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1、(10)申请公布号 CN 103501828 A (43)申请公布日 2014.01.08 CN 103501828 A (21)申请号 201280020798.5 (22)申请日 2012.04.06 2011-099564 2011.04.27 JP A61L 27/00(2006.01) C07K 7/08(2006.01) (71)申请人 株式会社美你康 地址 日本爱知县 申请人 国立大学法人大阪大学 (72)发明人 上杉晃司 林龙平 林田康隆 马场耕一 西田幸二 (74)专利代理机构 北京尚诚知识产权代理有限 公司 11322 代理人 龙淳 (54) 发明名称 人造玻璃体材料 (5。
2、7) 摘要 本发明提供一种人造玻璃体材料， 该人造玻 璃体材料对眼组织没有毒性， 能够在眼内长期地 维持填塞效果， 且操作性优异。本发明的人造玻 璃体材料包括自组装肽和盐， 渗透压为 40mOsm/ kg200mOsm/kg。 本发明的人造玻璃体材料对眼 组织没有毒性， 能够在眼内长期地维持填塞效果， 且操作性优异。 (30)优先权数据 (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2013.10.28 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/JP2012/059498 2012.04.06 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2012/147497 JA 2012.11.01 (51)Int.C。
3、l. 权利要求书 1 页 说明书 9 页 序列表 3 页 附图 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书9页 序列表3页 附图4页 (10)申请公布号 CN 103501828 A CN 103501828 A 1/1 页 2 1. 一种人造玻璃体材料， 其包括自组装肽和盐， 其特征在于 ： 渗透压为 40mOsm/kg 200mOsm/kg。 2. 如权利要求 1 所述的人造玻璃体材料， 其特征在于 ： 含有 0.01w/v% 0.5w/v% 的所述自组装肽。 3. 如权利要求 1 或 2 所述的人造玻璃体材料， 其特征在于 ： 所述自组装肽。
4、由下述氨基酸序列构成， 氨基酸序列 ： a1b1c1b2a2b3db4a3b5c2b6a4 该氨基酸序列中， a1 a4为碱性氨基酸残基 ； b1 b6为不带电荷极性氨基酸残基和 / 或疏水性氨基酸残基， 且其中至少 5 个为疏水性氨基酸残基 ； c1及 c2为酸性氨基酸残基 ； d 为疏水性氨基酸残基。 4. 如权利要求 3 所述的人造玻璃体材料， 其特征在于 ： 在所述氨基酸序列中， b1 b6分别独立地为丙氨酸残基、 缬氨酸残基、 亮氨酸残基或异 亮氨酸残基。 5. 如权利要求 3 或 4 所述的人造玻璃体材料， 其特征在于 ： 在所述氨基酸序列中， d 为丙氨酸残基、 缬氨酸残基、 亮。
5、氨酸残基或异亮氨酸残基。 权 利 要 求 书 CN 103501828 A 2 1/9 页 3 人造玻璃体材料 技术领域 0001 本发明涉及人造玻璃体材料。 背景技术 0002 玻璃体是填补眼球后房 （posterior cavity） 的由胶原蛋白及透明质酸钠构成的 凝胶状物质。玻璃体具有从眼球内侧压住视网膜防止其剥落的填塞效果。因此， 是使眼球 正常地发挥作用的重要的组织。 目前， 对于需要进行手术治疗的视网膜玻璃体疾病， 大多施 行玻璃体切除术， 但是， 由于没有适当的玻璃体的替代品， 因此玻璃体切除后一直是玻璃体 被切除的状态。 另外， 还有报告显示， 玻璃体切除后， 与玻璃体存在下。
6、的情况相比， 通过注射 向眼内投药的效果降低。 0003 作为玻璃体切除后的填塞材料， 使用气体 （例如， 空气、 六氟化硫或八氟丙烷等膨 胀气体） 以及硅油及液体全氟化碳等。其中， 在临床上多使用硅油。但是， 硅油对眼组织的 毒性强， 需要在一定期限后除去， 处理繁琐。另外， 硅油有时产生乳化白浊等。另外， 液体 全氟化碳在手术中作为临时填塞材料使用。 但是， 就液体全氟化碳而言， 对眼组织的毒性也 强， 手术结束时要从眼内除去。 使用空气、 六氟化硫或八氟丙烷等膨胀气体进行气体填塞的 情况下， 由于气体在眼内吸收， 其效果的持续时间短， 为 1 天 1 周 （例如， 专利文献 1） 。另 。
7、外， 在气体填塞的情况下， 术后， 通常患者会被强行要求保持俯卧姿势 1 周左右。作为填塞 材料， 也使用胶原蛋白或透明质酸及其盐 （例如， 专利文献 2） 。但是， 由于它们源自生物和 / 或微生物， 因此价格高， 达不到向临床的应用。 0004 另外， 作为填塞材料， 提出了使用使单末端被长链烷基修饰的聚乙二醇以及使两 末端被长链烷基修饰的聚乙二醇的组合物 （例如， 专利文献 3） 。虽然该组合物硬度高， 填塞 效果值得期待， 但是， 为了提高操作性， 需要使用比常用的注射针 （25号） 粗的针 （21号） 。 因 此， 对眼球造成的负担可能变大， 治疗所需要的时间也可能变长。 0005 。
8、现有技术文献 0006 专利文献 0007 专利文献 1 ： 日本特开平 6-154263 号公报 0008 专利文献 2 ： 日本特开平 5-184663 号公报 0009 专利文献 3 ： 日本特开 2010-104632 号公报 发明内容 0010 发明要解决的课题 0011 本发明就是为了解决上述课题而做出的发明， 其目的在于提供一种人造玻璃体材 料， 该人造玻璃体材料对眼组织没有毒性， 能够在眼内长期地维持填塞效果， 且操作性优 异。 0012 解决课题的方法 0013 根据本发明， 能够提供一种人造玻璃体材料。该人造玻璃体材料包括自组装肽和 说 明 书 CN 103501828 A。
9、 3 2/9 页 4 盐， 渗透压为 40mOsm/kg 200mOsm/kg。 0014 在优选的实施方式中， 上述人造玻璃体材料含有0.01w/v%0.5w/v%的所述自组 装肽。 0015 在优选实施方式中， 上述自组装肽由下述氨基酸序列构成。 0016 氨基酸序列 ： a1b1c1b2a2b3db4a3b5c2b6a4 0017 （在该氨基酸序列中， a1 a4为碱性氨基酸残基 ； b1 b6为不带电荷极性氨基酸 残基和 / 或疏水性氨基酸残基， 且其中至少 5 个为疏水性氨基酸残基 ； c1及 c2为酸性氨基 酸残基 ； d 为疏水性氨基酸残基。 ） 。 0018 在优选的实施方式中。
10、， 在上述氨基酸序列中， b1 b6分别独立地为丙氨酸残基、 缬 氨酸残基、 亮氨酸残基或异亮氨酸残基。 0019 在优选的实施方式中， 上述氨基酸序列中， d 为丙氨酸残基、 缬氨酸残基、 亮氨酸残 基或异亮氨酸残基。 0020 发明的效果 0021 利用本发明的人造玻璃体材料， 能够在眼内长期地维持填塞效果。 另外， 本发明的 人造玻璃体材料具有适度的流动性， 因此操作性也很优异。本发明的人造玻璃体材料包括 自组装肽和盐， 对眼组织也没有毒性。因此， 利用本发明的人造玻璃体材料， 不需要像气体 填塞后那样术后维持俯卧状态， 也不需要像使用硅油等的情况那样进行去除手术， 因此， 能 够提高患。
11、者的生活质量 （QOL） 。另外， 本发明的人造玻璃体材料的药物保持性也很优异， 因 此， 能够防止玻璃体除去后向眼内投药效果的降低。 附图说明 0022 图 1a 是注入本发明的人造玻璃体材料 1 周后的家兔眼球的前眼部照片 ； 0023 图 1b 是注入本发明的人造玻璃体材料 1 周后的家兔眼球的眼底照片 ； 0024 图 1c 是注入本发明的人造玻璃体材料 1 周后的家兔的 HE 染色后的视网膜组织照 片 ； 0025 图 2a 是注入本发明的人造玻璃体材料一个月后的家兔眼球的前眼部照片 ； 0026 图 2b 是注入本发明的人造玻璃体材料一个月后的家兔眼球的眼底照片 ； 0027 图2。
12、c是注入本发明的人造玻璃体材料一个月后的家兔的HE染色后的视网膜组织 的照片 ； 0028 图 3a 是注入本发明的人造玻璃体材料三个月后的家兔眼球的前眼部照片 ； 0029 图 3b 是注入本发明的人造玻璃体材料三个月后的家兔眼球的眼底照片 ； 0030 图3c是注入本发明的人造玻璃体材料三个月后家兔的HE染色后的视网膜组织的 照片。 具体实施方式 0031 术语定义 0032 （1） 在本说明书中，“自组装肽” 是指在溶剂中通过肽分子彼此的相互作用主动集 合的肽。作为相互作用， 没有特别限定， 例如， 可以举出氢键、 离子间相互作用、 范德华力等 静电相互作用、 疏水性相互作用。 在一个实。
13、施方式中， 自组装肽能够在室温的水溶液 （例如， 说 明 书 CN 103501828 A 4 3/9 页 5 0.4w/v% 的肽水溶液） 中进行自组装形成纳米纤维或凝胶。 0033 （2） 在本说明书中，“凝胶” 是指兼备粘性性质和弹性性质的粘弹性物质。 0034 （3） 在本说明书中，“亲水性氨基酸” 包括 ： 精氨酸 （Arg/R） 、 赖氨酸 （Lys/K） 、 组氨 酸 （His/H） 等碱性氨基酸、 天冬氨酸 （Asp/D） 、 谷氨酸 （Glu/E） 等酸性氨基酸、 酪氨酸 （Tyr/ Y） 、 丝氨酸 （Ser/S） 、 苏氨酸 （Thr/T） 、 天门冬氨酸 （Asn/N）。
14、 、 谷氨酰胺 （Gln/ ） 、 半胱氨酸 （Cys/C） 等不带电荷极性氨基酸。上述括号内的字母分别为氨基酸的三字母表示和单字母 表示。 0035 （4） 在本说明书中，“疏水性氨基酸” 包括 ： 丙氨酸 （Ala/A） 、 亮氨酸 （Leu/L） 、 异亮 氨酸 （Ile/I） 、 缬氨酸 （Val/V） 、 蛋氨酸 （Met/M） 、 苯丙氨酸 （Phe/F） 、 色氨酸 （Trp/W） 、 甘氨酸 （Gly/G） 、 脯氨酸 （Pro/P） 等非极性氨基酸。上述括号内的字母分别为氨基酸的三字母表示 和单字母表示。 0036 人造玻璃体材料 0037 本发明的人造玻璃体材料包括自组装肽。
15、和盐。 通过使本发明的人造玻璃体材料包 括自组装肽和盐， 能够在眼内长期地维持填塞效果， 且操作性优异。 0038 本发明的人造玻璃体材料的渗透压为40mOsm/kg200mOsm/kg。 通过使人造玻璃 体材料的渗透压在上述范围内， 可以得到能够在眼内维持更长期的填塞效果且操作性优异 的人造玻璃体材料。若渗透压大于 200mOsm/kg， 则人造玻璃体材料的透明性可能降低。另 外， 人造玻璃体材料的渗透压通过使用以日本药局方为标准的凝固点降低法的渗透压测定 法 （渗透浓度测定法） 进行测定。 0039 本发明的人造玻璃体材料优选将 pH 调节为生理条件 （pH7.4 左右） ， 可以通过使用。
16、 任意 pH 调节剂或缓冲剂等进行调节。 0040 A盐 0041 作为上述盐， 优选体液 （例如， 房水） 所含有的盐和类似盐， 可以使用任意适当的 盐。作为上述盐， 例如， 可以举出氯化钠及氯化镁等离子性盐。这些盐可以单独使用， 也可 以组合两种以上使用。 0042 上述盐也可以以将任意盐溶解于任意溶剂中而成的盐溶液的形式进行使用。 作为 该盐溶液所使用的溶剂， 可以举出蒸馏水等。作为该盐溶液， 可以使用市售的盐溶液。具体 而言， 可以举出生理盐水、 林格氏液、 奥谷胱甘肽溶液等眼内灌流液用稀释液 （例如， 日本爱 尔康株式会社制， 商品名 BSS Plus 附属的奥谷胱甘肽溶液用稀释液、。
17、 昭和药品加工株式会 社制， 商品名 Opeakua（注册商标） 附属的奥谷胱甘肽溶液用稀释液） 等。这些盐溶液可以 单独使用， 也可以组合两种以上使用。 0043 本发明的人造玻璃体材料中盐的比例可以进行调节， 以使所得到的人造玻璃体材 料的渗透压为 40mOsm/kg 200mOsm/kg。 0044 B自组装肽 0045 作为本发明中使用的自组装肽， 可以使用任意适当的自组装肽， 只要是对生物体 特别是眼组织没有毒性的物质即可。本发明的人造玻璃体材料中自组装肽的含量优选为 0.01w/v%0.5w/v%， 更优选为0.05w/v%0.4w/v%。 通过使自组装肽在上述范围内， 可得 到在。
18、眼内维持长期的填塞效果且操作性优异的人造玻璃体材料。 自组装肽作为给药系统的 基材而受到关注。 因此， 本发明的人造玻璃体材料注入眼内后， 能够防止注入眼内的药物的 说 明 书 CN 103501828 A 5 4/9 页 6 给药效果降低。自组装肽可以只使用一种， 也可以组合两种以上使用。 0046 优选本发明所使用的自组装肽由下述氨基酸序列构成。 0047 氨基酸序列 ： a1b1c1b2a2b3db4a3b5c2b6a4 0048 （在上述氨基酸序列中， a1 a4表示碱性氨基酸残基 ； b1 b6表示不带电荷极性 氨基酸残基和 / 或疏水性氨基酸残基， 且其中至少 5 个为疏水性氨基酸。
19、残基 ； c1及 c2表示 酸性氨基酸残基 ； d 表示疏水性氨基酸残基。 ） 。 0049 通过使用由上述氨基酸序列构成的自组装肽， 可得到能够在眼内维持更长期间的 填塞效果的自组装肽。另外， 由上述氨基酸序列构成的肽能够在生理条件下形成透明性及 力学强度优异的凝胶， 因此能够适用于人造玻璃体材料。 0050 构成上述自组装肽的氨基酸可以为 L- 氨基酸， 也可以为 D- 氨基酸。另外， 可以为 天然氨基酸， 也可以为非天然氨基酸。由于能够以低价获取， 且肽合成容易， 因此优选天然 氨基酸。 0051 在上述氨基酸序列中， a1 a4表示碱性氨基酸残基。碱性氨基酸优选精氨酸、 赖 氨酸或组氨。
20、酸， 更优选精氨酸或赖氨酸。这是因为这些氨基酸的碱性强。a1 a4可以为同 一氨基酸残基， 也可以为不同氨基酸残基。 0052 在上述氨基酸序列中， b1 b6表示不带电荷极性氨基酸残基和 / 或疏水性氨基酸 残基， 其中至少 5 个为疏水性氨基酸残基。疏水性氨基酸优选丙氨酸、 亮氨酸、 异亮氨酸、 缬 氨酸、 蛋氨酸、 苯丙氨酸、 色氨酸、 甘氨酸或脯氨酸。不带电荷极性氨基酸优选酪氨酸、 丝氨 酸、 苏氨酸、 天门冬氨酸、 谷氨酰胺或半胱氨酸。这是因为这些氨基酸容易获取。 0053 优选 b3及 b4分别独立地为任意适当的疏水性氨基酸残基， 更优选为亮氨酸残基、 丙氨酸残基、 缬氨酸残基或异。
21、亮氨酸残基， 特别优选为亮氨酸残基或丙氨酸残基。在上述 氨基酸序列中， 分别位于 6 位和 8 位的 b3和 b4为疏水性氨基酸残基的情况下， 6 8 位这 三个氨基酸残基连续成为疏水性氨基酸残基。 推测这样形成于氨基酸序列中心的疏水性区 域， 利用其疏水性相互作用等， 能够提高人造玻璃体材料的强度， 能够在眼内长期地维持填 塞效果。 0054 优选 b1 b6均为疏水性氨基酸残基。这是由于自组装肽适合形成 片材结构， 能够进行自组装。更优选 b1 b6分别独立地为亮氨酸残基、 丙氨酸残基、 缬氨酸残基或异 亮氨酸残基， 进一步优选为亮氨酸残基或丙氨酸残基。在优选的实施方式中， b1 b6中 。
22、4 个以上为亮氨酸残基， 特别优选其中 5 个以上为亮氨酸残基， 最优选均为亮氨酸残基。这是 由于水溶解性优异， 因此容易制备人造玻璃体材料， 另外可得到能够提高人造玻璃体材料 的强度、 能够在眼内长期地维持填塞效果的人造玻璃体材料。 0055 在上述氨基酸序列中， c1及 c2表示酸性氨基酸残基。酸性氨基酸优选天冬氨酸或 谷氨酸。这是因为这些氨基酸容易获取。c1及 c2可以为同一氨基酸残基， 也可以为不同氨 基酸残基。 0056 在上述氨基酸序列中， d 表示疏水性氨基酸残基。可以认为， 如上所述， d 为疏水性 氨基酸残基， 且具有规定的对称构造， 从而能够得到力学强度更优异的人造玻璃体材。
23、料， 能 够在眼内长期地维持填塞效果。 0057 d优选为丙氨酸残基、 缬氨酸残基、 亮氨酸残基或异亮氨酸残基。 这种情况下， 虽然 自组装肽形成的 片材结构的亲水性面侧的氨基酸的侧链长可以是非互补的， 但该自组 说 明 书 CN 103501828 A 6 5/9 页 7 装肽可发挥优异的自组装能力， 并且能够得到力学强度优于现有技术、 能够在眼内长期地 维持填塞效果的人造玻璃体材料。 0058 上述自组装肽所含有的氨基酸残基的中性区域中的电荷的总和实质上为2。 即， 上述自组装肽在中性区域， 来源于该肽所含有的氨基酸残基的侧链的正电荷和负电荷不会 抵消。此外， 由于 N 末端和 C 末端的。
24、氨基酸残基均为碱性氨基酸残基， 因此本发明使用的自 组装肽例如在肽之间除静电引力以外还作用有静电斥力， 通过保持它们的微妙平衡， 实际 上不会发生过度缔合， 因此， 推测在接近生理条件下的中性区域不会发生沉淀， 能够形成稳 定的凝胶。另外， 在本说明书中，“中性区域” 是指 pH 为 6 8 的区域， 优选 pH 为 6.5 7.5 的区域。 0059 各 pH 下的上述自组装肽的电荷可按照例如勒宁杰 （Lehninger） Biochimie， 1979 方法来计算。勒宁杰方法可通过例如在 EMBL WWW Gateway to Isoelectric Point Service 的网站 （。
25、http:/www.embl-heidelberg.de/cgi/pi-wrapper.pl） 上可使用的程序 来进行。 0060 作为本发明所使用的自组装肽， 优选的具体例如下所示。 0061 n-RLDLRLALRLDLR-c（序列号 1） 0062 n-RLDLRLLLRLDLR-c（序列号 2） 0063 n-RADLRLALRLDLR-c（序列号 3） 0064 n-RLDLRLALRLDAR-c（序列号 4） 0065 n-RADLRLLLRLDLR-c（序列号 5） 0066 n-RADLRLLLRLDAR-c（序列号 6） 0067 n-RLDLRALLRLDLR-c（序列号 。
26、7） 0068 n-RLDLRLLARLDLR-c（序列号 8） 0069 上述自组装肽可通过任意适当的制造方法来制造。例如， 可以举出 Fmoc 法等固相 法或液相法等化学合成方法、 基因重组表达等分子生物学方法。 0070 上述自组装肽也可以为进行了任意修饰的自组装肽 （下面， 称为修饰肽。 ） 。 该修饰 肽是在具有自组装能力且对生物体特别是眼组织没有毒性的范围内， 对上述自组装肽实施 了任意修饰而得到的肽。进行修饰的部位可以为上述自组装肽的 N 末端氨基， 也可以为 C 末端羧基， 还可以为其双方。 0071 作为上述修饰， 可以在所得到的修饰肽具有自组装能力， 且对生物体特别是眼组 。
27、织没有毒性的范围选择任意适当的修饰。例如， 可以举出 N 末端的乙酰化、 C 末端的酰胺 化等保护基的导入 ； 烷基化、 酯化或卤化等官能团的导入 ； 氢化 ； 单糖、 二糖、 寡糖或多糖等 糖化合物的导入 ； 脂肪酸、 磷脂质或糖脂质等脂质化合物的导入 ； 氨基酸或蛋白质的导入 ； DNA 的导入 ； 其它具有生理活性的化合物等的导入。在导入氨基酸或蛋白质的情况下， 导入 后的肽是上述自组装肽的 N 末端和 / 或 C 末端附加有任意氨基酸的肽， 但在本说明书中， 该 附加肽也包含在修饰肽中。修饰可以只施行一种， 也可以组合两种以上施行。例如， 可以将 在上述自组装肽的 C 末端导入了期望氨。
28、基酸的附加肽的 N 末端进行乙酰化， 将 C 末端进行 酰胺化。 0072 上述附加肽 （修饰肽） 整体有时没有上述自组装肽的特征。具体而言， 通过附加任 意的氨基酸， 存在以 7 位的疏水性氨基酸序列为中心， N 末端方向的序列和 C 末端方向的序 说 明 书 CN 103501828 A 7 6/9 页 8 列不对称的情况、 以等比例具有疏水性氨基酸和亲水性氨基酸的情况等。即使在这种情况 下， 上述自组装肽也具有极好的自组装能力， 所以附加有任意氨基酸的附加肽也能够得到 力学强度优异， 能够在眼内长期地维持填塞效果的人造玻璃体材料。 0073 被导入氨基酸或蛋白质的情况下， 构成导入后的修。
29、饰肽的氨基酸残基数优选为 14 200， 更优选为 14 100， 进一步优选为 14 50， 特别优选为 14 30， 最优选为 14 20。若氨基酸残基数大于 200， 有时会损害上述自组装肽的自组装能力。 0074 所导入的氨基酸的种类及位置可根据修饰肽的用途等适当设定。 优选从上述自组 装肽的 N 末端和 / 或 C 末端的精氨酸残基 （亲水性氨基酸） 以交替的方式导入疏水性氨基酸 和亲水性氨基酸。 0075 上述修饰可按照其种类等通过任意适当的方法进行。 0076 C添加剂 0077 本发明的人造玻璃体材料除了上述自组装肽和盐以外， 还可以含有任意添加 剂。作为该添加剂， 可以举出任。
30、意药剂， 例如， 低分子化合物、 DNA 及 RNA 等核酸、 雷珠单抗 （Lucentis） 、 阿瓦斯丁 （Avastin） 、 哌加他尼 （Macugen） 等抗体等。 0078 D人造玻璃体材料的制造方法 0079 本发明的人造玻璃体材料可通过任意适当的方法来制造。例如， 将上述自组装肽 溶解于蒸馏水中， 使其达到期望浓度， 制备肽水溶液， 将该肽水溶液、 上述盐及根据需要添 加的任意添加剂及溶剂使用任意搅拌方法进行搅拌、 混合而得到人造玻璃体材料。作为其 它方法， 例如， 将上述肽水溶液、 上述盐溶液及根据需要添加的任意添加剂使用任意搅拌方 法进行搅拌、 混合而得到人造玻璃体材料。 。
31、0080 E人造玻璃体材料的使用方法 0081 本发明的人造玻璃体材料可使用任意适当的方法注入眼球内。例如， 能够在注射 筒内填充本发明的人造玻璃体材料后， 进行灭菌处理， 使用注射器注入眼球内。 本发明的人 造玻璃体材料的操作性优异， 因此使用比通常向眼球内注射使用的 25 号注射针还要细的 注射针也能够容易地进行向眼球内的注入。 0082 实施例 0083 下面， 通过实施例具体地说明本发明， 但本发明不限于这些实施例。另外， 人造玻 璃体材料的渗透压如下操作进行测定。 0084 （渗透压的测定） 0085 将各人造玻璃体材料用蒸馏水 （株式会社大塚制药工场制， 商品名 ： 局方大塚蒸馏 。
32、水） 稀释， 直至溶液状态。然后， 按照日本药典记载的渗透压测定法 （渗透浓度测定法） ， 使用 渗透压测定装置 （Advanced Instruments 公司制， 商品名 ： Ozumo Meter 3900） 测定稀释后 的人造玻璃体材料的渗透压。按照稀释倍率比例计算得到的渗透压， 由此求得各人造玻璃 体材料的渗透压。 0086 实施例 1 0087 将自组装肽 （株式会社目立康制， 商品名 ： PanaceaGel SPG-178， 1w/v%） 与蒸馏水 （株式会社大塚制药工场制， 商品名 ： 局方大塚蒸馏水） 混合， 得到肽浓度为0.15w/v%的肽水 溶液。将得到的肽水溶液和盐溶。
33、液 1（昭和药品化工株式会社制， Opeakua（注册商标） （奥 谷胱甘肽溶液） 用稀释液， 渗透压 ： 308mOsm/kg） 按体积比 2:1 进行混合， 得到人造玻璃体材 说 明 书 CN 103501828 A 8 7/9 页 9 料 1。将得到的人造玻璃体材料中的自组装肽浓度、 盐溶液的比例及渗透压示于表 1。 0088 实施例 2 0089 除了代替盐溶液 1 使用盐溶液 2（日本爱尔康株式会社制， 商品名 ： BSS Plus（注 册商标） （奥谷胱甘肽溶液） 用稀释液， 渗透压 ： 308mOsm/kg） 以外， 与实施例 1 同样地操作， 得到人造玻璃体材料2。 将得到的人。
34、造玻璃体材料中的自组装肽浓度、 盐溶液的比例及渗透 压示于表 1。 0090 实施例 3 0091 除了使肽水溶液的肽浓度为 0.45w/v% 以外， 与实施例 2 同样地操作， 得到人造玻 璃体材料 3。将得到的人造玻璃体材料中的自组装肽浓度、 盐溶液的比例及渗透压示于表 1。 0092 实施例 4 0093 除了使肽水溶液的肽浓度为0.075w/v%以外， 与实施例1同样地操作， 得到人造玻 璃体材料 4。将得到的人造玻璃体材料中的自组装肽浓度、 盐溶液的比例及渗透压示于表 1。 0094 实施例 5 0095 除了使肽水溶液的肽浓度为 0.25w/v%， 使肽水溶液和盐溶液 1 的混合比。
35、按体积比 计为 2:3 以外， 与实施例 2 同样地操作， 得到人造玻璃体材料 5。将得到的人造玻璃体材料 中的自组装肽浓度、 盐溶液的比例及渗透压示于表 1。 0096 （比较例 1） 0097 与实施例 1 同样地操作而制备肽浓度为 1w/v% 的肽水溶液， 再向该肽水溶液中加 入蒸馏水 （株式会社大塚制药工场制， 商品名 ： 局方大塚蒸馏水） ， 使自组装肽浓度为 0.1w/ v%， 得到人造玻璃体材料C1。 将得到的人造玻璃体材料中的自组装肽浓度、 盐溶液的比例及 渗透压示于表 1。 0098 （比较例 2） 0099 除了使肽水溶液的肽浓度为 1w/v%， 使肽水溶液和盐溶液的混合比。
36、按体积比计为 3:7 以外， 与实施例 1 同样地操作， 得到人造玻璃体材料 C2。将得到的人造玻璃体材料中自 组装肽浓度、 盐溶液的比例及渗透压示于表 1。 0100 （比较例 3） 0101 除了使肽水溶液的肽浓度为 0.2w/v%， 使肽水溶液和盐溶液的混合比按体积比计 为9:1以外， 与实施例1同样地操作， 得到人造玻璃体材料C3。 将得到的人造玻璃体材料中 自组装肽浓度、 盐溶液的比例及渗透压示于表 1。 0102 表 1 0103 说 明 书 CN 103501828 A 9 8/9 页 10 0104 评价 0105 将实施例 1 5 及比较例 1 3 中得到的人造玻璃体材料用培。
37、养箱 （SANYO 制， 商 品名 ： CO2培养箱） 加温至 37， 进行以下评价。 0106 填塞效果、 物性及透明性 0107 目视确认加温后的人造玻璃体材料的填塞效果、 物性及透明性， 并进行评价。 填塞 效果如下评价。评价结果如表 2 所示。 0108 填塞效果 ： 填塞效果高 0109 ： 有填塞效果 0110 ： 无填塞效果 0111 操作性 0112 将加温后的人造玻璃体材料填充在注射器 （注射针 ： 26 号） 中， 根据射出时的感觉 （手感） 评价操作性。将评价结果示于表 2。 0113 表 2 0114 填塞效果人造玻璃体材料的性状透明性操作性 实施例 1流动性高的凝胶状。
38、容易 实施例 2流动性高的凝胶状容易 实施例 3有适度流动性的凝胶状容易 实施例 4流动性高的凝胶状容易 实施例 5流动性低且脆的块状容易 比较例 1液态容易 比较例 2有适度流动性的凝胶状容易 说 明 书 CN 103501828 A 10 9/9 页 11 比较例 3液态容易 0115 实施例 1 5 中得到的人造玻璃体材料具有填塞效果， 操作性也优异。另外， 透明 性也高， 可适用于人造玻璃体材料。通常， 向眼球注射时使用 25 号注射针。本发明的人造 玻璃体材料在使用比 25 号注射针还要细的 26 号注射针的情况下， 操作性也很优异。 0116 比较例1及比较例3中得到的人造玻璃体材。
39、料为液态， 得不到充分的填塞效果。 另 一方面， 比较例 2 中得到的人造玻璃体材料的填塞效果及操作性优异， 但是透明性差， 因此 不适合作为人造玻璃体材料使用。 0117 试验例 对家兔眼球的注入试验 0118 向体重 2kg 的白色家兔 21 个检体肌肉注射 15mg/kg 氯胺酮及 10mg/kg 甲苯噻嗪， 进行深麻醉。确认角膜反射消失及对疼痛刺激的反应正在消失。接着， 进行一只眼睛的玻 璃体切除术， 切除后， 注入实施例 2 中得到的人造玻璃体材料 2， 手术结束。手术方法使用 在人类临床中广泛普及的三通道系统 （25G） 的方法。在手术 1 天后、 3 天后、 1 周后、 2 周后。
40、、 3 周后、 一个月后及三个月后， 使用裂隙灯显微镜及眼底显微镜观察注入了人造玻璃体材料 的眼球， 进行视网膜电图的测定。在各观察日中， 从家兔 3 个检体摘除注入了人造玻璃体材 料的眼球， 进行 HE 染色， 观察视网膜的状态。手术 1 周后眼球的前眼部照片如图 1a 所示， 眼底照片如图1b所示， HE染色后的视网膜组织照片如图1c所示。 同样地， 手术一个月后眼 球的前眼部照片如图 2a 所示， 眼底照片如图 2b 所示， HE 染色后的视网膜组织照片如图 2c 所示， 手术三个月后眼球的前底部照片如图 3a 所示， 眼底照片如图 3b 所示， HE 染色后的视 网膜组织照片如图 3c。
41、 所示。 0119 在全部观察日中， 晶状体及人造玻璃体材料中均无浑浊， 能够进行眼底观察。 在手 术一个月后也未发生白内障， 未见对视网膜组织造成毒性。另外， 在手术一个月后， 眼球内 依然残留人造玻璃体材料， 保持了优异的填塞效果。 另外， 人造玻璃体材料自身也未固化或 浑浊。在手术三个月后也未发生白内障， 没有对视网膜组织造成毒性。另外， 未发生人造玻 璃体材料的固化或浑浊， 维持了优异的填塞效果。 这样， 本发明的人造玻璃体材料具有优异 的操作性， 且经过三个月这样的长时间后， 依然对眼组织没有毒性， 能够在眼球内维持优异 的填塞效果。 0120 产业上的可利用性 0121 本发明的人。
42、造玻璃体材料能够适合用作玻璃体切除术后使用的填塞材料。 0122 序列表自由文本 0123 序列号 1 是本发明中使用的自组装肽。 0124 序列号 2 是本发明中使用的自组装肽。 0125 序列号 3 是本发明中使用的自组装肽。 0126 序列号 4 是本发明中使用的自组装肽。 0127 序列号 5 是本发明中使用的自组装肽。 0128 序列号 6 是本发明中使用的自组装肽。 0129 序列号 7 是本发明中使用的自组装肽。 0130 序列号 8 是本发明中使用的自组装肽。 说 明 书 CN 103501828 A 11 1/3 页 12 0001 0002 序 列 表 CN 103501828 A 12 2/3 页 13 0003 序 列 表 CN 103501828 A 13 3/3 页 14 序 列 表 CN 103501828 A 14 1/4 页 15 图 1a 图 1b 说 明 书 附 图 CN 103501828 A 15 2/4 页 16 图 1c 图 2a 说 明 书 附 图 CN 103501828 A 16 3/4 页 17 图 2b 图 2c 说 明 书 附 图 CN 103501828 A 17 4/4 页 18 图 3a 图 3b 图 3c 说 明 书 附 图 CN 103501828 A 18 。