抑制肌肉收缩的化合物.pdf

抑制肌肉收缩的化合物
    发明领域 本发明涉及能够抑制肌肉收缩的肽和可用于治疗和 / 或护理皮肤的含有这些肽 的化妆用组合物或药物组合物， 优选地用于治疗和 / 或护理由肌肉收缩， 尤其是乙酰胆碱 受体聚簇 (clustering) 导致的病况、 失调和 / 或疾病。
     背景技术 肌肉收缩为生理过程， 其中由于先前的激发刺激使肌肉产生张力且被缩短或伸长 ( 或也可维持相同的长度 )。这些收缩使几乎所有的高等动物产生动力， 导致例如其所覆盖 的腔体的内容物排出 ( 平滑肌 ) 或使生物体向其周围移动或其他物体移动 ( 横纹肌 )。
     肌肉由可收缩的多核的肌肉纤维 ( 由数个肌肉细胞融合生成的多核细胞 ) 所形 成， 该肌肉纤维排列形成受神经元轴突中的突触终扣 (synaptic button) 支配的部分。在 神经元与肌肉纤维之间的接合被称为神经肌肉接头或 NMJ。神经元以动作电位形式传递刺 激， 且这引起神经递质乙酰胆碱 (ACh) 释出至突触间隙。负责接收信号和引起肌肉收缩的
     乙酰胆碱受体 (AChR) 累积在 NMJ 的突触后部位中。
     AChR 根据其与特定的激动剂结合而分类成两大组 ： 烟碱型乙酰胆碱受体 (nAChR) 和毒蕈碱型乙酰胆碱受体 (mAChR)。烟碱型乙酰胆碱受体由于其与生物碱烟碱结合的高亲 和性而命名 ； 然而毒蕈碱型乙酰胆碱受体以高亲和性与生物碱毒蕈碱结合。烟碱型乙酰胆 碱受体可转而根据其与 α- 银环蛇毒素结合或不结合的能力而分类。nAChR 为离子型受体 (ionotropic receptor)， 即其与路径藉由配体结合而开启的离子通道偶合。mAChR 为代谢 型受体 (metabotropic receptor) 或与 G 蛋白偶合的受体 ； 在该情况中， 离子循环取决于以 配体结合触发的一或多种代谢路径。
     神经肌肉接头已经典地用作一般的神经传递模型， 因此其功能已被详细说明。动 作电位到达运动神经元的末端部位且引起电压依赖性钙通道在突触前膜中开启， 造成局部 2+ 细胞内的钙增加。Ca 离子与连接充满神经递质 ACh 的突触囊泡至质膜的蛋白质结合。在 此情况中， 小突触泡蛋白 (synaptobrevin) 蛋白与突触融合蛋白 (syntaxin) 和 SNAP-25 强 力结合， 形成 SNARE 复合体 ( 突触小体 (synaptosomal) 相关蛋白受体 )， 其能够在囊泡与质 膜之间融合且引起 ACh 胞外分泌至突触间隙。此神经递质散布于整个突触空间且与 AChR 结合在突触后膜中。 ACh( 或另一激动剂 ) 的结合引起通道开启且这能够使钠离子向细胞内 部循环和使钾离开。 钠的进入引起去极化， 去极化经由细胞膜传递， 直到其到达触发钙从内 质网向细胞溶质释出的特化区域， 该释出诱发肌肉收缩。
     在分子水平， nAChR 为由 5 种以放射对称排列且形成 2.5 纳米直径的孔的单体所 形成的五聚体蛋白。这些亚基通常以化学计量法 (α)2-β-γ-δ 呈现， 且已揭示有 17 种 亚基类型 ： 10 种 α 类型的称为 α1 至 α10-， 4 种亚基 β 类型的称为 β1 至 β4-， 以及 γ、 δ 和 ε[Lindstrom J.(1997) “Nicotinic acetylcholine receptors in health and disease( 健康和疾病中的烟碱型乙酰胆碱受体 )” Mol.Neurobiol.15 ： 193-222]。 亚基水平 的分子组成细致地决定受体的功能性 ： 在神经肌肉接头中， 例如 nAChR 在胚胎期为异五聚体 (α1)2-β1-γ-δ， 而其在成人期为异五聚体 (α1)2-β1-δ-ε。亚基 γ 变成 ε 已被 与神经肌肉接头的成熟作用关联， 且与成人肌肉中的结构维持关联 [Yumoto N.， Wakatsuki S. 和 Sehara-Fujisawa A.(2005)“The acetylcholine receptor gamma-to-epsilon switch occurs in individual endplates( 乙酰胆碱受体亚基 γ 向 ε 的转变发生在个体 终板中 )” Biochem.Biophys.Res.Commun.331 ： 1522-1527]。
     神经肌肉接头为特化结构， 其功能是确保有效且快速的动作电位传递， 以引起突 触后肌肉中的去极化， 这是此肌肉收缩必要的信号。为了实现在神经元与肌肉纤维之间 快速的信息转移， 突触前区与突触后膜需要有适当的空间配置。突触前部位以 ACh 囊泡 的存在为特征， 而几乎所有的肌肉纤维 AChR 集中在突触后部位中且密集地堆积。AChR 聚 簇为复杂的过程， 此过程为 NMJ 的形成及其维持的关键 [Hoch W.(1999)“Formation of the neuromuscular junction.Agrin and its unusual receptors( 神经肌肉接头的形 成 .Agrin 和其不常见受体 )” Eur.J.Biochem.265 ： 1-10]。
     AChR 聚 簇 需 要 各 种 蛋 白 质 的 相 互 作 用， 其中三种蛋白质最突出 ： agrin、 MuSK( 肌肉特异性激酶 ) 和 rapsyn。认为蛋白质 agrin 负责触发导致受体聚簇的途径 [Mittaud P.， Camilleri A.A.， Willmann R.， ErbS.， Burden S.J. 和 Fuhrer C.(2004)“A single pulse of agrin triggers a pathway that acts to cluster acetylcholine receptors(agrin 的 单 次 脉 冲 触 发 聚 簇 乙 酰 胆 碱 受 体 的 途 径 )” Mol. Cell Biol.18 ： 7841-7854]， 且造成 AChR 的磷酸化作用、 聚簇和稳定。蛋白质 rapsyn 能 够于培养时诱发 AChR 聚簇且已经论证在 rspsyn 缺陷的突变体中， AChR 聚簇的形成被 抑 制 [Apel E.D.， Roberds S.L.， Campbell K.P. 和 Merlie J.P.(1995)“Rapsyn may function as a link between the acetylcholine receptor and the agrin-binding dystrophin-associated glycoprotein complex(rapsyn 可能作为乙酰胆碱受体与 agrin 结合肌萎缩蛋白相关糖蛋白复合体之间的连接 )” Neuron 1 ： 115-126]。连接 agrin 和 rapsyn 的 因 子 为 MuSK[Valenzuela D.M.， Stitt T.N.， DiStefano P.S.， Rojas E.， Mattson K.， Compton D.L.， L.， Park J.S.， Stark J.L.， Gies D.R.， Thomas S.， Le Beau M.M.， Femald A.A.， Copeland N.G.， Jenkins N.A.， Burden S.J.Glass D.J. 和 Yancopoulos G.D.(1995)“Receptor tyrosine kinase specific for the skeletal muscle lineage ： Expression in embryonic muscle， at the neuromuscular junction， and after injury( 骨骼肌谱系特异性的受体酪氨酸激酶 ： 在胚胎肌肉中、 在神经肌肉接头 处和在损伤后的表达 )” Neuron 3 ： 573-584]。MuSK 为具有激酶活性的受体， 其在需要被称 为 MASC( 肌肉相关特异性组分 ) 的另外组分的相互作用中使蛋白质 agrin 磷酸化。经由 这一配体结合的 MuSK 的活化作用本身不足以引起 AChR 聚簇， 且已提出在 MuSK 与 rapsyn 之间的相互作用被称为 RATL(rapsyn 相关的跨膜连接分子 ) 的因子介导， 经由此相互作 用 AChR-rapsyn 复合体可与 agrin-MASC-MuSK 复合体相互作用， 且形成成熟的 NMJ 的突触 后 装 置 (postsynaptic apparatus)[Zhou H.， Glass D.J.， Yancopoulos G.D. 和 Sanes J.R.(1999)“Distinct domains of MuSK mediate its abilities to induce and to associate with postsynaptic specializations(MuSK 的不同结构域介导其诱导突触后 特化作用并与其关联的能力 )” J.Cell Biol.146 ： 1133-1146]。已发现在严重的肌肉疾 病中编码 MuSK 的基因受到扰乱， 所述疾病诸如先天性肌无力综合征， 为一种由神经传递降低所引起的疾病， 其中患者遭受肌肉无力 [Chevessier F.， FarautB.， Ravel-Chapuis A.， Richard P.， Gaudon K.， BauchéS.， Prioleau C.， Herbst R.， Goillot E.， Ioos C.， Azulay J.P.， Attarian S.， Leroy J.P.， Fournier E.， Legay C.， Schaeffer L.， Koenig J.Fardeau M.， Eymard B.， Pouget J. 和 D.(2004)“MUSK， a new target for mutations causing congenital myasthenic syndrome(MuSK， 一种造成先天性肌无力综合征的突变 的新靶 )” Hum.Mol.Genet.13 ： 3229-3204]， 且 MuSK 在此疾病中的相关作用已经由小鼠 模型的建立予以确认， 该模型中 MuSK 基因缺少其激酶结构域且还显示肌肉无力的表型 [Chevessier F.， Girard E.， MolgóJ.， Bartling S.， Koenig J.， D.， 和 Witzemann V.(2008) “A mouse model for congenital myasthenic syndrome due to MuSK mutations reveals defects in structure and function of neuromuscular junctions( 先天性 肌无力综合征的小鼠模型， 由于 MuSK 突变揭示神经肌肉接头的结构和功能的缺陷 )” Hum. Mol.Genet.17 ： 3577-3595]。 肌肉收缩由中枢神经系统控制 ； 脑控制自主性收缩， 而脊髓控制非自主性反映。 两 种过程受到经调节释出的神经递质乙酰胆碱的介导。然而， 不同的失调或神经性疾病以非 自主性肌肉痉挛或张力障碍为特征， 其中肌肉持续地过度收缩 [Fahn S.(1988)“Concept and classification of dystonia( 张力障碍的概念和分类 )” Adv.Neurol.50 ： 1-8]。运
     动的出现取决于所涉及的肌肉和收缩强度。在其最轻微的形式中， 张力障碍可表现被认为 是正常的单纯夸张运动， 而在其最严重的形式中， 张力障碍甚至可引起伤残的异常肢体姿 势。取决于受影响的身体部位， 将张力障碍分类成 (1) 局灶性张力障碍， 其局限在特定的 身体部位， 尤其包含眼周围肌肉的张力障碍或睑痉挛、 颈张力障碍或痉挛性斜颈症、 喉张力 障碍或痉挛性发音困难、 口下颌张力障碍、 局灶性手部张力障碍诸如书写痉挛或音乐家痉 挛或脚部张力障碍、 夜间磨牙、 半侧颜面痉挛、 抽搐症和斜视 ； (2) 全身性张力障碍， 其影响 较大的部位或全身 ； (3) 多灶性张力障碍， 其涉及二或多个不相关的身体部位 ； (4) 节段性 肌张力障碍， 其影响二或多个相邻的身体部位， 包含梅杰氏综合征 (Meige’ s Syndrome) ； 和 (5) 偏侧肌张力障碍， 其涉及同侧的手臂和腿， 包含由中风造成的张力障碍 [Jinnah H.A. 和 Hess E.J.(2008)“Experimental therapeutics for dystonia( 张力障碍的实验 疗法 )” ， Neurotherapeutics 5 ： 198-209 ； Brooke M.H.(1986)“A clinician’ s view of neuromuscular disease( 神经肌肉疾病的医师观点 )” ， Baltimore， Williams & Wilkins ； Layzer R.B.(1986)“Muscle pain， cramps and fatigue( 肌 肉 痛、 痉 挛 和 疲 劳 )”于 Myology( 肌肉学 )， AG Engel， BQ Banke 编著， New York， McGraw-Hill]。
     另一方面， 在脸上传递表情的面部肌肉的重复收缩导致在特定区域的皱痕。随着 从约 30 岁起的年龄， 皱纹或表情纹的出现开始在这些区域中变得明显 ： 由这些区域中皮肤 真皮层中的细胞消失所引起的与肌肉纤维方向垂直排列的或多或少线状的沟纹。 其深度取 决于个体年龄和引起皱痕的肌肉收缩的频率与强度。 表情纹出现中牵涉的主要肌肉为那些 眼睛与睫毛周围的肌肉和那些在前额的肌肉、 唇部、 嘴巴、 脸颊和颈部肌肉。这些肌肉发现 于面部的皮下连接前部， 肌肉从此部位向皮肤升起且肌肉本身插入真皮层的最深部位。肌 肉收缩可导致皮肤耸起、 下压、 收缩或缓慢运动。 初期的皱纹出现为最典型的年龄和皮肤老 化迹象。皮肤老化为具有两个主要因素的过程 ： 由于时间推移的年龄因素和由于暴露于紫 外线照射 (UV) 水平的光诱发或光老化因素。数种环境因素的总和也促进皮肤老化， 诸如暴露于烟草烟、 暴露于污染和气候条件， 诸如冷和 / 或风。术语皮肤的″老化″和″光老化″ 指皮肤外观的明显变化， 诸如皱纹、 细纹、 粗糙、 表情纹、 妊娠纹、 裂纹、 沟纹、 松弛、 皮肤下垂 诸如下垂的脸颊、 丧失弹性、 丧失紧致、 弹性组织变性、 角质化和丧失光滑。
     自 1990 年代以来， 使用肉毒杆菌 (Clostridium botulinum) 毒素 ( 由 Allergan 以 Botox 销售 ) 注入肌肉中， 以减少肌肉收缩且治疗相关疾病， 诸如张力障碍和 / 或疼痛。 还 已使用神经毒素注射来治疗和 / 或护理皮肤， 以减少、 延缓或阻止老化和 / 或光老化的迹象 为目标， 尤其是松弛面部表情和减少皱纹的形成或皱纹的出现减至最小。其作用机制是基 于阻断 ACh 在神经肌肉接头的轴突的突触前端中释出， 因此避免神经传递和肌肉收缩。毒 素与突触前膜中的受体结合， 内在化和成为细胞质。其活性负责破坏三分子的小突触泡蛋 白 SNARE 复合体、 SANP-25 和突触融合蛋白， 这避免突触囊泡与质膜结合和释出 ACh 至突触 间隙。
     虽然已证明肉毒杆菌神经毒素的效果非常持久， 因为其在不可逆地破坏 SNARE 复 合体后花费数周再建立完整的肌肉功能性神经分布， 但是其施用不无风险。主要的风险在 于其毒性 ： 甚至低于 50 微克为成人的致命剂量。 肉毒杆菌神经毒素引起肌肉麻痹且甚至可 由于心跳停止而引起死亡。 由于肉毒杆菌毒素固有的危险和施用方法 ： 直接注入肌肉内， 因 此该物质的施用应由专科医师进行。经由肉毒杆菌毒素阻断在 AChR 水平的神经传递不具 有足以正好抑制肌肉收缩的特异性， 但是其具有患者可能不希望的其它活性且可引起副作 用诸如恶心、 疼痛或红斑。
     医药领域还已使用其他的化合物抑制肌肉收缩， 包括 γ- 氨基丁酸受体 (GABA) 调 节剂诸如氯苯氨丁酸 (Baclofen) 或苯并二氮卓、 α2- 肾上腺素受体激动剂诸如替扎尼定 (tizanidine) 或可乐宁 (clonidine)、 AChR 调节剂诸如从箭毒衍生的生物碱、 针对 AChR 的 特定抗体诸如那些在专利 US 6,780,413 B2 中所述的抗体、 或利阿诺定 (ryanodine) 受体 激动剂诸如丹曲洛林 (dantrolene)。这些治疗没有一个没有副作用， 因为许多这些化合物 在中枢神经系统水平作用， 且可能引起晕眩、 镇静， 且甚至在持续治疗时引起成瘾。
     化妆品工业还已进行了不同的努力以开发用于治疗表情纹的新化合物， 且因此以 减少、 延缓或阻止老化和 / 或光老化的迹象为目标治疗和 / 或护理皮肤， 经由局部施用以避 免在注射肉毒杆菌毒素之后发生可能的副作用和因此比较安全。现有技术已描述以在突 触水平抑制神经肌肉接头为目标来避免表情纹出现或使表情纹柔和的不同产品。专利 EP 1180524 B1 和 WO9734620 描述从蛋白质 SNAP-25 所衍生的肽的用途， 其在 SNARE 复合体的 形成中与 SANP-25 竞争而突触前地作用， 引起 ACh 的释出减少且抑制在 NMJ 中的神经元传 递。专利 EP 1809685 A2 描述 AChR 的拮抗剂肽， 其以类似于 waglerin-1 的作用机制突触 后地作用， 以阻断神经传递和阻止皱纹出现。有活性的化妆用五肽 -3 也通过抑制 AChR 而 突触后地作用， 以类似于筒箭毒碱 (tubocurarine) 的作用机制阻断神经传递和阻止皱纹 出现。
     然而， 化妆品或医药领域所开发的化合物都不能够以类似于肉毒杆菌毒素的有效 性， 但无风险的方式抑制肌肉收缩。因此， 对鉴定能够抑制肌肉收缩， 与现有的剂共施用以 实现更好的张力障碍治疗结果， 以及使皱纹和尤其是使表情纹减少和 / 或柔和， 且因此以 减少、 延缓或阻止老化和 / 或光老化的迹象为目标治疗和 / 或护理皮肤的新剂仍有需求。
     发明详述本发明提供上述问题的解决办法。本发明申请人惊讶地发现某些合成肽在抑制 AChR 聚簇方面呈现重要的有效性且因此可用于治疗和 / 或护理由肌肉收缩， 尤其是乙酰胆 碱受体聚簇导致的病况、 失调和 / 或疾病， 以及治疗和 / 或护理皮肤。
     定义
     为了帮助理解本发明， 本文包括一些术语和措词在本发明的上下文中使用时的意 义。
     在本发明的上下文内， 应了解″皮肤″为包含从最外层或角质层至最底层或皮下 组织 ( 包括所述二者 ) 的多层。这些层包含不同类型的细胞， 尤其诸如角质化细胞、 成纤维 细胞、 黑色素细胞和 / 或脂肪细胞。
     在本发明的上下文内，″护理皮肤″包含阻止老化和 / 或光老化的迹象。
     在本说明书内， 用于氨基酸的缩写依照在 Eur.J.Biochem.(1984)138 ： 9-37 和 J.Chem(1989)264 ： 633-673 中所规定的 IUPAC-IUB 联合委员会的生化命名规则。
     因此， 例如 Asp 代表 NH2-CH(CH2COOH)-COOH， Asp- 代表 NH2-CH(CH2COOH)-CO-， -Asp 代表 -NH-CH(CH2COOH)-COOH， 和 -Asp- 代表 -NH-CH(CH2COOH)-CO-。因此， 当代表肽键的连 字符位于符号右边时， 则消除氨基酸的 1- 羧基的 OH( 在此以非离子化的惯用形式表示 )， 而 位于符号左边时， 则消除氨基酸的 2- 氨基的 H ； 此两种修饰可应用于相同的符号 ( 参见表 1)。
     缩写″ Ac-″在本说明书中用于指明乙酰基 (CH3-CO-)， 缩写″ Palm-″用于指明 棕榈酰基 (CH3-(CH2)14-CO-)。
     术语″非环状脂族基团″在本发明书中用于涵盖例如但不限于直链或支链的烷 基、 烯基和炔基。
     术语″烷基″是关于饱和、 直链或支链的基团， 其具有介于 1 与 24， 优选介于 1 与
     16， 更优选介于 1 与 14， 甚至更优选介于 1 与 12 个之间的碳原子， 且甚至又更优选 1、 2、 3、 4、 5 或 6 个碳原子， 且以单键与分子的其余部分结合， 该烷基包括例如但不限于甲基、 乙基、 异 丙基、 异丁基、 叔丁基、 庚基、 辛基、 癸基、 十二烷基、 月桂基、 十六烷基、 十八烷基、 戊基、 2- 乙 基己基、 2- 甲基丁基、 5- 甲基己基和类似基团。
     术语″烯基″是关于直链或支链的基团， 其具有介于 2 与 24， 优选介于 2 与 16， 更 优选介于 2 与 14， 甚至更优选介于 2 与 12 个之间的碳原子， 甚至又更优选 2、 3、 4、 5 或 6 个碳 原子， 具有一或多个碳 - 碳双键， 优选具有 1、 2 或 3 个共轭或非共轭的碳 - 碳双键， 其经由单 键与分子的其余部分结合， 该烯基包括例如但不限于乙烯基、 油烯基、 亚油烯基 (linoleyl) 和类似基团。
     术语″炔基″是关于直链或支链的基团， 其具有介于 2 与 24， 优选介于 2 与 16， 更 优选介于 2 与 14， 甚至更优选介于 2 与 12 个之间的碳原子， 甚至又更优选 2、 3、 4、 5或6个 碳原子， 具有一或多个碳 - 碳三键， 优选具有 1、 2 或 3 个共轭或非共轭的碳 - 碳三键， 其经由 单键与分子的其余部分结合， 该炔基包括例如但不限于乙炔基、 1- 丙炔基、 2- 丙炔基、 1- 丁 炔基、 2- 丁炔基、 3- 丁炔基、 戊炔基诸如 1- 戊炔基和类似基团。
     术语″脂环基″在本发明书中用于涵盖例如但不限于环烷基或环烯基或环炔基。 术语″环烷基″是关于饱和的单 - 或多环脂族基团， 其具有介于 3 与 24， 优选介 于 3 与 16， 更优选介于 3 与 14， 甚至更优选介于 3 与 12 个之间的碳原子， 甚至又更优选 3、 4、 5 或 6 个碳原子， 且其经由单键与分子的其余部分结合， 该环烷基包括例如但不限于环丙 基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 甲基环己基、 二甲基环己基、 八氢茚、 十氢萘、 十二氢萉 和类似基团。
     术语″环烯基″是关于非芳族的单 - 或多环脂族基团， 其具有介于 5 与 24， 优选 介于 5 与 16， 更优选介于 5 与 14， 甚至更优选介于 5 与 12 个之间的碳原子， 甚至又更优选 5 或 6 个碳原子， 具有一或多个碳 - 碳双键， 优选具有 1、 2 或 3 个共轭或非共轭的碳 - 碳双 键， 其经由单键与分子的其余部分结合， 该环烯基包括例如但不限于环戊 -1- 烯 -1- 基和类 似基团。
     术语″环炔基″是关于非芳族的单 - 或多环脂族基团， 其具有介于 8 与 24， 优选 介于 8 与 16， 更优选介于 8 与 14， 甚至更优选介于 8 与 12 个之间的碳原子， 甚至又更优选 8 或 9 个碳原子， 具有一或更多个碳 - 碳三键， 优选具有 1、 2 或 3 个共轭或非共轭的碳 - 碳 三键， 其以单键与分子的其余部分结合， 该环炔基包括例如但不限于环辛 -2- 炔 -1- 基和类 似基团。
     术语″芳基″是关于芳族基团， 其具有介于 6 与 30， 优选介于 6 与 18， 更优选介于 6 与 10 个之间的碳原子， 甚至更优选 6 或 10 个碳原子， 其包含以碳 - 碳键结合或稠合的 1、 2、 3 或 4 个芳族环， 该芳基尤其包括例如但不限于苯基、 萘基、 联苯基、 茚基、 菲基或蒽基 ； 或 芳烷基。
     术 语 ″ 芳 烷 基 ″ 是 关 于 以 芳 族 基 团 取 代 的 烷 基， 其 具 有 介 于 7 与 24 个 之 间 的碳原子， 且包括例如但不限于 -(CH2)1-6- 苯基、 -(CH2)1-6-(1- 萘基 )、 -(CH2)1-6-(2- 萘 基 )、 -(CH2)1-6-CH( 苯基 )2 和类似基团。
     术语″杂环基″是关于杂环或 3-10 元烃环， 其中环原子中的一或多者， 优选环原 子中的 1、 2 或 3 个是非碳的元素， 诸如氮、 氧或硫， 且可为饱和或不饱和。为了本发明的目
     的， 杂环可为环状、 单环、 双环或三环系统， 其可包括稠合环系统 ； 且杂环基中的氮、 碳或硫 原子可任选地被氧化 ； 氮原子可任选地被季铵化 ； 且杂环基可为部分或完全饱和的， 或可 为芳族。随着渐增的优先选择， 术语杂环是关于 5 或 6 元环。
     术语″杂芳基烷基″是关于以经取代或未经取代的芳族杂环基取代的烷基， 该 烷基具有从 1 至 6 个碳原子， 而芳族杂环基具有介于 2 与 24 个之间的碳原子和从 1 至 3 个非碳原子， 且包括例如但不限于 -(CH2)1-6- 咪唑基、 -(CH2)1-6- 三唑基、 -(CH2)1-6- 噻吩 基、 -(CH2)1-6- 呋喃基、 -(CH2)1-6- 吡咯啶基和类似基团。
     当在本技术领域中使用时， 在上述定义的基团上可有某些程度的取代。 因此， 在本 发明的任何基团上可有取代。在本文件中提及本发明的基团中的经取代的基团表明， 该指 定的基可在一或多个可利用位置上被一或多个取代基取代， 优选在 1、 2 或 3 个位置上， 更优 选在 1 或 2 个位置上， 甚至更优选在 1 个位置。这些取代基包括例如但不限于 C1-C4 烷基、 羟基、 C1-C4 烷氧基、 氨基、 C1-C4 氨基烷基、 C1-C4 羰氧基、 C1-C4 氧羰基、 卤素， 诸如氟、 氯、 溴和 碘、 氰基、 硝基、 叠氮基、 C1-C4 烷基磺酰基、 硫醇基、 C1-C4 烷硫基、 芳氧基， 诸如苯氧基、 -NRb(C ＝ NRb)NRbRc， 其中 Rb 和 Rc 独立选自由下列所组成的组 ： H、 C1-C4 烷基、 C2-C4 烯基、 C2-C4 炔 基、 C3-C10 环烷基、 C6-C18 芳基、 C7-C17 芳烷基、 3-10 元杂环基或氨基的保护基。 本发明化合物
     本发明化合物以通式 (I) 定义 ：
     R1-Wn-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Yp-Zs-R2
     (I)
     其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 特征在于 ：
     AA1 选自由 -Asp-、 -Glu- 和 -Pro- 所组成的组 ；
     AA2 为 -Asp- ；
     AA3 选自由 -Tyr- 和 -Arg- 所组成的组 ；
     AA4 选自由 -Phe- 和 -Tyr- 所组成的组 ；
     AA5 选自由 -Arg- 和 -Lys- 所组成的组 ；
     AA6 选自由 -Leu- 和 -Met- 所组成的组 ；
     W、 X、 Y 和 Z 彼此独立地选自由编码的氨基酸或非编码的氨基酸所组成的组 ；
     n、 m、 p 和 s 彼此独立地选择且具有介于 0 与 1 之间的值 ；
     R1 选自由下列所组成的组 ： H、 经取代或未经取代的非环状脂族基团、 经取代或未 经取代的脂环基、 经取代或未经取代的杂环基、 经取代或未经取代的杂芳基烷基、 经取代或 未经取代的芳基、 经取代或未经取代的芳烷基和 R5-CO-， 其中 R5 选自由下列所组成的组 ： H、 经取代或未经取代的非环状脂族基团、 经取代或未经取代的脂环基、 经取代或未经取代的 芳基、 经取代或未经取代的芳烷基、 经取代或未经取代的杂环基、 和经取代或未经取代的杂 芳基烷基 ； 及
     R2 选自由下列所组成的组 ： -NR3R4、 -OR3 和 -SR3， 其中 R3 和 R4 独立选自由下列所组 成的组 ： H、 经取代或未经取代的非环状脂族基团、 经取代或未经取代的脂环基、 经取代或未 经取代的杂环基、 经取代或未经取代的杂芳基烷基、 经取代或未经取代的芳基、 和经取代或 未经取代的芳烷基。
     R1 和 R2 基团分别与肽序列的氨基末端 (N- 末端 ) 和羧基末端 (C- 末端 ) 结合。
     根据本发明的优选实施方案， R1 选自由 H 或 R5-CO- 所组成的组， 其中 R5 选自由下 列所组成的组 ： 经取代或未经取代的 C1-C24 烷基、 经取代或未经取代的 C2-C24 烯基、 经取代 或未经取代的 C2-C24 炔基、 经取代或未经取代的 C3-C24 环烷基、 经取代或未经取代的 C5-C24 环烯基、 经取代或未经取代的 C8-C24 环炔基、 经取代或未经取代的 C6-C30 芳基、 经取代或未 经取代的 C7-C24 芳烷基、 经取代或未经取代的具有 3-10 个环元的杂环基、 及经取代或未经 取代的具有 2 至 24 个碳原子与 1 至 3 个非碳原子和具有 1 至 6 个碳原子的烷基链的杂芳基 烷基。更优选地， R1 选自由下列所组成的组 ： H、 乙酰基、 叔丁酰基、 己酰基、 2- 甲基己酰基、 环己烷羧基、 辛酰基、 癸酰基、 月桂酰基、 肉豆蔻酰基、 棕榈酰基、 硬脂酰基、 油酰基和亚油酰 基 (linoleoyl)。甚至更优选地， R1 为 H、 乙酰基、 月桂酰基、 肉豆蔻酰基或棕榈酰基。在甚 至更优选的实施方案中， R1 为乙酰基或棕榈酰基。
     根据另一优选的实施方案， R2 为 -NR3R4、 -OR3 或 -SR3， 其中 R3 和 R4 独立选自由下列 所组成的组 ： H、 经取代或未经取代的 C1-C24 烷基、 经取代或未经取代的 C2-C24 烯基、 经取代 或未经取代的 C2-C24 炔基、 经取代或未经取代的 C3-C24 环烷基、 经取代或未经取代的 C5-C24 环烯基、 经取代或未经取代的 C8-C24 环炔基、 经取代或未经取代的 C6-C30 芳基、 经取代或未 经取代的 C7-C24 芳烷基、 经取代或未经取代的具有 3-10 个环元的杂环基、 及经取代或未经 取代的具有 2 至 24 个碳原子与 1 至 3 个非碳原子和具有 1 至 6 个碳原子的烷基链的杂芳 基烷基。任选地， R3 和 R4 可经由饱和或不饱和碳 - 碳键结合， 与氮原子形成环。更优选地， R2 为 -NR3R4 或 -OR3， 其中 R3 和 R4 独立选自由下列所组成的组 ： H、 经取代或未经取代的 C1-C24 烷基、 经取代或未经取代的 C2-C24 烯基、 经取代或未经取代的 C2-C24 炔基、 经取代或未经取 代的 C3-C10 环烷基、 经取代或未经取代的 C6-C15 芳基、 经取代或未经取代的具有 3-10 个环 元的杂环基、 经取代或未经取代的具有 3 至 10 个环元和具有 1 至 6 个碳原子的烷基链的杂 芳基烷基。更优选地， R3 和 R4 选自由下列所组成的组 ： H、 甲基、 乙基、 己基、 十二烷基或十六 烷基。甚至更优选地， R3 为 H 及 R4 选自由下列所组成的组 ： H、 甲基、 乙基、 己基、 十二烷基或 十六烷基。根据甚至更优选的实施方案， R2 选自 -OH 与 -NH2。
     根据本发明的另一实施方案， R1 选自由下列所组成的组 ： H、 乙酰基、 月桂酰基、 肉 豆蔻酰基或棕榈酰基， AA1 为 -L-Glu-， AA2 为 -L-Asp-， AA3 为 -L-Tyr-， AA4 为 -L-Tyr-， AA5 为 -L-Arg-， AA6 为 -L-Leu-， 且 R2 为 -NR3R4 或 -OR3， 其中 R3 和 R4 独立选自 H、 甲基、 乙基、 己 基、 十二烷基和十六烷基， R2 优选为 -OH 或 -NH2。更优选地， R1 为乙酰基或棕榈酰基及 R2 为 -NH2。甚至更优选地， n、 m、 p 和 s 为 0。
     根据本发明的另一实施方案， R1 选自由下列所组成的组 ： H、 乙酰基、 月桂酰基、 肉 豆蔻酰基或棕榈酰基， AA1 为 -L-Pro-， AA2 为 -L-Asp-， AA3 为 -L-Tyr-， AA4 为 -L-Tyr-， AA5 为 -L-Lys-， AA6 为 -L-Leu-， 且 R2 为 -NR3R4 或 -OR3， 其中 R3 和 R4 独立选自 H、 甲基、 乙基、 己 基、 十二烷基和十六烷基， R2 优选为 -OH 或 -NH2。更优选地， R1 为乙酰基或棕榈酰基及 R2 为 -NH2。甚至更优选地， n、 m、 p 和 s 为 0。
     根据本发明的另一实施方案， R1 选自由下列所组成的组 ： H、 乙酰基、 月桂酰基、 肉 豆蔻酰基或棕榈酰基， AA1 为 -L-Glu-， AA2 为 -L-Asp-， AA3 为 -L-Arg-， AA4 为 -L-Phe-， AA5 为 -L-Arg-， AA6 为 -L-Met-， 且 R2 为 -NR3R4 或 -OR3， 其中 R3 和 R4 独立选自 H、 甲基、 乙基、 己 基、 十二烷基和十六烷基， R2 优选为 -OH 或 -NH2。更优选地， R1 为乙酰基或棕榈酰基及 R2 为 -NH2。甚至更优选地， n、 m、 p 和 s 为 0。根据本发明的另一实施方案， R1 选自由下列所组成的组 ： H、 乙酰基、 月桂酰基、 肉 豆蔻酰基或棕榈酰基， AA1 为 -L-Glu-， AA2 为 -L-Asp-， AA3 为 -L-Tyr-， AA4 为 -L-Tyr-， AA5 为 -L-Arg-， AA6 为 -L-Met-， 且 R2 为 -NR3R4 或 -OR3， 其中 R3 和 R4 独立选自 H、 甲基、 乙基、 己 基、 十二烷基和十六烷基， R2 优选为 -OH 或 -NH2。更优选地， R1 为乙酰基或棕榈酰基及 R2 为 -NH2。甚至更优选地， n、 m、 p 和 s 为 0。
     根据本发明的另一实施方案， R1 选自由下列所组成的组 ： H、 乙酰基、 月桂酰基、 肉 豆蔻酰基和棕榈酰基， AA1 为 -L-Pro-， AA2 为 -L-Asp-， AA3 为 -L-Tyr-， AA4 为 -L-Tyr-， AA5 为 -L-Arg-， AA6 为 -L-Met-， 且 R2 为 -NR3R4 或 -OR3， 其中 R3 和 R4 独立选自 H、 甲基、 乙基、 己 基、 十二烷基和十六烷基， R2 优选为 -OH 或 -NH2。更优选地， R1 为乙酰基或棕榈酰基及 R2 为 -NH2。甚至更优选地， n、 m、 p 和 s 为 0。
     根据本发明的另一实施方案， R1 选自由下列所组成的组 ： H、 乙酰基、 月桂酰基、 肉 豆蔻酰基和棕榈酰基， 优选地， R1 选自由 H、 乙酰基和棕榈酰基所组成的组， 且 R2 选自由 -OH 和 -NH2- 所组成的组。
     优选地， 式 (I) 化合物选自由下列所组成的组 ：
     Ac-Asp-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-NH2、
     Ac-Asp-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-OH、
     Ac-Asp-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-NH2
     Ac-Asp-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-NH2、
     Ac-Asp-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-OH、
     Ac-Asp-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Met-NH2
     Ac-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Leu-NH2
     Ac-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Met-NH-(CH2)15-CH3、
     Ac-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Met-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Met-OH、
     Ac-Glu-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-OH、
     Ac-Glu-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-OH、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-OH、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-Gly-Gly-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-Gly-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH-(CH2)15-CH3、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-OH、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-NH-(CH2)15-CH3、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-NH2、
     Ac-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-OH、
     Ac-Gly-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-Gly-NH2、Ac-Gly-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Ac-Gly-Gly-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Ac-Pro-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-NH2、 Ac-Pro-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-OH、 Ac-Pro-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Ac-Pro-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-OH、 Ac-Pro-Asp-Arg-Tyr-Lys-Leu-NH2、 Ac-Pro-Asp-Arg-Tyr-Lys-Leu-OH、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-NH-(CH2)15-CH3 Ac-Pro-Asp-Tyr-Phe-Lys-Leu-NH2 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-OH、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-NH-(CH2)15-CH3、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-NH2、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-OH、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-NH-(CH2)15-CH3、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-NH2、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-OH、 Ac-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Met-NH2 H-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Met-NH2 Palm-Ala-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Met-Gly-NH2 ； Palm-Asp-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-NH2、 Palm-Asp-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-OH、 Palm-Asp-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-NH2、 Palm-Asp-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-OH、 Palm-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Met-NH2、 Palm-Glu-Asp-Arg-Phe-Arg-Met-OH、 Palm-Glu-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-NH2、 Palm-Glu-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-OH、 Palm-Glu-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Palm-Glu-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-OH、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-NH2、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Phe-Arg-Leu-OH、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-Gly-Gly-NH2、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-OH、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-Gly-NH2、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-NH2、 Palm-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-OH、Palm-Gly-Glu-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Palm-Gly-Gly-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-NH2、 Palm-Pro-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-NH2、 Palm-Pro-Asp-Arg-Phe-Lys-Leu-OH、 Palm-Pro-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Palm-Pro-Asp-Arg-Tyr-Arg-Leu-OH、 Palm-Pro-Asp-Arg-Tyr-Lys-Leu-NH2、 Palm-Pro-Asp-Arg-Tyr-Lys-Leu-OH、 Palm-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-NH2、 Palm-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Leu-OH、 Palm-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-NH2、 Palm-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Met-OH、 Palm-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-NH2、 和 Palm-Pro-Asp-Tyr-Tyr-Lys-Leu-OH、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐。本发明的肽可以立体异构体或立体异构体的混合物存在， 例如形成肽的氨基酸可 彼此独立地具有 L-、 D- 构型， 或为外消旋的。因此， 根据不对称碳的数目和存在何种异构体 或异构体的混合物， 有可能获得异构体的混合物以及外消旋混合物或非对映异构体的混合 物， 或纯的非对映异构体或对映异构体。 本发明肽的优选结构为纯的异构体， 即对映异构体 或非对映异构体。
     例 如， 当 指 出 AA1 可 为 -Glu- 时， 则 应 理 解 AA1 选 自 -L-Glu-、 -D-Glu- 或 二 者 的 外 消 旋 或 非 外 消 旋 的 混 合 物。 同 样 的， 当 指 出 AA2 可 为 -Asp- 时， 则应理解其可 为 -L-Asp-、 -D-Asp- 或二者的外消旋或非外消旋的混合物。在本文件中所述的制备方法允 许本领域技术人员由选择具有适当构型的氨基酸而获得本发明肽的各立体异构体。
     在本发明的上下文中， 术语″非编码的氨基酸″指不由遗传密码编码的任何天然 或非天然氨基酸， 尤其例如但不限于瓜氨酸、 鸟氨酸、 肌氨酸、 锁链素、 正缬氨酸、 4- 氨基丁 酸、 2- 氨基丁酸、 2- 氨基异丁酸、 6- 氨基己酸、 1- 萘基丙氨酸、 2- 萘基丙氨酸、 2- 氨基苯甲 酸、 4- 氨基苯甲酸、 4- 氯苯基丙氨酸、 2， 3- 二氨基丙酸、 2， 4- 二氨基丁酸、 环丝氨酸、 肉碱、 胱氨酸、 青霉胺、 焦谷氨酸、 噻吩基丙氨酸、 羟基脯氨酸、 别 - 异亮氨酸、 别 - 苏氨酸、 4- 哌啶 甲酸 (isonipecotic acid)、 异丝氨酸、 苯基甘氨酸、 抑胃酶氨酸 (statine)、 β- 丙氨酸、 正亮氨酸、 N- 甲基氨基酸、 β- 氨基酸或 γ- 氨基酸及其他， 以及其衍生物。非天然氨基 酸的名单可见于论文 “Unusual amino acids in peptide synthesis( 肽合成中的不常见 氨基酸 )”由 D.C.Roberts 和 F.Vellaccio， 于 The Peptides( 肽类 )， 第 5 卷 (1983)， 第 VI 章， Gross E. 和 Meienhofer J.， 编著， Academic Press， New York， USA 中或此领域中 的专门公司的商业目录中， 尤其诸如 PolyPeptide Laboratories、 Bachem、 Novabiochem、 Sigma-Aldrich、 Peptides International、 Advanced ChemTech、 Chem-Impex、 Maybridge Chemical 、 Chirotech Technology 、 Peninsula Laboratories 或 RSP Amino Acid Analogues。
     在本发明的上下文中， 当 n、 m、 p 和 / 或 s 不同于 0 时， 则清楚地了解 W、 X、 Y和/或 Z 的性质不使本发明肽的活性难以实现， 而是促成 AChR 聚簇抑制作用或对其不具作用。
     在本发明的上下文中， 本发明还提供肽的化妆品上或药学上可接受的盐。术语″ 化妆品上或药学上可接受的盐″意谓经许可用于动物和尤其用于人类的盐， 且包括 ： 用于 形成碱加成盐的盐， 不论为无机盐， 尤其例如但不限于锂、 钠、 钾、 钙、 镁、 锰、 铜、 锌或铝， 或 有机盐， 尤其例如但不限于乙胺、 二乙胺、 乙二胺、 乙醇胺、 二乙醇胺、 精氨酸、 赖氨酸、 组氨 酸或哌嗪 ； 或用于形成酸加成盐的盐， 不论为有机盐， 尤其例如但不限于乙酸盐、 柠檬酸盐、 乳酸盐、 丙二酸盐、 顺丁烯二酸盐、 酒石酸盐、 反丁烯二酸盐、 苯甲酸盐、 天冬氨酸盐、 谷氨酸 盐、 琥珀酸盐、 油酸盐、 三氟乙酸盐、 草酸盐、 扑酸盐或葡糖酸盐， 或无机盐， 尤其例如但不限 于氯化物、 硫酸盐、 硼酸盐或碳酸盐。盐的性质非关键， 其先决条件是该盐为化妆品上或药 学上可接受的。 本发明肽的化妆品上或药学上可接受的盐可由现有技术中熟知的惯用方法 获得 [Berge S.M.Bioghley L.D. 和 Monkhouse D.C.(1977)“Pharmaceutical Salts( 药 用盐类 )” J.Pharm.Sci.66 ： 1-19]。
     本发明的另一方面涉及如本发明所述的通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物 和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 用于治疗和 / 或护理由肌肉收缩， 尤其是乙酰胆碱 受体聚簇导致的病况、 失调和 / 或疾病。
     在另一具体的方面， 本发明涉及如本发明所述的通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其 混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 用于抑制肌肉收缩， 尤其是用于抑制乙酰 胆碱受体聚簇。
     在另一具体的方面， 其中待治疗的由肌肉收缩导致的失调和 / 或疾病为张力障 碍， 而更具体地为局灶性肌张力障碍， 例如但不限于睑痉挛、 扭转性张力障碍、 颈张力障碍 或斜颈症、 喉张力障碍或痉挛性发音困难、 口下颌张力障碍、 肢体张力障碍诸如书写痉挛或 音乐家痉挛或脚部张力障碍、 夜间磨牙、 半侧颜面痉挛、 抽搐症和 / 或斜视 ； 节段性肌张力 障碍、 梅杰氏综合征、 多灶性张力障碍、 偏侧肌张力障碍、 多巴胺反应性肌张力障碍和濑川 张力障碍 (Segawa dystonia)。
     在另一具体的方面， 本发明涉及如本发明所述的通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其 混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 用于治疗和 / 或护理皮肤， 优选用于治疗和 / 或护理面部皮肤。
     在另一具体的方面， 该治疗和 / 或护理皮肤指治疗和 / 或阻止老化和 / 或光老化 的迹象。
     在另一具体的方面， 本发明涉及如本发明所述的通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其 混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 用于治疗和 / 或护理受皱纹和 / 或表情纹 影响的皮肤。
     制备方法
     本 发 明 的 肽、 其立体异构体或其化妆品上或药学上可接受的盐的合成可 根 据 现 有 技 术 中 已 知 的 惯 用 方 法 进 行， 诸 如 固 相 肽 合 成 法 [Stewart J.M. 和 Young J.D.(1984)“Solid Phase Peptide Synthesis( 固相肽合成 )， 第 2 版” Pierce Chemical Company， Rockford， Illinois ； Bodanzsky M. 和 Bodanzsky A.(1984)“The practice of Peptide Synthesis( 肽 合 成 实 践 )” Springer Verlag， New Cork ； Lloyd-Williams P.， Albericio F. 和 Giralt E.(1997) “Chemical Approaches to the Synthesis of Peptidesand Proteins( 合成肽和蛋白的化学方法 )” CRC， Boca Raton， FL， USA]、 溶液合成法、 固相合 成法与溶液合成法或酶催化合成法的组合 [Kullmann W.(1980) “Proteases as catalysts for enzymic syntheses of opioid peptides( 蛋白酶作为酶催化性合成阿片肽的催化 剂 )” J.Biol.Chem.255 ： 8234-8238]。 肽还可如下获得 ： 发酵经或未经遗传改造的菌株以生 产期望序列， 或控制动物或植物来源 ( 优选为植物来源 ) 的蛋白质水解， 以释放含有至少期 望序列的肽片段。
     例如， 获得本发明的式 (I) 的肽的方法包含下列步骤 ：
     - 将具有经保护的 N- 末端和自由 C- 末端的氨基酸与具有自由 N- 末端和经保护的 C- 末端的氨基酸偶合， 或结合至固态支撑物上 ；
     - 移除 N- 末端的保护基 ；
     - 重复偶合和移除 N- 末端的保护基的顺序， 直到获得期望肽序列 ；
     - 移除 C- 末端的保护基或从固态支撑物裂解出。
     优选地， 将 C- 末端与固态支撑物结合， 且该方法在固相上进行， 因此包括将具有 经保护的 N- 末端和自由 C- 末端的氨基酸与具有自由 N- 末端和与聚合物支撑物结合的 C- 末端的氨基酸偶合 ； 移除 N- 末端的保护基 ； 和依需要重复该顺序许多次， 以获得期望长 度的肽， 且最终从原始的聚合物支撑物裂解出所合成的肽。
     氨基酸侧链的官能团在整个合成期间以暂时性或永久性保护基适当地保护， 且可 在与从聚合物支撑物裂解肽的过程同时地或互不相关地脱保护。
     可选地， 固相合成法可藉由将肽偶合在聚合物支撑物上或事先与聚合物支撑物结 合的氨基酸上的收敛性策略来进行。收敛性合成策略广为本领域技术人员所知且说明于 Lloyd-Williams P.， Albericio F. 和 Giralt E. 于 “Convergent solid phase peptide synthesis( 收敛性固相肽合成 )” (1993)Tetrahedron 49 ： 11065-11133 中。
     该方法可包含使用现有技术中已知的标准方法和条件， 以不同的次序脱保护 N- 末端和 C- 末端和 / 或从聚合物支撑物裂解肽的另外阶段， 随后可修饰这些末端的官能 团。N- 末端和 C- 末端的任选修饰可对与聚合物支撑物结合的式 (I) 的肽进行或在肽已从 聚合物支撑物裂解出时进行。
     可选地， R1 可藉由本发明肽的 N- 末端与化合物 R1-J 的反应而引入， 其中 R1 如上所 述， 且 J 为离去基， 尤其例如但不限于甲苯磺酰基、 甲磺酰基和卤素基团 ； 经由在适当的碱 和溶剂存在下的亲核取代反应而引入， 其中具有不牵涉入 N-C 键形成作用的官能团的片段 经暂时性或永久性保护基适当地保护。
     任选地和 / 或另外， R2 基可藉由其中 R2 为 -OR3、 -NR3R4 或 -SR3 的化合物 HR2 与对 应于其中 R2 为 -OH 的式 (I) 的肽的互补片段的反应而引入， 该反应在适当的溶剂和碱诸如 N， N- 二异丙基乙胺 (DIEA) 或三乙胺或添加剂诸如 1- 羟基苯并三唑 (HOBt) 或 1- 羟基氮 杂苯并三唑 (HOAt) 和脱水剂尤其诸如碳二亚胺、 脲盐、 鏻盐或脒基盐 (amidinium salt) 的 存在下进行 ； 或藉由以例如亚硫酰氯事先形成酰基卤化物而引入， 藉此获得根据本发明的 通式 (I) 的肽， 其中具有不牵涉入 N-C 键形成作用的官能团的片段以暂时性或永久性保护 基适当地保护， 或可选地， 其他的 R2 基可藉由在从聚合物支撑物裂解肽的过程中同时并入 而引入。
     本领域技术人员可轻易了解， C- 末端和 N- 末端的脱保护 / 裂解步骤及其后续的衍生作用可根据现有技术中已知的方法以不同的顺序进行 [Smith M.B. 和 March J.(1999)“March’ s Advanced Organic Chemistry Reactions ， Mechanisms and Structure(March 高级有机化学反应、 机理和结构 )” ， 第 5 版， John Wiley & Sons， 2001]。
     术语″保护基″是指封闭官能性有机基团且可在受控制条件下移除的基团。 保护 基、 其相关反应性和维持其为惰性的条件为本领域技术人员所知。
     氨基的代表性保护基的实例尤其为酰胺， 诸如酰胺乙酸酯、 酰胺苯甲酸酯、 酰胺特 戊酸酯 ； 氨基甲酸酯， 诸如苯甲氧基羰基 (Cbz 或 Z)、 2- 氯苯甲基 (ClZ)、 对 - 硝基苯甲氧基 羰基 (pNZ)、 叔丁氧基羰基 (Boc)、 2， 2， 2- 三氯乙氧基羰基 (Troc)、 2-( 三甲硅烷基 ) 乙氧 基羰基 (Teoc)、 9- 芴甲氧基羰基 (Fmoc) 或烯丙氧基羰基 (Alloc)、 三苯甲基 (Trt)、 甲氧基 三苯甲基 (Mtt)、 2， 4- 二硝基苯基 (Dnp)、 N-[1-(4， 4- 二甲基 -2， 6- 二氧代亚环己 -1- 基 ) 乙基 (Dde)、 1-(4， 4- 二甲基 -2， 6- 二氧代 - 亚环己基 )-3- 甲基丁基 (ivDde)、 1-(1- 金刚 烷基 )-1- 甲基乙氧基羰基 (Adpoc)， 优选为 Boc 或 Fmoc。
     羧基的代表性保护基的实例尤其为酯， 诸如叔丁酯 (tBu)、 烯丙酯 (All)、 三苯基 甲酯 ( 三苯甲酯， Trt)、 环己酯 (cHx)、 苯甲酯 (Bzl)、 邻 - 硝基苯甲酯、 对 - 硝基苯甲酯、 对 - 甲氧基苯甲酯、 三甲硅烷基乙酯、 2- 苯基异丙酯、 芴甲酯 (Fm)、 4-(N-[1-(4， 4- 二甲 基 -2， 6- 二氧代亚环己基 )-3- 甲基丁基 ] 氨基 ) 苯甲酯 (Dmab) ； 本发明优选的保护基为 All、 tBu、 cHex、 Bzl 和 Trt 酯。
     三官能性氨基酸的侧链可在合成过程期间以与 N- 末端和 C- 末端的保护基互不相 关的暂时性或永久性保护基保护。
     精 氨 酸 侧 链 的 胍 基 尤 其 可 以 硝 基、 烯 丙 氧 基 羰 基 (Alloc)、 对 - 甲苯磺酰基 (tosyl， Tos)、 2， 2， 5， 7， 8- 五甲基色满 -6- 磺酰基 (Pmc)、 2， 2， 4， 6， 7- 五甲基二氢苯并呋 喃 -5- 磺酰基 (Pbf) 或 4- 甲氧基 -2， 3， 6- 三甲基苯磺酰基 (Mtr) 保护。酪氨酸侧链的羟 基尤其可以 2- 溴苯甲氧基羰基 (2-BrZ)、 叔丁基 (tBu)、 烯丙基 (All)、 苯甲基 (Bzl) 或 2， 6- 二氯苯甲基 (2， 6-diClZ) 保护。可使用尤其下列基团保护赖氨酸侧链的氨基 ： 酰胺， 诸 如酰胺乙酸酯、 酰胺苯甲酸酯、 酰胺特戊酸酯 ； 氨基甲酸酯， 诸如苯甲氧基羰基 (Cbz 或 Z)、 2- 氯苯甲基 (ClZ)、 对 - 硝基苯甲氧基羰基 (pNZ)、 叔丁氧基羰基 (Boc)、 2， 2， 2- 三氯乙氧 基羰基 (Troc)、 2-( 三甲硅烷基 ) 乙氧基羰基 (Teoc)、 9- 芴甲氧基羰基 (Fmoc) 或烯丙氧基 羰基 (Alloc)、 三苯甲基 (Trt)、 甲氧基三苯甲基 (Mtt)、 2， 4- 二硝基苯基 (Dnp)、 N-[1-(4， 4- 二甲基 -2， 6- 二氧代亚环己 -1- 基 ) 乙基 (Dde)、 1-(4， 4- 二甲基 -2， 6- 二氧代 - 亚环 己基 )-3- 甲基丁基 (ivDde) 或 1-(1- 金刚烷基 )-1- 甲基乙氧基羰基 (Adpoc)。可使用 尤其下列基团保护天冬氨酸和谷氨酸侧链的羧基 ： 酯， 诸如叔丁酯 (tBu)、 烯丙酯 (All)、 三 苯基甲酯 ( 三苯甲酯， Trt)、 环己酯 (cHx)、 苯甲酯 (Bzl)、 邻 - 硝基苯甲酯、 对 - 硝基苯甲 酯、 对 - 甲氧基苯甲酯、 三甲硅烷基乙酯、 2- 苯基异丙酯、 芴甲酯 (Fm)、 4-(N-[1-(4， 4- 二甲 基 -2， 6- 二氧代亚环己基 )-3- 甲基丁基 ] 氨基 ) 苯甲酯 (Dmab)。甲硫氨酸侧链以亚砜保 护或未经保护地使用。
     在优选的实施方案中， 所使用的保护基策略为其中氨基以 Boc 保护， 羧基以 Bzl、 cHx 或 All 保护， 精氨酸侧链以 Tos 保护， 赖氨酸侧链以 ClZ、 Fmoc 或 Alloc 保护， 天冬氨酸 和谷氨酸侧链以 Bzl、 cHx 或 All 保护， 酪氨酸侧链以 2-BrZ 或 Bzl 保护和使用未经保护的 甲硫氨酸侧链的策略。在另一优选的实施方案中， 所使用的保护基策略为其中氨基以 Fmoc 保护， 羧基以 tBu、 All 或 Trt 保护， 精氨酸侧链以 Pbf 或 Pmc 保护， 赖氨酸侧链以 Boc 或 Mtt 保护， 天冬 氨酸和谷氨酸侧链以 tBu 或 All 保护， 酪氨酸侧链以 tBu 保护和使用未经保护的甲硫氨酸 侧链的策略。
     这些与其他另外的保护基、 及其引入和移除的实例可见于文献中 [Greene T.W. 和 Wuts P.G.M.， (1999)“Protective groups in Organic Synthesis( 有机合成中的保护 基 )” John Wiley & Sons， New York ； Atherton B. 和 Sheppard R.C.(1989)“Solid Phase Peptide Synthesis ： A practical approach( 固 相 肽 合 成 ： 实 用 方 法 ) ″ IRL Oxford University Press]。术语″保护基″也包括在固相合成法中所使用的聚合物支撑物。
     当合成全部或部分以固相发生时， 则在本发明的方法中所使用的可能的固态支撑 物包含聚苯乙烯支撑物、 接枝至聚苯乙烯的聚乙二醇和类似物， 例如但不限于对甲基二苯 甲胺 (MBHA) 树脂 [Matsueda G.R. 和 Stewart J.M.(1981)“A p-methylbenzhydrylamine resin for improved solid phase synthesis of peptide amides( 用于肽酰胺类改进 的固相合成的对 - 甲基二苯甲胺树脂 )” Peptides 2 ： 45-50]、 2- 氯三苯甲基树脂 [Barlos K.， Gatos D.， Kallitsis J.Papaphotiu G.， Sotiriu P.， Wenqing Y. 和 W. (1989) “Darstellung geschützter Peptid-Fragmente unter Einsatz substituierter T riphenylmethyl-Harze” Tetrahedron Lett.30 ： 3943-3946 ； Barlos K.， Gatos D.， Kapolos S.， Papaphotiu G.， W. 和 Wenqing Y.(1989)“Veresterung von partiell geschützten Peptid-Fragmenten mit Harzen.Einsatz von 2-Chlorotritylchlorid zur Synthese von Leul-castrin I” Tetrahedron Lett.30 ： 3947-3951]、 TentaGel 树脂 (Rapp Polymere GmbH)、 ChemMatrix 树脂 (Matrix Innovation， Inc) 和类似物， 其可包括或可 不包括不稳定的接头， 诸如 5-(4- 氨甲基 -3， 5- 二甲氧基苯氧基 )- 戊酸 (PAL)[Albericio F.， Kneib-Cordonier N.， Biancalana S.， Gera L.， Masada R.I.， Hudson D. 和 Barany G.(1990) “Preparation and application of the 5-(4-(9-fluorenylmethyloxycarbony l)aminomethyl-3， 5-dimethoxyphenoxy)valeric acid(PAL)handle for the solid-phase synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions( 用于在温和条件 下操纵 C 端肽酰胺类固相合成的 5-(4-(9- 芴基甲基氧羰基 ) 氨甲基 -3， 5- 二甲氧基苯氧 基 ) 戊酸 (PAL) 的制备和应用 )” J.Org.Chem.55 ： 37303743]、 2-[4- 氨甲基 -(2， 4- 二甲 氧基苯基 )] 苯氧基乙酸 (AM)[Rink H.(1987)“Solid-phase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester-resin( 利 用 三 烷 氧 基 - 二苯基 - 甲基酯树脂固相合成受保护的肽片段 )” Tetrahedron Lett.28 ： 3787-3790]、 Wang[Wang S.S.(1973) “p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbony lhydrazide Resin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments( 用于 固相合成受保护的肽片段的对烷氧基苄醇树脂和对烷氧基苄氧羰基肼树脂 )” J.Am.Chem. Soc.95 ： 1328-1333] 和类似物， 允许同时将肽脱保护和从聚合物支撑物裂解肽。
     化妆用组合物或药物组合物
     可以在哺乳类优选为人类体内的作用位置产生肽接触的任何方式来施用本发明 的肽以抑制 AChR 聚簇， 且以含有该肽的组合物形式施用。
     在这方面， 本发明的另一方面为化妆用组合物或药物组合物， 其包含至少一种通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐与至少一种 化妆品上或药学上可接受的佐剂。这些组合物可以本领域技术人员已知的惯用方法制备 “Harry’ [ s Cosmeticology(Harry 化妆品学 )” ， 第 8 版 (2000)Rieger M.M.， 编著， New York Chemical Pub.， NY， US ； ” Remington ： The Science and Practice of Pharmacy( 雷明顿 药学理论和实践 )” ， 第 20 版 (2003)Genaro A.R. 编著， Lippincott Williams & Wilkins， Philadelphia， US]。
     本发明的肽根据其序列的性质或在 N- 末端和 / 或 C- 末端上任何可能的修饰而在 水中具有不同的溶解度。 因此， 本发明的肽可以水溶液掺入组合物中， 而不溶于水中的那些 肽可溶解在化妆品上或药学上可接受的惯用溶剂中， 例如但不限于乙醇、 丙醇、 异丙醇、 丙 二醇、 甘油、 丁二醇或聚乙二醇或其任何组合。
     应施用本发明肽的化妆品上或药学上有效量以及其剂量取决于许多因素， 包括患 者的年龄 ； 状况 ； 待治疗、 护理或预防的病况、 失调或疾病的性质或严重性 ； 施用途径和频 率和尤其是待使用的肽的性质。
     应了解″化妆品上或药学上有效量″是指无毒性但足以提供所需效果的本发明 的肽或肽类的量。 本发明的肽以实现所需效果的化妆品上或药学上有效浓度用于本发明的 化妆用组合物或药物组合物中 ； 在优选形式中， 以组合物总重量计介于 0.00000001％ ( 重 量计 ) 与 20％ ( 重量计 ) 之间， 优选地介于 0.000001％ ( 重量计 ) 与 20％ ( 重量计 ) 之间， 更优选地介于 0.0001％ ( 重量计 ) 与 10％ ( 重量计 ) 之间， 且甚至更优选地介于 0.0001％ ( 重量计 ) 与 5％ ( 重量计 ) 之间。
     本发明的肽还可掺入化妆品或药物递送系统和 / 或持续释放系统中。
     术语″递送系统″是关于与本发明的肽一起施用的稀释剂、 佐剂、 赋形剂或载 体。这些化妆用或药学载体可为液体， 诸如水、 油或表面活性剂， 包括石油、 动物、 植物或合 成来源的， 例如但不限于花生油、 大豆油、 矿物油、 芝麻油、 蓖麻油、 聚山梨醇酯、 山梨醇酐 酯、 醚硫酸酯、 硫酸酯、 甜菜碱、 糖苷、 麦芽糖苷、 脂肪醇、 壬苯聚醇 (nonoxynol)、 泊洛沙姆 (poloxamer)、 聚氧乙烯、 聚乙二醇、 右旋糖、 甘油、 毛地黄皂苷和类似物。在 E.W.Martin 的 “Remington’ s Pharmaceutical Sciences( 雷明顿药学理论和实践 )” 中说明作为适当载 体的稀释剂、 佐剂或赋形剂。
     术语″持续释放″以惯用意义使用， 是关于在一段时间提供逐渐释放化合物的此 化合物释放系统， 且优选地在整个期间具有相对恒定的化合物释放水平， 虽然未必一定。
     递送或持续释放系统的实例为脂质体、 混合脂质体、 油质体、 类脂囊泡 (niosome)、 醇质体 (ethosome)、 毫米微粒、 微粒、 纳米微粒和固态脂质纳米微粒、 纳米构造的脂质载体、 海绵、 环糊精、 囊泡、 胶束、 表面活性剂混合胶束、 表面活性剂 - 磷脂混合胶束、 毫米微球、 微 球和纳米微球、 脂质微球 (liposphere)、 毫米微胶囊 (millicapsule)、 微胶囊和纳米微胶 囊， 以及微乳剂和纳米乳剂， 可添加这些以实现更大的活性成分渗透和 / 或改良其药代动 力学与药效学性质。优选的递送或持续释放系统为脂质体、 表面活性剂 - 磷脂混合胶束和 微乳剂， 更优选为具有反胶束的内部结构的油包水型微乳剂。
     持续释放系统可以现有技术中已知的方法制备， 且含有该系统的组合物可以例如 局部或透皮施用， 包括粘性贴片、 非粘性贴片、 闭合型 (occlusive) 贴片和微电贴片， 或以 全身性施用， 例如但不限于口服或肠胃外， 包括鼻腔、 直肠或皮下植入或注射， 或直接植入或注射至特定的身体部位， 且优选地应释放相对恒定量的本发明的肽。持续释放系统中所 含的肽量取决于例如待施用组合物的位置、 本发明肽的释放动力学和持续时间， 以及待治 疗、 护理或预防的病况、 失调和 / 或疾病的性质。
     本发明的肽还可吸附在固态有机聚合物或固态无机支撑物上， 例如但不限于滑 石、 膨润土、 硅石、 淀粉或麦芽糊精。
     含有本发明肽的组合物还可掺入与皮肤直接接触的织物、 非织造织物和医疗装置 中， 从而释放本发明的肽， 不论经由与织物、 非织造织物或医疗装置的结合系统的生物降 解， 或经由织物、 非织造织物或医疗装置与身体之间的摩擦， 由于身体湿度、 皮肤的 pH 或体 温而释放。此外， 织物和非织造织物可用于制造与身体直接接触的衣物。优选地， 含有本发 明肽的织物、 非织造织物和医疗装置用于治疗和 / 或护理由 AChR 聚簇导致， 尤其是肌肉收 缩导致的病况、 失调和 / 或疾病。
     为 上 述 的 递 送 系 统 和 / 或 持 续 释 放 系 统 的 织 物、 非 织 造 织 物、 衣 物、 医疗装 置 和 用 于 固 定 肽 于 其 上 的 装 置 的 实 例 可 见 于 文 献 中 且 为 现 有 技 术 中 所 知 [Schaab C.K.(1986)“Impregnating Fabrics With Microcapsules( 用微胶囊浸渍织物 )” ， HAPPI May 1986 ； Nelson G.(2002)“Application of microencapsulation in textiles( 微 胶囊化在纺织品中的应用 )” Int.J.Pharm.242 ： 55-62 ； ” Biofunctional Textiles and the Skin( 生物功能的纺织品与皮肤 )” (2006)Curr.Probl.Dermatol. 第 33 卷， Hipler U.C. 和 Elsner P.， 编 著 .S.Karger AG， Basel， Switzerland ； Malcom R.K.， McCullagh S.D.， Woolfson A.D.， Gorman S.P.， Jones D.S. 和 Cuddy J.(2004)“Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial( 模式抗细菌药从新型自润滑硅酮生物材料的控制释放 )” J.Cont.Release 97 ： 313-320]。 优选的织物、 非织造织物、 衣物和医疗装置为绷带 (bandage)、 纱布 (gauze)、 T 恤 (t-shirt)、 袜 子 (sock)、 裤 袜 (tight)、 内 衣 (underwear)、 腰 带 (girdle)、 手套 (glove)、 尿布 (diaper)、 卫生巾 (sanitary napkin)、 敷料 (dressing)、 床罩 (bedspread)、 擦拭物 (wipe)、 粘性贴片 (adhesive patch)、 非粘性贴片 (non-adhesive patch)、 闭合型贴 片 (occlusive patch)、 微电贴片 (microelectric patch) 和 / 或面罩 (face mask)。
     含有本发明的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的 盐的化妆用组合物或药物组合物可以不同类型的局部或透皮施用的组合物使用， 任选地 包括用于配制所需施用形式必要的化妆品上或药学上可接受的赋形剂 [Faulíi Trillo C.(1993) 的” Tratado de Farmacia Galénica” ， Luzán 5， S.A.Ediciones， Madrid]。
     局部或透皮施用的组合物可制成任何固态、 液态或半固态制剂， 例如但不限于 乳霜 (cream)、 复合乳剂 (multiple emulsion)， 例如但不限于水包油型和 / 或水包硅酮 型乳剂、 油包水型和 / 或硅酮包水型乳剂、 水 / 油 / 水型或水 / 硅酮 / 水型乳剂和油 / 水 / 油型或硅酮 / 水 / 硅酮型乳剂、 无水组合物 (anhydrous composition)、 水性分散 液 (aqueous dispersion)、 油 (oil)、 奶 状 物 (milk)、 香 脂 (balsam)、 泡 沫 (foam)、 洗剂 (lotion)、 凝胶 (gel)、 乳凝胶 (cream gel)、 水醇溶液 (hydroalcoholic solution)、 水二醇 (hydroglycolic) 溶液、 水凝胶 (hydrogel)、 搽剂 (liniment)、 浆液 (sera)、 皂 (soap)、 洗发 剂 (shampoo)、 润发乳 (conditioner)、 浆液 (serum)、 多糖膜 (polysaccharide film)、 软膏 (ointment)、 摩丝 (mousse)、 润发油 (pomade)、 粉剂 (powder)、 棒剂 (bar)、 笔剂 (pencil)和喷雾剂 (spray) 或气雾剂 (aerosol)( 喷雾剂 )， 包括免冲洗型和冲洗型制剂。这些局部 或透皮施用的制剂可使用本领域技术人员已知的技术掺入不同类型的固态附件中， 例如但 不限于绷带、 纱布、 T 恤、 袜子、 裤袜、 内衣、 腰带、 手套、 尿布、 卫生巾、 敷料、 床罩、 擦拭物、 粘 性贴片、 非粘性贴片、 闭合型贴片、 微电贴片或面罩 ； 或可将这些制剂掺入不同的化妆产品 中， 尤其诸如粉底 (make-up foundation) 诸如液态粉底和粉饼、 卸妆液 (make-up removing lotion)、 卸妆乳 (make-up removing milk)、 眼部遮瑕膏 (under-eye concealer)、 眼影 (eye shadow)、 唇膏 (lipstick)、 护唇膏 (lip protector)、 唇彩 (lip gloss) 和唇粉 (lip powder)。
     本发明的化妆用组合物和药物组合物可包括增加本发明的肽经皮吸收的剂， 尤其 例如但不限于二甲亚砜、 二甲基乙酰胺、 二甲基甲酰胺、 表面活性剂、 氮酮 (1- 十二烷基氮 杂环庚烷 -2- 酮 )、 醇、 尿素、 乙氧基二甘醇、 丙酮、 丙二醇或聚乙二醇。此外， 本发明的化妆 用组合物或药物组合物可以离子电渗、 超声波导入、 电穿孔、 微电贴片、 机械性压力、 渗透压 梯度、 闭塞治疗 (occlusive cure)、 微注射、 借助压力的无针注射诸如借助氧压力注射或其 任何组合的方式施用待治疗的局部区域， 以实现本发明肽的更大渗透。施用区域由待治疗 和 / 或护理的病况、 失调和 / 或疾病的性质而决定。
     此外， 含有本发明的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接 受的盐的化妆用组合物或药物组合物可以不同类型的口服施用制剂使用， 优选以口服化妆 品或药物形式， 例如但不限于胶囊， 包括明胶胶囊、 软胶囊、 硬胶囊、 片剂包括糖衣片剂、 粉 末剂、 颗粒剂 (granule)、 咀嚼胶 (chewing gum)、 溶液、 悬浮液、 乳剂、 糖浆、 多糖膜、 冻胶 (jelly) 或明胶， 和本领域技术人员已知的任何其他形式。尤其是， 本发明的肽可掺入任何 形式的功能性食品或强化食品中， 例如但不限于膳食棒或压制粉末或未压制粉末。这些粉 末可溶于水、 苏打水、 乳制品、 大豆衍生物中， 或可掺入膳食棒中。 本发明的肽可以常用于口 服组合物或食品补充物的赋形剂和佐剂配制， 例如但不限于食品工业中常用的脂肪成分、 水性成分、 保湿剂、 防腐剂、 调质剂、 调味剂、 香料、 抗氧化剂和着色剂。
     含有本发明的肽、 其立体异构体、 其混合物或其化妆品上和 / 或药学上可接受的 盐的化妆用组合物或药物组合物还可以局部或透皮途径， 以及任何其他适当的途径施用， 例如口服或肠胃外途径， 为这些途径的组合物包括配制所需的施用形式必要的药学上可接 受的赋形剂。 在本发明的上下文中， 术语″肠胃外″包括鼻腔、 耳廓、 眼睛、 直肠、 尿道、 阴道 途径、 皮下、 皮内、 血管内注射诸如静脉内、 肌肉内、 眼球内、 玻璃体内、 角膜内、 脊椎内、 脊髓 内插钉、 颅内、 宫颈内、 脑内、 脑脊膜内、 关节内、 肝脏内、 胸腔内、 气管内、 鞘内和腹膜内， 及 任何其他类似的注射或输注技术。 施用活性成分的不同的药物形式和获得这些形式必要的 赋形剂的综述可见于例如 “Tratado de Farmacia Galénica” C.Faulíi Trillo， 1993， Luzán 5， S.A.Ediciones， Madrid 中。
     在本发明所述的化妆用组合物或药物组合物中所含有的化妆品上或药学上可 接受的佐剂包括用于治疗和 / 或护理皮肤的组合物中常使用的另外成分， 尤其例如但不 限于其他抑制 AChR 聚簇的剂、 其他抑制肌肉收缩的剂、 抗胆碱能剂、 弹性蛋白酶抑制剂、 基质金属蛋白酶抑制剂、 黑色素合成刺激剂和抑制剂、 增白剂或脱色剂、 色素原形成剂 (pro-pigmenting agent)、 仿晒剂、 抗老化剂、 NO- 合酶抑制剂、 5α- 还原酶抑制剂、 赖氨 酰基 - 和 / 或脯氨酰基 - 羟化酶抑制剂、 抗氧化剂、 自由基清除剂和 / 或抗空气污染剂、 反应性羰基物类清除剂、 抗糖化剂、 抗组织胺剂、 止吐剂、 抗病毒剂、 抗寄生虫剂、 乳化剂、 润肤 剂、 有机溶剂、 液体推进剂、 皮肤调理剂， 诸如保湿剂、 保湿物质、 α 羟酸、 β 羟酸、 湿润剂、 表皮水解酶、 维生素、 颜料或着色剂、 染料、 胶化聚合物、 增厚剂、 表面活性剂、 软化剂、 防皱 剂、 能够减轻或治疗眼袋的剂、 去角质剂、 抗微生物剂、 抗真菌剂、 抑真菌剂、 杀细菌剂、 抑细 菌剂、 刺激真皮或表皮大分子合成和 / 或能够抑制或阻止其降解的剂， 诸如胶原合成刺激 剂、 弹性蛋白合成刺激剂、 核心蛋白聚糖 (decorin) 合成刺激剂、 层粘连蛋白 (laminin) 合 成刺激剂、 防御素 (defensin) 合成刺激剂、 伴侣蛋白 (chaperone) 合成刺激剂、 水通道蛋 白 (aquaporin) 合成刺激剂、 透明质酸合成刺激剂、 纤连蛋白 (fibronectin) 合成刺激剂、 乙酰化酶 (sirtuin) 合成刺激剂、 刺激脂质与角质层的成分 ( 神经酰胺、 脂肪酸等 ) 合成 的剂、 胶原降解抑制剂、 其他抑制弹性蛋白降解的剂、 丝氨酸蛋白酶诸如组织蛋白酶 G 抑制 剂、 成纤维细胞增殖刺激剂、 角质细胞增殖刺激剂、 脂肪细胞增殖刺激剂、 黑色素细胞增殖 刺激剂、 角质细胞分化刺激剂、 脂肪细胞分化刺激剂、 乙酰胆碱酯酶抑制剂、 皮肤松弛剂、 葡 萄糖胺聚糖合成刺激剂、 抗角化过度剂、 粉刺溶解剂 (comedolytic agent)、 抗牛皮癣剂、 DNA 修复剂、 DNA 防护剂、 稳定剂、 止痒剂、 敏感性皮肤治疗和 / 或护理剂、 皮肤紧实剂、 除妊 娠纹剂、 收敛剂、 皮脂产生调节剂、 解脂剂或脂肪分解刺激剂、 抗脂肪小丘剂、 止汗剂、 愈合 刺激剂、 愈合辅助剂、 表皮再生刺激剂、 表皮再生辅助剂、 细胞因子生长因子、 镇定剂、 消炎 剂和 / 或止痛剂、 麻醉剂、 作用于毛细血管循环和 / 或微循环的剂、 血管生成刺激剂、 血管 通透性抑制剂、 静脉张力剂 (venotonic agent)、 作用于细胞代谢的剂、 改善真皮 - 表皮接 合的剂、 毛发生长诱导剂、 毛发生长抑制剂或延缓剂、 防腐剂、 香料、 螯合剂、 植物提取物、 精 油、 海洋提取物、 从生物发酵过程获得的剂、 无机盐、 细胞提取物与防晒剂 ( 抗紫外线 A 和 / 或 B 的活性有机或无机光防护剂 )， 条件是这些另外成分与组合物的其他成分且尤其与本 发明组合物中所含有的通式 (I) 的肽在物理上与化学上相容。此外， 这些另外成分的性质 不应该以不可接受的方式改变本发明肽的益处。这些另外成分的性质可为合成或天然的， 诸如植物提取物， 或从生物技术过程获得， 或从合成过程与生物技术过程的组合获得。 另外 的实例可见于 CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook( 国际 化妆品原料字典 & 手册 )， 第 12 版 (2008)。在本发明的上下文中， 应了解生物技术过程为 在生物体或其部分中产生活性成分或其部分的任何过程。
     本发明的另一方面涉及含有化妆品上或药学上有效量的至少一种根据通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆用组合物或 药物组合物， 且该组合物还含有化妆品上或药学上有效量的至少一种为防皱剂和 / 或抗 老化剂的提取物， 尤其例如但不限于葡萄 (Vitis vinifera)、 狗蔷薇 (Rosa canina)、 姜 黄 (Curcuma longa)、 香根鸢尾 (Iris pallida)、 可可 (Theobroma cacao)、 银杏 (Ginkgo biloba)、 火 绒 草 (Leontopodium Alpinum) 或 盐 藻 (Dunaliella salina) 的 提 取 物 ； 或 至少一种为防皱剂和 / 或抗老化剂的合成化合物或生物发酵产物， 尤其例如但不限于 由 Sederma 销 售 的 Matrixyl [INCI ： 棕 榈 酰 基 五 肽 -4]、 Matrixyl 3000 [INCI ： 棕榈 TM 酰基四肽 -7， 棕榈酰基寡肽 ]、 Essenskin [INCI ： 羟基甲硫氨酸钙 ]、 Renovag[INCI ： 替 普 瑞 酮 (Teprenone)] 或 Dermaxyl [INCI ： 棕 榈 酰 寡 肽 ]， 由 Pentapharm/DSM 销 售 的 Vialox [INCI ： 五肽 -3]、 Syn -Ake [INCI ： 二肽二氨基丁酰基苯甲基酰胺二乙酸酯 ]、 Syn -Coll[INCI ： 棕榈酰基三肽 -5]、 Phytaluronate[INCI ： 角豆 (Ceratonia siliqua)胶 ] 或 Preregen [INCI ： 野 生 大 豆 (glycine soya)( 大 豆 ) 蛋 白 质， 氧 化 还 原 酶 ]， TM 由 Laboratoires Sérobiologiques/Cognis 销 售 的 Myoxinol [INCI ： 水解的黄秋葵 TM (Hibiscus Esculentus) 提取物 ]、 Syniorage [INCI ： 乙酰基四肽 -11]、 DermicanTM[INCI ： 乙酰基四肽 -9] 或 DN-AGETMLS[INCI ： 翅荚决明 (Cassia Alata) 叶提取物 ]， 由 Exsymol 销 售的 Algisum C [INCI ： 甲基硅烷醇甘露糖醛酸酯 ] 或 Hydroxyprolisilane CN [INCI ： 甲基硅烷醇羟基脯氨酸天冬氨酸酯 ]， Argireline [INCI ： 乙酰基六肽 -8]、 SNAP-7[INCI ： 乙酰基七肽 -4]、 SNAP-8[INCI ： 乙酰基八肽 -3]、 Leuphasyl [INCI ： 五肽 -18]、 Aldenine TM [INCI ： 水 解 小 麦 蛋 白 质、 水 解 大 豆 蛋 白 质、 三 肽 -1]、 Preventhelia [INCI ： 二氨基丙 TM TM 酰基三肽 -33]、 Decorinyl [INCI ： 三肽 -10 瓜氨酸 ]、 Trylagen [INCI ： 假交替单胞菌 (Pseudoalteromonas) 发酵提取物、 水解小麦蛋白质、 水解大豆蛋白质、 三肽 -10 瓜氨酸、 三肽 -1]、 Eyeseryl [INCI ： 乙酰基四肽 -5]、 肽 AC29[INCI ： 乙酰基三肽 -30 瓜氨酸 ]、 Lipochroman-6[INCI ： 二甲基甲氧基色原烷醇 ]、 ChromabrightTM[INCI ： 二甲基甲氧基色满 基棕榈酸酯 ]、 Antarcticine [INCI ： 假交替单胞菌发酵提取物 ]、 VilasteneTM[INCI ： 盐 酸赖氨酸、 卵磷脂、 三肽 -10 瓜氨酸 ]、 由销售的乙酰基 - 精氨酰基 - 苯基甘氨酰基 - 色氨 酰基 - 苯基甘氨酸、 乙酰基 - 精氨酰基 - 苯基甘氨酰基 - 缬氨酰基 - 甘氨酸或乙酰基 - 精 氨酰基 - 苯基甘氨酰基 - 缬氨酰基 - 苯基甘氨酸， 由 Institut Europeen de Biologie Cellulaire 销 售 的 Kollaren [INCI ： 三 肽 -1、 右 旋 糖 酐 ]， 由 Vincience/ISP 销 售 的 TM Collaxyl IS[INCI ： 六 肽 -9]、 Laminixyl IS [INCI ： 七 肽 ]、 OrsirtineTMGL[INCI ： 水稻 TM (Oryza Sativa)( 稻 ) 提 取 物 ]、 D’ Orientine IS[INCI ： 海 枣 (Phoenix Dactylifera) TM ( 枣 ) 籽提取物 ]、 Phytoquintescine [INCI ： 单谷小麦 (Einkorn)( 一粒小麦 (Triticum TM Monococcum)) 提取物 ] 或 Quintescine IS[INCI ： 二肽 -4]， 由 Infinitec Activos 销售 的 BONT-L- 肽 [INCI ： 棕榈酰基六肽 -19]， 由 Seppic 销售的 DeepalineTMPVB[INCI ： 棕榈酰 基水解小麦蛋白质 ] 或 Sepilift DPHP[INCI ： 二棕榈酰基羟基脯氨酸 ]， 由 Gattefossé 销 售的 Gatuline Expression[INCI ： 印度金钮扣 (Acmella oleracea) 提取物 ]、 Gatuline In-Tense[INCI ： 金 钮 扣 (Spilanthes Acmella) 花 提 取 物 ] 或 Gatuline Age Defense 2[INCI ： 胡 桃 (Juglans Regia)( 胡 桃 (Walnut)) 籽 提 取 物 ]， 由 Biotechmarine 销 售 TM 的 Thalassine [INCI ： 藻 类 提 取 物 ]， 由 Atrium Innovations/Unipex Group 销 售 的 TM ChroNOline [INCI ： 己酰基 (caprooyl) 四肽 -3] 或 Thymulen-4[INCI ： 乙酰基四肽 -2]， 由 Coltica 销售的 EquiStat[INCI ： 苹果 (Pyrus Malus) 果提取物、 野生大豆 (Glycine Soja) 籽提取物 ] 或 Juvenesce[INCI ： 乙氧基二甘醇和辛酸甘油三酯、 视黄醇、 熊果酸、 维生素 K1、 伊洛马司他 (Ilomastat)]， 由 Mibelle Biochemistry 销售的 Ameliox[INCI ： 肌肽， 生育酚， 水飞蓟 (Silybum marianum) 果提取物 ] 或 PhytoCellTec Malus Domestica[INCI ： 苹果 (Malus Domestica) 果细胞培养物 ]， 由 Silab 销售的 Bioxilift[INCI ： 茴芹 (Pimpinella Anisum) 提取物 ] 或 SMS Anti-Wrinkle [INCI ： 番荔枝 (Annona Squamosa) 籽提取物 ]， 2+ Ca 通道拮抗剂， 例如但不限于阿尔维林 (alverine)、 锰盐或镁盐、 某些仲胺或叔胺、 视黄 醇和其衍生物、 艾地苯醌 (idebenone) 和其衍生物、 辅酶 Q10 和其衍生物、 乳香酸和其衍生 物、 GHK 和其衍生物和 / 或盐、 肌肽和其衍生物、 DNA 修复酶， 例如但不限于光解酶或 T4 核酸 内切酶 V， 或氯化物通道拮抗剂。
     本发明的另外方面涉及包含化妆品上或药学上有效量的至少一种根据通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆用组合物或药 物组合物， 且该组合物另外包含药学上有效量的至少一种为抑制 AChR 聚簇的剂和 / 或肌肉 收缩抑制剂和 / 或抗胆碱能剂的提取物， 尤其例如但不限于颠茄 (Atropa belladonna)、 莨 菪 (Hyoscyamus niger)、 药用茄参 (Mandragora officinarum)、 美洲管箭 (Chondodendron tomentosum)、 木曼陀罗属 (Brugmansia) 植物或曼陀罗属 (Datura) 的提取物， 和 / 或至 少一种为抑制 AChR 聚簇的剂和 / 或肌肉收缩抑制剂和 / 或抗胆碱能剂的合成化合物或 生物发酵产物， 尤其例如但不限于肉毒杆菌毒素、 SNAP-25 蛋白质所衍生的肽、 氯苯胺丁 酸、 甲 基 多 巴 肼 (carbidopa)、 左 旋 多 巴 (levodopa)、 溴 麦 角 环 肽 (bromocriptine)、 氯 苯 甘 油 醚 (chlorphenesin)、 氯 唑 沙 宗 (chlorzoxazone)、 多 奈 哌 齐 (donepezil)、 美芬 诺 酮 (mephenoxalone)、 利 血 平 (reserpine)、 丁 苯 那 嗪 (tetrabenazine)、 丹 曲 洛 林、 硫 秋 水 仙 苷 (thiocolchicoside)、 替 扎 尼 定、 可 乐 宁、 丙 环 定 (procyclidine)、 格隆溴铵 (glycopyrrolate)、 阿托品 (atropine)、 莨菪碱 (hyoscyamine)、 苯扎托品 (benztropine)、 东 莨 菪 碱 (scopolamine)、 普 鲁 米 近 (promethazine)、 苯 海 拉 明 (diphenhydramine)、 乘 晕 宁 (dimenhydrinate)、 双 环 胺 (dicyclomine)、 环 苯 扎 珠 (cyclobenzaprine)、 邻 甲 苯 海 拉 明 (orphenadrine)、 黄 酮 哌 酯 (flavoxate)、 环 戊 醇 胺 酯 (cyclopentolate)、 异 丙 托 铵 (ipratropium)、奥 昔 布 宁 (oxybutynin)、哌 仑 西 平 (pirenzepine)、噻 托 溴 铵 (tiotropium)、苯 海 索 (trihexyphenidyl)、托 特 罗 定 (tolterodine)、托 吡 卡 胺 (tropicamide)、索 非 那 新 (solifenacin)、达 非 那 新 (darifenacin)、美 贝 维 林 (mebeverine)、咪 噻 芬 (trimethaphan)、阿 曲 库 铵 (atracurium)、顺 阿 曲 库 胺 (cisatracurium)、多 沙 氯 铵 (doxacurium)、法 扎 溴 铵 (fazadinium)、氯 二 甲 箭 毒 (metocurine)、 美 维 库 铵 (mivacurium)、 双 哌 雄 双 酯 (pancuronium)、 哌库溴铵 (pipecuronium)、 雷 帕 库 铵 (rapacuronium)、 筒 箭 毒 碱 (tubocurarine)、 二甲基筒箭 毒 碱、 罗 库 溴 铵 (rocuronium)、 维 库 溴 铵 (vecuronium)、 琥 珀 胆 碱 (suxamethonium)、 18- 甲 氧 基 狗 牙 花 碱 (18-methoxylcoronaridine)、 肌 安 宁 (carisoprodol)、 非巴氨 酯 (febarbamate)、 甲 丙 氨 酯 (meprobamate)、 美 索 巴 莫 (metocarbamol)、 苯丙氨酯 (phenprobamate)、 泰巴氨酯 (tibamate)、 抗痉挛剂， 诸如左乙拉西坦 (levetiracetam)、 司 替 戊 醇 (stiripentol)、 苯 巴 比 妥 (phenobarbital)、 甲 基 苯 巴 比 妥、 戊巴比妥 (pentobarbital)、 甲 基 巴 比 妥 (metharbital)、 巴 比 沙 隆 (barbexaclone)、 脱氧苯比妥 (primidone)、 卡 巴 西 平 (carbamazepine)、 奥 卡 西 平 (oxcarbazepine)、 苯 并 二 氮 卓， 例 如 但 不 限 于 氯 硝 西 泮 (clonazepam)、 氯 噁 唑 仑 (cloxazolam)、 氯 氮 卓 (clorazepate)、 苯 甲 二 氮 卓 (diazepam)、 氟 托 西 泮 (flutoprazepam)、 劳 拉 西 泮 (lorazepam)、 咪达唑 仑 (midazolam)、 硝西泮 (nitrazepam)、 甲硝西泮 (nimetazepam)、 溴氯苯基二氢苯并二 氮 杂 卓 酮 (phenazepam)、 替 马 西 泮 (tempazepam)、 四 氢 西 泮 (tetrazepam) 或 氧 异 安 定 (clobazam)。
     本发明的另一方面涉及包含药学上有效量的至少一种根据通式 (I) 的肽、 其立体 异构体、 其混合物和 / 或其药学上可接受的盐的药物组合物， 且该组合物包含药学上有效 量的至少一种为消炎剂和 / 或止痛剂的天然提取物或精油， 尤其例如但不限于羟基积雪草 苷 (madecassoside)、 松果菊属 (echinacea)、 苋属植物 (amaranth) 油、 檀香油 (sandalwood oil)、 桃树叶提取物、 芦荟 (Aloe vera) 提取物、 山金车 (Amica montana)、 艾蒿 (Artemisiavulgaris)、 大 花 细 辛 (Asarum maximum)、 金 盏 花 (Calendula officinalis)、 辣椒属 (Capsicum)、 石 胡 荽 (Centipeda cunninghamii)、 洋 甘 菊 (Chamomilla recutita)、 文殊 兰 (Crinum asiaticum)、 北美金缕梅 (Hamamelis virginiana)、 南非钩麻 (Harpagophytum procumbens)、 贯 叶 连 翘 (Hypericum perforatum)、 白 花 百 合 (Lilium candidum)、 欧锦 葵 (Malva sylvestris)、 互 叶 白 千 层 (Melaleuca alternifolia)、 马 郁 兰 (Origanum majorana)、牛 至 (Origanum vulgare)、月 桂 樱 (Prunus laurocerasus)、迷 迭 香 (Rosmarinus officialis)、 白 柳 (Salix alba)、 水 飞 蓟 (Silybum marianum)、 小白菊 (Tanacetum parthenium)、 百里香 (Thymus vulgaris)、 圭亚纳钩藤 (Uncaria guianensis) 或欧洲越桔 (Vaccinum myrtillus)， 或至少一种为消炎剂和 / 或止痛剂的合成化合物或 生物发酵产物， 尤其例如但不限于莫米松糠酸酯 (mometasone furoate) 和强的松龙、 非类 固醇消炎药物， 包括环加氧酶或脂肪加氧酶抑制剂、 苄达明 (benzydamine)、 乙酰水杨酸、 迷迭香酸 (rosmarinic acid)、 熊果酸、 甘草酸酯的衍生物、 α- 没药醇 (α-bisabolol)、 薁和类似物、 水田芥 (sericoside)、 鲁斯可皂甙元 (ruscogenin)、 七叶皂苷 (escin)、 氯 化丁二酰胆碱 (scoline)、 芸香苷和类似物、 氢化皮质酮、 氯倍他索 (clobetasol)、 地塞米 松、 泼 尼 松 (prednisone)、 扑 热 息 痛 (paracetamol)、 amoxiprin、 贝 诺 酯 (benorilate)、 胆碱水杨酸盐、 二氟尼柳 (diflunisal)、 faislamine、 水杨酸甲酯、 水杨酸镁、 双水杨酯 (salsalate)、 双氯芬酸 (diclofenac)、 醋氯芬酸 (aceclofenac)、 阿西美辛 (acemetacin)、 溴 芬 酸 (bromfenac)、依 托 度 酸 (etodolac)、吲 哚 美 辛 (indometacin)、奥 沙 美 辛 (oxametacin)、 丙 谷 美 辛 (proglumetacin)、 舒 林 酸 (sulindac)、 托 美 丁 (tolmetin)、 布 洛芬 (ibuprofen)、 右布洛芬 (dexibuprofen)、 卡洛芬 (carprofen)、 芬布芬 (fenbufen)、 非 诺 洛 芬 (fenoprofen)、 氟 比 洛 芬 (flurbiprofen)、 酮 洛 芬 (ketoprofen)、 右酮洛芬 (dexketoprofen)、 酮咯酸 (ketorolac)、 氯索洛芬 (loxoprofen)、 萘普生 (naproxen)、 咪洛 芬 (miroprofen)、 噁丙嗪 (oxaprozin)、 普拉洛芬 (pranoprofen)、 噻洛芬酸 (tiaprofenic acid)、 舒洛芬 (suprofen)、 甲芬那酸 (mefenamic acid)、 甲氯芬那酸酯 (meclofenamate)、 甲氯芬那酸 (meclofenamic acid)、 氟芬那酸 (flufenamic acid)、 托芬那酸 (tolfenamic acid)、 萘丁美酮 (nabumetone)、 保泰松 (phenylbutazone)、 阿扎丙宗 (azapropazone)、 氯 菲宗 (clofezone)、 凯布宗 (kebuzone)、 安乃近 (metamizol)、 莫菲布宗 (mofebutazone)、 羟 布 宗 (oxyphenbutazone)、 非 那 宗 (phenazone)、 苯 磺 唑 酮 (sulfinpyrazone)、 吡罗昔 康 (piroxicam)、 氯诺昔康 (lornoxicam)、 美洛昔康 (meloxicam)、 替诺昔康 (tenoxicam)、 塞 来 考 昔 (celecoxib)、 艾 托 考 昔 (etoricoxib)、 罗 美 昔 布 (lumiracoxib)、 帕瑞考昔 (parecoxib)、 罗非考昔 (rofecoxib)、 伐地考昔 (valdecoxib)、 尼美舒利 (nimesulide)、 萘 普 西 洛 (naproxinod)、 氟 丙 喹 宗 (fluproquazone) 或 利 克 飞 龙 (licofelone) ； 吗 啡、 可 待 因 (codein)、 氧 可 酮 (oxycodone)、 氢 可 酮 (hydrocodone)、 海 洛 因 (diamorphine)、 苯佐 哌 替 啶 (pethidine)、 曲 马 多 (tramadol)、 丁 丙 诺 啡 叔 丁 啡 (buprenorphine)、 卡 因 (benzocaine)、 力 多 卡 因 (lidocaine)、 氯 普 鲁 卡 因 (chloroprocaine)、 丁卡因 (tetracaine)、 普鲁卡因 (procaine)、 三环抗抑郁剂、 阿米替林 (amitriptyline)、 痛痉宁 (carbamazepine)、 加巴喷丁 (gabapentin)、 普瑞巴林 (pregabalin)、 泛酰醇 (pantenol)、 生物素、 月桂亚氨基二丙酸生育酚磷酸二钠、 环吡酮胺 (ciclopirox olamine)、 去甲二氢愈 TM 创木酸、 由 Atrium Innovations/Unipex Group 销售的 Neutrazen [INCI ： 水、 丁二醇、 右旋糖酐、 棕榈酰基三肽 -8]、 由 Institut Euroopéen de Biologie Cellulaire/Unipex Group 销售的 Meliprene [INCI ： 右旋糖酐、 乙酰基七肽 -1]、 由 Laboratoires Sérobiologiques/ TM Cognis 销售的 Skinasenyl [INCI ： 乙酰基四肽 -15]、 辅酶 Q10 或烷基甘油醚。
     应用
     本发明的另一方面涉及至少一种通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其 化妆品上或药学上可接受的盐在制备用于治疗和 / 或护理由肌肉收缩， 优选地乙酰胆碱受 体聚簇导致的病况、 失调和 / 或疾病的化妆用组合物或药物组合物中的用途。
     本发明的另一方面涉及至少一种通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其 化妆品上或药学上可接受的盐在制备用于抑制肌肉收缩， 优选地抑制乙酰胆碱受体聚簇的 化妆用组合物或药物组合物中的用途。
     优选地， 待治疗的由肌肉收缩所造成的失调和 / 或疾病为张力障碍， 且更具体地 为局灶性肌张力障碍， 例如但不限于睑痉挛、 扭转性张力障碍、 颈张力障碍或斜颈症、 喉张 力障碍或痉挛性发音困难、 口下颌张力障碍、 肢体张力障碍诸如书写痉挛或音乐家痉挛或 脚部张力障碍、 夜间磨牙、 半侧颜面痉挛、 抽搐症和 / 或斜视 ； 节段性肌张力障碍、 梅杰氏综 合征、 多灶性张力障碍、 偏侧肌张力障碍、 多巴胺反应性肌张力障碍和濑川张力障碍。
     本发明的另一方面涉及至少一种通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其 化妆品上或药学上可接受的盐在制备用于治疗和 / 或护理皮肤， 优选为面部皮肤的化妆用 组合物或药物组合物中的用途。
     根据优选的实施方案， 治疗和 / 或护理皮肤为治疗和 / 或阻止老化和 / 或光老化 的迹象。
     根据另一优选的实施方案， 本发明涉及至少一种通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其 混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐在制备用于治疗和 / 或护理受皱纹和 / 或表 情纹影响的皮肤的化妆用组合物或药物组合物中的用途。
     用于治疗和 / 或护理皮肤和 / 或身体的化妆用组合物或药物组合物的实例尤其 包括乳霜、 复合乳剂， 例如但不限于水包油型和 / 或水包硅酮型乳剂、 油包水型和 / 或硅酮 包水型乳剂、 水 / 油 / 水型或水 / 硅酮 / 水型乳剂和油 / 水 / 油型或硅酮 / 水 / 硅酮型乳 剂、 无水组合物、 水性分散液、 油、 奶状物、 香脂、 泡沫、 洗剂、 凝胶、 乳凝胶、 水醇溶液、 水二醇 溶液、 水凝胶、 搽剂、 浆液 (sera)、 皂、 洗发剂、 润发乳、 浆液 (serum)、 多糖膜、 软膏、 摩丝、 润 发油、 粉剂、 棒剂、 笔剂和喷雾剂或气雾剂 ( 喷雾剂 )， 包括免冲洗型和冲洗型制剂、 绷带、 纱 布、 T 恤、 袜子、 裤袜、 内衣、 腰带、 手套、 尿布、 卫生巾、 敷料、 床罩、 擦拭物、 粘性贴片、 非粘性 贴片、 闭合型贴片、 微电贴片或面罩、 化妆产品， 诸如粉底， 例如液态粉底和粉饼、 卸妆液、 卸 妆乳、 眼部遮瑕膏、 眼影、 唇膏、 护唇膏、 唇彩和唇粉。
     含有本发明肽的组合物可依需要施用于皮肤或可经口服或肠胃外施用， 以治疗和 / 或护理病况、 失调和 / 或疾病。
     本发明的化妆用组合物或药物组合物可经由离子电渗、 超声波导入、 电穿孔、 微电 贴片、 机械性压力、 渗透压梯度、 闭塞治疗、 微注射、 借助压力的无针注射诸如借助氧压力注 射、 或其任何组合的方式施用于皮肤， 以实现本发明肽的更大渗透。
     本发明的另外方面涉及治疗和 / 或护理由肌肉收缩导致， 优选地 AChR 聚簇导致的 哺乳类优选为人类的病况、 失调和 / 或疾病的方法， 其包括施用有效量的至少一种通式 (I)的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 优选以含有它们的 化妆用组合物或药物组合物形式。
     本发明的另一方面涉及治疗和 / 或护理哺乳类优选为人类的病况、 失调和 / 或疾 病的方法， 其抑制肌肉收缩， 优选地抑制乙酰胆碱受体聚簇， 该方法包括施用有效量的至少 一种通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 优选 以含有它们的化妆用组合物或药物组合物形式。
     根据具体的实施方案， 待治疗的失调和 / 或疾病选自张力障碍的组， 且更具体地 为局灶性肌张力障碍， 例如但不限于睑痉挛、 扭转性张力障碍、 颈张力障碍或斜颈症、 喉张 力障碍或痉挛性发音困难、 口下颌张力障碍、 肢体张力障碍诸如书写痉挛或音乐家痉挛或 脚部张力障碍、 夜间磨牙、 半侧颜面痉挛、 抽搐症和 / 或斜视 ； 节段性肌张力障碍、 梅杰氏综 合征、 多灶性张力障碍、 偏侧肌张力障碍、 多巴胺反应性肌张力障碍和濑川张力障碍。
     本发明的另一方面提供治疗和 / 或护理皮肤， 优选面部皮肤的方法， 其包括施用 化妆品上或药学上有效量的至少一种通式 (I) 的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆 品上或药学上可接受的盐， 优选以含有它们的化妆用组合物或药物组合物形式。
     根据具体的实施方案， 治疗和 / 或护理皮肤为治疗和 / 或阻止皮肤老化和 / 或光 老化的迹象。
     根据另一具体的实施方案， 本发明提供治疗和 / 或护理受皱纹和 / 或表情纹影响 的皮肤的方法， 其包括施用化妆品上或药学上有效量的至少一种通式 (I) 的肽、 其立体异 构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐， 优选以含有它们的化妆用组合物 或药物组合物形式。
     根据另一具体的实施方案， 本发明提供治疗和 / 或护理由肌肉收缩导致的病况、 失调和 / 或疾病的方法， 其包括将含有至少一种本发明的肽、 其立体异构体、 其混合物和 / 或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆用组合物或药物组合物局部或透皮施用于皮肤 上或经口服或肠胃外施用。
     在另一具体的方面， 本发明的治疗和 / 或护理经由局部或透皮施用来进行， 局部 或透皮施用优选地经由离子电渗、 超声波导入、 电穿孔、 机械性压力、 渗透压梯度、 闭塞治 疗、 微注射或借助压力的无针注射、 借助微电贴片或其任何组合来进行。
     在另一具体的方面， 治疗和 / 或护理经由口服施用来进行。
     在另一具体的方面， 治疗和 / 或护理经由肠胃外施用来进行。
     应用或施用频率可取决于每一受治疗者的需求和待治疗或护理的病况、 失调或疾 病的严重性而极大地改变， 建议的应用或施用范围从每月 1 次至每天 10 次， 优选从每周 1 次至每天 4 次， 更优选从每周 3 次至每天 3 次， 甚至更优选每天 1 或 2 次。
     本文所提供的下列特定实施例例证本发明的性质。 所包括的这些实施例仅以例证 为目的， 且不应将其解释为对本文所要求保护的本发明的限制。 实施例
     一般方法 所有的试剂和溶剂均为合成质量， 且未经另外处理即使用。 缩写氨 基 酸 的 缩 写 依 照 在 Eur.J.Biochem.(1984)138 ： 9-37 和 J.Chem(1989)264 ： 633-673 中所规定的 IUPAC-IUB 联合委员会的生化命名规则。
     树脂 ； 2， 6-diClZ ： 2， 6- 二氯苯甲基 ； 2-BrZ ： 2- 溴苯甲氧基羰基 ； Ac ： 乙酰基 ； ACh ： 乙酰胆碱 ； AChR ： 乙酰胆碱受体 ； Adpoc ： 1-(1- 金刚烷基 )-1- 甲基乙氧基羰基 ； All ： 烯丙基 ； Alloc ： 烯丙氧基羰基 ； AM ： 2-[4- 氨基甲基 -(2， 4- 二甲氧基苯基 )] 苯氧基乙酸 ； DNA ： 脱氧核糖核酸 ； Arg ： 精氨酸 ； Asp ： 天冬氨酸 ； Boc ： 叔丁氧基羰基 ； Bzl ： 苯甲基 ； Cbz ： 苯甲氧基羰基 ； cHx ： 环己基 ； ClTrt2- 氯三苯甲基树脂 ； ClZ ： 2- 氯苯甲基 ； cps ： 厘泊 ； C- 末端 ： 羧基末端 ； DCM ： 二氯甲烷 ； Dde ： N-[1-(4， 4- 二甲基 -2， 6- 二氧代亚环己 -1- 基 ) 乙基 ； DIEA ： N， N- 二异丙基乙胺 ； DIPCDI ： N， N’ - 二异丙基碳二亚胺 ； Dmab ： 4-(N-[1-(4， 4- 二甲基 -2， 6- 二氧代亚环己基 )-3- 甲基丁基 ] 氨基 ) 苯甲基 ； DMF ： N， N- 二甲基甲酰 胺； DMSO ： 二甲亚砜 ； Dnp ： 2， 4- 二硝基苯酚 ； DPPC ： 二棕榈酰基磷脂酰胆碱 ； EDTA ： 乙二胺四 乙酸 ； equiv ： 当量 ； ES-MS ： 电喷射电离质谱 ； Fm ： 芴甲基 ； Fmoc ： 9- 芴甲氧基羰基 ； Glu ： 谷 氨酸 ； HOAt ： 1- 羟基氮杂苯并三唑 ； HOBt ： 1- 羟基苯并三唑 ； HPLC ： 高效液相色谱 ； INCI ： 国 际化妆品成份命名法 (International Nomenclature of Cosmetic Ingredients) ； ivDde ： 1-(4， 4- 二甲基 -2， 6- 二氧代亚环己基 )-3- 甲基丁基 ； Leu ： 亮氨酸 ； Lys ： 赖氨酸 ； mAChR ： 毒蕈碱型乙酰胆碱受体 ； MASC ： MuSK- 附属特异性组分 ； MBHA ： 对甲基二苯甲胺 ； MeCN ： 乙 腈； MeOH ： 甲醇 ； Met ： 甲硫氨酸 ； MLV ： 多层囊泡 ； Mtr ： 4- 甲氧基 -2， 3， 6- 三甲基苯磺酰基 ； Mtt ： 甲氧基三苯甲基或甲基三苯甲基 ： MuSK ： 肌肉特异性激酶 ； nAChR ： 烟碱型乙酰胆碱受 体； NMJ ： 神经肌肉接头 ； N- 末端 ： 氨基末端 ； PAL ： 5-(4- 氨基甲基 -3， 5- 二甲氧基苯氧基 ) 戊酸 ； Palm ： 棕榈酰基 ； Pbf ： 2， 2， 4， 6， 7- 五甲基二氢苯并呋喃 -5- 磺酰基 ； PBS ： 磷酸盐缓冲 盐水 ； Phe ： 苯丙氨酸 ； Pmc ： 2， 2， 5， 7， 8- 五甲基色满 -6- 磺酰基 ； pNZ ： 对 - 硝基苯甲氧基羰 基； Pro ： 脯氨酸 ； q.s. ： 适量 ； q.s.p. ： 适量至 ； RATL ： rapsyn 相关的跨膜连接分子 ； SNARE ： 可溶性 NSF 连接蛋白质受体 ； tBu ： 叔丁基 ； Teoc ： 2-( 三甲硅基 ) 乙氧基羰基 ； TFA ： 三氟乙 酸； THF ： 四氢呋喃 ； TIS ： 三异丙基硅烷 ； Tos ： 对 - 甲苯磺酰基或甲苯磺酰基 ； Troc ： 2， 2， 2- 三氯乙氧基羰基 ； Trt ： 三苯甲基 ； Tyr ： 酪氨酸 ； ULV ： 单层囊泡 ； UV ： 紫外线 ； Z： 苯甲氧基 羰基。
     化学合成
     所有的合成方法在配备有多孔聚乙烯盘的聚丙烯注射筒或配备有多孔板的 Pyrex 反应器中进行。 溶剂和可溶性试剂藉由抽气移除。 Fmoc 基团以哌啶 -DMF(2 ∶ 8， v/v) (1×1 分钟， 1×5 分钟， 5 毫升 / 克树脂 ) 移除 [Lloyd-Williams P.， Albericio F. 和 Giralt E.(1997) “Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins( 合成肽 和蛋白的化学方法 )” CRC， Boca Raton， FL， USA]。在脱保护、 偶合和再次脱保护阶段之间的 清洗以 DMF(3×1 分钟 ) 进行， 每次使用 10 毫升溶剂 / 克树脂。 偶合反应以 3 毫升溶剂 / 克树 脂进行。 偶合作用的控制藉由进行茚三酮 (ninhydrin) 试验 [Kaiser E.， Colescott R.L.， Bossing C.D. 和 Cook P.l.(1970) “Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides( 固相肽合成中用于检测自由端氨 基的显色试验 )” Anal.Biochem.34 ： 595-598] 或四氯苯醌 (chloranil) 试验 [Christensen T.(1979) “A qualitative test for monitoring coupling completeness in solid-phase peptide synthesis using Chloranil( 用于在固相肽合成中利用四氯苯醌监测偶合完成程度的定量检验 )” Acta Chem Scand.33B ： 763-766] 来进行。所有的合成反应和清洗在室 温下进行。
     HPLC 色 谱 分 析 以 Shimadzu 仪 器 (Kyoto， Japan) 使 用 恒 温 为 30 ℃ 的 反 相 柱 (250×4.0 毫米， Kromsail C8， 5 微米， Akzo Nobel， Sweden) 进行。洗脱使用在水 (+0.1％ TFA) 中的乙腈 (+0.07％ TFA) 为梯度以 1 毫升 / 分钟的流速进行且在 220 纳米处进行检测。
     实施例 1
     获得 Fmoc-Wn-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Yp-Zs-O-2-ClTrt其中 AA1为 -L-Asp-、 -L-Glu- 或 -L-Pro-， AA 2 为 -L-Asp-， AA3 为 -L-Tyr- 或 -L-Arg-， AA 4 为 -L-Phe- 或 -L-Tyr-， AA5 为 -L-Arg- 或 -L-Lys-， AA6 为 -L-Leu- 或 -L-Met ； 且 n、 m、 p和 s 为 0。
     将溶解在添加 1.3 毫升 DIEA(7.6 毫摩尔， 0.86 当量 ) 的 55 毫升 DCM 中的 3.11 克 Fmoc-L-Leu-OH 或 3.27 克 Fmoc-L-Met-OH(8.8 毫摩尔， 1 当量 ) 偶合在干燥的 2- 氯三苯甲 基 (5.5 克， 8.8 毫摩尔 ) 上。将其搅拌 5 分钟， 然后添加 2.5 毫升 DIEA(14.6 毫摩尔， 1.66 当量 )。允许混合物反应 40 分钟。以 4.4 毫升 MeOH 处理而封闭剩余氯化物基团。
     将 N- 末 端 Fmoc 基 团 如 一 般 方 法 中 所 述 地 脱 保 护，且 将 14.27 克 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH 或 10.31 克 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(22 毫 摩 尔， 2.5 当 量 ) 在 DIPCDI(3.39 毫升， 22 毫摩尔， 2.5 当量 ) 和 HOBt(3.37 克， 22 毫摩尔， 2.5 当量 ) 的存在 下使用 DMF 作为溶剂经 1 小时偶合在肽基树脂上。接着将树脂如一般方法中所述地清洗， 且重复 Fmoc 基团的脱保护处理， 以偶合在下一个氨基酸上。依照所述方案， 将下列相继偶 合： 8.52 克 Fmoc-L-Phe-OH 或 10.11 克 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH(22 毫摩尔， 2.5 当量 ) ； 14.27 克 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH 或 10.11 克 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH(22 毫 摩 尔， 2.5 当 量 ) ； 9.05 克 Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH(22 毫摩尔， 2.5 当量 ) ； 和接着 7.43 克 Fmoc-L-Pro-OH、 9.75 克 Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH 或 9.05 克 Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH(22 毫摩尔， 2.5 当量 )， 每次偶合在 3.37 克 HOBt(22 毫摩尔， 2.5 当量 ) 和 3.39 毫升 DIPCDI(22 毫摩尔， 2.5 当量 ) 的存在下。
     在合成之后， 将肽基树脂以 DCM(5×3 分钟 ) 清洗且以氮流干燥。
     实施例 2
     获得 Fmoc-Wn-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Yp-Zs-AM-MBHA-其中 AA1为 -L-Asp-、 -L-Glu- 或 -L-Pro-， AA 2 为 -L-Asp-， AA3 为 -L-Tyr- 或 -L-Arg-， AA 4 为 -L-Phe- 或 -L-Tyr-， AA5 为 -L-Arg- 或 -L-Lys-， AA6 为 -L-Leu- 或 -L-Met ； 且 n、 m、 p和 s 为 0。
     根据所述的一般方案， 将 6.85 克具有 0.73 毫摩尔 / 克官能化的 Fmoc-AM-MBHA 树 脂 (5 毫摩尔 ) 以哌啶 -DMF 处理， 以移除 Fmoc 基团。将 8.84 克 Fmoc-L-Leu-OH 或 9.29 克 Fmoc-L-Met-OH(25 毫摩尔， 5 当量 ) 在 DIPCDI(3.85 毫升， 25 毫摩尔， 5 当量 ) 和 HOBt(3.85 克， 25 毫摩尔， 5 当量 ) 的存在下使用 DMF 作为溶剂经 1 小时并入脱保护的树脂上。
     接 着 将 树 脂 如 一 般 方 法 所 述 地 清 洗， 且 重 复 Fmoc 基 团 的 脱 保 护 处 理， 以偶 合 下 一 个 氨 基 酸。 依 照 先 前 所 述 的 方 案， 将 11.72 克 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 或 16.22 克 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH(25 毫 摩 尔， 5 当 量 )； 11.49 克 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH 或 9.69 克 Fmoc-L-Phe-OH(25 毫 摩 尔， 5 当 量 )； 11.49 克 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH 或 16.22 克 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH(25 毫 摩 尔， 5当量)； 10.29 克 Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH(25 毫 摩 尔，5 当量 )； 和 接 着 8.44 克 Fmoc-L-Pro-OH、 10.29 克 Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH 或 11.09 克 Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH(25 毫摩尔， 5 当量 ) 相继偶合， 每次偶合在 3.85 克 HOBt(25 毫摩尔， 5 当量 ) 和 3.85 毫升 DIPCDI(25 毫摩尔， 5 当量 ) 的存在下。
     在合成之后， 将肽基树脂以 DCM(5×3 分钟 ) 清洗且以氮流干燥。
     实施例 3
     用于移除 Fmoc 的 N- 末端保护基的一般方法
     将实施例 1 和 2 中所获得的肽基树脂的 N- 末端 Fmoc 基团如一般方法中所述地脱 保护 ( 在 DFM 中的 20 ％哌啶， 1×5 分钟 +1×20 分钟 )。将肽基树脂以 DMF(5×1 分钟 )、 DCM(4×1 分钟 )、 二乙醚 (4×1 分钟 ) 清洗且在真空下干燥。
     实施例 4
     在实施例 3 中所获得的肽基树脂上引入 R1 棕榈酰基的方法
     将预先溶解在 DMF(1 毫升 ) 的 2.56 克棕榈酸 (10 毫摩尔， 10 当量 ) 在 1.53 克 HOBt(10 毫摩尔， 10 当量 ) 和 1.54 毫升 DIPCDI(10 毫摩尔， 10 当量 ) 的存在下添加在实施 例 3 中所获得的 1 毫摩尔肽基树脂上。 允许其反应 15 小时， 然后将树脂以 THF(5×1 分钟 )、 DCM(5×1 分钟 )、 DMF(5×1 分钟 )、 MeOH(5×1 分钟 )、 DMF(5×1 分钟 )、 THF(5×1 分钟 )、 DMF(5×1 分钟 )、 DCM(4×1 分钟 )、 醚 (3×1 分钟 ) 清洗且在真空下干燥。 实施例 5
     在实施例 3 中所获得的肽基树脂上引入 R1 乙酰基的方法
     将实施例 3 中所获得的 1 毫摩尔肽基树脂在 25 当量 DIEA 的存在下使用 5 毫升 DMF 作为溶剂以 25 当量乙酸酐处理。允许其反应 30 分钟， 然后将肽基树脂以 DMF(5×1 分 钟 )、 DCM(4×1 分钟 )、 二乙醚 (4×1 分钟 ) 清洗且在真空下干燥。
     实施例 6
     从实施例 3、 4 和 5 中所获得的肽基树脂的聚合物支撑物裂解的方法
     将实施例 3、 4 和 5 中所获得的 200 毫克干燥肽基树脂在室温和搅拌下以 5 毫升 TFA ∶ TIS ∶ H2O(90 ∶ 5 ∶ 5) 处理 2 小时。将滤液收集在 50 毫升冷二乙醚上， 将其经由 配备有多孔聚乙烯盘的聚丙烯注射筒过滤， 且以 50 毫升二乙醚清洗 5 次。将最终沉淀物在 真空下干燥。
     所获得的肽以在 H2O(+0.1％ TFA) 中的 MeCN(+0.07％ TFA) 为梯度的 HPLC 分析显 示在所有情况中的纯度均超过 80％。所获得的肽的身份以 ES-MS 确认。
     实施例 7
     聚 合 物 支 撑 物 的 裂 解 方 法 和 以 经 R2 取 代 的 胺 官 能 化 ： 获得： Ac-Wn-Xm-A A1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Yp-Zs-NH-(CH2)15-CH3， 其 中 AA6 为 -L-Leu- 或 -L-Met， AA5 为 -L-Arg- 或 -L-Lys-， AA4 为 -L-Phe- 或 -L-Tyr-， AA3 为 -L-Tyr- 或 -L-Arg-， AA2 为 -L-Asp-， AA1 为 -L-Asp-、 -L-Glu- 或 -L-Pro- ； 且 n、 m、 p 和 s 为 0。
     具有经完全保护的侧链的肽 Ac-Wn-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Yp-Zs-OH 藉由以 3 毫升在 DCM 中的 3％ TFA 溶液处理事先在真空下在 KOH 的存在下干燥的实施例 5 的 150 毫 克肽基树脂 Ac-Wn-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Yp-Zs-O-2-ClTrt- 5 分钟而获得。将滤液 收集在 50 毫升冷二乙醚上， 且重复处理 3 次。将醚溶液在减压和室温下蒸发至干燥， 将沉 淀物再溶解在 H2O 中的 50％ MeCN 中且冻干。将 10 毫克所获得的粗肽称重至烧瓶中且添加
     3 当量十六烷基胺和 25 毫升无水 DMF。添加 2 当量 DIPCDI 且置于 47℃下以磁力搅拌反应。 反应以 HPLC 监测， 直到初产物消失为止， 其在 24-48 小时之后完成。将溶剂蒸发至干燥且 与 DCM 共蒸发两次。将所获得残余物 [ 具有经完全保护的侧链的 Ac-Wn-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4 -AA5-AA6-Yp-Zs-NH-(CH2)15-CH3] 再溶解在 25 毫升 TFA ∶ DCM ∶茴香醚 (49 ∶ 49 ∶ 2) 的混 合物中且置于室温下反应 30 分钟。添加 250 毫升冷二乙醚， 将溶剂在减压下蒸发且与醚进 行两次另外的共蒸发。将剩余物溶解在 H2O 中的 50％ MeCN 的混合物且冻干。
     所获得的肽以在 H2O(+0.1％ TFA) 中的 MeCN(+0.07％ TFA) 为梯度的 HPLC 分析显 示在所有情况中的纯度均超过 60％。所获得的肽的身份以 ES-MS 确认。
     实施例 8
     AChR 聚簇抑制试验
     将肽再悬浮在存在 0.5％ DMSO 的水中。将 104 个小鼠成肌细胞接种在 12- 孔板中 且在分化培养基中培养 4-6 天， 直到形成肌管。移除分化培养基且将细胞与 5M NaCl 培育 16 小时， 然后移除培养基且将细胞与 0.1mM 肽培育 24 小时。在此时间段之后， 添加溶解在 PBS(+0.1％ BSA) 中的 5 微克 / 毫升的 C- 末端 agrin 片段且在 37℃下培育 5 小时。
     将细胞固定且以与四甲基若丹明 (tetramethylrhodamine) 共轭的 α- 银环蛇毒 素进行免疫细胞化学， 使 AChR 显现。 将肌管与 10nM 毒素溶液在室温下无光线培育 30 分钟。 在此时间之后， 将毒素移除， 将肌管清洗， 干燥且放置在具有封固剂的载玻片上。
     使用 40 倍浸没物镜的共聚焦显微镜拍摄照片且使用图像处理软件定量 AChR 聚簇的数量。 表 2 提供显示聚簇抑制值大于 20％的肽的细节。 将抑制值相对于培养基的抑制基 础值标准化。
     表 2.AChR 聚簇抑制百分比
     实施例 9 含有 Ac-L-Glu-L-Asp-L-Tyr-L-Tyr-L-Arg-L-Leu-NH2 的化妆用组合物
     实施例 10 含有 Ac-L-Pro-L-Asp-L-Tyr-L-Tyr-L-Lys-L-Leu-NH2 的脂质体的制备将二棕榈酰基磷脂酰胆碱 (DPPC) 称重且溶解在氯仿中。将溶剂在真空下蒸发， 直 到获得磷脂薄层， 且将该层在 55℃下以所需浓度的肽水溶液 ( 含有防腐剂 Phenonip ) 处 理而水化， 并获得 MLV 脂质体。将 MLV 脂质体浸没于 55℃的超声浴中， 经 2 分钟浸没和 5 分 钟间隔的 8 次循环获得 ULV 脂质体。 ULV 脂质体的尺寸藉由将其通过高压挤压系统而缩小。
     实施例 11
     含有 Ac-L-Pro-L-Asp-L-Arg-L-Phe-L-Lys-L-Leu-NH2 的面霜组合物
     实施例 12 含有 Ac-L-Pro-L-Asp-L-Tyr-L-Tyr-L-Lys-L-Leu-NH2 的脂质体凝胶形式组合物的制备 将实施例 11 的脂质体在轻轻搅拌下分散在具有防腐剂 (EDTA、 咪唑烷基脲和 Phenonip ) 的水中。添加 Hispagel 200[INCI ： 水剂 ( 水 )、 甘油、 聚丙烯酸甘油酯 ] 且轻 轻搅拌， 直到获得均匀混合物。
     实施例 13 含有 Palm-L-Glu-L-Asp-L-Tyr-L-Tyr-L-Arg-L-Met-NH2 的微乳剂组合物实施例 14
     含有 Ac-L-Glu-L-Asp-L-Tyr-L-Tyr-L-Arg-L-Leu-NH2 的混合胶束组合物的制备
     将 A 相成分称重且在适合于完全样品的容器中略微加温至约 30℃， 以帮助溶解一 些防腐剂。接着添加 B 相成分且轻轻搅拌均化。
     接着在连续搅拌下添加 C 相， 然后以缓慢搅拌添加 D 相， 以避免形成泡沫。
     将 pH 调整至 5.5-6.5。
     实施例 15 含有 Ac-L-Glu-L-Asp-L-Tyr-L-Tyr-L-Arg-L-Leu-NH2 的乳霜组合物实施例 16
     实施例 15 的组合物减少皱纹的效果
     为了评定来自本发明实施例 15 的组合物的效力， 将具有平均年龄 45 岁的 20 位志 愿者小组每天 2 次以实施例 15 的组合物施用一只眼睛的眼眶周围区域为期 1 个月， 而以具
     有与实施例 15 的乳霜相同的组成、 但是没有本发明肽的安慰乳霜施用另一只眼睛的眼眶 周围区域。使用 Primos 光学 3D 技术评价处理之前和之后的皱纹深度， 且以相对于安慰乳 霜所显示的效力计算皱纹减少的效力。 志愿者获得皱纹深度的平均减少比以安慰乳霜获得 的值增加 44.7％。40