6.19-6.17(t,J3.0Hz,1H),5.61-5.60(t,J 3.0Hz,1H),4.38(s,1H),3.20-3.13(dt,J3.0,18.0Hz,1H),2.77-2.69(t,J3.0Hz, 18.0,1H),1.93-1.84(m,2H),1.76-1.71(m,1H),1.58-1.47(m,2H),。

45、1.36-1.30(m,2H), 1.11-1.00(m,1H)； 13CNMR(75MHz,CDCl3) 169.1,135.0,134.6,128.1,127.7,126.3, 122.1,82.2,67.3,60.5,37.7,35.3,26.2,23.6,22.3.HRMS(EI)m/zcalcdforC17H18O3(M+ H)+271.1334,found271.1331. 0082 实验例1生物活性测试部分： 0083 细胞抗癌活性和毒性检测主要运用MTT法测试受试化合物对DU-145(人前列腺癌说明书 10/14 页 13 CN 105906615 A 13 细胞腺)， SG。

46、C-7901(人胃癌细胞腺)， Mcf-7(人乳腺癌细胞腺)， K562(人白血病细胞腺)， HepG2(人肝癌细胞腺)， HeLa(人宫颈癌细胞腺)细胞进行体外活性测试，同时对Vero(非洲绿猴肾细胞)进行体外毒性测试。 0084 (1)接种细胞 0085 本实验需要用到的Vero细胞和6种癌细胞腺接种于含有10胎牛血清， 100U/mL青霉素和100 g/mL链霉素的RPMIl640培养基中。当细胞生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面时，用0.25胰蛋白酶消化，传代。待细胞长至75左右时，收集细胞。实验时取对数生长期的癌症细胞为实验对象。 0086 收集细胞的步骤如下所示。

47、：弃除培养皿中上层培养基，用5mLPBS洗涤细胞两次，再将500 L的0.25的胰酶蛋白加入其中，放置含5CO2的培养箱中，等到细胞脱壁后，在加入5mL新培养基，轻轻吹打至细胞完全脱落，等到细胞吹打均匀后吸入至15mL的离心管中进行离心3min，离心后去出上层液体，再加入5mL新培养基，轻轻吹打，计算细胞浓度，接着接种与孔板中，每个孔板中加入90 L的细胞悬液，板的边缘为了防止细胞蒸发，用无菌的 PBS进行填充。 0087 (2)细胞培养 0088 接种完的孔板放置瓶置于37、 5CO2饱和湿度培养箱培养，每1-2天换一次培养液。 0089 (3)MT。

48、T检测 0090 通过MTT法检测化合物的细胞体外毒活性。用于测试的6种肿瘤细胞分别DU-145 (人前列腺癌细胞腺)， SGC-7901(人胃癌细胞腺)， Mcf-7(人乳腺癌细胞腺)， K562(人白血病细胞腺)， HepG2(人肝癌细胞腺)， HeLa(人宫颈癌细胞腺)及正常细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)。在测试过程中，以化合物小白菊内酯为阳性对照物。小白菊内酯通过抑制核转录因子 NF-kB的激活，对癌细胞有一定的抑制作用。 0091 所有受试化合物均由HPLC检测纯度大于95。 0092 取对数生长期的肿瘤细胞，用RPMI1640或DMEM培养液稀释成5104个/mL，。

49、接种在 96孔板中。放置于37， 5CO2培养箱中培养过夜后加入不同浓度的药物培养液，再孵育72 小时，加入10.0 L/well的MTT溶液(5mgmL-1)。于37孵化4小时后， 4小时后，停止培养，小心吸除孔板上的上层清液。随后每孔加入150.0 LDMSO溶液，摇床震荡10分钟后使蓝色结晶物完全溶解。将孔板置于自动微孔板分光光度计上，检测其在波长为570nm和630nm处的吸光度值。通过软件” Dose-EffectAnalysiswithMicrocomputers” 计算半数有效抑制浓度(IC50)。细胞抑制率(空白对照组平均OD值-给药组平均OD值)/对照组平均OD值 100。每组样品平行测试3次。 0093 生物活性结果： 0094 表1-1受试化合物的活性测试结果说明书 11/14 页 14 CN 105906615 A 14 0095 说明书 12/14 页 15 CN 105906615 A 15 0096 0097 所合成的衍生物进行了体外抗癌活性测试，从表1-1中的活性数据，可以得到以下几点结果： 0098 1.合成的11个小白菊内酯类似物都具。

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